Фармацевтическая композиция, содержащая производные бензодиазепина и ингибитор белка слияния rsv
Изобретение относится к области фармакологии и касается фармацевтической композиции для лечения или профилактики респираторно-синцитиального вируса (RSV), включающей ингибитор белка слияния респираторно-синцитиального вируса (RSV) и производное бензодиазепина, способное ингибировать репликацию RSV. Композиция обладает повышенной терапевтической эффективностью. 6 н. и 4 з.п. ф-лы.
Настоящее изобретение относится к ряду противовирусных производных бензодиазепина. Прежде всего настоящее изобретение относится к ряду производных бензодиазепина, при взаимодействии которых с ингибитором белка слияния RSV обеспечивается аддитивное или синергическое терапевтическое действие при лечении или профилактике инфекции RSV.
Респираторно-синцитиальный вирус (RSV) является главной причиной возникновения респираторных заболеваний у пациентов всех возрастов. У взрослых пациентов вирус в основном вызывает симптомы слабой простуды. У детей школьного возраста при этом наблюдается простуда и бронхиальный кашель. У новорожденных и детей младшего возраста вирус вызывает бронхиолит (воспаление мелких бесхрящевых разветвлений бронхов) или пневмонию. Установлено также, что указанный вирус часто является причиной инфекций среднего уха (средний отит) у детей дошкольного возраста. Инфекция RSV, перенесенная на первом году жизни, влечет за собой развитие астмы в детском возрасте.
Существующее в настоящее время лечение инфекции RSV включает использование моноклональных антител против RSV, которые называются паливизумаб. Указанное применение паливизумаба является скорее профилактикой, а не лечением RSV. Однако, несмотря на то что указанные антитела в большинстве случаев характеризуются высокой эффективностью, их недостатком является дорогостоимость лекарственных препаратов. Действительно, высокая стоимость антител приводит к тому, что такие лекарственные средства являются недоступными для многих людей, нуждающихся в лечении инфекции RSV. В связи с этим существует острая необходимость в эффективных альтернативных способах лечения RSV.
Низкомолекулярные соединения, ингибирующие репликацию RSV за счет ингибирования белка слияния RSV (белок F), подавляют инвазию вируса в клетки организма-хозяина и выход из клеток организма-хозяина за счет образования синцития (соклетия). Несмотря на то что установлена высокая эффективность указанных соединений, развивается устойчивость RSV к указанным соединениям за счет мутаций белка F (Morton C.J. и др. Virology, 311, с.275-288 (2003)).
В опубликованной заявке PCT/GB 03/04050, поданной 20 сентября 2003, описан ряд производных бензодиазепина, которые ингибируют репликацию RSV. При проведении экспериментов по серийному пассивированию вируса было установлено, что устойчивость к указанным ингибиторам развивается медленно, а секвенирование резистентных мутантов не выявляет никаких значительных изменений в последовательности белка F. В связи с этим предполагается, что указанные бензодиазепины характеризуются общим новым механизмом действия, который не включает ингибирование белка F.
Таким образом, неожиданно было установлено, что комбинация (а) ингибитора белка слияния RSV и (b) бензодиазепина, обладающего противовирусной активностью в отношении RSV, характеризуется высокой противовирусной активностью в отношении RSV. Установлено, что компоненты (а) и (b) проявляют по крайней мере аддитивное действие. Кроме того, в настоящем изобретении также установлено, что указанные два компонента проявляют синергический эффект, что обеспечивает совместное действие, более высокое, чем суммарное действие индивидуальных компонентов.
Таким образом, в первом варианте осуществления настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, которая включает фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и
(a) ингибитор белка слияния RSV и
(b) производное бензодиазепина, способное ингибировать репликацию RSV.
