Способ получения полифенолов из чаги

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Проводят водное экстрагирование чаги и обработку полученного водного извлечения этилацетатом с получением этилацетатного, эмульсионного и водного слоев, которые разделяют, этилацетатный слой упаривают, из эмульсионного слоя выделяют полифенолы добавлением равного объема этилового спирта, из водного слоя - добавлением 25% соляной кислоты до рН 2,0-2,5. Изобретение позволяет выделять продукты из всех слоев.

 

Предлагаемое изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано для получения полифенолов из чаги.

Известен способ получения флавоноидов (а. св. №571269, М.кл 2 А61К 37/78, авторы И.Ф.Макаревич, Н.Ф.Комиссаренко, Д.Г.Колесников, Э.А.Зборовская, П.И.Безрук и Ж.А.Любецкая).

Недостатком является то, что полифенолы используют только из этилацетатного слоя.

Известен способ получения растительных полифенолов, обладающих гепатозащитным действием (патент РФ №1510147, М.кл 5 А61К 35/78, Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения АН СССР, Томский медицинский институт, авторы Максимов О.Б., Кривощекова О.Е., Степаненко Л.С., Покушапова Т.В., Саратиков А.С., Венгеровский А.И., Новощеева Т.П., Прищеп Т.П., Власова Т.В., Чучалин B.C., Седых И.М.).

Недостатком является то, что полифенолы используют только из этилацетатного слоя.

Известен способ получения экстракта абортирующих веществ (патент №651655, М.кл 2 А61К 35/78, иностранная фирма «Орто Фармасъютикал Корпорейшн», США, авторы Хосе Луис Матеос, Луис Нориега (Мексика), Ричард Хьюттеманн, Рамеш Каноджиа, Майкл Вочтер) путем водного экстрагирования листьев растения, затем экстракт обрабатывают водносмешивающимся органическим растворителем, например этилацетатом, с получением слоев этилацетатного, эмульсионного и водного, используют для дальнейшей работы этилацетатный слой.

Недостатком является то, что полифенол используют только из этилацетатного слоя.

Прототипом является способ получения осажденного препарата из березового гриба чага (авторское свидетельство №126988, Класс 30h, 2₀₃, опубликовано в «Бюллетене изобретений» №6 за 1960 г., авторы И.А.Якимов, С.М.Андреева, Е.В.Алексеева и Н.Л.Маттисон) путем добавления к подщелоченному диффузионному соку раствора казеина, альбумина или желатина и осаждения добавлением 20%-ного раствора соляной кислоты до значения рН 2,0-2,2 с последующей обработкой осажденного полифенольного комплекса известными приемами.

Недостатком является то, что из водного извлечения выделяют только один полифенол.

Задачей предлагаемого изобретения является выделение из водного извлечения трех полифенолов, относящихся к полифенольному комплексу чаги.

Задачу осуществляют путем водного экстрагирования чаги и обработки полученного водного извлечения, согласно изобретению обработку водного извлечения осуществляют этилацетатом с получением этилацетатного, эмульсионного и водного слоев, которые разделяют, этилацетатный слой упаривают, из эмульсионного слоя выделяют полифенолы добавлением равного объема этилового спирта, из водного слоя - добавлением 25%-ной соляной кислоты до рН 2,0-2,5.

Способ получения полифенолов из чаги осуществляют следующим образом.

Водное извлечение чаги экстрагируют определенным количеством этилацетата в одну или несколько последовательных стадий при перемешивании в течение определенного времени, которые проводятся при температуре 35±1°С, разделением слоев, объединением каждого выделенного слоя, определением сухого остатка и зольности (ГФ СССР, вып.1 Общие методы анализа. 11-е изд., доп. М.: Медицина. 1987. 336 с.; вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. М.: Медицина. 1989. 400 с.) каждого слоя и выделением полифенолов из этилацетатного слоя упариванием, из эмульсионного слоя обработкой его равным объемом этилового спирта, из водного слоя 25%-ным раствором соляной кислоты до рН 2,0-2,5, подтверждают выделенные полифенолы из каждого слоя с помощью качественных реакций.

Пример 1. Водное извлечение чаги из 10 г сырья с сухим остатком 0,2182 г, зольностью 0,0462 г и содержанием полифенолов 1,32 г экстрагируют 70 мл этилацетата в одну стадию. Экстракцию ведут при перемешивании и температуре 35±1°С в течение трех часов.

Слои в полученном экстракте разделяют с помощью делительной воронки отстаиванием. Содержание сухих веществ: в этилацетатном слое - 0,0015 г, эмульсионном слое - 0,0350 г, водном слое - 0,2350 г. Зольность эмульсионного слоя составляет 0,0124 г, а водного слоя - 0,0221 г.

Этилацетатный слой упаривают до объема 10 мл. Выпадает осадок полифенола 0,0008 г.

Эмульсионный слой обрабатывают равным объемом этилового спирта. Выпадает осадок полифенола 0,0289 г.

К водному слою приливают 25%-ный раствор соляной кислоты до рН 2,0-2,5. Содержание полифенолов в водном слое составляет 0,1589 г.

Со всеми полученными полифенолами проделывают качественные реакции. При добавлении 10%-ной Н₂О₂ к 0,1%-ному раствору полифенола в 0,1 н. NaOH происходит обесцвечивание раствора. При добавлении к раствору полифенола 1%-ного раствора KMnO₄ их окраска изменяется от коричневой до зеленой с последующим выпадением осадка и обесцвечиванием раствора. При добавлении к раствору полифенола 1%-ного раствора FeCl₃ наблюдается выпадение хлопьевидного осадка. Это подтверждает отнесение выделенных из этилацетатного, эмульсионного и водного слоев полифенолов к полифенольному комплексу, выделяемому из водного извлечения чаги.

