Антигипотензивное средство

Предложено применение в качестве антигипотензивного средства производного тиазина формулы (1). Средство может быть использовано для создания лекарств, предназначенных для лечения гипотензивных состояний (кровопотеря, травма, шок и т.д.). По длительности гипертензивного действия предлагаемое вещество превосходит мезатон и другие препараты, применяющиеся в медицинской практике для лечения гипотензивных состояний. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 табл.

 

Изобретение относится к новым лекарственным средствам, которые могут найти применение в медицинской практике при лечении хронических и острых гипотензивных состояний (кровотечение, травма, шок, отравление), особенно в скорой и неотложной медицинской помощи, так как оно может быть использовано для производства новых антигипотензивных средств.

Заявлено антигипотензивное средство, содержащее в качестве действующего вещества гидробромид N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин (2-ААДТ) формулы

или его солей.

Изобретение расширяет ассортимент веществ антигипотензивного действия. Соединение относится к новым лекарственным средствам, которое может найти применение в медицинской практике как новое химическое соединение, влияющее на артериальное давление. Это вещество может быть использовано для лечения хронической и острой гипотонии.

Изобретение направлено на область удовлетворения жизненных потребностей человека - создание новых лекарственных средств, которые могут найти применение в химико-фармацевтической и медицинской промышленности.

В настоящее время в медицинской практике известны лекарственные средства гипертензивного действия, воздействующие либо непосредственно на гладкую мускулатуру сосудистой стенки, либо посредством стимуляции альфа-адренорецепторов.

Обычно используют адреномиметики (адреналин, норадреналин, мезатон, эфедрин и др.) и препараты полипептидной природы (глюкагон, октапрессин, антиотенинамид и т.п.).

Главный недостаток препаратов с полипептидной структурой и большинства адреномиметиков заключается в короткой продолжительности их действия. Для пролонгирования действия препараты вводят в виде перфузии. [I.M.Autkunson, S.I.Dusting, V.I.Rand, Aust. J. Exp.Biol. Med., V.50, p.847-859 (1972), "Acidosis induced by catecholamines in acidosis"]

По фармакологическим свойствам наиболее близким прототипом предлагаемому соединению является известный лекарственный препарат мезатон.

Мезатон представляет собой гидрохлорид 1-(м-оксифенил)-2-метиламиноэтанола. Он селективно стимулирует α₁-адренорецепторы, вызывая сужение артериол, повышает систолическое и диастолическое давление. Антигипотензивное действие мезатона длится около 20 минут после внутривенного введения (0.1-0.5 мл 1% раствора) (М.Д.Машковский. Лекарственные средства, изд. 14-е, М.: Новая волна, 2000, часть 1, С.233; О.М. Авакян, Фармакологическая регуляция функции адренорецепторов, М.: Медицина, 1988, С.8).

Адреномиметики, в том числе мезатон, имеют некоторые общие недостатки. Они действуют непродолжительно - всего лишь в пределах 20 минут, увеличивают потребление кислорода тканями, вызывают метаболический ацидоз, аритмии, возбуждение ЦНС. (О.М.Авакян, Фармакологическая регуляция функции адренорецепторов, М.: Медицина, 1988, С.8; В.Г.Кулинский, А.Н.Ковалевский, Бюл. Эксперим. Биол. Мед., 1984, С.9 «Дуалистический контроль катехоламинами потребления кислорода организмом мышей»). Для них характерно возникновение вторичной гипотензии. Кроме того, адреномиметики не корригируют артериальную гипотензию, вызванную адреноблокаторами и в условиях метаболического ацидоза имеют лишь слабый антигипотензивный эффект (С.Kortanje, V.I.Mathy, R.Chartdorp, Haunyn Gohinedeleg is Arh. Pharmakol., v. 330, N3, p.187, 1985, "Influence respiratory acidosis or alkalosis on response imediated by and alfa-adrenoreseptor in pithed normotensive rats", I.M.Autkunson, S.I.Dusting, V.I.Rand, Aust. J.ExpBiol. Med., v.50, p.847, 1972, 'Acidjsis induced by catecholamines in acidosis').

