Способ размножения лилий in vitro
Владельцы патента RU 2384050:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева" (RU)
Изобретение относится к области садоводства. В способе отделяют экспланты, обрабатывают их раствором препарата эпибрассинолид в концентрации 0,1 мг/л и времени экспозиции 1 ч, подвергают их стерилизации. Затем высаживают экспланты на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с содержанием регуляторов роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты. Затем отделяют микролуковицы от эксплантов и укореняют на питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением 10-11 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты в темноте при температуре 14°С. Изобретение позволяет повысить выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся микролуковиц при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста. 5 табл.
Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений лилий in vitro.
Известен способ размножения лилий in vitro (Мазур A.M., Калашникова Е.А. Клональное микроразмножение ценных гибридов лилий // Сельскохозяйственная биотехнология. Избранные работы / Под ред. В. С.Шевелухи. - М.: Евразия, 2000. - 264 с.). В качестве первичного экспланта использовали чешуйки луковиц, которые стерилизовали 0,1%-ным раствором сулемы (HgCl2) в течение 10 минут, высаживали на среду Мурасиге и Скуга, дополненную сахарозой 20-60 г/л и регуляторами роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, и культивировали в световой комнате при температуре 25±1°С, 24-часовом освещении белыми люминесцентными лампами с интенсивностью света 3000 лк. Процесс ризогенеза индуцировали добавлением в питательную среду α-нафтилуксусной кислоты в концентрации от 0,2 мг/л до 0,5 мг/л.
Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения.
Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся микролуковиц при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.
Технический результат достигается тем, что в способе размножения лилий in vitro, включающем отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга, перед стерилизацией экспланты обрабатывают раствором препарата эпибрассинолид в концентрации 0,1 мг/л и времени экспозиции 1 ч, экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с содержанием регуляторов роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты, затем микролуковицы отделяют от эксплантов и укореняют на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением 10-11 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты в темноте при температуре 14°С.
Способ осуществляют следующим образом.
Из луковицы лилии отделяют внутренние (сочные) чешуи, которые используют в качестве эксплантов, замачивают их в растворе препарата эпибрассинолид в концентрации 0,1 мг/л и времени экспозиции 1 ч. Длительность обработки и концентрация препарата эпибрассинолид подобраны на основании предварительных экспериментов (табл.1).
После этого чешуи стерилизуют и в стерильных условиях высаживают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 7,0 г/л агара, 60 г/л сахарозы и регуляторы роста - 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты. Состав среды, использованный при культивировании чешуи луковиц, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранных в предварительных опытах концентраций сахарозы (табл.2) и регуляторов роста (табл.3). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 3000 лк и при температуре 25°С (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивировании эксплантов растений).
| Таблица 2 | |
| Концентрация сахарозы, г/л | Микролуковицы, штук/эксплант |
| 10 | 1,6 |
| 20 | 1,8 |
| 30 | 2,4 |
| 40 | 2,5 |
| 50 | 2,6 |
| 60 | 2,9 |
| 70 | 2,7 |
При выращивании эксплантов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением сочетания 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты в течение 4 недель культивирования образуется максимальное число микролуковиц - 8 штук/эксплант (табл.3).
В последующем микролуковицы отделяют от чешуй и пересаживают на питательную среду для укоренения. Укоренение проводят на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 10-11 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты в темноте при температуре 14°С. Эти условия были выбраны как наиболее способствующие укоренению пробирочных растений лилий (табл.4, 5). После укоренения размноженные растения переносят в почву и выращивают обычным способом.
| Таблица 5 | |
| Длина светового дня, ч | Процент укоренения |
| 24 | 53,1±2,8 |
| 16 | 84,4±3,1 |
| 0 | 100±0,0 |
| Температура, °С | Процент укоренения |
| 14 | 100±0,0 |
| 23 | 65,1±1,6 |
В результате использования предложенного способа повышается выход размножаемого материала (8 штук/эксплант) за счет увеличения количества образующихся микролуковиц при положительном влиянии предобработки чешуй лилий препаратом эпибрассинолид с последующим их культивированием на питательной среде в присутствии сочетания регуляторов роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индоуксусной кислоты. Культивирование микролуковиц на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 10-11 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, в темноте при температуре 14°С приводит к 100% укоренению и высокой жизнеспособности растений - регенерантов при последующей высадке в почву.
Способ размножения лилий in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга, отличающийся тем, что перед стерилизацией экспланты обрабатывают раствором препарата эпибрассинолид в концентрации 0,1 мг/л и времени экспозиции 1 ч, экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с содержанием регуляторов роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты, затем микролуковицы отделяют от эксплантов и укореняют на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением 10-11 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты в темноте при температуре 14°С.
