Способ получения препарата для профилактики или лечения радиационных поражений организма

Изобретение относится к радиационной биологии. Производят извлечение биологически активных веществ из натуральной кормовой добавки, содержащей мас.%: мед 1,5-2,0; прополис 2,0-2,5; пергу 30-35; обножку 15-17; пчелиный яд 0,5-1,0; пчелиный расплод в разных стадиях развития 5,5-6,0; маточное молоко 3,5-4,0; восковую моль и их личинки 2,5-3,0; воск 5,0-7,0; пчелиный подмор 7,0-8,0; травяную муку - остальное, путем этанолового экстрагирования в течение 20-21 суток при 70%-ной концентрации экстрагента, фильтрования экстрагента и удаления осадков, определения содержания сухого вещества в супернатанте с последующим хранением при температуре 2-6°С. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение.

 

Изобретение относится к радиационной биологии, в частности к получению и применению многокомпонентных смесей радиозащитных препаратов фитогенного и зоогенного происхождения (фитозоопрепаратов).

Известен способ получения экстрактов из растительных (настойка календулы, цветочная пыльца, полиэкстракт из ягод рябины), апифитопродуктов - продуктов пчеловодства (мед, экстракт прополиса) и животных тканей и клеток, обладающих противолучевым действием (см. статью Л.М.Овсянникова, Г.И.Квита, А.Н.Коваленко - Основные принципы коррекции нарушений окислительного гомеостаза у лиц, подвергавшихся воздействию факторов аварии на ЧАЭС. // Проблемы противолучевой защиты: Матер. конф. - М.: РАН, 1998. - С.116-117).

Известно также совместное применение овощно-зерновой смеси и продуктов пчеловодства в качестве радиозащитных кормовых добавок при внутреннем облучении радиоизотопом ¹³⁷Cs, что обеспечивало снижение радионуклида в организме на 30-40% (см. статью Н.Д.Шабунина, И.И.Карачев, Н.Л.Ковтонюк, Н.К.Кушнир, Н.Д.Семенюк: Экспериментальные исследования радиозащитной эффективности некоторых средств природного происхождения. // Тез. Докл. IV съезда по рад. иссл. - М., 2001. - Т.2. - С.467).

Известен базовый комплекс биологически активных пищевых добавок и способ его применения для реабилитации облученных [Заявка на изобретение RU 2004109896, кл. A23L 1/30, дата пуб. 10.10.05 г.], содержащий мед, прополис, животный жир, настои осиновой коры, гриба чаги, морс калины или рябины и витаминный травяной чай.

Недостатком указанных способов является то, что, во-первых, они предполагают пероральное применение водных или спиртовых экстрактов апифитопродуктов, во-вторых, радиозащитный эффект указанных средств проявляется только при длительном (в течение года или в течение не менее 21 дня) непрерывном применении препаратов в виде пищевых добавок к основному рациону. В случае необходимости экстренного радиопрофилактического или радиотерапевтического применения указанные способы не обеспечивают экстренной радиозащиты.

Известен способ профилактики и лечения радиационных поражений организма путем однократного подкожного введения противолучевой сыворотки в дозах 100-125 мг/кг массы тела молодым и 200-250 мг/кг взрослым в течение первых 10 суток до облучения с профилактической целью и в течение первых 10 суток после облучения с лечебной целью (Патент RU 2169372, кл. А61К 35/28, 27.06.2001 г.). Недостатком указанного способа является сложная технология получения препарата (двукратное облучение крупных животных, использование мощной, радиационно-опасной гамма-установки и, самое главное, - использование весьма высоких лечебных доз дорогостоящего препарата - противолучевой лошадиной сыворотки, расходы которой для крупных животных составляют 200-400 мл препарата на 1 голову (100-250 мг/кг белка).

При создании изобретения ставилась задача получения доступных результативных и быстро действующих способа получения препарата для профилактики или лечения радиационных поражений и способа профилактики или лечения.

Это достигается тем, что способ получения препарата для профилактики или лечения радиационных поражений организма включает извлечение биологически активных веществ из натуральной кормовой добавки, содержащей следующие соотношения компонентов, мас.%: мед 1,5-2,0, прополис 2,0-2,5, перга 30,0-35,0, обножка 15,0-17,0, пчелиный яд 0,5-1,0, пчелиный расплод в разных стадиях развития 5,5-6,0, маточное молоко 3,5-4,0, восковая моль и их личинки 2,5-3,0, воск 5,0-7,0, пчелиный подмор 7,0-8,0, травяная мука - остальное, путем этанолового экстрагирования в течение 20-21 суток при 70%-ной концентрации экстрагента, фильтрацию экстрагента и удаление осадков, определение содержания сухого вещества в супернатанте с последующим хранением при температуре 2-6°С.

