Способ моделирования отека капсул больших слюнных желез
Владельцы патента RU 2360297:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU)
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной морфологии, и может быть использовано для моделирования отека капсул больших слюнных желез. Для этого белых крыс перегревают в термокамере с температурой воздуха 45°С в течение 9-36 минут. Способ обеспечивает получение модели отека капсул больших слюнных желез. 3 ил., 8 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной морфологии. Оно может быть использовано для изучения патоморфологии больших слюнных желез белых крыс, для разработки лекарственных средств - термопротекторов и определения эффективности их терапевтического действия на доклиническом этапе исследования данных фармацевтических средств.
Методы моделирования отека капсул больших слюнных желез в доступной литературе не обнаружены.
Сущность способа моделирования отека капсул больших слюнных желез состоит в том, что экспериментальных животных подвергают острой внешней гипертермии при температуре 45°С в течение 9-36 минут.
В зависимости от времени перегревания получают модель отека капсул исследуемых органов разной степени выраженности.
В результате проведенного эксперимента на макроскопическом уровне был установлен отек названных структур. Большие слюнные железы ярко-розового цвета и находятся в прозрачной, бесцветной жидкости.
Предложенный способ осуществляется следующим образом.
Половозрелых белых крыс самцов весом от 180 до 200 г помещали в тепловую камеру с температурой воздуха +45°С. Температура в камере регулировалась автоматически по контрольному термометру. Точность поддержания температуры - не менее ±0,75°С. Отклонение температуры любой точки рабочего объема от заданной температуры по контрольному термометру - ±1,5°С.
В качестве камеры использовали отечественный термостат для парафиновых заливок с электроподогревом и водяной рубашкой (Ц-1281). Размеры внутренней рабочей камеры термостата - 250 мм × 250 мм × 400 мм, объем - 0,025 м3.
Экспериментальных животных перегревали всегда в утренние часы суток (с 9.00 до 12.00). Длительность пребывания крысы в термостате зависела от задач эксперимента и состояния животного и составила 9-36 минут. По общему состоянию подопытных крыс (физиологии поведения животного) и повышению их ректальной температуры судили о степени гипертермии животных. Всех использованных в работе подопытных животных подразделили на 6 групп: контрольная группа (Ко), включающая 15 животных, и 5 экспериментальных групп, каждая из которых состоит из 17 животных: животные, выведенные из эксперимента на стадии безразличия (Ст.Б, в термокамере находились 9-10 минут), стадии возбуждения (Ст.В, в термокамере находились 14-18 минут), начальной стадии теплового удара (НТУ, в термокамере находились 21-25 минут), разгаре теплового удара (РТУ, в термокамере находились 28-32 минуты), и крысы, погибшие от теплового удара (ТУ, в термокамере находились 34-36 минут). Градацию стадий эксперимента проводили на основании литературных данных (Фаращук Н.Ф., Рахманин Ю.А., 2004) и физиологии поведения животного. Животных выводили из эксперимента с учетом правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (приказ Минздрава №724 от 13 ноября 1984 г.).
Фотографировали субмандибулярную область шеи, затем препарировали шкурку этой области и снова фотографировали эту область с помощью цифрового аппарата «Nikon coolpix 4600». Далее удаляли фасцию шеи и обнажали субмандибулярный комплекс желез. Фотографировали и изучали его с помощью лупы. После удаления кожи в субмандибулярной области обнаружили отек подлежащей соединительной ткани. После удаления этой ткани и поверхностной фасции был выявлен резко выраженный отек соединительнотканных структур больших слюнных желез и особенно их субмандибулярного комплекса: а - контроль; б - стадия безразличия; в - стадия возбуждения, г - начальная стадия ТУ; д - разгар ТУ; е - смерть от ТУ (фиг.1). Производили экстирпацию всего блока слюнных желез, затем разрезали этот блок в продольном и поперечном направлениях, стараясь, чтобы в одном кусочке были фрагменты всех трех БСЖ. Это хорошо получалось на поперечных разрезах. Кусочки слюнных желез одновременно фиксировали в жидкости Буэна, жидкости Карнуа. Срезы окрашивали гематоксилином Бемера - эозином; гематоксилином Ганзена - эозином; альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми; импрегнировали серебром по Гомори.
Морфометрические исследования проводили с помощью окуляр-микрометра (MOB 1-15*): измеряли толщину капсул больших слюнных желез (в микрометрах) в местах их наибольших и наименьших размеров (контрольная выборка n=90; экспериментальные выборки n=102).
Предложенным способом произведена качественная и количественная морфометрическая оценка динамики морфологических изменений в капсулах больших слюнных желез белых крыс на разных стадиях острого перегревания организма.
