Селективная добавка к питательной среде для выделения и культивирования neisseria gonorrhoeae
Владельцы патента RU 2380407:
Федеральное Государственное Учреждение "Государственный Научный Центр Дерматовенерологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (RU)
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано при диагностике гонореи. Селективная добавка содержит нистатин в концентрации 327,7 ед/мл среды - 399,3 ед/мл среды, полимиксина-В сульфат в концентрации 36 ед/мл среды - 44 ед/мл среды и гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 ед/мл среды - 4,4 ед/мл среды. Изобретение позволяет ускорить рост гонококков на питательной среде, содержащей селективную добавку (более 500 колоний по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации), при полном подавлении посторонней микрофлоры.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике гонореи.
Уровень заболеваемости гонококковой инфекцией в 2007 году (60,8 случаев на 100000 населения) в Российской Федерации в настоящее время остается высоким, что определяет актуальность проведения исследований, направленных на развитие как первичной, так и вторичной профилактики этих инфекций.
В Российской Федерации селективные питательные среды для диагностики гонореи не производятся. В связи с этим важной задачей является разработка таких сред и их регистрация в установленном порядке как изделий медицинского назначения.
В настоящее время известны различные добавки к питательным средам для культивирования и выделения гонококка. К числу таких добавок относятся следующие:
- селективная добавка с антибиотиками V.C.N.T., номер по каталогу FD 024, содержащая на 500 мл среды:
ванкомицин - 1,50 мг,
колистина метансульфонат - 3,75 мг,
триметоприм - 2,50 мг,
нистатин 6,25 мг;
- селективная добавка с антибиотиками для основы гонококкового агара, номер по каталогу FD 021, содержащая на 500 мл среды:
дрожжевой аутолизат - 5,0 г,
глюкоза - 0,75 г,
натрия гидрокарбонат 0,075 г,
ванкомицин - 1,50 мг,
колистина метансульфонат - 3,75 мг,
триметоприм - 2,50 мг,
нистатин 6,25 мг.
Также известна селективная добавка с антибиотиками V.C.N., номер по каталогу FD 023, содержащая на 500 мл среды:
ванкомицин - 1,50 мг,
колистина метансульфонат - 3,75 мг,
нистатин 6,25 мг.
Кроме того, известны питательные среды, содержащие в качестве ингибитора посторонней микрофлоры такие антибиотики как полимиксина-В сульфат и линкомицина гидрохлорид (см. RU 2076904 С1, 10.04.1997). Данная питательная среда выбрана в качестве ближайшего аналога. Культивирование N. gonorrhoeae на данной питательной среде с добавками из антибиотиков позволяет достичь обильного роста микроорганизма только после 24-48 часов.
Недостатки известных селективных добавок заключаются в том, что часть гонококков может проявлять чувствительность к входящим в их состав антибактериальным препаратам, вследствие чего рост гонококка подавляется компонентами, входящими в состав селективной добавки и определенный процент заболевания остается нераспознанным. Кроме того, селективные добавки не всегда полностью подавляют рост сопутствующей микрофлоры. В связи с вышеизложенным одной из актуальных проблем практической венерологии является разработка новых селективных добавок, позволяющих устранить вышеуказанные недостатки, что является задачей настоящего изобретения.
Поставленная задача решается путем создания селективной добавки, содержащей:
нистатин в концентрации 327,7 ед./мл среды - 399,3 ед./мл среды,
полимиксина-В сульфат в концентрации 3,6 ед./мл среды - 44 ед./мл среды,
гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 ед./мл среды - 4,4 ед./мл среды.
Технический результат изобретения заключается в ускорении роста гонококков на питательной среде, содержащей селективную добавку (более 500 колоний по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации), при полном подавлении посторонней микрофлоры.
Селективную добавку к питательной среде для выделения и культивирования N. gonorrhoeae получают путем смешивания компонентов.
Для проведения экспериментов была использована питательная среда для выделения гонококка ФГУП «НПО Микроген», г.Ставрополь, представляющая собой набор, состоящий из 2 лиофилизированных компонентов: основы питательной среды и добавки к основе питательной среды.
