Способ прогнозирования риска изъязвления тканей гастродуоденальной зоны путем определения липидного состава венозной крови
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для осуществления способа прогнозирования риска изъязвлениия тканей гастродуоденальной зоны определяют липидный состав плазмы крови. При этом высокий риск изъязвления определяется при уровне фосфолипидов 23,18±1,30%, холестерола 15,53±0,87%, эфиров холестерола 39,71±1,38%. Низкий риск изъязвления определяется при уровне фосфолипидов 28,03±1,58%, холестерола 22,36±1,22%, эфиров холестерола 33,04±2,33%. Использование изобретения позволяет выявлять животных с низким риском возникновения эрозивно-язвенного повреждения желудочно-кишечного тракта, выделять их в отдельную группу и исключать из эксперимента по определению противоязвенной активности испытуемых препаратов. Испытания препаратов с противоульцерогенной активностью рекомендуется проводить на крысах, предрасположенных к изъязвлению, что позволяет более объективно оценивать противоульцерогенную активность тестируемых препаратов. 7 табл.
Область применения: медицина, экспериментальная фармакология.
В экспериментальной фармакологии для испытания препаратов с противоязвенной активностью рекомендовано проводить исследования на крысах линии Вистар, так как они обладают наименьшей устойчивостью к изъязвлению желудочно-кишечного тракта. Однако даже у крыс одной популяции, одного пола и возраста в одно и то же время года наклонность к изъязвлению разная.
В экспериментальной медицине оценка процессов язвообразования проводится путем измерения диаметра язвенного дефекта после забоя животных (Окабэ С., 1970). Однако визуальный контроль язвообразования в экспериментальных условиях связан с определенными трудностями. Визуальный контроль невозможно провести без наркотизирования, забоя животных и извлечения пораженного органа. На наш взгляд, представляется целесообразным перед началом экспериментов по определению противоязвенной активности препаратов выявлять животных с низким риском развития эрозивно-язвенных повреждений, выделять их в отдельную группу и исключать из эксперимента. Это позволит получить более объективные данные о противоязвенной активности испытуемого препарата.
Кроме того, будут снижаться материальные затраты на приобретение и содержание лабораторных крыс.
Цель изобретения: улучшение прогнозирования риска изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта, позволяющее без забоя животных определять предрасположенность к изъязвлению.
Через 7 сут с момента моделирования на 21 крысе линии Вистар обоего пола ацетатной язвы по методу Окабэ С.(1970) извлекали желудок, рассекали по большой кривизне и визуально оценивали диаметр язвенного дефекта с последующим вычислением площади изъязвления. У 13 крыс площадь язвенного дефекта составляла 7,67±1,31 мм2 (группа 1), у 9 крыс площадь язвенного дефекта составляла 25,67±4,22 мм2 (группа 2). В крови из подключичной вены, полученной в исходном состоянии, у крыс 1-й группы по отношению ко 2-й методом тонкослойной хроматографии было выявлено: а) более высокое содержание фосфолипидов и холестерола; б) более низкое содержание эфиров холестерола (табл.1).
| Таблица 1 | |||
| Липидный состав крови у подопытных крыс из подключичной вены в исходном состоянии. | |||
| Кровь из подключичной вены | |||
| группа 1 (n=13) | группа 2 (n=9) | Р | |
| Фосфолипиды, % | 33,0±3,14 | 25,67±1,80 | <0,05 |
| Холестерол, % | 22,92±1,99 | 14,63±1,19 | <0,01 |
| Триглицериды, % | 12,64±1,56 | 15,0±1,76 | >0,1 |
| Свободные жирные кислоты, % | 4,67±0,58 | 4,56±0,58 | >0,1 |
| Эфиры холестерола, % | 33,82±2,80 | 41,5±2,32 | <0,05 |
| Общие липиды, г/л | 2,52±0,1 | 2,71±0,21 | >0,1 |
| Площадь изъязвления, мм2 | 7,67±1,31 | 25,67±4,22 | <0,001 |
| Р - достоверность различия между показателями в 1-й и 2-й группах. |
Анализ липидного спектра у 53 интактных крыс подтвердил правомерность разделения крыс на 2 группы. На 53 крысах были выявлены те же особенности липидного состава плазмы крови в исходном состоянии, что и в подопытных группах (табл.2).
| Таблица 2 | |||
| Липидный состав крови у интактных крыс из подключичной вены в исходном состоянии. | |||
| Кровь из подключичной вены | |||
| группа I (n=33) | группа II (n=20) | Р | |
| Фосфолипиды, % | 28,03±1,58 | 23,18±1,30 | <0,05 |
| Холестерол,% | 22,36±1,22 | 15,53±0,87 | <0,001 |
| Триглицериды, % | 15,41±1,28 | 16,35±1,26 | >0,1 |
| Свободные жирные кислоты, % | 5,89±0,55 | 4,56±0,41 | >0,1 |
| Эфиры холестерола, % | 33,04±2,33 | 39,71±1,38 | <0,05 |
| Общие липиды, г/л | 2,51±0,07 | 2,53±0,12 | >0,1 |
| Р - достоверность различия между показателями в I и II группах. |
Примеры конкретного выполнения экспериментов из подопытной серии.