Исследования влияния различных химических соединений на артериальное давление крови, проведенные ранее авторами изобретения, показали, что некоторые производные изотиомочевины, тиазолина и тиазина обладают способностью в той или иной мере повышать нормальное и пониженное артериальное давление изменяемого в результате эндотоксического шока. Однако следует отметить, что они не обладают продолжительным гипертензивным действием и весьма токсичны. (С.Я.Проскуряков, Н.Г.Кучеренко, А.И.Тришкина и др., Бюл. Эксп. Биол и Мед., 2002, Т.134, №10, С.393-396. «NO-ингибирующая и вазотропная активность некоторых соединений, содержащих тиоамидиновую группу», С.Я.Проскуряков, М.В.Филимонова, Ю.Г.Верховский и др., Бюл. Эксп.Биол и Мед., 2004, Т.138, №10, С.446-449, «Влияние ингибитора NO-синтазы 2-ААДТ на эндотоксининдуцированные изменения гемодинамики и дыхания крыс».

В результате проведенных нами исследований в этом направлении было обнаружено, что гидробромид N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазин обладает выраженным антигипотензивным действием.

Целью предлагаемого изобретения является увеличение длительности действия антигипотензивного средства и снижение его токсичности по сравнению с препаратами, применяющимися в медицинской практике для лечения гипотензивных состояний.

Достижение цели осуществляется за счет использования гидробромида N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина (2-ААДТ) следующего строения

а также его солей.

Найденное соединение менее токсично, чем мезатон (ЛД₅₀ 191 мг/кг). Введение животным 2-ААДТ не вызывает никаких видимых изменений со стороны частоты сердечных сокращений частоты дыхания на протяжении всего периода наблюдения. По длительности гипертензивного действия предлагаемое вещество превосходит мезатон и другие препараты, применяющиеся в медицинской практике для лечения гипотензивных состояний.

Выявленные эффекты показывают, что предлагаемое соединение отличается от известных средств, которые применяются для повышения артериального давления.

Использование 2-ААДТ в медицинской практике создает новые возможности в лечении острых и, возможно, хронических артериальных гипотензий, а также в случаях неотложной и скорой помощи.

Первое описание химического синтеза 2-ААДТ проведено Шеберлем А. ацилированием 2-амино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина в присутствии 15-кратного избытка уксусного ангидрида при нагревании до 100°С в течение 12 часов. (Schoberl A., Kawohl М. Liebigs Ann. Chem 614, S.95-101, (1958), Schoberl А., K.H.Magosch. Liebigs Ann. Chem. 742, S.74-84 (1970), Acylierung und Alkylierung von 2-Amino-penthiazolin).

Следует отметить, что специально проведенные нами исследования механизма ацилирования тиазина с использованием ЯМР-¹³С спектроскопии высокого разрешения показали, что состав продуктов реакции зависит от соотношения реагентов, времени и температурного режима. В зависимости от условий ацилирование может идти конкурентно как по экзогенному, так и по эндогенному атому азота. Условия, предложенные в вышеуказанной работе, приводят к преимущественному образованию 3-ацильного производного тиазина. Большие различия в температуре плавления, которые приводится в работе Шеберля А. (179-180°С) и полученные нами для N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина (192-194°С) позволяют сделать вывод о том, что это соединение получено нами впервые.

Синтез N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина

Синтез средства. К 0,7 г (0,0036 моль) гидробромида 2-амино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина добавили 5 мл (0,053 моля) уксусного ангидрида и нагревали при 80°С при перемешивании на магнитной мешалке в течение 7 часов. После охлаждения из реакционной массы выпал осадок. Полученный осадок отфильтровали и три раза промыли эфиром, получили 0,72 г (84%) вещества. Т.пл. 192-194°С. Лит. данные: т.пл. 179-180 [Шеберля А.]. Найдено %: С 30.25, 30.32; Н 4.39, 4.52; N 11.62, 11.86. C₆H₁₁NBrOS. Вычислено %: С 30.14; H 4.64; N 11.71.

