Способ профилактики платиноза кожи

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для профилактики платиноза кожи. Для этого в качестве защитного средства используют ежедневные аппликации 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования свыше 90%. Способ обеспечивает создание барьера, эффективно конкурирующего с платиной в глубоких слоях дермы и препятствующего образованию комплекса платина-коллаген, а также повышающего клиренс металла из дермы в выделительные и детоксикационные системы организма. 7 табл., 6 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и предназначено для предупреждения развития дерматитоплатиноза при контакте открытых участков кожи с агрессивными соединениями металлов платиновой группы.

Известны способы профилактики платиноза кожи, включающие наряду с предложенными на производстве мерами индивидуальной защиты кожи в виде спецодежды, очков и перчаток использование мазей, паст и кремов. Используемые химические вещества препятствуют попаданию комплексов металлов в глубокие слои эпидермиса в силу создания герметичного слоя и закрытия выводных протоков сальных и потовых желез. Гидрофильные защитные кремы легко смываются водой, механически препятствуют внедрению в кожу соединений металлов, присутствующих в технических маслах, жирах, нефтепродуктах, лаках, растворителях, смолах (паста «Хиот-6, мазь Селисского, мазь «Исчезающий крем») [1], образуют защитные пленки (пасты «Невидимые перчатки», «Биологические перчатки») [2]. Гидрофобные мази и пасты не удаляются водными растворами, осуществляют защиту от воздействия слабых кислот и щелочей, водных растворов солей, смазочно-охлаждающих жидкостей (паста «ИЭР-2» в комбинации с поверхностно-активными моющими средствами), образуют защитные накожные пленки с включением в них воска, нитроцеллюлозы, шеллака, силикона [3]. В современные накожные защитные пленки включаются комплексообразователи, приводящие к инактивации соединений металлов с образованием устойчивых трилоновых связей (кальций-динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, лимонная, аскорбиновая, виннокаменная кислоты, гидрохинон, цистеин, 2,3-димеркаптопропанол, ионообменные смолы). Эффективным защитным кремом является крем «ПМС-400» на основе полиметилсилоксана, натрия бисульфат, натрия сульфат, натрия цитрат, пиросульфат натрия [4].

Профилактика попадания соединений металлов в кожу заключается и в применении эффективных моющих ингредиентов на основе поверхностно-активных веществ, препятствующих выпадению в осадок на кожные покровы солей кальция и магния, резко не меняющих кислотно-щелочное равновесие кожи (ДНС-АК и средства на его основе) [5].

Известны защитные мази, обладающие амфифильными свойствами, способные универсально инактивировать соединения металлов в водных и масляных средах (ГКЖ-94) [6]. Фотозащитными свойствами на коже обладают ацетилсалициловая и салициловая, аскорбиновая кислоты, танин, хинин, салол, парааминобензойная кислота, окись цинка, двуокись титана (пасты Бушуры, Сало, Шелюженко, кремы Стоянова, Ленсиной, парфюмерные кремы «Щит», «Луч», «Антилюкс», «Ахромин») [7]. Соединения металлов группы платины, меди, кобальта, цинка могут быть инактивированы включением в мазевые основы унитиола, триэтаноламина, цитрата натрия, этилендиаминтетраацетата [8].

Для эффективного удаления с кожных покровов производственных загрязнений используют анионоактивные, катионоактивные, неионогенные вещества. Группа анионоактивных соединений включает первичные и вторичные алкилсульфонаты: алкилсульфаты, сульфанолы, алкилбензосульфаниты, динатриевые соли моноэфиров сульфоянтарной кислоты [9]. Группа катионоактивных веществ включает алкилтриметилбензиламмонийхлорид, алкилдиметилбензиламонийхлорид, стеариновую кислоту, октадециламинопропионитрил, кислоты кашалотового жира, третичный алкилдиметиламин.

Однако как анионные, так и катионные инактивирующие соединения в определенных дозах вызывают раздражение и воспалительную реакцию кожи.

Неионогенные поверхностно-активные вещества представляют собой оксиэтилированные алкилфенолы, моноэтаноламиды, первичные спирты - синтанолы. Превышение пороговых концентраций этих соединений в моющих средствах приводит к раздражающему действию на коже и развитию ее сенсибилизации, появлению входных ворот для микробной инвазии.

Важное место в профилактике внедрения соединений металлов в эпидермальный слой занимают активные добавки к основным ионитам (полифосфаты, карбоксиметилцеллюлоза, кислородсодержащие отбеливатели, щелочные электролиты - карбонаты, силикаты).

Из группы комплексообразующих веществ наиболее часто применяют органические комплексообразователи аминополикарбоновых кислот (трилон А, трилон Б) [10]. Активность этих соединений связана с многоосновностью органических кислот, наличием активных аминосоединений.

