Способ инактивации вирусов при получении иммуноглобулина

Изобретение относится к инактивации вирусов в производстве иммуноглобулинов, в частности фракции G. Способ инактивации вирусов при получении иммуноглобулина фракции G включает очистку раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, при этом при очистке раствор иммуноглобулина предварительно обрабатывают сольвент-детергентной смесью, в качестве которой используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80, и обработку проводят путем перемешивания смеси в течение 12-16 часов с последующим разбавлением 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, обработанный иммуноглобулин иммобилизируют на сульфопропилкатионитном сорбенте, имеющем зерна размером 50 мкм и сорбционную емкость 55 мг/см³, и осуществляют промывание в две стадии с помощью колоночной хроматографии с последующей элюцией, причем на первой стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1% мас. октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, на второй стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, при этом на первой стадии промывание ведут объемом, соответствующим пяти объемам сорбента, на второй стадии промывание ведут объемом, соответствующим трем объемам сорбента. Изобретение обеспечивает высокую эффективность в инактивации вирусов, что повышает вирусобезопасность препаратов иммуноглобулина. 2 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к инактивации вирусов в производстве глобулинов, которые относятся к белкам плазмы крови, принимающим участие в иммунных реакциях, и может быть использовано при производстве лекарственных препаратов, которые содержат иммуноглобулин фракции G.

Существенной проблемой при использовании лекарственных препаратов, полученных из биологического материала, является опасность контаминации вирусами. Известные методы инактивации вирусов, в частности тепловая обработка, неприемлемы к такому биологическому сырью, как глобулярные белки плазмы крови, поскольку приводят к их разрушению и потере биологической активности.

Наиболее близким является способ инактивации вирусов при получении иммуноглобулина, включающий очистку раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием (RU, патент №2261112, кл. А61К 39/395, опубл. 27.09.2005). Очистка по известному способу предусматривает обработку раствора, который содержит разбавленный 12-ю объемами воды для инъекций экстракт спиртового осадка Б (III фракция Кона) и хлорид натрия, хлороформом, который добавляют к 3 мас.%, при рН 4,0…5,0. Смесь выдерживают в течение 14 часов при 0…3°С, центрифугируют, осадок удаляют и проводят осветляющую фильтрацию.

Недостатком известного способа является низкий уровень удаления/инактивации вирусов при проведении указанной обработки, что оставляет его вирусоопасным. В связи с этим известный способ предусматривает проведение дополнительной инактивации вирусов при комнатной температуре путем выдержки в течение 20…25 дней.

Задачей изобретения является усовершенствование способа инактивации вирусов при получении иммуноглобулина, в котором за счет предложенной обработки и условий ее проведения повышается эффективность удаления/инактивации вирусов, что обеспечивает вирусобезопасность иммуноглобулина для лекарственных препаратов. Предложенный способ является технологичным и легко контролируется.

Поставленная задача решается предложенным способом инактивации вирусов при получении иммуноглобулина, который включает очистку раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием, в котором при очистке раствор иммуноглобулина предварительно обрабатывают сольвент-детергентной смесью, обработанный иммуноглобулин иммобилизуют на сульфопропилкатионитном сорбенте и осуществляют в две стадии промывание с помощью колоночной хроматографии с последующей элюцией. На первой стадии промывания используют ацетатный буферный раствор, который содержит октаноат натрия, хлорид натрия и пропиленгликоль, например 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, и промывание ведут объемом, соответствующим пяти объемам сорбента. На второй стадии промывания используют ацетатный буферный раствор, например 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, и промывание ведут объемом, соответствующим трем объемам сорбента. Лучше на первой и второй стадиях промывание проводить со скоростью 3 см/мин.

В качестве сольвент-детергентной смеси используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Обработку ведут путем перемешивания сольвент-детергентной смеси и раствора иммуноглобулина в течение 12…16 часов с последующим разбавлением 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л.

Для иммобилизации иммуноглобулина используют сульфопропилкатионитный сорбент, который имеет размер зерен 50 мкм, и сорбционную емкость 55 мг/см³. Элюцию обработанного и промытого иммуноглобулина осуществляют 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия.

Экспериментально было установлено, что предварительная сольвент-детергентная обработка раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием, с последующей его иммобилизацией на сульфопропилкатионитном сорбенте и промывкой определенным ацетатным буферным раствором приводят к повышению эффективности удаления/инактивации вирусов, что обеспечивает вирусобезопасность препаратов иммуноглобулина.

Способ осуществляется таким образом.