При исследовании препаратов больших слюнных желез на первой стадии перегревания, стадии безразличия выявлен незначительный отек капсулы: например, в капсуле околоушной слюнной железы и междолевой соединительной ткани на препарате, окрашенном альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, - незначительный отек, увеличение 7×8 (фиг.2). Определяется разволокнение коллагеновых волокон, истончение эластических и ретикулиновых волокон, наиболее выраженное в наружном и внутреннем слоях капсулы. На последующих стадиях перегревания наблюдается усиление всех вышеописанных морфологических изменений в строении капсул больших слюнных желез, которое максимально проявляется у животных, погибших от теплового удара. Так, в околоушной слюнной железе в разгар теплового удара определяется резкий отек капсулы, который представлен на микрофотографии препарата, окрашенного альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, увеличение 7×40 (фиг.3)
Отек ведет к достоверному увеличению толщины капсулы: как минимального, так и максимального размеров. Количественные данные изменения толщины капсул в местах их наибольших и наименьших размеров рассчитаны с помощью определения статистических показателей результативного признака для каждой группы животных: среднее значение (М), дисперсия (σ2), стандартная ошибка среднего (m), 95% доверительный интервал для среднего значения, коэффициент вариации (CV %) (Автандилов Г.Г., 2002), проводили дисперсионный анализ, вычисляли F-критерий (Медик В.А., Токмачев М.С., Фишман Б.Б., 2000).
Пример 1
Крыса №19, вес - 190 г, перегрета до стадии безразличия, находилась в термокамере в течение 9 минут, вела себя спокойно, ректальная температура до перегревания - 36,8°С, после перегревания - 39,5°С. После выведения животного из эксперимента определен слабовыраженный отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1, б), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - незначительный отек капсул больших слюнных желез: околоушной слюнной железы (ОКЖ), подчелюстной слюнной железы (ПЧЖ), подъязычной слюнной железы (ПЯЖ). На стадии безразличия при остром перегревании организма имеет место начинающийся отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс (фиг.1б, 2), проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.1).
Пример 2
Крыса №1, вес - 180 г, перегрета до смерти от теплового удара, находилась в термокамере в течение 36 минут, ректальная температура до перегревания - 36,6°С, после перегревания - 44°С. Определен резкий отек субмандибулярного комплекса слюнных желез (фиг.1е), на препаратах, окрашенных гематоксилином Ганзена-эозином, гематоксилином Бемера-эозином, альдегид-фуксином по Гомори с докраской смесью Хальми, импрегнированных серебром, - значительный отек капсул больших слюнных желез. У животных, погибших от теплового удара, имеет место резкий отек и разволокнение капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярный комплекс, проявляющийся увеличением максимального и минимального размеров толщины капсул больших слюнных желез (табл.2).
Результаты оценки количественных параметров толщины капсул контрольной и экспериментальных групп представлены в таблицах 3-8. Они свидетельствуют, что острое перегревание организма приводит к отеку капсул больших слюнных желез и соединительной ткани, окружающей их. Степень выраженности этого отека нарастает по мере перегревания организма и достигает максимальной величины у животных, погибших от теплового удара.
Таким образом, острое внешнее перегревание организма может использоваться в качестве способа моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс и соединительной ткани, окружающей эти органы, особенно их субмандибулярного комплекса.
| Табл.1 | ||||||||
| ОКЖ №19 | Min, мкм | Max, мкм | ПЧЖ №19 | Min, мкм | Max, мкм | ПЯЖ №19 | Min, мкм | Max, мкм |
| поле зрения 1 | 34,89 | 192,04 | поле зрения 1 | 25,23 | 167,66 | поле зрения 1 | 21,65 | 144,13 |
| 2 | 33,05 | 192,38 | 2 | 25,65 | 166,34 | 2 | 20,56 | 144,25 |
| 3 | 33,58 | 190,67 | 3 | 27,18 | 166,87 | 3 | 21,72 | 144,89 |
