Способ оценки фертильных свойств эякулята
Владельцы патента RU 2348933:
Государственное образовательнок учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU)
Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики мужского бесплодия. Снижение показателя электрофоретической подвижности сперматозоидов ниже 11,65 мкм/с свидетельствует о нарушении фертильных свойств исследуемого эякулята. Изобретение обеспечивает сокращение сроков обследования пациентов и улучшения диагностики нарушений фертильности у мужчин. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики мужского бесплодия.
Необходимость быстрой оценки фертильных свойств эякулята в клинической практике обусловлена рядом причин. При обследовании бесплодной пары первоочередная оценка фертильных свойств эякулята позволит оптимизировать процесс диагностики и последующего лечения. Репродуктивная урология нуждается в скрининговом методе оценки фертильных свойств эякулята для обеспечения массовых профилактических исследований и динамического мониторинга уровня мужской фертильности в процессе лечения заболеваний мужских половых органов.
Таким образом, необходим новый метод диагностики, позволяющий на основании исследования эякулята объективно оценить состояние мужской фертильности у конкретного больного.
Лабораторная оценка концентрации, морфологии и подвижности сперматозоидов по детально разработанным критериям ВОЗ [WHO laboratory manual for the examination of human sperm and semen-cervical mucus interaction. - WHO, 4-th edn.: Cambridqe univerciti pres; 1999. - 128 p.] является классическим методом оценки мужской фертильности. Фертильным признается эякулят, содержащий не менее 20 млн. сперматозоидов в одном миллилитре, при условии наличия не менее 50% прогрессивно подвижных и не менее 15% морфологически нормальных форм. Однако клиническая спермограмма требует наличия в лаборатории специально подготовленного персонала и строгого соблюдения методики исследования, поэтому во многом является субъективной методикой. Кроме того, механистическая трактовка результатов клинической спермограммы далеко не всегда соответствует реальному состоянию мужской фертильности, так как известны случаи бесплодия при нормозооспермии [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 1. Андрология и генитальная хирургия. 2001, №1, С.72-77].
Известен «Способ измерения электрофоретической подвижности биологических микрообъектов» (Егорова Н.Г., Голубев О.А., Кузнецов О.Ю., Слободин В.Б., патент РФ №2199733 от 2003.02.27). Сущность данного способа заключается в измерении электрофоретической подвижности биологических объектов (авторы исследовали прокариотические и эукариотические клетки в суспензиях), помещенных в специальную камеру, заполненную диэлектрической жидкой средой, посредством регистрации амплитуды колебания клеток в поле зрения микроскопа. Электрофоретическая подвижность (ЭФП), обусловленная электрическим зарядом ее мембраны (ζ-потенциалом), является одним из существенных биологических показателей, характеризующих поверхностные свойства клеточной мембраны и отражающим функциональное состояние клетки, в том числе и сперматозоида, поэтому этот способ был избран нами в качестве прототипа.
Методика исследования: сперма объемом 1 мл разводилась в 5 мл 5% раствора сахарозы и помещалась в герметичную камеру для измерения ЭФПС. На электроды камеры подавался ток от генератора низких частот (0,1 Гц). При этом каждый сперматозоид колебался пропорционально заданной частоте с амплитудой, определяемой собственным зарядом (ζ-потенциалом). Измерительная шкала окуляра располагалась параллельно оси колебания клеток. Скорость перемещения клеток измеряли амплитудно-частотным методом. Напряжение электрического поля составляло 5 В, использовался объектив с увеличением 20Х. В качестве единицы измерения амплитуды колебаний сперматозоидов использовалось 1 деление окуляра-микрометра, равное 0,5 мкм. В каждой пробе производили измерение 100 отдельных сперматозоидов и вычисляли среднее значение. Среднее время исследования одной пробы было не более 15 минут.
Нами установлено, что в эякулятах бесплодных мужчин величина ЭФП сперматозоидов не превышала значение 11,65 мкм/с. В то же время показатели ЭФП сперматозоидов фертильных мужчин превышали 11,65 мкм/с. Результаты измерений приведены в табл.1.
Технический результат предлагаемого способа заключается в сокращении сроков обследования пациентов и в улучшении диагностики нарушений фертильности у мужчин на основании оценки ЭФП сперматозоидов. Снижение величины ЭФПС ниже 11,65 мкм/с свидетельствует о нарушении фертильных свойств эякулята и необходимости применения дополнительных диагностических тестов.
Предлагаемый способ использован в процессе обследования 15 мужчин. После применения предлагаемого способа оценки фертильных свойств эякулята состояние фертильности, установленное на основании изучения ЭФП сперматозоидов (заявляемый способ), полностью совпало с оценкой, базирующейся на основании данных, полученных с помощью стандартных клинических и лабораторных методик (анамнез, спермограмма).
Преимущества заявляемого способа:
1. Предлагаемый способ позволяет сократить сроки обследования больных, так как позволяет отказаться от целого ряда рутинных исследований.