Опыт 1.
Половозрелого самца массой 240 г, находящегося на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). Кровь для исследования в исходном состоянии получили из подключичной вены в объеме 1,0 мл. В полученной пробе крови определили концентрацию общих липидов стандартным набором фирмы «Лахема». Липидный спектр плазмы крови определили методом тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil. [1]. (см. таблицу 3).
| Таблица 3 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ,% | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 35 | 22 | 8 | 4 | 31 | 2,31 |
Ацетатную язву смоделировали по методу Окабэ С. (1970) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70%-ной уксусной кислоты на 30 сек после получения крови из подключичной вены. После экспозиции уксусной кислоты в течение 30 сек ее удалили фильтровальной бумагой. Рану ушили послойно. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За 14 часов до окончания эксперимента животное находилось в условиях пищевой депривации при свободном доступе к воде. Эксперимент завершили через 7 сут с момента моделирования ацетатной язвы. Получили кровь из подключичной вены, извлекли желудок. Желудок вскрыли по большой кривизне под холодной проточной водой. Измерили диагонали зоны эрозивно-язвенного повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном случае на малой кривизне в антральной зоне обнаружили язвенный дефект размером 4×2 мм, что позволяет отнести животное к 1-й группе с низким риском изъязвления.
Опыт 2.
Половозрелую самку массой 190 г, находящуюся на стандартной диете, наркотизировали нембуталом (30 мг/кг). Кровь для исследования в исходном состоянии получили из подключичной вены в объеме 1,0 мл. В полученной пробе крови определили концентрацию общих липидов стандартным набором фирмы «Лахема». Липидный спектр плазмы крови определили методом тонкослойной хроматографии на пластинах Sorbfil [1] (см. таблицу 4).
| Таблица 4 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ, % | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 27 | 13 | 18 | 5 | 37 | 3,52 |
Ацетатную язву смоделировали по методу Окабэ С. (1970) путем нанесения на серозную оболочку желудка 70%-ной уксусной кислоты на 30 сек после получения крови из подключичной вены. После экспозиции уксусной кислоты в течение 30 сек ее удалили фильтровальной бумагой. Рану ушили послойно. В течение 6 последующих суток крыса имела свободный доступ к воде и пище. За 14 часов до окончания эксперимента животное находилось в условиях пищевой депривации при свободном доступе к воде. Эксперимент завершили через 7 сут с момента моделирования ацетатной язвы. Получили кровь из подключичной вены, извлекли желудок. Желудок вскрыли по большой кривизне под холодной проточной водой. Измерили диагонали зоны эрозивно-язвенного повреждения с последующим вычислением площади дефекта. В данном случае на малой кривизне в антральной зоне обнаружили язвенный дефект размером 4×4 мм, что позволяет отнести животное ко 2-й группе с высоким риском изъязвления.
Выявленные закономерности соответствия характера липидного спектра и степени предрасположенности к изъязвлению отмечались у 18 из 21 подопытных крыс. У 3 животных эта закономерность не прослеживалась.
1) Половозрелый самец, масса животного 230 г.
| Таблица 5 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ, % | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 33 | 8 | 19 | 5 | 35 | 3,52 |
Площадь язвенного дефекта желудка 16 мм2.
2) Половозрелая самка, масса животного 200 г.
| Таблица 6 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ, % | ХС, % | ТГ, % | ЖК, % | ЭХС, % | ОЛ, г/л |
| 17 | 10 | 22 | 10 | 41 | 3,2 |
Площадь язвенного дефекта желудка 4 мм2.
3) Половозрелый самец, масса животного 220 г.
| Таблица 7 | ||||||
| Фракции липидов в исходном состоянии | ФЛ,% | ХС,% | ТГ,% | ЖК,% | ЭХС,% | ОЛ, г/л |
| 32 | 32 | 11 | 2 | 23 | 3,2 |
Площадь язвенного дефекта желудка 16 мм2.
Таким образом, по липидному составу венозной крови можно прогнозировать риск изъязвления тканей желудочно-кишечного тракта. При низком содержании холестерола и фосфолипидов и высоком содержании эфиров холестерола в венозной крови нанесение стандартного химического повреждения приводило к формированию эрозивно-язвенного дефекта большей площади (25,67±4,22 мм2), что свидетельствовало о более высоком риске изъязвления. При высоком содержании холестерола и фосфолипидов и низком содержании эфиров холестерола в венозной крови нанесение стандартного химического повреждения приводило к формированию эрозивно-язвенного дефекта меньшей площади (7,67±1,31 мм2), что свидетельствовало о более низком риске изъязвления.
Источники информации
1. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: в 2х ч. - М.: Мир, 1980. - 621с.
Способ прогнозирования риска изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта в эксперименте, отличающийся тем, что определяют липидный состав плазмы крови, при этом высокий риск изъязвления определяют при уровне фосфолипидов (23,18±1,30)%, холестерола (15,53±0,87)%, эфиров холестерола (39,71±1,38)%, а низкий риск изъязвления определяют при уровне фосфолипидов (28,03±1,58)%, холестерола (22,36±1,22)%, эфиров холестерола (33,04±2,33)%.