Таким образом, в отличие от метода Шеберля А. предложенный нами метод синтеза и выделения 2-ААДТ позволяет получать это соединение в индивидуальной форме и проводить надежные исследования его биологическиой активности.

Обработка водного раствора гидробромида 2-амино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина (АДТ) гидрокарбонатом натрия приводит к образованию основания гетероцикла. Экстракцией диэтиловым эфиром с последующим упариванием получают свободное основание АДТ. Воздействием на основание АДТ различных кислот (хлористоводородной, молочной, никотиновой, салициловой) получают соли. Обработка солей АДТ уксусным ангидридом, в вышеуказанных условиях, приводит к образованию различных солей ААДТ.

Современная комплексная терапия как хронических заболеваний, так и внезапных нарушений жизнедеятельности организма требует, чтобы лекарственный препарат и его терапевтическая форма обладали широким спектром полезных эксплуатационных характеристик, среди которых, прежде всего, необходимо отметить а) эффективное действующее начало; б) оптимальные биодинамические и биокинетические характеристики, достигаемые путем инкапсуляции на пористых и высокодисперсных наноносителях. С целью регулирования скорости введения антигипотензивного вещества в кровь и другие органы/ткани организма целесообразна его иммобилизация на пористых носителях.

В качестве оптимально фармакологически приемлемых носителей могут быть использованы препараты, широко применяемые в медицинской практике, обладающие развитой пористой поверхностью, на которую наносится ААДТ. В качестве фармакологически приемлемых носителей могут быть использованы Силлард П [Бичкивска Е.И. «Розлади локального иммунитету та их коррекция ентеросорбентом силлардом-п при дифтерии у дитей». Автреферат дисс. на здобуття наук ступеня канд. мед. наук. Киiв, 2002], Полисорб МП [www.rlsnet.ru/, www.polisorb.ru], а также Уголь активированный УБФ (У) [www.rlsnet.ru/, http//amt.allergist.ru].

Нами специально был разработан метод нанесения 2-ААДТ на носители.

Метод адсорбционной иммобилизации 2-ААДТ на носители.

К 90 мг носителя добавляют 10 мг 2-ААДТ в 1 мл этанола. Суспензия тщательно перемешивается в течение 2 часов (20°С), высушивается на воздухе, а затем в сушильном шкафу при 90°С в течение 3 часов. Содержание вещества в образцах по массе - 10%.

Биологические испытания, проведенные с 2-ААДТ, обнаружили наличие у соединения анальгетической активности (GB 957771, A61K, 13.05.1964).

Биологическое изучение свойств гидробромида N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина

В настоящем разделе приведены результаты первичной фармакологической оценки N-2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина. Исследования выполнены на наркотизированных (интактным) (нембутал 55 мг/кг) крысах Wistar массой 200-300 г. Влияние соединения 2-ААДТ (от 1 мг/кг до и 5 мг/кг) на артериальное давление изучено как на интактных животных, так и на фоне глубокой гипотонии, обусловленной септическим шоком, вызванным введением бактериального эндотоксина липополисахарида (LPS). Во время опыта регистрировали показатели систолического и диастолического давления (АДС и АДД) из устья левой сонной артерии, частоту сердечных сокращений (ЧСС) по интервалу RR и частоту дыхательных движений (ЧДД). Контролировали общее состояние крыс до окончания видимой реакции.

Для получения устойчивой гипотонии использовали известную модель септического шока, вызванного эндотоксином LPS. Непосредственно после записи фоновых показателей крысам в яремную вену медленно (в течение 2-3 минут) вводили раствор LPS в дозе 18 мг/кг. Наблюдение за животными продолжали в течение 20-30 минут, до устойчивого и выраженного снижения давления. После достижения эффекта гипотонии внутрибрюшинно вводили 2-ААДТ в дозах 1 и 5 мг/кг и продолжали регистрировать исследуемые параметры и общее состояние.

В экспериментальных группах было по 5-7 животных. Результаты исследований обрабатывали с помощью компьютерных программ Basica и Origin, используя t-критерий Стьюдента и критерий Ван дер Вардена (Р≤0,05).

