Производные аминокислот, способ их получения, их применение и фармацевтическая композиция

В заявке описано соединение формулы I, где R₁ означает С₁-С₆алкил; R₂ означает радикал формулы а, где R₆ означает С₁-С₁₂алкил, R₇ означает Н, Х означает О, R₃ означает -А-В-СООН, где А и В каждый независимо означает химическую связь, или CDE, где D и Е каждый независимо означает Н, а каждый R₄ и R₅ независимо означает Н, при условии, если R4 означает Н, R₅ означает Н, R₃ означает СООН, R₂ означает радикал формулы а, а R₇ означает Н, R₁ означает СН₃, a XR₆ означает незамещенный радикал ОС₁-С₁₂алкил, то XR₆ не находится в мета-положении к (СН₂)₂-CR₁R₃(CN₄R₅), в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, а также способ его получения, применение, прежде всего при трансплантации, и содержащие их фармацевтические композиции. 5 н. и 2 з.п. ф-лы.

 

В настоящем изобретении предлагаются производные аминокислот, способы их получения и применения и содержащие их фармацевтические композиции.

Более конкретно описано соединение формулы I

где

R₁ означает С₁-С₆алкил, необязательно замещенный ОН, С₁-С₂алкокси или 1-6 атомами фтора; С₂-С₆алкенил или С₂-С₆алкинил,

R₂ означает радикал формулы a, b или с

где

R₆ означает С₁-С₁₂алкил, необязательно замещенный группами галоген, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный гетероарил или необязательно замещенный гетероциклил, причем С₁-С₁₂алкил необязательно прерывается одним или более О или С=O, а фенил, гетероарил, циклоалкил и/или гетероциклический остаток необязательно замещены 1-5 заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, галоген, С₁-С₄алкил, C₁-С₄алкил, замещенный 1-5 атомами фтора; С₁-С₄алкокси, С₁-С₄алкокси, замещенный 1-5 атомами фтора; циано, фенил и фенил, замещенный 1-5 заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, галоген, С₁-С₄алкил, С₁-С₄алкил, замещенный 1-5 атомами фтора; С₁-С₄алкокси, С₁-С₄алкокси, замещенный 1-5 атомами фтора, и циано,

R₇ означает Н, необязательно замещенный фенил, необязательно замещенный гетероарил, причем фенил и/или гетероарил независимо замещены 1-5 заместителями, выбранными из группы, включающей гидрокси, галоген, С₁-С₄алкил, С₁-С₄алкил, замещенный 1-5 атомами фтора; С₁-С₄алкокси, С₁-С₄алкокси, замещенный 1-5 атомами фтора, и циано,

Х означает О, С=O, S или химическую связь,

Z означает N или СН,

R₃ означает -А-В-СООН, где А и В каждый независимо означает химическую связь, С=O или CDE, где D и Е каждый независимо означает Н, галоген, C₁-С₃алкил, ОН, при условии, если А и В оба не означают С=O, а

каждый R₄ и R₅ независимо означает Н, С₁-С₄алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена, или ацил,

в свободной форме или в форме соли.

Алкил или алкильный остаток может содержать прямую или разветвленную цепь, например метил, этил, пропил, изопропил или бутил. Алкенил означает, например, винил. Алкинил означает, например, пропин-2-ил. Циклоалкил означает, например, С₃-С₆циклоалкил.

Ацил означает остаток W-CO, где W означает С₁-С₆алкил, С₃-С₆циклоалкил, фенил или фенил(С₁-С₄)алкил.

Галоген означает F, Сl или Вr, предпочтительно F или Сl.

Гетероарил означает 5-8-членный ароматический цикл, включающий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, О и S, например пиридил, пиримидинил, пиразинил, фурил, оксазолил, изоксазолил, тиофенил, тиазолил, изотиазолил, пирролил, имидазолил или пиразолил.

Гетероциклический остаток означает 3-8-членный, предпочтительно 5-8-членный насыщенный или ненасыщенный гетероциклический цикл, включающий, например, тетрагидрофурил, тетрагидропиранил, азиридинил, пиперидинил, пирролидинил, пиперазинил.

Соединения формулы I могут существовать в свободной форме или в форме соли, например кислотно-аддитивной соли, например, неорганических кислот, такой, как гидрохлорид, гидробромид или сульфат, и солей органических кислот, таких как ацетат, фумарат, малеат, бензоат, цитрат, малат, метансульфонат или бензолсульфонат; карбоксильная группа может также присутствовать в солевой форме, например аммонийной соли или солей металлов, таких как натрий, калий, кальций, цинк или магний, или их смеси. Соединения формулы I и их соли в форме гидрата или сольвата также являются частью изобретения.