В настоящем изобретении также установлено, что компоненты (а) и (b) проявляют по крайней мере аддитивное действие. Определения синергизма и аддитивности безусловно являются широко известными в области фармакологии. Таким образом, известно, что терапевтически ценная аддитивная комбинация означает комбинацию, которая проявляет более высокое действие по сравнению с самым высоким действием каждого компонента в отдельности при той же концентрации, что и в смеси. В связи с этим согласно настоящему изобретению данный состав, содержащий х мас.% компонента (а) и у мас.% компонента (b), обладает активностью, по крайней мере равной активности состава, содержащего в качестве единственного активного ингредиента либо х мас.% компонента (а), либо у мас.% компонента (b).
В указанных аддитивных комбинациях активные ингредиенты в основном действуют по различным физиологическим механизмам. Например, согласно настоящему изобретению предполагается, что компонент (а) и компонент (b) ингибируют различные белки RSV. Аддитивная комбинация является терапевтически ценной, поскольку обеспечивает терапевтический эффект при более низких концентрациях каждого активного компонента, что, в свою очередь, позволяет свести к минимуму побочные действия лекарственного препарата. В связи с этим аддитивную комбинацию получают таким образом, чтобы концентрация каждого присутствующего активного ингредиента в нормальных клетках в отличие от патологических клеток-мишеней составляла субклинический уровень, и в то же время аддитивная комбинация оказывает терапевтическое действие на клетки-мишени, которые чувствительны к обоим ингредиентам.
Определение активности ингибитора белка слияния RSV (компонента (а)) проводят с использованием следующего метода анализа:
(a) окрашивание RSV октадецилродаминовым красителем (R18),
(b) предварительное инкубирование окрашенного вируса в присутствии клеток Нер-2, культивированных в 6-луночном планшете, при 4°С в течение 1 ч,
(c) удаление несвязанного вируса,
(d) добавление исследуемого ингибитора белка слияния,
(e) инкубирование 6-луночных планшетов при 37°С в течение 1 ч и
(f) определение возрастания флуоресценции, обычно с использованием флуоресцентного микроскопа.
В описанном выше анализе увеличение флуоресценции означает слияние (инвазию) вируса. Таким образом, 100% ингибирование наблюдается, если увеличения флуоресценции не регистрируется. Если увеличение флуоресценции равно флуоресценции, наблюдаемой в контрольном образце, в котором на стадии (d) вместо исследуемого ингибитора белка слияния добавляют среду для культивирования и растворитель (например, среду для культивирования, содержащую 10% эмбриональную сыворотку теленка и ДМСО), то в этом случае ингибирование равно 0%. Соответственно, уровень ингибирования в процентах определяют при измерении интенсивности флуоресценции в присутствии исследуемого ингибитора белка слияния на стадии (f).
Использованный в данном контексте термин «компонент (а)» обычно означает соединение, которое обеспечивает по крайней мере 10% ингибирование, более типично по крайней мере 30%, предпочтительно по крайней мере 50% и наиболее предпочтительно по крайней мере 75% ингибирование белка слияния RSV, причем ингибирование определяют с использованием описанного выше анализа.
Обычно «компонент (а)» означает соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль,
где
X означает простую связь или C1-С6алкил, причем указанный C1-С6алкил необязательно замещен атомом галогена, группами оксо, циано, гидроксил, OCOR4 или S(O)n-(С1-С6)алкил,
Y означает R4, NR4R5, NСОR4, =N-OR4, -CONHR4, СООR4, -OR4, арил, гетероарил, циклил или гетероциклил, причем R4 и R5 означают Н или C1-С6алкил,
Z означает СR6R7, причем R6 и R7 независимо означают Н или C1-С6алкил с прямой или разветвленной цепью или циклический C1-С6алкил,
n равно 1-2,
R1 означает CONR4R5, СО2R4 или C1-С6алкил, причем указанный С1-С6алкил необязательно замещен группой OR4 или NR8R9,
каждый R8 и R9 независимо означает Н, C1-С6алкил, SO2R5, CO2R4 или COR4,
R2 выбирают из группы, включающей NH2, CONR6R7, гетероарил, С2-С6алкенил, СО2R4, N=CPh2, C(=NH)NH2 и C1-С6алкил, причем указанный алкил необязательно содержит заместитель, выбранный из группы, включающей атом галогена, CN, NR10R11, OSO2R4 и ОR4,
каждый R10 и R11 независимо выбирают из группы, включающей Н, С1-С6алкил, С3-С6циклоалкил, СО2R4, COR4 и SO2R4,
R3 выбирают из группы, включающей (1) СО2R9, (2) C1-С6алкил, необязательно замещенный группами CN, OR4 или NR6R7 и (3) С1-С6алкенил, замещенный группой CN,
Q означает заместитель, выбранный из группы, включающей
А означает С или N, необязательно замещенный атомами Н, галогена, группами C1-С6алкил, С2-С6алкенил, циано(С1-С6)алкил, CO2R4, арил, бензаминокарбонил, гидроксибензил, SO2NR4R5 или С3-С6циклоалкил. Если А означает углерод, то он также необязательно замещен атомом О или S через двойную связь,
В означает С или N, если В означает С, то он необязательно замещен атомом Н, группами С1-С6алкил, NO2, CN, атомом галогена, COR4, COOR4, CONHR4C(=NH)NH2 или C(=NOH)NH2.