Иммуноглобулин, выделенный спиртовым фракционированием по методу Кона (раствор осадка «В»), растворяют в ацетатном буферном растворе. 3%-ный раствор иммуноглобулина обрабатывают сольвент-детергентной смесью. Эта стадия технологического процесса включает экспозицию иммуноглобулина раствором, который содержит сольвент и детергент. Как сольвент используют, например, три-н-бутилфосфат, как детергент - октоксинол 10, полисорбат 80, β-пропиоллактон и другие поверхностно-активные вещества. Смешивание проводят в реакторе. Например, 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80, смешивают с раствором иммуноглобулина. Смесь перемешивают в течение 12…16 часов при температуре 25°С. Далее смесь разбавляют 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Обработанный таким образом иммуноглобулин с помощью колоночной хроматографии при линейной скорости элюента 1 см/мин иммобилизируют на сульфопропилкатионитном сорбенте, который имеет сорбционную емкость 55 мг/см³ и зерна размером 50 мкм.

После завершения сорбции осуществляют в две стадии промывание предварительно обработанного иммуноглобулина, иммобилизированного на сульфопропилкатионитном сорбенте, при линейной скорости элюента 3 см/мин. На первой стадии промывания используют ацетатный буферный раствор того же состава, что и для разбавления смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Промывание ведут объемом, соответствующим пяти объемам сорбента.

На второй стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5. Промывание ведут объемом, соответствующим трем объемам сорбента.

Элюцию иммуноглобулина осуществляют 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия.

Элюат содержит иммуноглобулин G в концентрации 3,5…4%.

Ниже приведены примеры, демонстрирующие эффективность способа инактивации вирусов при получении иммуноглобулина, но не ограничивающие его. Согласно требованиям GMP, преднамеренное внесение любого вируса в производственные помещения не допускается. Поэтому валидация проводилась в отдельной лаборатории, оборудованной соответствующим образом, с использованием модели производственного процесса (примеры 1-6).

Пример 1.

Для демонстрации эффективности удаления/инактивации вирусов предложенным способом использовали модельные вирусы вирусной диареи ВРХ (BVDV).

3 г осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В 3%-ный раствор иммуноглобулина вносили 6,45 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³ вируса BVDV. В емкость, содержащую 15 мл 3%-ного раствора иммуноглобулина с вирусом BVDV, прибавили 15 мл сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 12 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в емкость добавляют 90 мл раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонку диаметром 15 мм, содержащую 23 см³ сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1,7 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 70 мин. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонку пропускают 110 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 5 мл/мин (отвечает линейной скорости - 3 см/мин) в течение 20 минут. Потом промывают 70 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 15 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 50 минут. Элюат в количестве 34 мл собирали в стерильную посуду и проводили ультрафильтрацию.

Титр инфекционности вируса BVDV после инактивации - <1,0 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³.

Пример 2.

Для демонстрации эффективности удаления/инактивации вирусов предложенным способом использовали модельные вирусы псевдобешенства (PRV).

3 г осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В 3%-ный раствор иммуноглобулина вносили ≥7,33 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³ вируса PRV. В емкость, содержащую 15 мл 3%-ного раствор иммуноглобулина с вирусом PRV, добавили 15 мл сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 14 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в емкость добавляют 90 мл раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонку диаметром 15 мм, содержащую 23 см³ сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1,7 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 70 мин. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонку пропускают 110 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 5 мл/мин (соответствует линейной скорости - 3 см/мин) в течение 20 минут. Потом промывают 70 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 15 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 50 минут. Элюат в количестве 34 мл собирали в стерильную посуду и проводили ультрафильтрацию.

Титр инфекционности вируса PRV после инактивации составлял <1,0 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³.

Пример 3.

Для демонстрации эффективности удаления/инактивации вирусов предложенным способом использовали модельные энтеровирусы свиней (PTV-1).

3 г осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В 3%-ный раствор иммуноглобулина вносили ≥ 7,9 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³ вируса PTV-1. В емкость, содержащую 15 мл 3%-ного раствора иммуноглобулина с вирусом PTV-1, добавили 15 мл сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 16 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в емкость добавляют 90 мл раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонку диаметром 15 мм, содержащую 23 см³ сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1,7 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 70 мин. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонну пропускают 110 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 5 мл/мин (соответствует линейной скорости - 3 см/мин) в течение 20 минут. Потом промывают 70 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 15 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 50 минут. Элюат в количестве 34 мл собирали в стерильную посуду и проводили ультрафильтрацию.

Титр инфекционности вируса PTV-1 после инактивации составлял 3,3 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³.

Пример 4.

Для демонстрации эффективности удаления/инактивации вирусов предложенным способом использовали модельный штамм аденовирусов типа 4 (Ad4).

3 г осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В 3%-ный раствор иммуноглобулина вносили ≥7,0 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³ вируса Ad4.

В емкость, содержащую 15 мл 3%-ного раствора иммуноглобулина с вирусом Ad4, добавили 15 мл сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 12 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в емкость добавляют 90 мл раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1% мас. октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонку диаметром 15 мм, содержащую 23 см³ сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1,7 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 70 мин. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонку пропускают 110 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 5 мл/мин (соответствует линейной скорости - 3 см/мин) в течение 20 минут. Потом промывают 70 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 15 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 50 минут. Элюат в количестве 34 мл собирали в стерильную посуду и проводили ультрафильтрацию.

Титр инфекционности вируса Ad4 после инактивации составлял ≤ 5,77 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³.