Если в соединениях формулы I содержатся асимметрические центры, то такие соединения могут существовать в виде оптических изомеров. Настоящее изобретение включает также энантиомеры, рацематы, диастереоизомеры и их смеси. Например, центральный атом углерода, содержащий заместители R₁, R₃ и NR₄R₅ может находиться в R или S конфигурацию. В общем случае предпочтительны соединения, которые имеют следующую трехмерную конфигурацию:

.

Кроме того, если соединения формулы I могут образовывать геометрические изомеры, то настоящее изобретение включает цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси. То же самое относится к исходным материалам, содержащим асимметрические атомы углерода или ненасыщенные связи, указанные выше, например, к соединеням формул II, III или IV, указанным ниже.

В соединениях формулы I предпочтительны следующие значения групп, используемые индивидуально или в любой комбинации:

1. R₁ означает СН₃ или СН₂-ОН,

2. R₃ означает СН₂-СООН,

3. каждый R₄ и R₅ означает водород,

4. R₇ означает водород, фенил или тиофенил,

5. Х означает О или химическую связь, и

6. если R₂ означает радикал формулы а, то XR₆ находится в пара-положении к группе -(CH₂)₂-CR₁R₃(NR₄R₅).

Настоящее изобретение включает также способ получения соединения формулы I, включающий удаление защитной группы, присутствующей в соединении формулы II

где R₁, R₂ и R₅ имеют значения, указанные выше, R₃' означает -A-B-COOR₈, где А и В имеют значения, указанные выше, R₈ означает гидролизуемую или гидрируемую группу, а R₄' означает аминозащитную группу, и при необходимости превращение соединений формулы I, полученных в свободной форме, в требуемую соль, или наоборот.

Удаление защитной группы проводят известными способами. Удаление аминозащитной группы обычно также проводят известными способами, например гидролизом, например, в кислотной среде, например соляной кислотой. Примеры аминозащитных групп приводятся, например, в монографии "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W.Greene, J.Wiley & Sons NY, 2^nd ed., гл.7 (1991), и включают, например, бензил, пара-метоксибензил, метоксиметил, тетрагидропиранил, триалкилсилил, ацил, третбутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, трифторацетил и т.п.

Настоящее изобретение включает также получение соединения формулы II, где Х означает О, причем указанный способ включает алкилирование соединения формулы III

где R₁, R₃', R₄' и R₅ имеют значения, указанные выше, a R₂' означает радикал формулы а' или b'

для введения требуемого остатка R₆.

Алкилирование соединений формулы III проводят известными методами, например нуклеофильным замещением, например, по реакции с алкилирующим агентом R₆-Х₃, где Х₃ означает мезилат, тозилат, трифлат, нозилат или галоген, например, хлорид, бромид или иодид. Алклирование можно также проводить по методике Мицунобу (например, как описано в статьях Hughes, Organic Preparations and Procedures International, 28, 127-64, (1996) или D.L.Hughes, Org. React., 42, 335 (1992)) в растворе или твердофазным синтезом, например, при присоединении соединения формулы III к смоле. В другом варианте можно использовать трифенилфосфин, или, например, диэтилазокарбоксилат, иммобилизованный на смоле, например на полистироле.

Настоящее изобретение включает также получение соединения формулы I, причем указанный способ включает гидролиз цианогруппы, присутствующей в соединении формулы IV

где R₁, R₂ и R₅ имеют значения, указанные выше, R₃' означает -A-B-CN, a R₄' означает аминозащитную группу, и при необходимости превращение соединений формулы I, полученных в свободной форме, в требуемую солевую форму или наоборот.

Получение исходных материалов конкретно не описано, поскольку они являются известными соединенями или их можно получить анлогично известным методам или как описано в примерах.

Изобретение иллюстрирутся следующими примерами. Температура плавления приводится без поправки.

КТ комнатная температура

ДМФА диметилформамид

ЖХВР жидкостная хроматография высокого разрешения

ДМСО диметилсульфоксид

ТГФ тетрагидрофуран

AcOEt этилацетат

Пример 1

(R)-3-Амино-5-(4-гептилоксифенил)-3-метилпентановая кислота

В раствор третбутилового эфира ([(R)-1-цианометил-3-(4-гептилоксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой кислоты (136 мг, 0,34 ммоля) в диоксане (2 мл) в сосуде для микроволнового реактора при перемешивании добавляли НСl (37% водный раствор, 1 мл) и реакционную смесь нагревали при 160°С в течение 1,3 ч. Затем смесь охлаждали до КТ и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали методом препаративной ЖХВР (элюент: ацетонитрил/вода + 0,1% трифторуксусная кислота, от 5% до 95%), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде аморфного порошка белого цвета. МС (ESI+): m/z 322,1 [M+H]⁺.