Обычно по крайней мере два заместителя из R1, R2 и R3 означают водород, а другой заместитель означает водород или -C(NH)-NH2. Предпочтительно, все заместители R1, R2 и R3 означают водород.
Обычно -X-Y означает Н, либо Х означает группу C1-С6алкилен, которая является незамещенной или содержит в качестве заместителя гидроксигруппу, а Y означает Н, ОН, CN, -NR'R″ -COR', -SO2R' или фенил, причем R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают группу С1-С4алкил.
Обычно Z означает -СН2-.
Обычно Q означает остаток формулы
или 
где В означает -СН- или -N-, A1 означает -С(O)- или -NH- и А2 означает -СН2-, -CHR'- или -NR″-, причем R' означает атом галогена, а R″ означает атом водорода или С1-С4алкил, С2-С4алкенил, С3-С6циклоалкил, -SO2-(С1-С6)алкил, SO2-Н((С1-С6)алкил)2 или группу (СО-NН)а-(С1-С4)алкилфенил, где а равно 0 или 1, причем указанная группа является незамещенной или содержит гидрокси- или цианозаместитель.
Прежде всего, предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются соединения формулы (Iа) и их фармацевтически приемлемые соли
где
В, Х и Y имеют значения, как определено выше для формулы (I),
D означает циклопропил, этил, 4-цианобутил, изопропенил, метилсульфонил, диметилсульфамоил, бензиламинокарбамоил или парагидроксибензил.
Компонент (а) является также соединением формулы (II) или его фармацевтически приемлемой солью
где
L1 означает -CH2- или -СНR2-СО-,
каждый Х является одинаковым или различным и означает СН или N,
каждый R1 является одинаковым или различным и означает C1-С6алкил, атом галогена, гидрокси, фенил или (CH2)m=NH2,
n равно 1 или 2,
R2 означает C1-С6алкокси или C1-С6алкоксифенил,
R3 означает C1-С6алкил,
L2 означает -СН2- или -NH-,
Y означает C1-С6алкил или C1-С6алкенил,
Z означает Н, N(R4)2-, -C(=O)-R5, -С(=СН2)-R5, -CH(OH)-R5, -СН(СН3)-R5, -СН(ОСН3)-R5,
каждый R4 является одинаковым или различным и означает Н, C1-С6алкил,
R5 означает C1-С6алкилкарбонил, амино, гидроксил, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, а
m равно 1-6.
Если L1 означает -СНR2-СО-, то карбонильный остаток присоединен к фенильному или пиридильному кольцу.
L1 обычно означает -СН2-.
L2 обычно означает -NH-.
R1 обычно означает метил или гидрокси. Обычно n равно 2. Обычно каждый R1 является различным.
Y обычно означает С1-С4алкил.
Z означает -NH2.
