Способ определения способности биологически активных веществ (бав) к проявлению эффекта сверхмалых доз (смд)

Изобретение относится к методике определения способности биологически активных веществ (БАВ) к проявлению эффекта сверхмалых доз (СМД) и может быть использовано при исследовании БАВ на возникновение эффекта СМД. Способ определения способности БАВ к проявлению эффекта СМД заключается в получении определенного количества проб разведений, последующего определения в капилляре и вычислении краевого угла смачивания. По определенному изменению краевого угла смачивания определяют, что исследуемое вещество будет обладать эффектом СМД. Техническим результатом изобретения является повышение точности определения эффекта СМД. 1 ил.

 

Изобретение относится к методике определения способности биологически активных веществ к проявлению эффекта сверх малых доз и может быть использовано при исследовании БАВ на возникновение эффекта СМД.

Известно, что у растворов есть так называемые коллигативные свойства, то есть свойства, зависящие от концентрации веществ в растворе, одним из которых является поверхностное натяжение. Поверхностное натяжение определяется через смачивание жидкостью твердой поверхностью. Явление смачиваемости характеризуется краевым углом между смоченной поверхностью твердого тела и мениском жидкости в точках их пересечения. На основании этого характеризуют ассоциацию молекул в разведениях. (Гаврилов Ю.В., Салычева Л.В., Комисаренко А.А. Значение потенцирования в гомеопатии. Опубликовано 17.06.06).

Недостатками данного способа является следующее:

Недостаточное практическое применение вследствие не полностью выявленной зависимости: концентрация - изменение краевого угла смачивания; и зависимости возникновения эффекта сверхмалых доз (СМД) в соответствии с изменением краевого угла смачивания.

Аналогом предлагаемого способа является определение возникновения эффекта сверхмалых доз (СМД) биологически активных веществ (БАВ) при помощи исследования изменения двигательных способностей инфузорий-спиростом под действием сверхмалых доз этих БАВ. (Лебедева Н.Е., Головкина Т.В., Горбатова Е.Н., Бурлакова Е.Б.. Радиац. биол. Радиоэкол. 2003. №5, с.43-48).

Недостатком данного способа является:

Не достаточно доступны микроорганизмы, используемые в способе.

Задачей предлагаемого способа является повышение точности определения эффекта сверхмалых доз различных биологически активных веществ (БАВ) на основе изменения краевого угла смачивания в капилляре проб различных разведений этих биологически активных веществ.

Поставленная задача достигается тем, что для определения способности биологически активных веществ (БАВ) к проявлению эффекта сверхмалых доз (СМД) получают определенное количество проб разведений (этих же БАВ), определяют в капилляре и вычисляют краевой угол смачивания и по его изменению определяют эффект СМД.

Получили очищенную бидистиллированную воду. Подготовили нужное количество колб объемом 100 мл для приготовления разведений; кювету, капилляр для исследования, катетометр.

Первоначально в колбу, содержащую 50 мл бидистиллированной воды, вносили 0,5 мл биологически активного вещества (БАВ), что соответствует первому сотенному разведению. Затем проводилось несколько ступеней потенцирования. Процесс потенцирования представлял собой процесс последовательного сотенного разведения, сопровождающийся интенсивным встряхиванием в количестве 50 раз.

Каждую пробу разведений испытывали на выбранной биомоделе, с последующем исследованием этих же образцов разведений на изменение краевого угла смачивания в капилляре при помощи катетометра.

Полученные на катетометре результаты сопоставлялись с результатами биологического эффекта сверхмалых доз (СМД). Выяснилось, что разведения, при исследовании которых в капилляре происходит понижение краевого угла смачиваемости, дают некий биологический эффект. Если у разведений биологически активных веществ (БАВ) не обнаруживалось изменений в краевом угле смачивания, то вещество не обладает биологическим эффектом сверхмалых доз.

Пример 1

В ходе эксперимента было приготовлено тринадцать сотых разведений гемолизирующего раствора с концентрацией от 10^-2 до 10^-26 от исходной. Разведения готовились на фильтрованной и прошедшей двухкратную дистилляцию воде. Было взято 16 пробирок (3 контрольные), в которых находилась равноценная 3% смесь эритроцитов (причем смесь устойчива, без лизиса). В 13 пробирок добавили равноценное количество стандартного раствора сапонинов для гемолиза (который в контроле начинает вызывать снижение осмотического давления в растворе, что в свою очередь вызывает растворение эритроцитов). Визуально происходит переход раствора из взвешенного состояния (мутный раствор) в состояние истинного раствора (прозрачный окрашенный раствор). В каждую из опытных пробирок добавляли по равноценному объему соответствующего разведения, то есть в первую добавили первое сотое разведение гемолизина (10^-2), во вторую - второе сотое разведение (10^-4) и так соответственно до тринадцатой пробирки, в которую добавили сотое разведение, что соответствует степени разведения 10^-26 от исходной концентрации.

Первая контрольная пробирка содержала равноценный объем эритроцитов, а так же равноценный объем гемолизирующего раствора стандартной концентрации, что и опытные образцы, и дистиллированную воду, в объеме, равном добавленным разведениям в каждую опытную пробирку.