¹H-ЯМР (ДМСО-d6): δ 7,95 (ушир. s, 1H), 7,06 (d, J 9 Гц, 2Н), 6,83 (d, J 9 Гц, 2Н), 3,89 (t, J 7 Гц, 2Н), 3,40-3,20 (m, 2Н), 2,53-2,45 (m, 2Н), 1,86-1,75 (m, 2Н), 1,66 (q, J 8 Гц, 2Н), 1,41-1,20 (m, 11H), 0,85 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение третбутилового эфира [(R)-1-цианометил-3-(4-гептилоксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой кислоты

В раствор третбутилового эфира (R)-4-[2-(4-гептилоксифенил)этил]-4-метил-2,2-диоксо-2λ*6*-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты (174 мг, 0,40 ммолей) в ДМФА (5 мл) при перемешивании добавляли цианид натрия (94 мг, 1,91 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 25 ч. Затем добавляли вторую порцию цианида натрия (37 мг, 0,76 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 18 ч. Реакционную смесь выливали в двухфазную смесь AcOEt/насыщенный раствор NaHCO₃, водную фазу дважды экстрагировали AcOEt, объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: 5% AcOEt/толуол), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла. МС (ESI+): m/z 468,3 [M+CH₃CN+Na]⁺, 827,6 [2M+Na]⁺.

¹H-ЯМР (CDCl₃): δ 7,09-7,04 (m, 2H), 6,83-6,78 (m, 2H), 4,59 (ушир. s, 1H), 3,91 (t, J 7 Гц, 2H), 3,08 (ушир. d, J 7 Гц, 1H), 2,78 (d, J 7 Гц, 1H), 2,59-2,50 (m, 2H), 2,32-2,20 (m, 1H), 1,82-1,70 (m, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,48-1,18 (m, 11H), 0,90 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение третбутилового эфира (R)-4-[2-(4-гептилоксифенил)этил]-4-метил-2,2-диоксо-2λ*6*-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты

В раствор третбутилового эфира (R)-4-[2-(4-гептилоксифенил)этил]-4-метил-2-оксо-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты (275 мг, 0,63 ммоля) в ацетонитриле/Н₂О (9:1, 10 мл) при перемешивании добавляли периодат натрия (401 мг, 1,88 ммоля) и хлорид рутения (III) (13 мг, 0,06 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 18 ч. Затем добавляли вторую порцию хлорида рутения (III) (65 мг, 0,30 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 65 ч. Реакционую смесь фильтровали через слой целита, фильтрат выливали в двухфазную смесь AcOEt/насыщенный раствор Na₂S₂O₃, водную фазу трижды экстрагировали AcOEt, объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: AcOEt/гептан, от 5% до 15%), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла. МС (ESI+): m/z 478,2 [M+Na]⁺, 933,4 [2M+Na]⁺.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 7,07 (d, J 8 Гц, 2Н), 6,81 (d, J 8 Гц, 2H), 4,42 (d, J 9 Гц, 1Н), 4,16 (d, J 9 Гц, 1Н), 3,92 (t, J 6 Гц, 2H), 2,67-2,50 (m, 2H), 2,43-2,32 (m, 1Н), 2,09-1,95 (m, 1Н), 1,75 (qt, J 7 Гц, 2H), 1,62 (s, 3H), 1,53 (s, 9H), 1,50-1,22 (m, 8H), 0,90 (t, J 7 Гц, 3H).

Получение третбутилового эфира (R)-4-[2-(4-гептилоксифенил)этил]-4-метил-2-оксо-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты

Раствор тионилхлорида (0,14 мл, 1,91 ммоля) в ацетонитриле (10 мл) охлаждали до -40°С, при перемешивании при указанной температуре последовательно добавляли раствор третбутилового эфира [(R)-3-(4-гептилоксифенил)-1-гидроксиметил-1-метилпропил]карбаминовой кислоты (300 мг, 0,76 ммоля) в ацетонитриле (5 мл) и пиридин (0,31 мл, 3,81 ммоля) и смесь нагревали до -10°С в течение 2,5 ч. Затем реакционную смесь выливали в двухфазную смесь AcOEt/1M HCl, водную фазу дважды экстрагировали AcOEt, объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NаНСО₃, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: AcOEt/гептан, от 5% до 15%), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (2 диастереомера, 1:1).

Диастереомер 1: МС (ESI+): m/z 462,3 [M+Na]⁺, 901,6 [2M+Na]⁺.

¹Н-ЯМР (СDСl₃): δ 7,07 (d, J 9 Гц, 2H), 6,81 (d, J 9 Гц, 2H), 4,95 (ушир. d, J 9 Гц, 1Н), 4,28 (d, J 9 Гц, 1Н), 3,92 (t, J 6 Гц, 2H), 2,62 (dt, J 5 Гц, 8 Гц, 1Н), 2,50 (dt, J 5 Гц, 8 Гц, 1Н), 2,40-2,28 (m, 1Н), 2,10-1,99 (m, 1Н), 1,76 (qt, J 7 Гц, 2H), 1,66-1,23 (m, 20H), 0,90 (t, J 7 Гц, 3Н).