Однако методы специфической десенсибилизации кожи на основе селективного связывания и трансляции металлов платиновой группы, внедренных в глубокие слои дермы, не разработаны. Указанные профилактические химические вещества, инактивируя агрессивные соединения металлов, снимают острые воспалительные реакции в коже, но не влияют на конкурентное связывание металла с коллагеном в глубоких слоях дермы и, таким образом, не влияют на развитие контактной гиперчувствительности замедленного типа. Кроме того, известные средства при нанесении на кожу не повышают клиренс металла платины выделительными системами организма: почками, эпидермисом кожи, кровью, мочой, печенью, снижая при этом его концентрацию в глубоких слоях дермы. Указанные средства профилактики являются в разной степени агрессивными по отношению к коже и вызывают признаки ее воспаления, реакцию гиперчувствительности замедленного типа, усугубляют течение металлодерматоза, непосредственно слабо связывают саму платину.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи создания защитного барьера, эффективно конкурирующего с металлом платиной в глубоких слоях дермы, препятствующего образованию комплекса платина-коллаген и повышающего клиренс металла из дермы в выделительные и детоксикационные системы организма.

Задачу достигают за счет того, что в качестве защитного средства используют ежедневные аппликации 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования свыше 90%.

Способ создания защитного барьера выполняют следующим образом: группе морских свинок в количестве 9 особей после удаления волосяного покрова в нижнедорсальной поверхности спины площадью 3х3 см на кожу ежедневно наносят в течение 10-12 дней 0,1 мл 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94%. После каждой аппликации хитозана через 4 часа следует нанесение раствора соли платины - гексахлорплатината аммония с содержанием металла 0,1 мг в 0,1 мл. Контроль абсолютного содержания металла в дерме, эпидермисе, периферической крови, печени, селезенке, почках, надпочечниках, тимусе, регионарных (паховых) и отдаленных (брыжеечных) лимфатических узлах, вторичной моче производят на 3, 6 и 9 дни после окончания нанесения хитозана методом масс-спектрометрия на установке ELAN 9000. Контрольной группе животных, состоящей из 9 особей, на обнаженную кожу производят только аппликации раствора соли платины с содержанием металла 0,1 мг в 0,1 мл в течение 10-12 дней и контроль абсолютного содержания металла платины в тех же органах и тканях и в те же сроки, что и у опытной группы животных.

Результаты исследования в контрольной группе животных показывают, что платина кумулируется и длительно сохраняется во всех исследуемых органах и системах. На 6 сутки по сравнению с 3 сутками после прекращения сеансов аппликаций металла на кожу его содержание увеличивается в эпидермальном слое в среднем в 1,1 раза, в дерме - в 1,5 раза, в регионарных лимфатических узлах - в 2 раза, в отдаленных лимфатических узлах - в 2 раза, в вилочковой железе - в 2 раза, в надпочечниках - в 1,2 раза, в печени - в 1,2 раза. На 6 сутки клиренс платины с мочой возрастает в 1,5 раза, а затем существенно снижается. В периферической крови характерно снижение абсолютного содержания металла по сравнению с третьими сутками после окончания аппликаций во все сроки наблюдения: на шестые сутки в среднем в 2 раза, на девятые сутки - в 2,5 раза.

Определение абсолютного содержания платины в группе опытных животных показывает увеличение клиренса металла в периферической крови в среднем в 3,5 раза, в почках - в 1,5 раза, в печени - в 1,3 раза, в регионарных и отдаленных лимфатических узлах - в 1,6 раза, в селезенке - в 1,6 раза, в тимусе - в 2 раза в течение всех сроков контроля. Выделение платины с мочой возрастает по сравнению с результатами контрольной группы животных на 3 и 6 сутки аппликаций в среднем в 2 раза, на 9 сутки - в 10 раз. Во все сроки наблюдения после прекращения аппликаций биополимера отмечается рост абсолютного содержания платины в эпидермисе в среднем на 15-20%. В дермальном слое коже, наоборот, регистрируют плавное снижение концентрации металла в среднем на 30-45%.

Способ профилактики платиноза кожи с помощью 1% водорастворимого хитозана демонстрируют в экспериментах in vitro и in vivo на крысах и морских свинках, приводят доказательства по следующим критериям:

1) эффективность связывания соединения платины с 1% коллоидным раствором бычьего коллагена;

2) эффективность связывания соединения платины с 1% водорастворимым хлоргидратом хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94%;

3) эффективность связывания соединения платины полиионным комплексом: 1% водорастворимый хитозан молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94%+1% коллоидный раствор бычьего коллагена;

4) степень проникновения 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94% в глубокие слои дермы;

5) уровень содержания металла платины в собственно дерме, эпидермисе кожи и органах иммунной, выделительной и детоксикационной систем без и при предварительных аппликациях на кожу 1% раствора хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94%.