Другими предпочтительными соединениями формулы (II) являются соединения формулы
где
Х означает С или N,
R1 означает C1-С6алкил, атом галогена, фенил или (CH2)m=NH2,
R2 означает C1-С6алкокси или C1-С6алкоксифенил,
R3 означает C1-С6алкил,
Y означает C1-С6алкил или C1-С6алкенил,
Z означает H, NR4, -C(=O)-R5, -C(=CH2)-R5, -CH(OH)-R5, -СH(СН3)-R5, -СН(ОСН3)-R5,
R4 означает H, C1-С6алкил,
R5 означает C1-С6алкилкарбонил, амино, гидроксил, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил,
m равно 1-6.
Компонент (а) является также соединением формулы (III) или его фармацевтически приемлемой солью
где
Х означает -N=C- или -СН=СН-,
R1 означает H, гидроксил, алкил, атом галогена, нитро или алкокси, причем указанный алкокси является необязательно монозамещенным группой карбокси, амино, моноалкиламино, диалкиламино или ацетамино,
R2 означает пиразолил, триазолил или тетразолил и необязательно замещен группой амино или алкил.
Компонент (а) является также соединением формулы (IV) или его фармацевтически приемлемой солью.
Соединение формулы (IV) означает 4,4'-бис-(4,6-бис-{3-[бис(2-карбамоилэтил)сульфамоил]фениламино}-[1,3,5]триазин-2-иламино)бифенил-2,2'-бисульфоновую кислоту.
Предпочтительный компонент (а) означает:
1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он,
{2-[2-(1,2-дигидробензотриазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]этил}диэтиламин,
{2-[2-(3-йод-2,3-дигидроиндазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]этил}диметиламин,
1-изопропенил-3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он,
1-(4-гидроксибензил)-3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он,
1-изопропенил-3-[1-(3-оксобутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он,
1-этил-3-[1-(2-гидрокси-2-фенилэтил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он,
1-этил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он,
7-[2-(3-изопропенил-
2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]гептаннитрил,
5-{3-[1-(3-метансульфонилпропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-ил}пентаннитрил,
бензиламид 3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-карбоновой кислоты,
1-метансульфонил-3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он,
диметиламид 3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-сульфоновой кислоты,
1-изопропенил-3-(1-пропил-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он,
бис(5-амидино-2-бензимидазолил)метан,
2-{2-[1-[1-(2-аминоэтил)пиперидин-4-иламино]-4-метилбензимидазол]-1-илметил}-6-метилпиридин-3-ол
или их фармацевтически приемлемую соль.
В другом варианте композиция содержит ингибитор белка слияния RSV, как описано выше, и бензодиазепин, обладающий противовирусной активностью в отношении RSV, определенной, как описано в примере 8.
Обычно компонент (b) означает соединение формулы (V) или его фармацевтически приемлемую соль
где
R1 означает C1-С6алкил, арил или гетероарил,
R2 означает водород или С1-С6алкил,
каждый R3 является одинаковым или различным и означает атом галогена, гидрокси, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро, циано, -CO2R', -CONR'R″, -NH-CO-R', -S(O)R', -S(O)2R', -NH-S(O)2R', -S(O)NR'R″ или -S(O)2NR'R″, причем каждый R' и R″ является одинаковым или различным и означает водород или C1-С6алкил,
n равно от 0 до 3,
R4 означает водород или С1-С6алкил,
R5 означает C1-С6алкил, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С6)алкил-, гетероарил(С1-С6)алкил-, карбоциклил(С1-С6)алкил-, гетероциклил(С1-С6)алкил-, арил-С(O)-С(O)-, гетероарил-С(O)-С(O)-, карбоциклил-С(O)-С(O)-, гетероциклил-С(O)-С(O)- или -XR6,
Х означает -СО-, -S(O)- или -S(O)2-, a
R6 означает C1-С6алкил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С6)алкил-, гетероарил(С1-С6)алкил-, карбоциклил(С1-С6)алкил-, гетероциклил(С1-С6)алкил-, арил(С1-С6)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С6)гидроксиалкил-, карбоциклил(С1-С6)гидроксиалкил-, гетероциклил(С1-С6)гидроксиалкил-, арил(С1-С6)алкил-O-, гетероарил(С1-С6)алкил-O-, карбоциклил(С1-С6)алкил-O-, гетероциклил(С1-С6)алкил-O- или -NR'R″, причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород, C1-С6алкил, карбоциклил, гетероциклил, арил, гетероарил, арил(С1-С6)алкил-, гетероарил(С1-С6)алкил-, карбоциклил(С1-С6)алкил- или гетероциклил(С1-С6)алкил-. Обычно R' и R″ оба не означают водород.