Диастереомер 2: МС (ESI+): m/z=462,3 [M+Na]⁺, 901,6 [2M+Na]⁺.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 7,04 (d, J 8 Гц, 2H), 6,80 (d, J 8 Гц, 2H), 4,82 (ушир. d, J 9 Гц, 1Н), 4,59 (d, J 9 Гц, 1Н), 3,91 (t, J 7 Гц, 2H), 2,59 (dt, J 5 Гц, 8 Гц, 1Н), 2,39 (dt, J 5 Гц, 7 Гц, 1Н), 2,28-2,16 (m, 1Н), 1,93-1,82 (m, 1Н), 1,80-1,22 (m, 22H), 0,90 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение третбутилового эфира [(R)-3-(4-гептилоксифенил)-1-гидроксиметил-1-метилпропил]карбаминовой кислоты

В раствор третбутилового эфира [(R)-1-гидроксиметил-3-(4-гидроксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой (2,06 г, 6,98 ммоля) в этаноле (100 мл) при перемешивании добавляли карбонат калия (2,90 г, 20,8 ммоля) и гептиловый эфир метансульфоновой кислоты (2,04 г, 10,5 ммоля), и смесь кипятили с обратным холодильником при перемешивании в течение 6 ч. Затем смесь охлаждали до КТ и перемешивали при КТ в течение ночи. Реакционную смесь выливали в двухфазную смесь AcOEt/1M HCl, водную фазу дважды экстрагировали AcOEt, объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NаНСО₃, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: 8% AcOEt/толуол), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла. МС (ESI+): m/z 416,1 [M+Na]⁺.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 7,10-7,05 (m, 2H), 6,81-6,76 (m, 2H), 4,60 (ушир. s, 1Н), 4,07 (ушир. s, 1Н), 3,92 (t, J 6 Гц, 2H), 3,70 (d, J 12 Гц, 1Н), 3,62 (d, J 12 Гц, 1Н), 2,65-2,43 (m, 2H), 2,07-1,94 (m, 1H), 1,88-1,69 (m, 1H), 1,68-1,60 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,50-1,25 (m, 8H), 1,22 (s, 3H), 0,88 (t, J 7 Гц, 3Н).

Пример 2

(R)-2-Амино-4-(4-гептилоксифенил)-2-метилмасляная кислота

В раствор (R)-2-третбутоксикарбониламино-4-(4-гептилоксифенил)-2-метилмасляной кислоты (43 мг, 0,11 ммоля) в CH₂Cl₂ (2 мл) при перемешивании добавляли трифторуксусную кислоту (0,1 мл) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 8 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: MeOH/CH₂Cl₂, от 5% до 25%), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла. МС (ESI-): m/z 306,3 [М-Н]⁺.

¹H-ЯМР (ДМСО-d6): δ 8,32 (ушир. s, 3Н), 7,02 (d, J 8 Гц, 2H), 6,81 (d, J 8 Гц, 2H), 3,88 (t, J 7 Гц, 2H), 2,70-2,58 (m, 1H), 2,42-2,31 (m, 1H), 2,04-1,83 (m, 2H), 1,70-1,62 (m, 2H), 1,45 (s, 3Н), 1,44-1,21 (m, 8H), 0,72 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение (R)-2-третбутоксикарбониламино-4-(4-гептилоксифенил)-2-метилмасляной кислоты

В раствор третбутилового эфира [(R)-1-формил-3-(4-гептилоксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой кислоты (103 мг, 0,26 ммоля) в третбутаноле (1 мл) и 10% растворе КН₂РО₄ (1 мл) при перемешивании добавляли 2-метил-2-бутен (0,66 мл, 5,27 ммоля) и хлорит натрия (59 мг, 0,52 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч. Затем реакционную смесь выливали в двухфазную смесь AcOEt/1M HCl, водную фазу дважды экстрагировали AcOEt, объединенные органические слои промывали небольшим количеством насыщенного раствора NаНСО₃, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении.

Продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: 5% МеОН/СН₂Сl₂), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла. МС (ESI+): m/z 430,2 [M+Na]⁺.

Получение третбутилового эфира [(R)-1-формил-3-(4-гептилоксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой кислоты

В раствор третбутилового эфира [(R)-1-гидроксиметил-3-(4-гидроксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой кислоты (1,98 г, 5,03 ммоля) в CH₂Cl₂ (20 мл) при перемешивании добавляли N-морфолин-N-оксид (884 мг, 7,54 ммоля) и перрутенат тетра-н-пропиламмония (177 мг, 0,50 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч. Затем смесь фильтровали через тонкий слой SiO₂ при элюировании диэтиловым эфиром. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, при этом получали указанное в заголовке соединение. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI+): m/z 414,2 [M+Na]⁺.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 9,33 (s, 1H), 7,06-7,01 (m, 2H), 6,82-6,76 (m, 2H), 5,18 (ушир. s, 1H), 3,92 (t, 2H), 2,60-2,49 (m, 1H), 2,44-2,19 (m, 2H), 2,01-1,93 (m, 1H), 1,80-1,71 (m, 2H), 1,55 (s, 3Н), 1,48-1,25 (m, 17H), 0,89 (t, J 7 Гц, 3Н).