Для подтверждения первого критерия доказательств в систему in vitro включали 1% коллоидный раствор бычьего коллагена и различные концентрации платины в растворе аммония гексахлорплатината в соотношении 1:1 по объему. Смеси соли платины и коллагена инкубировали при 37°С в течение 5, 15, 30 минут, 1, 2, 3, 4, 8, 12 и 24 часов при постоянном перемешивании. Пробы согласно временным интервалам извлекали из термостата, перемешивали, центрифугировали при скорости 1500 об/мин в течение 10 мин, отделяли надосадок, его маркировали, герметизировали и помещали в накопитель для проведения масс-спектрометрии на аппарате ELAN 9000. Результаты выражали в абсолютных цифрах содержания платины на 10^-3 мг/мл пробы.

Результаты исследований. Анализ экспериментальных исследований показал, что 1% коллоидный раствор коллагена в условиях in vitro обладает сорбционной активностью по отношению к соединениям платины, способен извлекать из раствора в среднем 20-30% металла. Скорость сорбции достаточно высока в первый час контакта с металлом (34-40% массы), насыщение полимера происходит через 2-3 часа, возникает эффект равновесия и десорбции. Последнее является важным обстоятельством, указывающим на неустойчивость образовавшихся комплексов и возможность их удаления с белковой цепи полимера. Независимо от первоначальной массовой доли платины коллаген к 24 часу сорбции способен извлечь до 37% массы металла (таблица 1).

Таблица 1
Сорбция in vitro коллоидным раствором коллагена в соотношении коллаген:раствор аммония гексахлорплатината 1:1 (по объему)
Массовая доля платины (Pt) х 10-3 мг/мл (масс-спектрометрия ELAN 9000)
	Исходная расчетная масса платины	10,50	21,00	52,50	105,00	210,00
Время сорбции	Исходная фактическая масса платины	10,48	23,39	55,29	117,05	244,57
5 мин		10,529 (-0,47%)	10,196 (56,4%)	17,418 (68,5%)	51,720 (55,8%)	153,206 (37,4%)
15 мин		7,319 (30,2%)	9,096 (61,1%)	21,025 (61,9%)	58,703 (49,8%)	154,654 (36,8%)
30 мин		7,126 (32,0%)	8,429 (63,9%)	11,651 (78,9%)	76,733 (34,4%)	174,027 (28,8%)
1 час		6,871 (34,4%)	11,619 (50,3%)	32,779 (40,7%)	68,567 (41,4%)	147,914 (39,5%)
2 часа		9,003 (14,1%)	10,752 (54,0%)	27,031 (51,1%)	92,849 (20,7%)	169,614 (30,6%)
3 часа		8,991 (14,2%)	18,641 (20,3%)	38,313 (30,7%)	95,735 (18,2%)	139,663 (42,9%)
4 часа		9,672 (7,7%)	19,610 (16,2%)	35,125 (36,5%)	73,678 (37,1%)	152,928 (37,5%)
8 часов		7,700 (26,5%)	14,147 (39,5%)	33,485 (39,4%)	80,224 (31,5%)	146,872 (39,9%)
12 часов		8,659 (17,4%)	13,118 (43,9%)	35,088 (36,5%)	74,877 (36,0%)	153,716 (37,2%)
24 часа		8,478 (19,1%)	-	-	94,979 (18,9%)	153,667 (37,2%)

Для доказательства второго критерия в систему in vitro включали 1% раствор водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa, степени дезацетилирования 94% и различные концентрации платины в растворе аммония гексахлорплатината в соотношении 1:1 по объему. Смеси соли платины и хитозана инкубировали при 37°С в течение 5, 15, 30 минут, 1, 2, 3, 4, 8, 12 и 24 часов при постоянном перемешивании. Пробы согласно временным интервалам извлекали из термостата, перемешивали, добавляли 50 мкл 2N раствора NaOH, центрифугировали осадок при скорости 1500 об/мин в течение 10 мин, отделяли надосадок, его маркировали, герметизировали и помещали в накопитель для проведения масс-спектрометрии на аппарате ELAN 9000. Результаты выражали в абсолютных цифрах содержания платины на 10^-3 мг/мл пробы.

Результаты исследований. События временной сорбции соли платины 1% водорастворимым хитозаном показали, что полимер независимо от первоначальной концентрации соли металла способен в первые 30 минут извлекать из раствора свыше 65% платины. Сорбция протекает более уверенно при малых концентрациях металла (10-55·10^-3 мг/мл), и, тем не менее, через 12-24 часа степень извлечения металла остается очень высокой и составляет около 90% от первоначальной массы (табл.2). При очень высоких концентрациях соли платины характер сорбции прерывистый, указывает на быстрое насыщение полимера, смещение равновесия в сторону десорбции. Емкость и скорость сорбции соли платины у водорастворимого хитозана существенно превышают соответствующие характеристики коллагена (табл.1).

