Экспонирование т-клеточных рецепторов
Изобретение относится к биотехнологии. Описана фаговая частица, экспонирующая на своей поверхности Т-клеточный рецептор (TCR), представляющий собой scTCR человека. Экспонированная полипептидная пара dTCR или экспонированный полипептид scTCR включает последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, а дисульфидная связь связывает аминокислотные остатки указанных последовательностей цепей константного Ig домена, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками. Представлена библиотека полипептидных пар мутированных TCR или полипептидов scTCR, экспонированных на описанной фаговой частице. Представлена нуклеиновая кислота, кодирующая описанную фаговую частицу. Раскрыт способ идентификации TCRs. Изобретение может использоваться для создания разнообразных библиотек TCR для идентификации высокоаффинных TCRs. 7 н. и 10 з.п. ф-лы, 63 ил., 2 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Фаговая частица, экспонирующая на своей поверхности Т-клеточный рецептор (TCR), характеризующаяся тем, что TCR представляет собой scTCR человека, полипептидную пару dTCR человека, или полипептидную пару dTCR не человека, а также характеризующаяся тем, что экспонированная полипептидная пара dTCR или экспонированный полипептид scTCR включает последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, а дисульфидная связь связывает аминокислотные остатки указанных последовательностей цепей константного Ig домена, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены
Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Ser 77 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или Tyr 10 экзона 1 TRAC*01 и Ser 17 экзона 1 TRB1*P01 или TRBC2*01, или Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Asp 59 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или Ser 15 экзона 1 TRAC*01 и Glu 15 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.
2. Фаговая частица по п.1, у которой или
а) С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR или С-конец scTCR полипептида связан пептидной связью с остатком, экспонированным на поверхности фаговой частицы, или
б) С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR или С-конец scTCR полипептида связан дисульфидной связью с цистеиновым остатком, экспонированным на поверхности фаговой частицы.
3. Фаговая частица по п.1, экспонирующая на своей поверхности полипептидную пару dTCR, которая включает:
первый полипептид, в котором последовательность α или β цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности а цепи внеклеточного константного домена TCR, и
второй полипептид, в котором последовательность α или β цепи вариабельного домена TCR, слита с N-концом последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR.
4. Фаговая частица по п.1, где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
5. Фаговая частица по п.2, где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
6. Фаговая частица по п.3, где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
7. Фаговая частица по п.1, где в последовательностях цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, замещены нецистеиновыми остатками.
8. Фаговая частица по п.1, которая представляет собой нитевидную фаговую частицу, экспонирующую на своей поверхности димерную полипептидную пару Т-клеточного рецептора (dTCR), причем указанная пара включает:
первый полипептид, в котором последовательность α цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности α цепи внеклеточного константного домена TCR, и второй полипептид, в котором последовательность β цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, причем первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью, находящейся между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения, а С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR связан пептидной связью с белком оболочки фага.
9. Фаговая частица по п.1, которая представляет собой нитевидную фаговую частицу, экспонирующую на своей поверхности димерную полипептидную пару Т-клеточного рецептора (dTCR), причем указанная пара включает:
первый полипептид, в котором последовательность α цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности α цепи внеклеточного константного домена TCR, и второй полипептид, в котором последовательность β цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, причем первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью, находящейся между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения, а С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR связан пептидной связью с белком оболочки фага, и где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
10. Библиотека полипептидных пар мутированных TCR или полипептидов scTCR, экспонированных на фаговых частицах по п.1.
11. Библиотека полипептидных пар мутированных dTCR, экспонированных на фаговых частицах dTCR по п.8.
11. Библиотека мутированных TCRs по п.10 или 11, в которой различия находятся в вариабельном домене или доменах dTCR или полипептидов scTCR.
12. Нуклеиновая кислота, кодирующая фаговую частицу по п.1.
13. Нуклеиновая кислота, кодирующая фаговую частицу по п.8.
15. Способ идентификации TCRs с характеристиками, выбираемыми из (i) усиленной экспрессируемости и/или усиленных характеристик (ii) связывания и/или (iii) стабильности, причем указанный способ заключается в том, что библиотека по п.10 подвергается: процессу отбора по указанным характеристикам с выделением фаговых частиц, экспонирующих TCR с указанными характеристиками, и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц и/или процессу скрининга, который измеряет указанные характеристики, идентифицируя те фаговые частицы, которые экспонируют TCR с желаемыми характеристиками, и выделяя эти фаговые частицы и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц.
16. Способ идентификации TCRs с характеристиками, выбираемыми из (i) усиленной экспрессируемости и/или усиленных характеристик (ii) связывания и/или (iii) стабильности, причем указанный способ заключается в том, что библиотека по п.11 подвергается: процессу отбора по указанным характеристикам, и выделением фаговых частиц, экспонирующих TCR с указанными характеристиками, и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц и/или процессу скрининга, который измеряет указанные характеристики, идентифицируя те фаговые частицы, которые экспонируют TCR с желаемыми характеристиками, и выделяя эти фаговые частицы и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц.
17. Способ по п.15 или 16, в котором усиленной характеристикой является повышенная аффинность к TCR лиганду.