Пример 3

(R)-4-Амино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгексановая кислота

В раствор (R)-4-третбутоксикарбониламино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгексановой кислоты (24 мг, 0,06 ммоля) в СН₂Сl₂ (2 мл) при перемешивании добавляли трифторуксусную кислоту (0,1 мл) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 6,5 ч. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, при этом получали указанное в заголовке соединение в виде аморфного порошка белого цвета. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI+): m/z 336,2 [М+Н]⁺.

¹H-ЯМР (ДМСО-d6): δ 7,81 (ушир. s, 3Н), 7,12-7,07 (m, 2H), 6,85-6,81 (m, 2H), 3,90 (t, J 7 Гц, 2H), 2,52-2,29 (m, 4H), 1,88-1,80 (m, 2H), 1,77-1,62 (m, 4H), 1,40-1,21 (m, 11H), 0,85 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение (R)-4-третбутоксикарбониламино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгексановой кислоты

В раствор (Е)-(R)-4-третбутоксикарбониламино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгекс-2-еновой кислоты (53 мг, 0,12 ммоля) в AcOEt (10 мл) при перемешивании добавляли палладий на активированном угле (10 мг, 10%) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н₂ при КТ в течение 17 ч. Затем смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали при пониженном давлениия, при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI-): m/z 434,4 [М-Н]⁺.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 7,06 (d, J 9 Гц, 2H), 6,80 (d, J 9 Гц, 2H), 4,42 (ушир. s, 1H), 3,92 (t, J 6 Гц, 2H), 2,51 (t, J 8 Гц, 2H), 2,38 (t, J 8 Гц, 2H), 2,28-2,17 (m, 1H), 2,11-2,00 (m, 1H), 1,97-1,70 (m, 4H), 1,50-1,22 (m, 20H), 0,90 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение (Е)-(R)-4-третбутоксикарбониламино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгекс-2-еновой кислоты

В раствор этилового эфира (Е)-(R)4-третбутоксикарбониламино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгекс-2-еновой кислоты (56 мг, 0,12 ммоля) в метаноле (0,5 мл), ТГФ (0,5 мл) и воды (0,5 мл) при перемешивании добавляли гидроксид лития (14 мг, 0,61 ммоля) и смесь перемешивали при КТ в течение 3,5 ч. Затем реакционную смесь выливали в двухфазную смесь AcOEt/1M HCl, водную фазу дважды экстрагировали AcOEt, объединенные органические слои промывали небольшим количеством насыщенного

раствора NaHCO₃, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении, при этом получали указанное в заголовке соединение. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI+): m/z 456,3 [M+Na]⁺.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d6): δ 12,3 (ушир. s, 1H), 7,08-7,00 (m, 2H), 6,91 (ушир. s, 1H), 6,83 (d, J 16 Гц, 1H), 6,79-6,75 (m, 2H), 5,67 (d, J 16 Гц, 1H), 3,88 (t, J 7 Гц, 2H), 2,50-2,31 (m, 1H), 2,00-1,89 (m, 1H), 1,79-1,60 (m, 4H), 1,40-1,19 (m, 20H), 0,83 (t, J 7 Гц, 3Н).

Получение этилового эфира (Е)-(R)-4-третбутоксикарбониламино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгекс-2-еновой кислоты

В раствор этилового эфира (диэтоксифосфорил)уксусной кислоты (429 мг, 1,92 ммоля) в сухом ТГФ (7 мл) при перемешивании при -78°С добавляли н-бутиллитий (0,66 мл, 2,5 М раствор в гексане, 1,66 ммоля) и смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Затем добавляли раствор третбутилового эфира [(R)-1-формил-3-(4-гептилоксифенил)-1-метилпропил]карбаминовой кислоты (500 мг, 1,28 ммоля) в ТГФ (4 мл) и смесь перемешивал при -78°С в течение 1,5 ч. Смесь нагревали до КТ, а затем перемешивали при КТ в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в двухфазную смесь АсОЕt/NаНСО₃ (насыщенный раствор) и водную фазу дважды экстрагировали AcOEt. Объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄) и концентрировали при пониженном давлении. Продукт очищали хроматографией на колонке (элюент: 4% AcOEt/толуол), при этом получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 7,10-7,01 (m, 2H), 7,00 (d, J 16 Гц, 1Н), 6,83-6,78 (m, 2H), 5,86 (d, J 16 Гц, 1Н), 4,60 (ушир. s, 1Н), 4,20 (q, J 7 Гц, 2H), 3,92 (t, J 7 Гц, 2H), 2,55-2,48 (m, 2H), 2,11-2,01 (m, 1Н), 1,99-1,86 (m, 1Н), 1,80-1,71 (m, 2H), 1,56 (s, 3H), 1,48-1,22 (m, 20 H), 0,89 (t, J 7 Гц, 3Н).