Таблица 2
Сорбция in vitro 1% водорастворимым хитозаном в соотношении хитозан:раствор аммония гексахлорплатината 1:1 (по объему)
Массовая доля платины (Pt) ×10-3 мг/мл (масс-спектрометрия ELAN 9000)
	Исходная расчетная масса платины	10,50	21,00	52,50	105,00	210,00
Время сорбции	Исходная фактическая масса платины	10,48	23,39	55,29	117,05	244,57
5 мин		4,125 (60,6%)	9,806 (58,1%)	31,585 (42,9%)	34,672 (70,4%)	152,082 (37,8%)
15 мин		3,918 (62,6%)	8,471 (63,8%)	32,069 (42,0%)	80,167 (31,5%)	150,616 (38,4%)
30 мин		3,380 (67,8%)	10,280 (56,1%)	34,008 (38,5%)	91,313 (22,00%)	121,270 (50,4%)
1 час		2,152 (79,5%)	9,991 (57,3%)	31,864 (42,4%)	76,288 (34,8%)	159,348 (34,9%)
2 часа		1,684 (83,9%)	8,570 (63,4%)	29,193(47,2%)	84,273 (28,0%)	114,882 (53,0%)
3 часа		1,915 (81,7%)	6,763 (71,1%)	29,132 (47,3%)	83,516 (28,7%)	157,043 (35,8%)
4 часа		1,267 (87,9%)	5,374 (77,0%)	26,394 (52,6%)	77,592 (33,7%)	74,047 (69,7%)
8 часов		1,298 (87,6%)	3,077 (86,8%)	15,299 (72,3%)	73,959 (36,8%)	123,173 (49,6%)
12 часов		1,196 (88,6%)	2,689 (88,5%)	9,216 (83,3%)	48,284 (58,8%)	161,146 (34,1%)
24 часа		-	-	5,782 (89,5%)	-	57,151 (76,6%)

Для доказательств третьего критерия в систему in vitro помещали полиионные комплексы, состоящие из 1% раствора бычьего коллагена и 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa, степени дезацетилирования 94% в соотношении 1:1; 5:1 и 9:1 по объему, добавляли к комплексам различные концентрации платины в 1% растворе гексахлорплатината аммония. Смеси соли платины и полиионных комплексов инкубировали при 37°С в течение 5, 15, 30 минут, 1, 2, 3, 4, 8, 12 и 24 часов при постоянном перемешивании. Пробы согласно временным интервалам извлекали из термостата, перемешивали, добавляли 50 мкл 2N раствора NaOH, центрифугировали осадок при скорости 1500 об/мин в течение 10 мин, отделяли надосадок, его маркировали, герметизировали и помещали в накопитель для проведения масс-спектрометрии на аппарате ELAN 9000. Результаты выражали в абсолютных цифрах содержания платины на 10^-3 мг/мл пробы.

Результаты исследования. Исследования показали, что комплекс коллаген-хитозан, в состав которого входит водорастворимый хитозан, не способен присоединять к себе солевой комплекс платины. Если водорастворимый хитозан самостоятельно обладает способностью присоединять до 90% платины, то, вступая во взаимодействие с коллагеном, теряет эту способность в течение всего периода наблюдения (табл.3). Такая зависимость характерна для любого из предложенных объемных соотношений двух полимеров. В этом случае результаты исследований означают, что при предварительном нанесении водорастворимого хитозана на кожу и его проникновении в кожу образование такого комплекса будет происходить в глубоком слое дермы. Следовательно, в результате связывания с коллагеном кожи следует ожидать слабое оседание металла платины, поскольку сайты связывания с белком уже заняты. Более высокие сорбционные характеристики хитозана по платине по сравнению с коллагеном позволяют рассчитывать на клиренс уже попавших соединений металла из дермы.

