Антиагрегационное средство

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается разработки нового антиагрегационного средства. Для этого предлагается использовать тропоксин (гидрохлорид 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана), известный ранее в качестве противомигреневого средства. Тропоксин обладает выраженной антиагрегационной активностью, превосходящей активность используемого в клинической практике антиагрегационного препарата трентал.

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения ишемических поражений мозга и сердца, а также нарушений микро- и макроциркуляции в других органах. Кардиоваскулярные и цереброваскулярные расстройства занимают ведущее место среди основных причин смертности и инвалидизации населения различных стран. Антиагрегационные средства широко применяются в комплексной терапии сердечно-сосудистых заболеваний.

Известны средства, снижающие агрегационную способность тромбоцитов. В частности, пентоксифиллин (трентал). Он снижает агрегационную способность тромбоцитов и обладает сосудорасширяющим действием, поэтому нашел широкое применение при лечении нарушений мозгового и регионального кровообращения (С.Крыжановский, М.Вититнова. Современные лекарственные средства. М.: Ризол классик, 2005). Вместе с тем пентоксифиллин обладает рядом существенных побочных эффектов. К ним относятся тошнота, рвота, чувство тяжести в эпигастрии, тахикардии, артериальная гипотензия, головокружение, нарушение сна, судороги, возбуждение, аллергические реакции. Все это часто ограничивает его применение в клинической практике.

Широко применяется также ацетилсалициловая кислота. Она оказывает мощное антиагрегационное действие как in vitro, так и in vivo. Однако данное соединение тормозит противотромботическую активность сосудистой стенки, что является крайне нежелательным в процессе лечения и профилактики тромбозов. Именно в силу этих причин часты случаи так называемой "аспиринорезистентности" у значительного контингента больных. Кроме того, ацетилсалициловая кислота обладает сильным ульцерогенным эффектом, вызывает лейкопению и др. В силу изложенного, изыскание новых ингибиторов агрегации тромбоцитов остается актуальной задачей фармакологии.

Нами предложено использовать в качестве средства, тормозящего агрегационную способность тромбоцитов, гидрохлорид 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октан (тропоксин). Он снижает агрегационную способность тромбоцитов при ее индукции адреналином в конечной концентрации 2-7 мг/мл, а АДФ-индуцированную агрегацию в концентрации 0,01-10 мг/мл. По своей антиагрегационной активности тропоксин превосходит пентоксифиллин при использовании как in vitro, так и ex vivo.

Данные закономерности подтверждаются следующими примерами.

Конкретные примеры, подтверждающие антиагрегационную активность тропоксина

Пример 1. Эксперименты по изучению влияния гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана на агрегационную активность тромбоцитов in vitro были выполнены на венозной крови здоровых доноров, которую получали путем пункции кубитальной вены и стабилизировали 3,8%-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Для приготовления богатой тромбоцитами плазмы кровь центрифугировали в течение 10 минут при 1000 об/мин, после чего верхний слой плазмы переносили в другую пробирку, а остаток повторно центрифугировали в течение 20 минут при 3000 об/мин для получения плазмы, бедной тромбоцитами.

Агрегацию тромбоцитов исследовали на агрегометре фирмы "Biola" (Россия) по методу G.G.V.Born. С этой целью в кювету прибора помещали 300 мкл исследуемой богатой тромбоцитами плазмы. Исследуемое вещество добавляли в кювету агрегометра, инкубировали в течение 5-ти минут при 37°С и затем индуцировали процесс тромбоцитарной агрегации. В качестве проагрегантов в работе использовали АДФ (Boehringer Mannheim, Австрия) в конечной концентрации 1×10^-5 М и адреналин (Reanal, Венгрия) в конечной концентрации 2,5×10^-6 М. Оптическим контролем служил такой же объем плазмы, не содержащей тромбоцитов. О степени агрегации судили по максимальной величине падения оптической плотности после окончания реакции (A_max) по сравнению с исходной величиной. При инкубации обогащенной тромбоцитами плазмы с 0,01 мг/мл гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов снижалась с 59% до 46%.