Соединения формулы I в свободной форме или форме фармацевтически приемлемой соли проявляют ценные фармакологические свойства, например свойства, модулирующие рециркуляцию лимфоцитов, например, как показано при испытаниях in vitro и in vivo, и, следовательно, могут применяться для лечения.

А. Испытания in vitro

Результаты испытаний по следующей методике свидетельствуют о том, что соединения формулы I связываются с индивидуальными рецепторами S1P человека.

Анализ свзывания с рядом рецепторов сфингозин-1-фосфата (S1P)

Агонистическую активность соединений определяли по действию на рецепторы S1P человека: EDG-1 (SIP₁), EDG-3 (SIP₃), EDG-5 (S1P₂), EDG-6 (S1P₄) и EDG-8 (S1P₅). Функциональную активацию рецептора оценивали по количеству соединения, которое индуцирует связывание ГТФ [γ-³⁵S] с мембранным белком, полученным из трансфектированных клеток СНО или RH7777, стабильно экспрессирующих соответствующий рецептор S1P человека. Для анализа использовали SPA-метод (анализ, основанный на использовании сцинтилляционных гранул). Соединения растворяли в ДМСО, готовили ряд серийных разведении и добавляли к иммобилизованному на SPA-гранулах (фирма Amersham-Pharmacia) мембранному белку, экспрессирующему рецептор S1P, (10-20 мкг в лунку) в присутствии 50 мМ Hepes, 100 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂ 10 мкМ ГДФ, 0,1% делипидизованного БСА и 0,2 нМ ГТФ [γ-³⁵S] (1200 Ки/ммоль). После инкубации в 96-луночных микротитрационных планшетах при КТ в течение 120 мин несвязанный ГТФ [γ-³⁵S] отделяли центрифугированием. Люминесценцию SPA-гранул, инициируемую связанным с мембраной ГТФ [γ-³⁵S], измеряли на планшет-ридере (фирма Packard). Величины ЕС₅₀ рассчитывали с использованием стандартной кривой по соответствующей программе. Полученные результаты свидетельствуют о том, что соединения формулы I проявляли сродство к рецептору SIP₁ на уровне <50 нМ.

Пример	S1P1 ЕС50 [нМ]	S1Р3 ЕС50 [нМ]	S1P4 ЕС50 [нМ]	S1P5 ЕС50 [нМ]
1	11 Агон.	209 Агон.	117 Агон.	203 Агон.
Агон. означает агонист

Б. Испытания in vivo: истощение (снижение уровня) лимфоцитов крови

Соединение формулы I или носитель вводили крысам пероральным способом через желудочный зонд. Кровь из основания хвоста для гематологического текущего контроля отбирали в день -1 (для получения индивидуальной базовой линии) и через 2, 6, 24, 48 и 72 ч после введения препаратов. Полученные результаты свидетельствуют о том, что после введения соединений формулы I в дозе от 0,03 до 3 мг/кг наблюдается истощение лимфоцитов в периферической крови. Например, получены следующие результаты: истощение (снижение уровня) лимфоцитов в периферической крови составляло более 50%. Пример 1: 3,2 мг/кг перорально через 6 ч.

Следовательно, соединения формулы I можно использовать для лечения и/или профилактики заболеваний или нарушений, опосредованных взаимодействиями лимфоцитов, например, при транплантации, таких как острое или хроническое отторжение клеток, ткани или органа в виде алло- или ксенотрансплантата, или замедленная функция трансплантата, реакция трансплантат против хозяина, при аутоиммунных заболеваниях, например при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, тироидите Хашимото, рассеянном склерозе, тяжелой миастении, диабете I или II типа и ассоциированными с ним нарушениями, васкулите, пернициозной анемии, синдроме Шегрена, увейте, псориазе, офтальмопатии Грейвса, гнездной алопеции и др., при аллегических заболеваниях, например при аллергической астме, атопическом дерматите, аллергическом рините/конъюнктивите, аллергическом контактном дерматите, при воспалительных заболеваниях необязательно за счет аномальных реакций, например при воспалительном заболевании кишечника, болезни Крона или язвенном колите, врожденной астме, воспалении легких, воспалении печени, гломерулярном воспалении, атеросклерозе, остеоартрите, вызывающим разражение контактном дерматите, и других экзематозных дерматитах, себоррейном дерматите, имунологически опосредованных кожных проявлениях, глазных воспалительных заболеваниях, кератоконъюнктивите, миокардите или гепатите, при повреждении за счет ишемии/реперфузии, например при инфаркте миокарда, инсульте, кишечной ишемии, почечной недостаточности или геморрагическом шоке, травматическом шоке, ангиогенезе, болезни Альцгеймера, при раке, например раке молочной железы, Т-клеточной лимфоме или Т-клеточном лейкозе, при инфекционных заболеваниях, например токсическом шоке (например, индуцированном суперантигеном), септическом шоке, респираторном дистресс-синдроме у взрослых, или при вирусных инфекциях, например при СПИД, вирусном гепатите, хронической бактериальной инфекции, или при старческой деменции. Примеры трансплантатов клеток, тканей или органов включают, например, островки Лангерганса поджелудочной железы, стволовые клетки, костный мозг, роговичную ткань, нейронную ткань, сердце, легкие, комбинированный трансплантат сердце/легкие, почки, печень, кишечник, поджелудочную железу, трахею или пищевод. При вышеуказанном применении требуемые дозы варьируют в зависимости от способа введения, конкретного состояния, подлежащего лечению, и требуемого результата.

