Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина
Владельцы патента RU 2374322:
Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что содержит глицеринкиназу, в которой ингибирование фруктозо-1,6-дифосфатом по типу обратной связи ослаблено, и указанная глицеринкиназа содержит замену, по крайней мере, одной аминокислоты на другую в области, соответствующей положениям с 233 по 235 в аминокислотной последовательности глицеринкиназы дикого типа, представленной в SEQ ID NO:4. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Способ получения L-аминокислоты, включающий:
А) выращивание бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, -продуцента L-аминокислоты в питательной среде, содержащей глицерин, и
Б) выделение L-аминокислоты из культуральной жидкости, отличающийся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что содержит глицеринкиназу, в которой ингибирование фруктозо-1,6-дифосфатом по типу обратной связи ослаблено, и указанная глицеринкиназа содержит замену по крайней мере одной аминокислоты на другую в области, соответствующей положениям с 233 по 235 в аминокислотной последовательности глицеринкиназы дикого типа, представленной в SEQ ID NO:4.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа включает мутацию, выбранную из группы, состоящей из замены остатка Gly в положении 234 на остаток Asp и замены Lys-Gly-Gly в положениях с 233 по 235 на Arg-Ile-Pro.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа дополнительно содержит замену по крайней мере одной аминокислоты на другую в области, соответствующей положениям с 231 по 232.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа включает мутацию замены Gly-Gly-Lys-Gly-Gly в положениях с 231 по 235 на Arg-Ala-His-Leu-Ala.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия далее модифицирована таким образом, что активности вспомогательного белка утилизации глицерина и/или глицерин-3-фосфатдегидрогеназы увеличены.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что экспрессия указанного белка увеличена за счет увеличения числа копий гена или путем такой модификации последовательности, контролирующей экспрессию гена, в результате которой экспрессия гена усиливается.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что активность триозофосфатизомеразы увеличена.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что активность указанной триозофосфатизомеразы увеличена за счет увеличения количества копий гена или путем изменения последовательности, контролирующей экспрессию гена, таким образом, что экспрессия этого гена усиливается.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из ароматической L-аминокислоты и неароматической L-аминокислоты.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная ароматическая L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-фенилаланина, L-тирозина и L-триптофана.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная неароматическая L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-треонина, L-лизина, L-цистеина, L-метионина, L-лейцина, L-изолейцина, L-валина, L-гистидина, L-глицина, L-серина, L-аланина, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-глутамина, L-глутаминовой кислоты, L-пролина и L-аргинина.
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют глицерин, полученный как побочный продукт при производстве биодизельного топлива.