Пример 2. Водное извлечение чаги из 10 г сырья с сухим остатком 0,2182 г, зольностью 0,0462 г и содержанием полифенолов 1,32 г экстрагируют 80 мл этилацетата. Экстракцию проводят в 4 стадии, используя на каждой стадии по 20 мл этилацетата. Экстракцию ведут при перемешивании и температуре 35±1°С в течение одного часа.

Слои в полученном экстракте разделяют с помощью делительной воронки отстаиванием. Содержание сухих веществ: в этилацетатном слое - 0,0027 г, эмульсионном слое - 0,0446 г, водном слое - 0,2167 г. Зольность эмульсионного слоя составляет 0,0124 г, а водного слоя - 0.0277 г.

Этилацетатный слой упаривают до объема 10 мл. Выпадает осадок полифенола 0,0014 г.

Эмульсионный слой обрабатывают равным объемом этилового спирта. Выпадает осадок полифенола 0,0389 г.

К водному слою приливают 25%-ный раствор соляной кислоты до рН 2,0-2,5. Содержание полифенолов в водном слое составляет 0,1415 г.

Со всеми полученными полифенолами проделывают качественные реакции с Н₂O₂, KMnO₄, FeCl₃. При добавлении 10%-ной Н₂О₂ к 0,1%-ному раствору полифенола в 0,1 н. NaOH происходит обесцвечивание раствора. При добавлении к раствору полифенола 1%-ного раствора KMnO₄ их окраска изменяется от коричневой до зеленой с последующим выпадением осадка и обесцвечиванием раствора. При добавлении к раствору полифенола 1%-ного раствора FeCl₃ наблюдается выпадение хлопьевидного осадка. Это подтверждает отнесение выделенных из этилацетатного, эмульсионного и водного слоев полифенолов к полифенольному комплексу, выделяемому из водного извлечения чаги.

По разработанной методике было проанализировано по примеру 1 - три образца, по примеру 2 - более 30 образцов. Отклонение по полученным результатам не превышает допустимой погрешности примененных методов.

На процесс экстракции и количество полифенолов, содержащихся в образующихся слоях, влияет количество этилацетата, используемого на каждой стадии экстракции водного извлечения чаги. Дробное проведение этого процесса в четыре стадии наиболее эффективно для получения большего количества полифенолов.

При сравнении экстракции водного извлечения чаги этилацетатом, проведенной в четыре стадии (пример 2) и в одну стадию (пример 1), выход по содержанию сухих веществ и по содержанию полифенолов по слоям возрастает: в этилацетатном слое в 1,8 раза, эмульсионном слое в 1,3 раза.

Полифенолы при проведении экстракции водного извлечения чаги этилацетатом распределяются по формируемым слоям, и, следовательно, водный слой должен содержать меньшее количество сухих веществ и соответственно полифенолов в случае эффективного проведения экстракции этилацетатом. Поэтому, при проведении четырехстадийной экстракции водного извлечения чаги этилацетатом, в водном слое содержится 0,1415 г полифенолов, а при одной стадии в нем содержится - 0,1589 г полифенолов.

Зольные вещества распределяются при экстракции водного извлечения чаги этилацетатом между формируемыми слоями.

Проделанные качественные реакции с Н₂О₂, KMnO₄, FeCl₃ со всеми полученными полифенолами подтверждают отнесение их к полифенольному комплексу, выделяемому из водного извлечения чаги.

Таким образом, для использования полифенолов из слоев, получающихся при экстракции водного извлечения чаги этилацетатом, ее можно проводить в одну или четыре стадии.

По предлагаемому изобретению из сырья получают водное извлечение чаги. Водное извлечение чаги экстрагируют этилацетатом, в результате получают слои: этилацетатный, эмульсионный и водный. Из полученных слоев этилацетатного, эмульсионного и водного выделяют полифенолы.

Эти полифенолы являются основой для разработки и получения БАД и лекарственных препаратов.

В ранее известных изобретениях для выделения полифенолов используют только этилацетатный слой или согласно прототипу проводят осаждение полифенольного комплекса с добавлением казеина, альбумина или желатина. Согласно нашему изобретению мы проводим разделение водного извлечения чаги с применением этилацетата и используем для выделения полифенолов этилацетатный, эмульсионный и водный слои:

- упаривают этилацетатный слой до объема 10 мл и таким образом отделяют из этого слоя полифенолы. Затем используют для дальнейшей разработки и получения биологически активных добавок и лекарственных препаратов;

- к эмульсионному слою добавляют равный объем этилового спирта и таким образом отделяют из этого слоя полифенолы. Затем используют для дальнейшей разработки и получения биологически активных добавок и лекарственных препаратов;

- к водному слою добавляют 25%-ную соляную кислоту до рН 2,0-2,5 и таким образом отделяют из этого слоя полифенолы. Затем используют их для дальнейшей разработки и получения биологически активных добавок и лекарственных препаратов.

Способ получения полифенолов из чаги путем водного экстрагирования чаги и обработки полученного водного извлечения, отличающийся тем, что обработку водного извлечения осуществляют этилацетатом с получением этилацетатного, эмульсионного и водного слоев, которые разделяют, этилацетатный слой упаривают, из эмульсионного слоя выделяют полифенолы добавлением равного объема этилового спирта, из водного слоя - добавлением 25%-ной соляной кислоты до рН 2,0-2,5.