В общем случае удовлетворительные результаты обычно достигаются при введении суточной дозы от приблизительно 0,03 до 2,5 мг/кг массы тела. Рекомендуемая суточная доза для крупного млекопитающего, например человека, составляет от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 100 мг, которую обычно вводят, например, раздельными дозами до четырех раз в сутки или в виде пролонгированной формы. Пригодные стандартные лекарственные формы для перорального введения включают приблизительно от 0,1 до 50 мг активного ингредиента.

Соединения формулы I можно вводить любым обычным способом, прежде всего энтеральным способом, например пероральным способом, например в форме таблеток или капсул, или парентеральным способом, например в форме инъекционных растворов или суспензий, местным способом, например в форме лосьонов, гелей, мазей или кремов, или интраназальным способом или в форме суппозитория. Фармацевтические композиции, включающие соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в смеси по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, получают обычным смешиванием с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Соединения формулы I можно вводить в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, например, как указано выше. Такие соли получают обычным способом, и обычно они обладают активностью того же порядка, что и свободное соединение.

В соответствии с вышеизложенным в настоящем изобретении также предлагается:

1.1. Способ профилактики или лечения нарушений или заболеваний, опосредованных лимфоцитами, например, таких как указанные выше, у субъекта, который нуждается в таком лечении, причем указанный способ включает введение указанному субъекту эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли,

1.2. Способ профилактики или лечения острого или хронического отторжения трансплантата или воспаления, опосредованного Т-клетками, или аутоиммунных заболеваний, например указанных выше, у субъекта, который нуждается в таком лечении, причем указанный способ включает введение указанному субъекту эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

2. Соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства, например, в любом из способов, указанных выше в пунктах 1.1 или 1.2.

3. Фармацевтическая композиция, например, для применения в любом из способов, указанных выше в пунктах 1.1 или 1.2, включающая соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

4. Соединение формулы I в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для применения при получении фармацевтической композиции, предназначенной для применения в любом из способов, указанных выше в пунктах 1.1 или 1.2.

Соединение формулы I можно вводить в виде единственного активного ингредиента или в сочетании, например, с адъювантом, другими лекарственными средствами, например иммунодепрессантами или иммуномодуляторами, или другими противовоспалительными агентами, например, для лечения или профилактики острого или хронического отторжения алло- или ксенотрансплантата, или воспалительных, или аутоиммунных нарушений, или в сочетании с химиотерапевтическим агентом, например антипролиферативным агентом злокачественных клеток. Например, соединения формулы I можно использовать в комбинации с ингибитором кальцинейрина, например циклоспорином A, FK 506 или ISA_ТХ247; ингибитором mTOR, например рапамицином, 40-O-(2-гидроксиэтил)рапамицином, CCI779, АВТ578, АР23573, АР23464, АР23675, АР23841, ТАFА-93, биолимусом 7 или биолимусом 9; аскомицином, обладающим свойствами иммунодепрессанта, например АВТ-281, ASM981 и т.п.; кортикостероидами; циклофосфамидом, азатиопреном, метотрексатом, лефлуномидом, мизорибином, микофеноловой кислотой, микофенолятом мофетила, 15-дезоксипергуалином или его иммунодепрессантным гомологом, аналогом или производным; иммунодепрессантными моноклональными антителами, например моноклональными антителами против рецепторов лейкоцитов, например МНС, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25. CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86 или их лигандами; другими соединениями-иммуномодуляторами, например рекомбинантными связывающими соединениями, содержащими по меньшей мере часть внеклеточного домена CTLA4 или его мутант, например по меньшей мере внеклеточный фрагмент CTLA4 или его мутант, конденсированный с не-CTLA4 последовательностью, например CTLA4Ig (ATCC 68629) или его мутант, например LEA29Y; ингибиторами адгезии, например антагонистами LFA-1, антагонистами ICAM-1 или -3, антагонистами VCAM-4 или VLA-4; или химиотерапевтическим агентом, например паклитакселем, гемцитабином, цисплатином, доксорубицином или 5-фторурацилом, или противоинфекционным агентом.