Использованный в данном контексте термин «C1-С6алкильная группа или остаток» означает алкильную группу или остаток с разветвленной или линейной цепью, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, такую как С1-С4алкил. Примеры С1-С4алкильных групп или остатков включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил и трет-бутил. Если в группе присутствуют два алкильных остатка, то алкильные остатки являются одинаковыми или различными.
Использованный в данном контексте термин «гидроксиалкильная группа» обычно означает указанный алкил, который замещен одной или более гидроксигруппами. Обычно указанная группа замещена одной, двумя или тремя гидроксигруппами. Предпочтительно, она замещена одной гидроксигруппой. Предпочтительными гидроксиалкильными группами являются моногидроксиэтильные группы.
Использованный в данном контексте термин «ацильная группа» означает С2-С7ацил, например группу -CO-R, в которой R означает указанную C1-С6алкильную группу.
Использованный в данном контексте термин «арильная группа» обычно означает С6-С10арил, такой как фенил или нафтил. Предпочтительным является фенил. Арильная группа является незамещенной или содержит заместители в любом положении. Обычно указанная группа содержит 0, 1, 2 или 3 заместителя.
Пригодные заместители арильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R″ или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил. Примеры пригодных заместителей арильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -NH-S(O)2R' или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил.
Предпочтительные заместители арильной группы включают атом галогена, С1-6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро, циано, -CO2R', -S(O)R', -S(O)2R' и -S(O)2NR'R″, причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или С1-С4алкил. Примеры предпочтительных заместителей арильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро и циано.
Прежде всего предпочтительные заместители включают фтор, хлор, бром, йод, С1-С4алкил, С2-С4ацил, гидрокси, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, С1-С4галогеналкил, С1-С4галогеналкокси, амино, моно(С1-С4алкил)амино, ди(С1-С4алкил)амино, нитро, -CO2R', -S(O)2R″ и -S(O)2NH2, причем R' означает С1-С2алкил. Примеры прежде всего предпочтительных заместителей включают фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро.
Использованные в данном контексте термины, относящиеся к арильной группе, включают циклические конденсированные системы, в которых арильная группа образует конденсированную систему с моноциклической карбоциклильной, гетероциклильной или гетероарильной группой и фенильной группой. Обычно упомянутые конденсированные циклические системы являются системами, в которых арильная группа образует конденсированную систему с моноциклической карбоциклильной, гетероциклильной или гетероарильной группой. Предпочтительно указанные циклические системы включают системы, в которых арильная группа конденсирована с конденсированной группой, которая означает моноциклическую гетероциклильную или гетероарильную группу, или с моноциклической карбоциклической группой, конденсированной с фенильным кольцом прежде всего системы, в которых арильная группа конденсирована с гетероциклильной или гетероарильной группой. Примеры указанных конденсированных циклических систем включают группы, в которых фенильное кольцо конденсировано с тиенильной группой или с тетрагидрофуранильной группой с образованием бензотиенильной или дигидробензофуранильной группы. Кроме того, примеры указанных конденсированных циклов включают группы, в которых фенильное кольцо конденсировано с диоксанильной группой, пирролильной группой или 2,3-дигидроинден-1-оновой группой с образованием бензодиоксинильной, индолильной или 9Н-флуорен-9-оновой группы.
Использованный в данном контексте термин «карбоциклильная группа» означает неароматическое насыщенное или ненасыщенное моноциклическое углеводородное кольцо, содержащее обычно от 3 до 6 атомов углерода. Предпочтительно указанный термин означает насыщенное углеводородное кольцо (т.е. циклоалкильную группу), содержащую от 3 до 6 атомов углерода. Примеры включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. Предпочтителен циклопентил или циклогексил. Циклоалкильная группа является незамещенной или содержит заместитель в любом положении. Обычно указанная группа содержит 0, 1, 2 или 3 заместителя.