| 4 | 31,08 | 193,67 | 4 | 27,56 | 166,03 | 4 | 21,71 | 145,12 |
| 5 | 32,17 | 189,99 | 5 | 29,45 | 166,07 | 5 | 21,84 | 145,11 |
| 6 | 31,43 | 189,06 | 6 | 29,34 | 165,99 | 6 | 21,45 | 145,01 |
| Табл.2 | ||||||||
| ОКЖ №1 | Min, мкм | Max, мкм | ПЧЖ №1 | Min, мкм | Max, мкм | ПЯЖ №1 | Min, мкм | Max, мкм |
| поле зрения 1 | 38,08 | 266,12 | поле зрения 1 | 45,18 | 314,56 | поле зрения 1 | 34,71 | 226,84 |
| 2 | 38,09 | 265,12 | 2 | 44,67 | 310,56 | 2 | 35,62 | 220,02 |
| 3 | 39,24 | 257,34 | 3 | 43,23 | 310,31 | 3 | 35,78 | 220,56 |
| 4 | 39,71 | 257,54 | 4 | 45,12 | 311,23 | 4 | 35,12 | 227,89 |
| 5 | 40,01 | 258,12 | 5 | 45,67 | 311,45 | 5 | 34,71 | 230,45 |
| 6 | 40,03 | 264,76 | 6 | 45,78 | 311,76 | 6 | 34,83 | 227,65 |
| Табл.3 | |||||
| Стадия опыта | ОКЖ, Min М±m, мкм | Cv, % | 95% доверительный интервал | σ2 | |
| Нижняя граница | Верхняя граница | ||||
| Ко | 30,81±0,16 | 4,92 | 30,49 | 31,13 | 2,29 |
| Ст.Б | 34,08±0,16* | 4,62 | 33,78 | 34,39 | 2,48 |
| Ст.В | 35,87±0,05* | 1,35 | 35,78 | 35,97 | 0,24 |
| НТУ | 37,03±0,09* | 2,37 | 36,85 | 37,2 | 0,77 |
| РТУ | 38,29±0,08* | 2,04 | 38,15 | 38,45 | 0,61 |
| ТУ | 39,45±0,08* | 1,94 | 39,30 | 39,60 | 0,58 |
| Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией |
| Табл.4 | |||||
| Стадия опыта | ПЧЖ, Min М±m, мкм | Cv, % | 95% доверительный интервал | σ2 | |
| Нижняя граница | Верхняя граница | ||||
| Ко | 23,98±0,09 | 3,66 | 23,79 | 24,17 | 0,77 |
| Ст.Б | 27,46±0,16* | 5,88 | 27,14 | 27,78 | 2,61 |
| Ст.В | 36,51±0,13* | 3,47 | 36,26 | 36,76 | 1,61 |
| НТУ | 38,88±0,06* | 1,48 | 38,77 | 38,99 | 0,33 |
| РТУ | 41,31±0,09* | 2,37 | 41,12 | 41,50 | 0,33 |
| ТУ | 45,01±0,07* | 1,55 | 44,87 | 45,15 | 0,49 |
| Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией |
| Табл.5 | |||||
| Стадия опыта | ПЯЖ, Min М±m, мкм | Cv, % | 95% доверительный интервал | σ2 | |
| Нижняя граница | Верхняя граница | ||||
| Ко | 20,16±0,08 | 3,78 | 19,99 | 20,32 | 0,58 |
| Ст.Б | 21,18±0,04* | 1,83 | 21,10 | 21,26 | 0,15 |
| Ст.В | 25,13±0,03* | 1,25 | 25,07 | 25,19 | 0,09 |
| НТУ | 30,98±0,06* | 2,07 | 30,86 | 31,11 | 0,41 |
| РТУ | 33,49±0,06* | 1,82 | 33,37 | 33,61 | 0,37 |
| ТУ | 34,97±0,04* | 1,22 | 34,89 | 35,06 | 0,18 |
| Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией |
| Табл.6 | |||||
| Стадия опыта | ОКЖ, Мах М±m, мкм | Cv, % | 95% доверительный интервал | σ2 | |
| Нижняя граница | Верхняя граница | ||||
| Ко | 167,0±0,33 | 1,88 | 166,34 | 167,66 | 9,89 |
| Ст.Б | 187,57±0,38* | 2,06 | 186,81 | 188,33 | 14,94 |
| Ст.В | 196,77±0,33* | 1,69 | 196,12 | 197,42 | 11,03 |
| НТУ | 204,98±0,29* | 1,45 | 204,39 | 205,57 | 8,84 |
| РТУ | 216,62±0,93* | 4,33 | 214,77 | 218,46 | 88,05 |
| ТУ | 262,59±0,26* | 1,02 | 262,06 | 263,11 | 7,10 |
| Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией |
| Табл.7 | |||||
| Стадия опыта | ПЧЖ, Мах М±m,мкм | Cv, % | 95% доверительный интервал | σ2 | |
| Нижняя граница | Верхняя граница | ||||
| Ко | 141,17±0,17 | 1,12 | 140,84 | 141,49 | 2,48 |
| Ст.Б | 166,53±0,11* | 0,657 | 166,32 | 166,74 | 1,19 |
| Ст.В | 182,3±0,12* | 0,686 | 182,06 | 182,55 | 1,56 |
| НТУ | 213,31±0,13* | 0,61 | 213,05 | 213,56 | 1,69 |
| РТУ | 278,79±0,22* | 0,79 | 278,36 | 279,22 | 4,86 |
| ТУ | 312,66±0,15* | 0,477 | 312,37 | 312,95 | 2,22 |
| Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией |
| Табл.8 | |||||
| Стадия опыта | ПЯЖ, Мах М±m, мкм | Cv, % | 95% доверительный интервал | σ2 | |
| Нижняя граница | Верхняя граница | ||||
| Ко | 134,41±0,05 | 0,38 | 134,31 | 134,52 | 0,26 |
| Ст.Б | 144,94±0,07* | 0,49 | 144,79 | 145,08 | 0,52 |
| Ст.В | 149,33±0,12* | 0,82 | 149,09 | 149,57 | 1,51 |
| НТУ | 151,43±0,09* | 0,61 | 151,25 | 151,61 | 0,85 |
| РТУ | 206,17±0,11* | 0,53 | 205,95 | 206,39 | 1,18 |
| ТУ | 223,51±0,28* | 1,27 | 222,95 | 224,06 | 8,02 |
| Примечание: * - уровень значимости р<0,05 по сравнению с контролем и предыдущей стадией |
Способ моделирования отека капсул больших слюнных желез белых крыс путем перегревания экспериментального животного в термокамере с температурой воздуха 45°С в течение 9-36 мин.