Состав второй контрольной пробирки отличался тем, в место гемолизина пороговой концентрации добавили дистиллированную воду в объеме, равном объему гемолизирующего раствора.

В составе третьей контрольной пробирки в место гемолизина и воды был добавлен 0,9% раствор хлорида натрия в соответствующих объемах.

Результатом эксперимента было следующее. В пробирках №1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 13, а так же в контроле №1 наблюдался переход раствора из взвешенного состояния (смесь эритроцитов) в состояние истинного раствора.

Особый интерес представляют пробирки №6 и №11 (10^-12 и 10^-22 разведения от исходной концентрации), в которых этого перехода не произошло (нет растворения эритроцитов), несмотря на то, что в контрольной пробирке исходного объема гемолизирующего раствора пороговой концентрации достаточно для растворения эритроцитов. Как, например, в контроле №2 и №3 так же не было лизиса, но там не было и гемолизирующего агента.

Были сделаны предположения, что в определенных концентрациях разведений (в нашем случае это 10^-12 и 10^-22 от исходной концентрации) происходят изменения физико-химических показателей воды под действием БАВ (гемолизирующего агента). Причем как и в литературных источниках, в нашей работе это выражено в виде полимодальной зависимости - отсутствии лизиса при действии двух разных концентраций, в присутствии того же вещества в нормальной концентрации, которая 100% должна была вызывать растворение эритроцитов.

Решено было проанализировать разведения (по сути, воду) по некоторым физико-химическим показателям.

Образцы разведений исследовались на уменьшении угла смачиваемости в капилляре. Результатом явилось то, что угол смачивания понижался только в двух образцах №6 и №11, что соответствует разведениям гемолизина 10^-12 и 10^-22 от исходной концентрации и соответствует выявлению остановки разрушения эритроцитов в вышеописанном эксперименте. В других пробах изменения угла смачивания незначительные (см. чертеж).

Данный эксперимент проводился многократно, что подтверждает вышеописанное. Необходимо отметить, что в эксперименте могли меняться степени разведения, которым соответствовал биологический эффект, но понижение краевого угла смачивание так же соответствовало этим разведениям.

Пример 2

В ходе эксперимента было приготовлено пятнадцать сотых разведений инсулина с концентрацией от 10^-2 до 10^-30 от исходной. Разведения готовились на фильтрованной и прошедшей двухкратную дистилляцию воде. В работе использован инсулин генно-инженерный Актрапид ИМ короткого действия, 100 МЕ/мл, производства фирмы Ново Нордикс А/о, Багсваерд, Дания. Эксперименты проведены на 12 беспородных белых крысах-самцах. Биологический эффект инсулина и его разведений (гипогликемическая реакция) тестировали на животных, страдающих диабетом, что сопровождалось гипергликемией до 30-35 ммоль/л (при нормальном содержании глюкозы у интактных животных 5,5-6,6 ммоль/л) и появлением других типичных признаков заболевания.

Стандартный раствор инсулина, как и его разведения, вводили в хвостовую вену животных. Кровь для определения концентрации глюкозы забирали из подъязычной вены до и после инъекции инсулина.

Введение исходного раствора инсулина (100 МЕ/мл) в подобранной дозе приводило к нормализации уровня сахара в крови у экспериментальных животных. Контрольное введение чистого растворителя как подопытным, так и интактным крысам не оказывало гипогликемического действия. Более того, у отдельных животных отмечено небольшое повышение концентрации глюкозы в крови, вероятно, за счет стрессорной реакции.

Начиная с разведения 10^-16-10^-17, инъекции инсулина вызывали слабовыраженное гипогликемическое действие. При введении инсулина в разведения 10^-18 от исходной концентрации уровень глюкозы в крови у отдельных животных заметно снижался и гипогликемический эффект СМД был резко выражен. Так, у одного из животных с экспериментальным диабетом содержание глюкозы снижалось с 28,9 ммоль/л до 16,6 ммоль/л, у другого - с 20 ммоль/л до 9,6 ммоль/л.

Образцы разведений инсулина исследовались на уменьшении угла смачиваемости в капилляре. Результатом явилось то, что угол смачивания понижался только в образце №9, что соответствует разведениям инсулина 10^-18 исходной концентрации и соответствует снижению содержание глюкозы.

Пример 3

Аналогично примеру 1 проводились эксперименты с уксусной кислотой (она является эффективным гемолизирующем агентом) в место раствора сапонинов, но соответствующего биологического эффекта не было обнаружено. Соответственно не было обнаружено снижения краевого угла смачивания в капилляре при исследовании проб разведений уксусной кислоты.

Положительный эффект предлагаемого метода состоит в том, что:

1) метод прост в аппаратурном оформлении и работе, относительно доступен.

2) с помощью указанного метода можно определить, в каких степенях разведений вещество будет проявлять эффект сверхмалых доз (СМД).

Способ определения способности биологически активных веществ (БАВ) к проявлению эффекта сверхмалых доз (СМД), заключающийся в получении определенного количества проб разведений, определении в капилляре и вычислении краевого угла смачивания, отличающийся тем, что по изменению краевого угла смачивания определяют эффект сверхмалых доз (СМД).