2. Предлагаемый способ позволяет снизить нагрузку на лабораторию, выполняющую классические спермограммы, за счет выявления фертильных эякулятов, дальнейшее изучение которых не показано.
Новизна предлагаемого способа заключается в том, что впервые на основании оценки электрофоретической подвижности сперматозоидов предлагается способ оценки фертильных свойств эякулята.
Примеры из практики клинического применения способа.
Пример 1.
Больной М., 27 лет.
Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности.
Из анамнеза: Бесплодный брак в течение 4 лет, ранее не лечился. Супруге 26 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.
Объективно: Нормостеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы развиты правильно. Яички в мошонке и без особенностей. Придатки обоих яичек дифференцируются, безболезненны при пальпации.
Осмотр per rectum: Простата умеренно увеличена, междолевая бороздка сглажена, железа болезненная при пальпации.
Спермограмма
| Количество спермы | 3,5 мл |
| Вязкость | N |
| Лейкоциты | 2-3-5 в поле зрения |
| Сперматогенный эпителий | 2% |
| Количество сперматозоидов в 1 мл | 70 млн |
| подвижность категории А | 0% |
| подвижность категории В | 11% |
| подвижность категории С | 29% |
| подвижность категории D | 60% |
| Патологические формы | 90% |
Исследование половых гормонов:
| ФСГ | 7,4 МЕ/л |
| ЛГ | 4,0 МЕ/л |
| Пролактин | 230,5 ММЕ/л |
| Тестостерон | 14,3 нмоль/л |
Консультация генетика: кариотип 46XY
Секрет простаты.
Лейкоциты: 20-25 в поле зрения,
Эритроциты - нет
Лецитиновые зерна - ++
Бактериологический анализ секрета простаты: роста нет
ПЦР: инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.
Электофоретическая подвижность сперматозоидов: 9,32 мкм/с
Клинический диагноз: Хронический абактериальный простатит (категории 3А), первичное бесплодие, астенозооспермия.
Пример 2.
Больной В., 32 года.
Жалоб нет, обследован в качестве волонтера.
Из анамнеза: В браке 8 лет, заболеваний мужских половых органов не отмечает. Имеет двоих детей (6 лет и 10 мес. соответственно). Супруге 29 лет, гинекологически здорова.
Объективно: Нормостеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы развиты правильно. Яички в мошонке, нормальных размеров и консистенции. Придатки яичек и семявыносящие протоки дифференцируются с обеих сторон, безболезненны при пальпации.
Осмотр per rectum: Простата нормальных размеров и формы, безболезненная при пальпации.
УЗИ яичек: Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, нормальных размеров, гипоэхогенные.
Спермограмма.
| Количество спермы | 3,5 мл |
| Вязкость | N |
| Лейкоциты | Единичные в поле зрения |
| Сперматогенный эпителий, % | 3 |
| Количество сперматозоидов в 1 мл | 150 млн |
| подвижность категории А, % | 28 |
| подвижность категории В, % | 30 |
| подвижность категории С, % | 17 |
| подвижность категории D, % | 25 |
| Патологические формы, % | 60 |
Консультация генетика: кариотип 46XY
Электофоретическая подвижность сперматозоидов: 11,65 мкм/с
Исследование половых гормонов:
| ФСГ | 3,4 МЕ/л |
| ЛГ | 2,5 МЕ/л |
| Пролактин | 210 ММЕ/л |
| Тестостерон | 18,0 нмоль/л |
Характеристика состояния здоровья: Урологически здоров, фертилен.
| Таблица 1. Способ оценки фертильных свойств эякулята. | |||
| Величина электрофоретической подвижности сперматозоидов в эякулятах обследованных мужчин. | |||
| № | Электрофоретическая подвижность сперматозоидов, мкм/с | Характеристика спермограммы | Фертильность |
| 1 | 6,99 | олиготератозооспермия | бесплодный брак |
| 2 | 6,99 | олиготератозооспермия | бесплодный брак |
| 3 | 6,99 | астенотератозооспермия | бесплодный брак |
| 4 | 6,99 | олиготератозооспермия | бесплодный брак |
| 5 | 6,99 | астенотератозооспермия | бесплодный брак |
| 6 | 6,99 | астенотератозооспермия | бесплодный брак |
| 7 | 9,32 | астенозооспермия | бесплодный брак |
| 8 | 9,32 | астенотератозооспермия | бесплодный брак |
| 9 | 11,65 | нормозооспермия | фертилен |
| 10 | 11,65 | нормозооспермия | фертилен |
| 11 | 11,65 | нормозооспермия | фертилен |
| 12 | 11,65 | нормозооспермия | фертилен |
| 13 | 11,65 | нормозооспермия | фертилен |
| 14 | 13,98 | нормозооспермия | фертилен |
| 15 | 18,64 | нормозооспермия | фертилен |
Способ оценки фертильных свойств эякулята путем исследования электрофоретической подвижности биологических объектов, отличающийся тем, что при снижении данного показателя в сперме ниже 11,65 мкм/с констатируется нарушение фертильности исследуемого эякулята.