Таблица 3
Сорбция in vitro раствора аммония гексахлорплатината (х 10-3 мг/мл) комплексом коллоидного коллагена и водорастворимого хитозана в соотношениях коллаген:хитозан 1:1; 5:1; 9:1 (по объему)
Массовая доля платины (Pt) х10-3 мг/мл (масс-спектрометрия ELAN 9000)
	Исходная расчетная масса платины	52,50	52,50	52,50
Время сорбции	Исходная фактическая масса платины	55,29	55,29	55,29
	Соотношение коллагена и в/р хитозана	1:1	5:1	9:1
5 мин		54,630 (1,19%)	47,855 (13,45%)	54,398 (1,61%)
15 мин		53,434 (3,36%)	48,297 (12,65%)	45,216 (18,22%)
30 мин		51,047 (7,68%)	50,264 (9,09%)	55,828 (-0,97%)
1 час		53,428 (3,37%)	50,410 (8,83%)	52,623 (4,82%)
2 часа		53,567 (3,12%)	48,022 (13,15%)	58,053 (-5,00%)
3 часа		44,564 (19,4%)	52,253 (5,49%)	59,497 (-7,61%)
4 часа		55,259 (0,06%)	40,901 (26,03%)	52,824 (4,46%)
8 часов		63,191 (-14,29%)	50,963 (7,83%)	53,234 (3,72%)
12 часов		62,286 (-12,65%)	50,936 (7,88%)	47,095 (14,82%)
24 часа		57,438 (-3,88%)	51,196 (7,40%)	53,518 (3,21%)

Для подтверждения характера кинетики в коже водорастворимого хлоргидрата хитозана в эксперимент было взято 12 лабораторных крыс, которым предварительно был удален волосяной покров в межлопаточной области. Животных разделяли на две группы по 6 в каждой. В I группе хитозан наносили на неповрежденную кожу; во II группе хитозан наносили на скарифицированную кожу. На подготовленные участки кожи размером 0,5×0,5 см наносили 0,1% водорастворимый хлоргидрат хитозана с молекулярной массой 10-15 kDa, степенью дезацетилирования 94% в объеме 0,05 мл, меченный флюоресцеин изотиоцианатом (ФИТЦ) (степень мечения - 1 метка на 10 звеньев полимера). Для исключения влияния ФИТЦ на кинетику хитозана была взята контрольная группа животных (6 особей), которым наносили раствор ФИТЦ (0,01 мкг/мл). Кожные дефекты закрывали марлевыми компрессными салфетками, плотно фиксировали. Аппликации сохраняли в течение 1, 2, 4, 8, 12 и 24 часов, после чего производили биопсию исследуемых участков кожи и их фиксацию в 10% нейтральном растворе формалина. Срезы приготавливали из биоптатов кожи с помощью замораживающего микротома. Затем проводили световую микроскопию срезов с помощью люминесцентного микроскопа «ЛЮМАМ-И3».

Способ профилактики платиноза кожи иллюстрируется фото 1-6. Результаты исследований. В результате люминесцентной микроскопии срезов кожи контрольной группы животных, которым наносили раствор ФИТЦ, наблюдали трансэпидермальный путь проникновения флюоресцирующего агента в первые часы эксперимента с накоплением его в клетках Лангерганса. К 24 часам от начала аппликаций раствора ФИТЦ ингредиент покидает пределы кожи, пройдя все его слои (фото 6). В I группе животных, которым водорастворимый хитозан наносили на неповрежденную кожу, определяли преимущественно трансфолликулярный (через устья волосяных фолликулов), трансгландулярный (через устья желез) пути проникновения хитозана в 1 час (фото 1) и через 4 часа (фото 2) после его нанесения. На срезах скарифицированных участков кожи II группы животных определяли ускоренное проникновение хитозана через дефекты эпидермиса наряду с трансфолликулярным и трансгландулярным путями через 1 час (фото 3) и через 4 часа (фото 4) после нанесения аппликации раствора хитозана. Во всех случаях через 24 часа определялось проникновение хитозана во все слои эпидермиса и дермы (фото 5). Таким образом, проведенные исследования показывают, что водорастворимый хитозан способен проникать в неповрежденную и скарифицированную кожу в первые 1-2 часа трансэпидермально, трансфолликулярно, трансгландулярно, постепенно связываться в течение 24 часов с коллагеном межклеточного вещества дермы. Это обстоятельство создает высокую вероятность того, что полимер может выполнять наряду с собственными белками кожи роль конкурентной «мишени» для соединений платины.

Для подтверждения контактной гиперчувствительности замедленного типа при условии длительных аппликаций на кожу раствора соли платины и определения уровня содержания металла платины в собственно дерме, эпидермисе кожи и органах иммунной, выделительной и детоксикационной систем без и при предварительных аппликациях на кожу 1% раствора хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94% были выполнены эксперименты на животных. В этих экспериментах в первой группе животных искусственно первоначально насыщали кожу 1% раствором гексахлорплатината аммония путем ежедневных аппликаций солевого раствора металла платины, во второй группе - 1% раствором хлоргидрата хитозана. В первом случае решают задачу контроля извлечения закрепившегося металла в коже, а во втором случае - подтверждения факта профилактики возможного закрепления.