Пригодные заместители карбоциклильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, оксо, -СО2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R' или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или С1-С6алкил. Примеры пригодных заместителей карбоциклильной группы включают атом галогена, С1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -NH-S(O)2R' или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил.
Предпочтительные заместители карбоциклильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро, циано и оксо. Примеры предпочтительных заместителей карбоциклильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро и циано. Прежде всего предпочтительные заместители включают фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил, нитро и оксо. Примеры прежде всего предпочтительных заместителей включают фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро. Кроме того, примеры прежде всего предпочтительных заместителей включают фтор, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро.
Использованный в данном контексте термин «гетероциклильная группа» означает неароматическое насыщенное или ненасыщенное карбоциклическое кольцо, содержащее обычно от 5 до 10 атомов углерода, в котором один или более, например 1, 2 или 3, атома углерода заменены на гетероатом, выбранный из N, О и S. Предпочтительны насыщенные гетероциклильные группы. Примеры включают тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, диоксоланил, тиазолидинил, тетрагидропиранил, пиперидинил, диоксанил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил и тиоксанил. Кроме того, примеры включают дитиоланил, оксазолидинил, тетрагидротиопиранил и дитианил. Предпочтительными являются пиперазинил, пиперидинил и морфолинил.
Использованные в данном контексте термины, относящиеся к гетероциклильной группе, включают конденсированные циклические системы, в которых гетероциклильная группа конденсирована с фенильной группой. Предпочтительные указанные конденсированные циклические системы означают системы, в которых 5-6-членная гетероциклильная группа конденсирована с фенильной группой. Примером указанной конденсированной циклической системы является группа, в которой 1Н-имидазол-2(3Н)-онильная группа или имидазолидин-2-онильная группа конденсирована с фенильной группой с образованием 1Н-бензо[d]имидазол-2(3Н)-онильной группы. Однако наиболее предпочтительно гетероциклильная группа является моноциклической.
Гетероциклильная группа является незамещенной или содержит заместитель в любом положении. Обычно указанная группа содержит 0, 1 или 2 заместителя.
Пригодные заместители гетероциклильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, оксо, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R' или
-NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил. Примеры пригодных заместителей гетероциклильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -NH-S(O)2R' или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил.
Предпочтительные заместители гетероциклильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, С1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро, циано и оксо. Примеры предпочтительных заместителей гетероциклильной группы включают атом галогена, С1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-C6алкил)амино, нитро и циано. Прежде всего предпочтительные заместители включают фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил, нитро и оксо. Примеры прежде всего предпочтительных заместителей включают фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро. Кроме того, примеры прежде всего предпочтительных заместителей включают фтор, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро. Наиболее предпочтительно гетероциклильная группа является незамещенной или замещенной одним или двумя С1-С2алкильными группами.
Использованный в данном контексте термин «атом галогена» обычно означает атом хлора, фтора, брома или йода. Предпочтительными являются хлор, фтор или бром. Более предпочтителен хлор или фтор.
Использованный в данном контексте термин «алкоксигруппа» обычно означает указанную алкильную группу, присоединенную к атому кислорода. Термин «алкилтиогруппа» обычно означает указанную алкильную группу, присоединенную к тиогруппе. Термин «галогеналкил» или «галогеналкокси» обычно означает указанную алкильную или алкокси группу, замещенную одним или более указанных атомов галогена. Обычно указанная группа содержит 1, 2 или 3 указанных атомов галогена. Предпочтительные галогеналкильные и галогеналкоксигруппы включают пергалогеналкил и пергалогеналкокси, такие как -СХ3 и -ОСХ3, в которых Х означает указанный атом галогена, например хлор или фтор. Прежде всего предпочтительными галогеналкильными группами являются -СF3 и -ССl3. Прежде всего предпочтительными галогеналкоксигруппами являются -ОСF3 и -ОССl3.