Пример 2. Плазму, обогащенную тромбоцитами, приготовляли как описано в примере 1. При инкубации обогащенной тромбоцитами плазмы с 3 мг/мл гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана АДФ-индуцированная агрегационная способность тромбоцитов снижалась до 29%. На интактной плазме она составила 56%.

Пример 3. Плазму, обогащенную тромбоцитами, приготовляли как описано в примере 1. При инкубации обогащенной тромбоцитами плазмы с 7 мг/мл гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана АДФ-индуцированная агрегационная способность тромбоцитов снижалась до 18%. На интактной плазме она составила 55%.

Пример 4. Плазму, обогащенную тромбоцитами, приготовляли как описано в примере 1. При инкубации обогащенной тромбоцитами плазмы с 2 мг/мл гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана адреналин-индуцированная агрегационная способность тромбоцитов снижалась до 38%. На интактной плазме она составила 58%.

Пример 5. Плазму, обогащенную тромбоцитами, приготовляли как описано в примере 1. При инкубации обогащенной тромбоцитами плазмы с 7 мг/мл гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана адреналин-индуцированная агрегационная способность тромбоцитов снижалась до 2%. На интактной плазме она составила 54%.

Пример 6. Плазму, обогащенную тромбоцитами, приготовляли как описано в примере 1. При инкубации обогащенной тромбоцитами плазмы с 7 мг/мл пентоксифиллина АДФ-индуцированная агрегационнная способность тромбоцитов снижалась до 40%. На интактной плазме она составила 53%.

Пример 7. В экспериментах по изучению влияния гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана на агрегацию тромбоцитов ex vivo использовали кроликов обоего пола массой 3,0-4,0 кг, которым болюсно внутривенно вводили данное вещество в дозе 10 мг/кг веса. Для инъекции гидрохлорид 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октан предварительно растворяли в 5 мл физиологического раствора. Образцы крови для оценки тромбоцитарной активности забирали из краевой вены уха животного методом свободного падения капель. Кровь брали до введения вещества (контрольный опыт) и через 15, 45, 75 и 90 минут после введения. Стабилизацию крови и приготовление образцов бедной и богатой тромбоцитами плазмы, а также измерение тромбоцитарной агрегации проводили с применением тех же методик, что и при работе с кровью доноров.

В исходном состоянии агрегационная способность тромбоцитов интактного кролика составила 54%. Через 15 мин после введения она составила 37%, через 45 мин - 28%, через 75 мин - 23%, через 90 мин - 34%. Таким образом, гидрохлорид 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октан проявил антиагрегационную активность не только в условиях in vitro, но и ex vivo.

Пример 8. В экспериментах по изучению влияния пентоксифиллина на агрегацию тромбоцитов ex vivo использовали кроликов обоего пола массой 3,0-4,0 кг, которым болюсно внутривенно вводили данное вещество в дозе 10 мг/кг веса. Для инъекции пентоксифиллин предварительно растворяли в 5 мл физиологического раствора. Образцы крови для оценки тромбоцитарной активности забирали из краевой вены уха животного методом свободного падения капель. Кровь брали до введения вещества (контрольный опыт) и через 15, 45, 75 и 90 минут после введения. Стабилизацию крови и приготовление образцов бедной и богатой тромбоцитами плазмы, а также измерение тромбоцитарной агрегации проводили с применением тех же методик, что и при работе с кровью доноров. В исходном состоянии агрегационная способность тромбоцитов интактного кролика составила 51%. Через 15 мин после введения она составила 43%, через 45 мин - 39%, через 75 мин - 30%, через 90 мин - 45%.

Таким образом, тропоксин (гидрохлорид 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октан) по своей антиагрегационной активности как in vitro, так и ex vivo превосходит пентоксифиллин, используемый в клинической практике в качестве антиагреганта.

Применение гидрохлорида 3-(3,4,5-триоксибензоил-оксиимино)-8-метил-8-азабицикло[3,2,1]октана (тропоксина) в качестве антиагрегационного средства.