Если соединения формулы I вводятся совместно с другим иммунодепресантом/иммуномодулятором, противовоспалительным, химиотерапевтическим или противоинфекционным агентом, то дозы совместно вводимого иммунодепрессанта, иммуномодулятора, противовоспалительного, химиотерапевтического или противоинфекционного соединения варьируют в зависимости от типа совместно используемого лекарственного средства, например, это может быть стероид или ингибитор кальцинейрина, от конкретного лекарственного средства, от состояния, подлежащего лечению и т.п. В соответствии с вышеизложенным объектами настоящего изобретения являются также:

5. Способ, указанный выше, включающий совместное введение, например, одновременно или последовательно, терапевтически эффективного нетоксичного количества соединения формулы I и по меньшей мере второго лекарственного средства, например иммунодепрессанта, иммуномодулятора, противовоспалительного или химиотерапевтического средства, например, как указано выше.

6. Фармацевтическая комбинация, например набор, включающий а) первый агент, который означает соединение формулы I, описанное в тексте заявки, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и б) по меньшей мере один дополнительный агент, например иммунодепрессант, иммуномодулятор, противовоспалительный, химиотерапевтический или противоинфекционный агент. Набор может включать инструкции по способу введения.

Термины "совместное введение" или "комбинированное введение" или т.п., используемые в тексте заявки, означают введение выбранных терапевтических агентов одному пациенту и включают схемы введения, согласно которым агенты необязательно вводятся одинаковым способом введения или необязательно вводятся одновременно.

Термин "фармацевтическая комбинация", используемый в описании заявки, означает продукт, который образуется при смешивании или перемешивании более одного активного ингредиента, и включает фиксированные и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин "фиксированная комбинация" означает, что активные ингредиенты, например соединение формулы I и дополнительный агент, оба вводятся пациенту одновременно в одной форме или дозе. Термин "нефиксированная комбинация" означает, что активные ингредиенты, например соединение формулы I и дополнительный агент, оба вводятся пациенту в раздельных формах совместно, одновременно или последовательно без конкретного ограничения по времени, причем такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме пациента. Последнее также относится к лечению с использованием более сложных комбинаций, например к введению трех или более активных ингредиентов.

1. Соединение формулы I

где R₁ означает С₁-С₆алкил;
R₂ означает радикал формулы а,

где R₆ означает С₁-С₁₂алкил,
R₇ означает Н,
Х означает О,
R₃ означает -А-В-СООН, где А и В каждый независимо означает химическую связь, или CDE, где D и Е каждый независимо означает Н,
а каждый R₄ и R₅ независимо означает Н,
при условии, если R₄ означает Н, R₅ означает Н, R₃ означает СООН, R₂ означает радикал формулы a, a R₇ означает Н, R₁ означает СН₃, a XR₆ означает незамещенный радикал ОС₁-С₁₂алкил, то XR₆ не находится в метаположении к (CH₂)₂-CR₁R₃(NR₄R₅),
в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли.

2. Соединение формулы II

где R₁-R₃ и R₅ имеют такие значения, как определено в п.1, а R₄' означает третбутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, или его соль.

3. Соединение по п.1, которое выбирают из группы, включающей (R)-3-амино-5-(4-гептилоксифенил)-3-метилпентановую кислоту, (R)-4-амино-6-(4-гептилоксифенил)-4-метилгексановую кислоту и (R)-2-амино-4-(4-гептилоксифенил)-2-метилмасляную кислоту или их фармацевтически приемлемую соль.

4. Соединение по одному из пп.1 или 3 в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства, обладающего агонистической активностью в отношении рецептора S1P.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении рецептора S1P, содержащая эффективное количество соединения по одному из пп.1 или 3 в качестве активного компонента в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, в смеси с одним или более фармацевтически приемлемых разбавителей или носителей.

6. Применение соединения по любому из пп.1-3 в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции по п.5 для получения лекарственного средства, обладающего агонистической активностью в отношении рецептора S1P и предназначенного для лечения или профилактики отторжения аллотрансплантата, аутоиммунного заболевания, реакции трансплантат против хозяина, воспалительных заболеваний или повреждения при ишемии/реперфузии.

7. Способ получения соединения по п.1, включающий удаление защитной группы, присутствующей в соединении формулы II

где R₁, R₂ и R₅ имеют значения, указанные в п.1, R₃' означает -A-B-COOR₈, где А и В имеют значения, указанные в п.1, R₈ означает гидролизуемую или отщеплямую гидрированием группу, а R₄' означает аминозащитную группу, и при необходимости превращение соединений формулы I, полученных в свободной форме, в требуемую солевую форму, или наоборот.