Это достигается тем, что способ профилактики или лечения радиационных поражений организма включает извлечение биологически активных веществ из натуральной кормовой добавки, содержащей следующие соотношения компонентов, мас·%: мед 1,5-2,0, прополис 2,0-2,5, перга 30,0-35,0, обножка 15,0-17,0, пчелиный яд 0,5-1,0, пчелиный расплод в разных стадиях развития 5,5-6,0, маточное молоко 3,5-4,0, восковая моль и их личинки 2,5-3,0, воск 5,0-7,0, пчелиный подмор 7,0-8,0, травяная мука - остальное, путем этанолового экстрагирования в течение 20-21 суток при 70%-ной концентрации экстрагента, фильтрацию экстрагента и удаление осадков, определение содержания сухого вещества в супернатанте и разведение стерильной водой до 3,5-4%-ной концентрации, подкожное однократное введение, которое осуществляют в виде 3,5-4%-ного спиртоводного раствора из расчета 5,6-5,7 мг АДВ на 1 кг живой массы животного до или после облучения.

Использование кормовой добавки «Вита-Форце» в течение 30 сут по 20-40 г в день мелким и 30-50 г - крупным животным обеспечивает радиозащиту (радиопрофилактику) животных от стрессовых факторов, в том числе и от радиационных поражений организма. Однако такое применение препарата в виде кормовой добавки не обеспечивает проведение экстренной профилактики или лечения радиационных поражений, что диктует необходимость изучения других способов применения высокоактивной кормовой добавки.

Существенным отличием способа для профилактики или лечения радиационных поражений организма является то, что вместо перорального и длительного использования кормовой добавки апифитогенного происхождения используют парентеральный путь ее введения в строго оттитрованных дозах методом подкожной инъекции этанолового экстракта в виде 3,5-4,0%-ного раствора, содержащего 5,6-5,7 мг сухого вещества в 1 мл экстракта. Защита животных от радиационных поражений с использованием кормовой добавки «Вита-Форце» при пероральном применении достигается при длительном (ежедневном в течение 30 сут) скармливании препарата из расчета по 20-40 г в день на голову мелким и 30-50 г в день крупным животным соответственно, что в абсолютном выражении составляет за весь период профилактического и лечебного радиозащитного кормления 600-1200 г (0,6-1,2 кг) мелким и 900-1500 г (0,9-1,5 кг) крупным чистого препарата на одного животного. При этом следует учесть, что в реальных условиях при общем содержании животных провести точную дозировку препарата не представляется возможным, поскольку, в силу различной упитанности и реактивности животных, одни из них получат большую, а другие - меньшую дозу препарата, что может отразиться на конечном эффекте - радиозащите летально облученных животных.

Индивидуальная подкожная инъекция строго дозированного количества препарата из расчета 5,6-5,7 мг сухого вещества экстракта на 1 кг живой массы позволяет создать эффективную радиопрофилактическую и радиотерапевтическую дозу препарата в организме, обеспечивая 80-85%-ную защиту летально облученных животных. При этом экономия исходного (нативного) препарата в расчете на 1 голову составляет, например, для свиней 51,42 г вместо 900,0 г, что в 17,5 раза меньше, чем при пероральном применении препарата при сохранении равнозначного радиозащитного эффекта. Многократное уменьшение дозы препарата при парентеральном введении объясняется тем, что для создания 75-80%-ной радиорезистентности свиней при пероральном применении необходимо израсходовать в среднем от 0,6 до 1,2 кг препарата «Вита-Форце». Из этого количества препарата при приготовлении этанолового экстракта получают около 1,0 л 70%-ного экстракта, из которого готовят рабочий раствор экстракта в 4%-ной концентрации, т.е. для этого исходный (70%-ный) экстракт необходимо разводить в 17,5 раза, чтобы получить экстракт 4%-ной концентрации, т.е. из 1 л 70%-ного экстракта в итоге получают 17,5 л 4%-ного экстракта, содержащего 1750 мл (доз) препарата из расчета 10,0 мл на 1 голову животного при подкожном введении эффективной радиозащитной дозы.