Результаты экспериментов

Пример 1. Внутрибрюшинное введение 2-ААДТ интактным наркотизированным крысам в дозе 1 мг/кг не вызывало у них никаких видимых изменений со стороны ЧСС и дыхания на протяжении всего периода наблюдения. Вместе с тем, уже со 2-3 минуты после инъекции у всех животных происходил подъем АД, особенно систолического (табл.1). Эффект достигал максимума к 10-15 минуте и составлял 110-117% от исходных значений, затем АД снижалось и у большинства крыс к 30-40 минутам оно не превышало исходных значений. Лишь у 1 крысы из 7 эффект продолжался более 40 минут.

Пример 2. Внутрибрюшинное введение 2-ААДТ в дозе 1 мг/кг крысам в условиях глубокого септического шока от воздействия LPS вызывало выраженное увеличение АД уже с четвертой - пятой минуты после инъекции (табл.2). К 15 минуте параметры АД повышались на 40% (АДС) и на 55% (АДД). Общий подъем артериального давления достигал 70-80% от исходных показателей, оставаясь на этом уровне около 20 минут. Затем у части крыс АД плавно снижалось, а у двух самцов из пяти эффект длился более 2 часов. Учитывая глубину падения давления после введения LPS в этой группе крыс (около 50%), необходимо подчеркнуть, что антигипотензивный (нивелирующий) эффект 2-ААДТ был весьма выраженным и длительным.

Пример 3. Введение 2-ААДТ в дозе 5 мг/кг крысам в состоянии септического шока также вызывало быстрый подъем АД без видимых изменений со стороны дыхания и пульса (табл.3). В этой группе крыс АД, сниженное под влиянием LPS до 72-74% от исходного, к 20-30 минутам действия 2-ААДТ поднималось до 94-102%, то есть практически до исходных значений. Даже после 60 минут наблюдений у двух крыс из 6 показатели АДС и АДД составляли 90-100% от исходных значений. У остальных животных после 40 минут действия 2-ААДТ АД начинало плавно опускаться и через час лишь незначительно отличалось по сравнению с уровнем гипотонии, вызванной введением LPS.

Пример 4. Частота сердечных сокращений под воздействием LPS при его внутривенном введении изменялась 10-24% (табл.4). Частота дыхательных движений изменялась незначительно.

Пример 5. Динамика показателей частоты сердечных сокращений и частоты дыхательных движений у крыс после введения 2-ААДТ в дозе 5 мг/кг в/б на фоне внутривенного введения LPS в дозе 18 мг/кг представлена в табл.5. Частота дыхательных движений незначительно увеличивалась под влиянием 2-ААДТ, а сердечный ритм через 10 мин уряжался, через 50 мин не отличался от ритма сердечных сокращений здорового животного.

Как видно из приведенных данных, антигипотензивное действие 2-ААДТ в дозах 1 и 5 мг/кг продолжается 30-40 мин и более, что значительно превосходит длительность действия мезатона и препаратов с полипептидной структурой.

Таким образом, установлено, что соединение 2-ААДТ обладает антигипотензивным действием и способно эффективно и достаточно длительно нивелировать критическое снижение артериального давления, вызванное септическим шоком без возникновения вторичной гипотензии, что характерно для адреномиметиков, в том числе и для мезатона. Следует отметить, что 2-ААДТ менее токсичен, чем мезатон.

Проведенные исследования достоверно свидетельствуют, что 2-ААДТ может применяться для лечения острых и хронических гипотензивных состояний.

Таблица 1.
Изменение артериального (АДС и АДЦ) давления (мм рт.ст.) у интактных крыс после внутрибрюшинного введения 2-ААДТ дозе 1 мг/кг.
Время, мин	АДС	АДД
Фон	136±4a)	93±2
2-ААДТ
3	145±7	97±4
5	157±5*°	103±2*°
10	160±6*°	104±3*°
15	152±4*°	102±3*°
20	146±4	102+3
25	146±4	102±4
30	141±4	101±4
40	146±3	108±8*
Примечания:а) В экспериментальной группе 7 животных.
Достоверность различий с фоном: * - Р≤0,05 по t - критерию Стъюдента, ° - по критерию Ван дер Вардена.