Для реализации поставленной задачи были выполнены эксперименты на 18 морских свинках массой 300 г. Животные были разделены на две группы по 9 особей в каждой. У всех животных на нижнедорсальной поверхности спины тщательно удаляли волосяной покров площадью 3×3 см. Первой группе морских свинок на обнаженную кожу производили аппликации по 0,1 мг платины в 0,1 мл раствора гексахлорплатината аммония в течение 10-12 дней и контроль абсолютного содержания металла платины в дерме, эпидермисе, периферической крови, печени, селезенке, почках, надпочечниках, тимусе, регионарных (паховых) и отдаленных (брыжеечных) лимфатических узлах, вторичной моче в последующие 3, 6 и 9 дней с момента окончания аппликаций. У второй группы морских свинок первоначально производили в течение 10-12 дней аппликации на кожу 0,1 мл 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94%, после чего через 4 часа следовали аппликации соли платины по 0,1 мг в 0,1 мл и контроль содержания металла на 3, 6 и 9 дни после окончания нанесения хитозана в указанных выше органах и системах экспериментального животного. Таким образом, каждая группа животных согласно срокам контроля была в свою очередь разделена на три подгруппы по три особи в каждой.

Результаты исследований. Исследования в первой группе животных показали, что попадание раствора соли платины на обнаженный участок кожи приводит к кумулированию и длительному сохранению металла во всех исследуемых органах и системах экспериментального животного. Общность кинетики состоит в том, что на 6 сутки по сравнению с 3 сутками после прекращения сеансов аппликаций раствора соли металла на кожу его содержание возрастает практически во всех тканях (например, в эпидермальном слое - в 2 раза, в дерме - в 1,4 раза, в регионарных лимфатических узлах - в 2,6 раза, в отдаленных лимфатических узлах - в 2,3 раза, в вилочковой железе - в 2,1 раза, в надпочечниках - в 1,1 раза, в печени - в 1,3 раза). Выведение платины с мочой на 6 сутки возрастает в 1,5 раза. При этом в периферической крови происходит линейное снижение абсолютного содержания металла по сравнению с третьими сутками после окончания аппликаций во все сроки наблюдения: на шестые сутки - в 1,88 раза, на девятые сутки - в 2,67 раза. Максимальный клиренс платины характерен для 9 суток наблюдения. Только в селезенке отмечено постепенное накопление металла. Следует заметить, что насыщение платиной глубоких слоев дермы и эпидермиса в ранний срок наблюдения происходит равномерно с небольшим превышением в дерме. Однако более поздние сроки контроля убеждают в том, что эпидермис является металлоемким элементом кожи, длительно сохраняет металл, берет на себя функцию элиминации (табл.4). Предварительное насыщение кожи в течение 10 дней водорастворимым низкомолекулярным хитозаном и последующие аппликации на кожу раствора гексахлорплатината аммония с содержанием металла платины 0,1 мг в 0,1 мл подтвердило предположение конкурентных взаимодействий между платиной, коллагеном (или другим стационарным белком дермы) и хитозаном.

Таблица 4
Средние величины абсолютного содержания платины (мг/г ткани) в тканях морских свинок при аппликациях на кожу раствора гексахлорплатината аммония в течение 10-12 дней
Вид ткани	Сроки контроля после периода аппликаций платины
3 сутки	6 сутки	9 сутки
Эпидермис	0,000363	0,000752	0,000579
Дерма	0,000378	0,000548	0,000480
Кровь	0,000628	0,000334	0,000235
Л/у регионарные	0,000261	0,000692	0,000268
Тимус	0,000243	0,000518	0,000363
Почки	0,000979	0,000440	0,000491
Надпочечник	0,000585	0,000629	0,000327
Печень	0,000427	0,000565	0,000215
Селезенка	0,000350	0,000353	0,000635
Л/у отдаленные	0,000332	0,000786	0,000519
Моча	0,000321	0,000487	0,000141

Если сайты связывания металла на коллагене предварительно заняты хитозаном, то комплекс коллаген-хитозан должен слабо абсорбировать соединение платины (как это зафиксировано в условиях in vitro). Таким образом, поступающие через открытые участки кожи из внешней среды соединения металлов платиновой группы должны в меньшей степени задерживаться в коже и транслироваться в другие системы. Анализ абсолютного содержания платины в тканях экспериментальных морских свинок показал, что поступающий в кожу металл очень быстро начинает насыщать периферическую кровь, паренхиматозные органы, включая органы иммунной системы. Такое нарастающее насыщение наблюдается в течение всех сроков контроля. Выделение платины с мочой возрастает по сравнению с результатами первой группы животных в 13,3 раза (табл.5). Такое кумулирование металла в тканях отражается и на эпидермальном слое кожи. Во все сроки наблюдения после прекращения аппликаций биополимера фиксируется рост абсолютного содержания платины в эпидермисе (3 день - 528·10^-6 мг; 6 день - 611·10^-6 мг; 9 день - 618·10^-6 мг). При такой общей картине роста кумуляции металла во всех тканях обращает на себя внимание факт плавного снижения содержания платины в глубоких слоях дермы, а именно 3 день - 437·10^-6 мг; 6 день - 362·10^-6 мг; 9 день - 326·10^-6 мг.