Способ получения препарата для профилактики или лечения радиационных поражений организма осуществляют следующим образом.

В качестве технологического сырья для приготовления радиозащитного средства апифитогенного происхождения используют многокомпонентную кормовую добавку «Вита-Форце» из продуктов пчеловодства следующего состава, мас·%:

Мед	1,5-2,0
Прополис	2,0-2,5
Перга	30-35
Пыльца (обножка)	15-17
Пчелиный яд	0,5-1,0
Пчелиный расплод в
разных стадиях развития	5,5-6,0
Маточное молоко	3,5-4,0
Восковая моль
и их личинки	1,5-2,0
Травяная мука	Остальное

Начальным этапом изготовления радиозащитного препарата является получение этанолового экстракта из кормовой добавки на основе продуктов пчеловодства «Вита-Форце». Для этой цели берут 1 объем (например, 1 кг) нативного препарата, представляющего собой порошок с видимыми малыми кормовыми гранулами и измельченными лекарственными травами, высыпают порошок в стеклянную колбу емкостью 3-5 л, заливают его 1,3-1,4 объемами (1,3-1,4 л) 70%-ного этанолового спирта, тщательно размешивают, плотно закрывают и ставят на экстрагирование при комнатной температуре в темное помещение (или шкаф). Полное экстрагирование биологически активных веществ из апифитопрепарата достигается в течение 20-21 суток с начала экстрагирования. По истечении указанной экспозиции экстракт фильтруют через стерильную 2-3-слойную марлю в стерильные колбы, определяют в нем содержание сухого вещества, помещают в холодильник и хранят при температуре (2-6)°С и при необходимости используют по назначению. Содержание сухого вещества при этом в полученном препарате колеблется в пределах 10,8-11,0%.

Для применения этанолового экстракта апифитопрепарата в качестве радиозащитного средства из исходного 70%-ного этанолового экстракта готовят 3,5-4%-ные рабочие концентрации препарата, используя известное правило креста. Так, например, если необходимо приготовить 1 л (1000 мл) 4%-ного рабочего раствора, то согласно правилу креста, следует брать 340 мл 70%-ного этанолового экстракта и к нему добавить 660 мл стерильной кипяченой воды. Полученный рабочий раствор содержит 4% этанола и 0,56-0,58% сухого вещества, т.е. в 1 мл рабочего экстракта содержится 35-40 мг этанола и 5,6-5,7 мг сухого экстрактивного вещества.

Полученный по вышеописанному способу 3,5-4%-ный этаноловый экстракт используют в качестве радиозащитного средства на облученных в летальных дозах лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Радиозащитное действие предлагаемого многокомпонентного фитоадаптогена - вытяжки из кормовой добавки «Вита-Форце» в сочетании с этанолом, осуществляется путем нормализации системы иммунитета и кроветворения, стимуляции эндогенных тиолов, повышении эндогенного фона радиорезистентности, нормализации процессов липопероксидации, пополнения резервов антиоксидантной системы (АОС) и усиления антиоксидантной активности крови.

Способ лечебно-профилактического применения этанолового экстракта апифитопрепарата иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Изучение возможности парентерального способа применения препарата «Вита-Форце».

Для определения возможности парентерального применения препарата, из маточного раствора (70%) готовили убывающие концентрации экстракта (30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1%), которые вводили белым мышам подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мл соответственно. За животными вели клиническое наблюдение, регистрируя изменения клинического состояния, количество и сроки падежа животных после парентерального введения препарата.

Установлено, что подкожное, внутримышечное и внутрибрюшинное введение концентрированных растворов экстракта (30, 20, 10%) сопровождалось развитием гиподинамии, сонливости, наркотического состояния и, в ряде случаев (при высоких концентрациях - 30, 20, 10%), гибелью животных. Только при подкожном применении 3,5-4%-ных растворов экстракта отмеченные явления отсутствовали: животные охотно принимали корм и воду, активно двигались, адекватно реагировали на внешние раздражители, имели опрятный внешний вид и случаев падежа животных при введении им больших объемов препарата (в интервале от 0,1 до 0,5 мл на животное) не было зафиксировано. Образование некрозов и других патоморфологических изменений на месте инъекции растворов не было обнаружено, что свидетельствует об отсутствии токсических эффектов использованных оптимальных концентраций (3,5-4%) препарата.

Пример 2. Определение оптимальных концентраций экстрагента, сроков экстрагирования и объемных (весовых) соотношений компонентов.