Таблица 2.
Изменение артериального (АДС и АДД) давления (мм рт.ст.) у крыс после внутрибрюшинного введения 2-ААДТ в дозе 1 мг/кг на фоне внутривенного введения LPS в дозе 18 мг/кг.
Время, мин	АДС	АДД
Фон	162+2	112±3
LPS	82±10*°	57±10*°
2-ААДТ
3	81±8*°	55±8*°
5	93±12*°	68±12*°
10	107±14*°	79±14*°
15	117+13*°	88,4±14
20	119±10*°+х	90,4+11+х
30	119±8*°+x	87,8±8*°+х
40	109±121*°	75,0±12*°
50	101±11*°	66,8±11*°
60	100±11*°	66,0±11*°
70	98+11*°	65,6±11*°
80	129±3*+	96±2*
90	131±1*+	99±2*
Примечания: В экспериментальной группе 5 животных.
Достоверность различий с фоном * - Р≤0,05 по t - критерию Стъюдента, ° - по критерию Ван дер Вардена Достоверность различий с LPS + - Р≤0,05 по t - критерию Стъюдента, х - по критерию Ван дер Вардена.

Таблица 3.
Изменение артериального (АДС и АДД) давления (мм рт.ст.) у крыс после внутрибрюшинного введения 2-ААДТ в дозе 5 мг/кг на фоне внутривенного введения LPS в дозе 18 мг/кг.
Время, мин	АДС	АДД
Фон	142+6	96±5
LPS	103+7*°	72±8*°
2-ААДТ
3	110±8*°	80±9
5	115±8*°	85±9
10	126±8+	92±8
15	130±9+	95±7
20	134±7+х	98±6х
30	128±3+х	97±5
40	124±5*°+х	94±5
50	121±4*°+	92±4
60	117±7*	92±4
70	116±12°	86±8
Примечания: В экспериментальной группе 6 животных.
Достоверность различий с фоном * - Р≤0,05 по t - критерию Стьюдента, ° - по критерию Ван дер Вардена. Достоверность различий с LPS + - Р≤0,05 по t - критерию Стьюдента, х - по критерию Ван дер Вардена.

Таблица 4
Динамика показателей частоты сердечных сокращений (ЧСС) и частоты дыхательных движений (ЧДД) у крыс после внутривенного введения LPS в дозе 20 мг/кг.
Время, мин	ЧСС	ЧДД
Фон	429±6a)	70±2
LPS
10	368±22*	56±4*
15	394±16*	70±4
20	397±12*	76±5
25	320±17*	62±2
Примечание:а) В экспериментальной группе 4-7 животных.
Достоверность различий с фоном: * - Р≤0,05 по t - критерию Стъюдента, ° - по критерию Ван дер Вардена.

Таблица 5.
Динамика показателей частоты сердечных сокращений и частоты дыхательных движений у крыс после введения 2-ААДТ в дозе 5 мг/кг в/б на фоне внутривенного введения LPS в дозе 18 мг/кг.
Время, мин	ЧСС	ЧДД
Фон	431±8	75±8
LPS	412±17°	72±8
2-ААДТ
10	365±8*°+	80±11
50	419±13°	77±9
Примечания: в группе 6 животных, достоверность различий с фоном * - Р≤0,05 по t - критерию Стьюдента ° - по критерию Ван дер Вардена достоверность различий с LPS + - Р≤0,05 по t - критерию Стьюдента.

1. Применение 2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина структурной формулы

в качестве антигипотензивного средства.

2. Фармакологическая композиция для лечения гипотензивных состояний, содержащая действующее вещество и фармакологически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве действующего вещества она содержит фармакологически приемлемую соль 2-ацетиламино-5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина.

3. Фармакологическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что в качестве фармакологически приемлемой соли используют бромид.

4. Фармакологическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что она предназначена для лечения гипотензивного состояния, вызванного кровопотерей, травмой или шоком.