Таблица 5
Средние величины абсолютного содержания платины (мг/г ткани) в тканях морских свинок при аппликациях на кожу 1% раствора водорастворимого хитозана в течение 10-12 дней и последующих аппликациях раствора гексахлорплатината аммония
Вид ткани	Сроки контроля после периода аппликаций хитозана
3 сутки	6 сутки	9 сутки
Эпидермис	0,000528	0,000611	0,000618
Дерма	0,000437	0,000362	0,000326
Кровь	0,000350	0,000454	0,001181
Л/у регионарные	0,000777	0,000960	0,000199
Тимус	0,000516	0,000734	0,000953
Почки	0,000444	0,000605	0,000797
Надпочечник	0,002645	0,001026	0,000817
Печень	0,000489	0,000639	0,000626
Селезенка	0,000469	0,000784	0,000740
Л/у отдаленные	0,000492	0,000942	0,000527
Моча	0,000645	0,000930	0,001880

Таким образом, с позиций профилактики платиноза кожи - это положительный результат, так как целенаправленное снижение содержания металлов платиновой группы в глубоких слоях дермы означает только одно: чем меньше металлокомплексов будет играть роль резидуальных структур в этом слое кожи, тем меньше вероятность развития реакции гиперчувствительности, а следовательно, и металлодерматоза. Предложен эффективный конкурирующий с металлом платины в глубоких слоях дермы агент, препятствующий накоплению металла в этом слое кожи и повышающий клиренс платины из дермы в выделительные и детоксикационные системы организма, предупреждающий развитие реакции контактной гиперчувствительности замедленного типа и признаков воспаления кожи.

Пример. У 18 морских свинок массой 320-350 г на нижнедорсальной поверхности спины тщательно удаляли волосяной покров площадью 3×3 см. Животные были разделены на две группы по 9 особей в каждой. Первой группе морских свинок на обнаженную кожу нанесли аппликации по 0,1 мг платины в 0,1 мл раствора гексахлорплатината аммония в течение 12 дней и осуществили контроль абсолютного содержания металла платины в дерме, эпидермисе, периферической крови, печени, селезенке, почках, надпочечниках, тимусе, регионарных (паховых) и отдаленных (илеоцекальных) лимфатических узлах, вторичной моче в последующие 3,6 и 9 дней с момента окончания аппликаций. У второй группы животных последовательно произвели в течение 12 дней аппликации на кожу 0,1 мл 1% водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 kDa и степени дезацетилирования 94%, после чего через 4 часа выполняли аппликации соли платины по 0,1 мг в 0,1 мл и контроль содержания металла на 3, 6 и 9 дни после окончания нанесения хитозана в указанных выше органах и системах экспериментального животного.

Результаты исследований. Исследования в первой группе животных показали, что аппликации раствора соли платины на обнаженный участок кожи приводят к накоплению и длительному сохранению металла во всех органах и системах экспериментального животного. На 6 сутки по сравнению с 3 сутками после прекращения сеансов аппликаций металла на кожу его содержание увеличилось в эпидермальном слое - в 1,16 раза, в дерме - в 1,5 раза, в регионарных лимфатических узлах - в 1,8 раза, в отдаленных лимфатических узлах - в 1,8 раза, в вилочковой железе - в 2,1 раза, в надпочечниках - в 1,1 раза, в печени - в 1,1 раза. На 6 сутки клиренс платины с мочой возрастал в 1,4 раза, а затем существенно снижался. В периферической крови отмечено снижение абсолютного содержания металла по сравнению с третьими сутками после окончания аппликаций во все сроки наблюдения: на шестые сутки - в 1,78 раза, на девятые сутки - в 2,61 раза. Максимальный клиренс платины характерен для 9 суток наблюдения. Накопление платины в глубоких слоях дермы и эпидермисе плавно возрастало от 3 до 9 суток в 1,58 раза (табл.6). Нанесение на кожу в течение 12 дней водорастворимого низкомолекулярного хлоргидрата хитозана и последующие аппликации на кожу раствора гексахлорплатината аммония с содержанием металла платины 0,1 мг в 0,1 мл раствора показало увеличение клиренса металла в периферической крови, почках, надпочечниках, печени, лимфатических узлах, селезенке, тимусе в течение всех сроков контроля.