Для определения оптимальной концентрации экстрагента при извлечении биологически активных веществ (БАВ) из препарата «Вита-Форце», готовили различные концентрации (96, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5%-ные растворы) этанола и проводили экстрагирование препарата в течение 5, 10, 15, 20, 25, 30 суток после смешивания компонентов в соотношениях 1:1; 1:1,1; 1:1,2; 1:1,3; 1:1,4; 1:1,5; 1:1,6; 1:1,7; 1:1,8; 1:1,9; 1:2,0. Отбор оптимальных параметров изучаемых показателей проводили по критерию максимального выхода экстрактивных (сухих) веществ из исходного сырья.

Установлено, что максимальный выход биологически активных веществ (БАВ) из технологического сырья (порошка «Вита-Форце») - 10,8-11,0 г на 100 г исходного продукта достигается при концентрации экстрагента 69-71% (70%), объемном (весовом) соотношении 1:1,20-1:1,22 и продолжительности экстрагирования 20-21 сут с начала экстрагирования. Изменение указанных параметров экстрагирования как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения их не приводит к увеличению количества экстрагируемых веществ (сухого вещества), что свидетельствует об оптимальности отобранных параметров.

Пример 3. Определение оптимальной лечебно-профилактической дозы радиозащитного препарата при парентеральном (подкожном) применении.

Для определения оптимальной лечебно-профилактической дозы экстракта «Вита-Форце» готовили различные концентрации препарата по содержанию биолого-активных экстрактивных веществ (БАВ), т.е. по содержанию сухого вещества в экстракте. Для этого вначале из экстракта удаляли этанол на вакуумном ротационном испарителе при 28-33°С и полученный осадок (сухое вещество) растворяли в стерильной кипяченой воде в концентрациях 108,0 мг/мл, 50,4; 25,2; 12,1; 6,05; 3,02; 1,5; 1,25; 1,12; 0,6 мг/мл. Перечисленные концентрации препарата подкожно вводили облученным в летальной (7,7 Гр) дозе 120 белым мышам (по 10 животных на каждую концентрацию препарата) в количестве по 0,1 мл за 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 сут до облучения и через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 сут после облучения.

Установлено, что при подкожном введении животным препарата в концентрациях 108,0 мг/мл (10,8 мг / на 1 мышку), 50,4; 25,2; 12,1; 6,05 выживаемость радиопрофилактированных и леченых животных составляла 70-75% соответственно. При введении животным менее концентрированных растворов (3,02 мг/мл, 1,5; 1,25; 1,12; 0,6 мг/мл) наблюдалось снижение радиозащитной активности препаратов с 50 (3,02 мг/мл) до 5% (0,6 мг/мл) соответственно.

Следовательно, результаты этих опытов дают основание считать, что оптимальной лечебно-профилактической дозой апифитогенного экстракта при подкожном введении составляет 5,6-5,7 мг/кг живой массы. Для практического подкожного применения апифитопрепарата необходимо приготовить 3,5-4%-ный раствор из исходного экстракта, а вводимый объем полученного раствора при эффективной дозе 5,6-5,7 мг/кг составляет для животных живой массой 100 кг - 10 мл, 50 кг - 5 мл соответственно. При этом содержание этанола не должно превышать 3,5-4%.

Таким образом, полученный препарат и способ его применения для профилактики или лечения радиационных поражений организма, позволяют создать эффективную радиопрофилактическую и радиотерапевтическую дозу препарата в организме, обеспечивая 80-85%-ную защиту летально облученных животных и в 17,5 раз снизить расход нативного препарата в расчете на одну голову животного.

Способ получения препарата для профилактики или лечения радиационных поражений организма, включающий извлечение биологически активных веществ из натуральной кормовой добавки, содержащей следующие соотношения компонентов, мас.%: мед 1,5-2,0; прополис 2,0-2,5; перга 30-35; обножка 15-17; пчелиный яд 0,5-1,0; пчелиный расплод в разных стадиях развития 5,5-6,0; маточное молоко 3,5-4,0; восковая моль и их личинки 2,5-3,0; воск 5,0-7,0; пчелиный подмор 7,0-8,0; травяная мука - остальное, путем этанолового экстрагирования в течение 20-21 суток при 70%-ной концентрации экстрагента, фильтрацию экстрагента и удаление осадков, определение содержания сухого вещества в супернатанте с последующим хранением при температуре 2-6°С.