Пример 5.

Для демонстрации эффективности удаления/инактивации вирусов предложенным способом использовали модельные вирусы гепатита утят (DHV-1).

3 г осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В 3%-ный раствор иммуноглобулина вносили 3,0×10⁶ ЕЛД₅₀/см³ вируса DHV-1.

В емкость, содержащую 15 мл 3%-ного раствора иммуноглобулина с вирусом DHV-1 добавили 15 мл сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 12 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в емкость добавляют 90 мл раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонку диаметром 15 мм, содержащую 23 см³ сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1,7 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 70 мин. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонку пропускают 110 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 5 мл/мин (соответствует линейной скорости - 3 см/мин) в течение 20 минут. Потом промывают 70 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 15 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 50 минут. Элюат в количестве 34 мл собирали в стерильную посуду и проводили ультрафильтрацию.

Титр инфекционности вируса DHV-1 после инактивации составлял ≤1,0×10³ ЕЛД₅₀/см³.

Пример 6.

Для демонстрации эффективности удаления/инактивации вирусов предложенным способом использовали модельные вирусы ВИЧ 1.

3 г осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В 3%-ный раствор иммуноглобулина вносили 5,5 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³ вируса ВИЧ 1.

В емкость, содержащую 15 мл 3%-ного раствора иммуноглобулина с вирусом ВИЧ 1, добавили 15 мл сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 12 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в емкость добавляют 90 мл раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонку диаметром 15 мм, содержащую 23 см³ сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1,7 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 70 мин. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонку пропускают 110 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 5 мл/мин (соответствует линейной скорости - 3 см/мин) в течение 20 минут. Потом промывают 70 мл 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 15 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 50 минут. Элюат в количестве 34 мл собирали в стерильную посуду и проводили ультрафильтрацию.

Титр инфекционности ВИЧ 1 после инактивации - <1,0 log₁₀ ТЦЛД₅₀/см³ вируса.

Пример 7.

3 кг осадка «В» иммуноглобулина человека, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, растворили в 15 л 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 и температуре 4°С.

В реактор, содержащий 15 л 3%-ного раствора иммуноглобулина, с помощью вакуума подают 15 л сольвент-детергентной смеси: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80. Смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 12 часов при скорости вращения мешалки 80 об/мин. Далее в реактор с помощью вакуума подают 90 л раствора, который содержит: 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Смесь перемешивают и пропускают через предварительно уравновешенную хроматографическую колонну диаметром 400 мм, содержащую 23 л сульфопропилкатионитного сорбента, при объемной скорости потока 1200 мл/мин (линейная скорость элюента - 1 см/мин). Сорбцию проводят около 10 часов. Иммобилизированный на сульфопропилкатионитном сорбенте предварительно обработанный иммуноглобулин подвергают промыванию в две стадии. Для этого через колонну пропускают 110 л 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5, содержащего 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л. Раствор пропускают при объемной скорости 3600 мл/мин (соответствует линейной скорости - 3 см/мин) в течение 37 минут. Потом промывают 70 л 0,05 М ацетатного буферного раствора при рН 5,5 в течение 23 минут.

Элюцию иммуноглобулина осуществляли 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия. Процесс элюции длился около 60 минут. Элюат в количестве 34 л собирали в стерильные 20-ти л стеклянные баллоны и проводили ультрафильтрацию.

Титр вирусов после инактивации - отсутствие вирусов. Таким образом, предложенный способ обеспечивает высокую эффективность в удалении вирусов, что повышает вирусобезопасность иммуноглобулиновых лекарственных препаратов, является технологичным и может использоваться в производственном масштабе.

1. Способ инактивации вирусов при получении иммуноглобулина фракции G, включающий очистку раствора иммуноглобулина, выделенного спиртовым фракционированием по методу Кона, отличающийся тем, что при очистке раствор иммуноглобулина предварительно обрабатывают сольвент-детергентной смесью, в качестве которой используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% три-н-бутилфосфата и 1 мас.% полисорбата 80, и обработку проводят путем перемешивания смеси в течение 12-16 ч с последующим разбавлением 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, обработанный иммуноглобулин иммобилизируют на сульфопропилкатионитном сорбенте, имеющем зерна размером 50 мкм и сорбционную емкость 55 мг/см,³ и осуществляют промывание в две стадии с помощью колоночной хроматографии с последующей элюцией, причем на первой стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, содержащий 1 мас.% октаноата натрия, 0,15 М хлорида натрия и пропиленгликоль в концентрации 0,2 г/л, на второй стадии промывания используют 0,05 М ацетатный буферный раствор при рН 5,5, при этом на первой стадии промывание ведут объемом, соответствующим 5-ти объемам сорбента, на второй стадии промывание ведут объемом, соответствующим трем объемам сорбента.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что на первой и второй стадиях промывание ведут со скоростью 3 см/мин.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что элюцию осуществляют 0,05 М ацетатным буферным раствором при рН 5,5, содержащим 0,2 М хлорида натрия.