Таблица 6
Средние величины абсолютного содержания платины (мг/г ткани) в тканях морских свинок при аппликациях на кожу раствора гексахлорплатината аммония в течение 12 дней
Вид ткани	Сроки контроля после периода аппликаций платины
3 сутки	6 сутки	9 сутки
Эпидермис	0,000398	0,000464	0,000488
Дерма	0,000365	0,000548	0,000579
Кровь	0,000672	0,000376	0,000257
Л/у регионарные	0,000331	0,000612	0,000377
Тимус	0,000274	0,000576	0,000406
Почки	0,000744	0,000499	0,000462
Надпочечник	0,000612	0,000653	0,000386
Печень	0,000550	0,000587	0,000279
Селезенка	0,000368	0,000412	0,000480
Л/у отдаленные	0,000347	0,000635	0,000568
Моча	0,000344	0,000496	0,000164

Выделение платины с мочой возрастало по сравнению с результатами первой группы животных на 3 и 6 сутки аппликаций в 1,97 раза, на 9 сутки - в 12,26 раза (табл.7).

Таблица 7
Средние величины абсолютного содержания платины (мг/г ткани) в тканях морских свинок при аппликациях на кожу 1% раствора водорастворимого хитозана и последующих аппликациях раствора гексахлорплатината аммония в течение 12 дней
Вид ткани	Сроки контроля после периода аппликаций хитозана
3 сутки	6 сутки	9 сутки
Эпидермис	0,000576	0,000660	0,000694
Дерма	0,000456	0,000324	0,000257
Кровь	0,000356	0,000682	0,001248
Л/у регионарные	0,000532	0,000857	0,000866
Тимус	0,000538	0,000804	0,001026
Почки	0,000568	0,000648	0,000873
Надпочечник	0,001875	0,001888	0,001640
Печень	0,000514	0,000671	0,000683
Селезенка	0,000489	0,000798	0,000843
Л/у отдаленные	0,000556	0,000842	0,000876
Моча	0,000678	0,000982	0,002012

Накопление платины в тканях внутренних органов протекает с одновременным накоплением металла в эпидермальном слое кожи. Во все сроки наблюдения после прекращения аппликаций биополимера фиксируют рост абсолютного содержания платины в эпидермисе. В дермальном слое коже, наоборот, регистрируют плавное снижение концентрации металла. Таким образом, снижение содержания платины в дерме с одновременным повышением клиренса его в моче является признаком профилактики платиноза кожи. Предложен эффективный способ создания барьера, препятствующего накоплению металла платины в глубоких слоях дермы и повышающего клиренс платины из дермы в выделительные и детоксикационные системы организма.

Литература

1. Багнова М.Д. Профессиональные дерматозы. / М.Д.Багнова. - М.: Медицина, 1984. - 304 с.

2. Защитные средства для кожи. / Г.С.Башура, Б.А.Задорожный, Д.П.Сало и др. - Киев, 1975. - 95 с.

3. К вопросу о защитных дерматологических средствах универсального действия. / Л.В.Алчангян, Г.Д.Селисский, А.А.Неменко и др. // Вестн. дерматологии и венерологии. - 1989. - №5. - С.27-29.

4. Колпаков Ф.И. Профессиональные дерматозы химической этиологии. / Ф.И.Колпаков. - Красноярск, 1974. - 178 с.

5. Метод химической инактивации и его роль в профилактике профессиональных аллергических дерматозов. / Г.Д.Селисский, Б.А.Сомов, Ю.К.Скрипкин и др. - Вестн. дерматологии и венерологии. - 1976. - №8. - С.81-84.

6. Мисенко Д.Н. Особенности патогенеза и иммунокорригирующей терапии больных аллергическими дерматозами рабочих платинового производства: дис… канд. мед. наук. / Д.Н.Мисенко. - М., 1994. - 157 с.

7. Опыт комплексного изучения защитно-профилактических свойств крема ПМС-400 с универсальными свойствами. / Вестн. дерматологии и венерологии. - 1975. - №12. - С.42-46.

8. Профессиональные болезни кожи. Руководство для врачей. Т. 1-2. / А.А.Антоньев, Б.А.Сомов, Л.П.Цыркунов и др. - Красноярск, 1996.

9. Рабен А.С. Профессиональная дерматология. / А.С.Рабен, Антоньев А.А. - М.: Медицина, 1975.- 318 с.

10. Селисский Г.Д. Профилактика профессиональных дерматозов. / Г.Д.Селисский, Б.Г.Стоянов. - М.: Медицина, 1981. - 272 с.

Способ профилактики платиноза кожи путем нанесения на нее защитных средств для связывания и инактивации агрессивных соединений металлов, отличающийся тем, что в качестве защитного средства используют ежедневные аппликации 1%-ного водорастворимого хлоргидрата хитозана молекулярной массы 10-15 кДа и степени дезацетилирования свыше 90%.