Основа питательной среды содержит: экстракт кроличьего мяса, экстракт языков крупного рогатого скота, пептон сухой ферментативный для бактериологических целей, натрий хлористый, аутолизат хлебопекарных дрожжей, кислота оротовая и агар микробиологический.
Добавка к основе питательной среды: сыворотка крупного рогатого скота, аутолизат хлебопекарных дрожжей, гидролизат казеина для парентерального белкового питания.
Заявленное изобретение может быть проиллюстрировано следующими примерами.
Пример 1
К питательной среде для культивирования N. gonorrhoeae ФГУП «НПО Микроген» добавляли селективную добавку, содержащую:
нистатин в концентрации 327,7 ед./мл среды,
полимиксина-В сульфат в концентрации 3,6 ед./мл среды,
гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 ед./мл среды. Производили посев лабораторного штамма N. gonorrhoeae и культивировали в течение 16-18 часов в атмосфере 5-10% СO2 при 36-37°С.
Учет результатов культивирования микроорганизмов осуществляли визуально с использованием стериомикроскопа - лупы - прибора, позволяющего оценивать количество колоний инструментальным методом. Рост микроорганизмов оценивали по 4-балльной системе:
4+ - обильный сливной рост микроорганизмов (более 500 колоний) по всей поверхности среды;
3+ - обильный рост (более 300 колоний);
2+ - более 40 колоний (от 40 до 100 колоний) - умеренный рост;
1+ - более 10 колоний (от 10 до 30 колоний) - скудный рост.
В результате проведенного эксперимента наблюдался обильный сливной рост штамма микроорганизма - 4+ (более 500 колоний) по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации, в то время как в прототипе это время составляет 24-48 часов.
Пример 2
Эксперимент проводили аналогично примеру 1, используя компоненты селективной добавки в следующих количествах:
нистатин в концентрации 358,7 ед./мл среды,
полимиксина-В сульфат в концентрации 40 ед./мл среды,
гидрохлорид линкомицина в концентрации 4,0 ед./мл среды.
В результате проведенного эксперимента наблюдался обильный сливной рост штамма микроорганизма - 4+ (более 500 колоний) по всей поверхности среды уже после 17 часов инкубации, в то время как в прототипе это время составляет 24-48 часов.
Пример 3
Эксперимент проводили аналогично примеру 1, используя компоненты селективной добавки в следующих количествах:
нистатин в концентрации 399,3 ед./мл среды,
полимиксина-В сульфат в концентрации 44 ед./мл среды,
гидрохлорид линкомицина в концентрации 4,4 ед./мл среды.
В результате проведенного эксперимента наблюдался обильный сливной рост штамма микроорганизма - 4+ (более 500 колоний) по всей поверхности среды уже после 16 часов инкубации, в то время как в прототипе это время составляет 24-48 часов.
Пример 4
На указанную в примере 1 питательную среду с селективной добавкой производили посев следующих лабораторных штаммов следующих микроорганизмов: S. epidermidis, Е. coli, С.albicans, N. gonorrhoeae. Через 24 часа производили оценку наличия и роста штаммов микроорганизмов. Анализ показал, что в результате эксперимента был полностью подавлен рост сопутствующей микрофлоры (S. epidermidis, Е. coli, С.albicans), при обильном росте штамма N. gonorrhoeae.
Как видно из представленных примеров, изобретение позволяет ускорить рост гонококков на питательной среде, содержащей селективную добавку (более 500 колоний по всей поверхности среды уже после 16-18 часов инкубации), при полном подавлении посторонней микрофлоры.
Селективная добавка к питательной среде для выделения и культивирования Neisseria gonorrhoeae, включающая антибиотик, отличающаяся тем, что в качестве антибиотика содержит нистатин в концентрации 327,7 - 399,3 ед./мл среды, полимиксина-В сульфат в концентрации 36 - 44 ед./мл среды и гидрохлорид линкомицина в концентрации 3,6 - 4,4 ед./мл среды.