Использованный в данном контексте термин «гетероарильная группа» обычно означает 5-10-членное ароматическое кольцо, такое как 5- или 6-членное кольцо, содержащее по крайней мере один гетероатом, например 1, 2 или 3 гетероатома, выбранных из О, S и N. Примеры включают группы пиридил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, фуранил, тиенил, пиразолидинил, пирролил, оксадиазолил, изоксазолил, тиадиазолил, тиазолил, имидазолил и пиразолил. Кроме того, примеры включают оксазолил и изотиазолил. Предпочтительными гетероарильными группами являются пиридил, тиенил, оксазолил, изоксазолил, фуранил и пиразолил. Примерами предпочтительных гетероарильных групп являются пиридил, тиенил, изоксазолил и фуранил. Используемые в данном контексте термины, относящиеся к гетероарильным группам, включают конденсированные циклические системы, в которых гетероарильная группа конденсирована с фенильной группой. Предпочтительными указанными конденсированными циклическими системами являются системы, в которых 5-6-членная гетероарильная группа конденсирована с фенильной группой. Примерами указанных конденсированных циклических систем являются остатки бензофуранила, бензотиофенила, индолила, бензимидазолила, бензоксазолила, хинолинила, хиназолинила и изохинолинила. Однако наиболее предпочтительно гетероарильная группа является моноциклической.
Гетероарильная группа является незамещенной или содержит заместитель в любом положении. Обычно указанная группа содержит 0, 1, 2 или 3 заместителя.
Пригодные заместители гетероарильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R' или
-NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или С1-С6алкил. Примеры пригодных заместителей гетероарильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R' или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил.
Предпочтительные заместители гетероарильной группы включают атом галогена, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, С1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро и циано. Прежде всего предпочтительные заместители включают фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро. Кроме того, предпочтительные заместители включают фтор, хлор, бром, C1-С2алкил, C1-С2галогеналкил и ди(С1-С2алкил)амино.
Использованные в данном контексте термины, относящиеся к гетероарильной группе, включают конденсированные циклические системы, в которых гетероарильная группа конденсирована с упомянутой моноциклической арильной, карбоциклильной или гетероциклильной группой или с другой гетероарильной группой. Предпочтительными указанными циклическими системами являются системы, в которых гетероарильная группа конденсирована с арильной группой, например с фенильной группой. Примером указанной конденсированной циклической системы является группа, в которой тиенильная группа конденсирована с фенильным кольцом с образованием бензотиенильной группы. Еще одним примером указанной конденсированной циклической системы является группа, в которой фуранильная группа конденсирована с фенильным кольцом с образованием бензофуранильной группы.
Если группа R1 в формуле (V) означает арильную или гетероарильную группу, то она обычно является незамещенной или содержит один, два или три заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, С1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил или C1-С6галогеналкокси. Предпочтительно, указанная группа является незамещенной или содержит один или два заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, С1-С4галогеналкил или С1-С4галогеналкокси. Более предпочтительно указанная группа является незамещенной или содержит один заместитель, выбранный из группы, включающей фтор, хлор, C1-С2алкил, С1-С2алкокси, С1-С2алкилтио, C1-С2галогеналкил или С1-С2галогеналкокси.
Обычно R1 в формуле (V) означает C1-С6алкил или арил. Предпочтительный R1 означает C1-С2алкил или арил. Более предпочтительный R1 означает С1-С2алкил или фенил. Наиболее предпочтительный R1 означает фенил.
Обычно R2 в формуле (V) означает водород или С1-С4алкил. Предпочтительный R2 означает водород.
Обычно R3 в формуле (V) означает атом галогена, гидрокси, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, С1-С4галогеналкил, галогеналкокси, амино, моно(С1-С4алкил)амино или ди(С1-С4алкил)амино. Предпочтительный R3 означает фтор, хлор, бром, С1-С2алкил, С1-С2алкокси, С1-С2алкилтио, С1-С2галогеналкил, С1-С2галогеналкокси, амино, моно(С1-С2алкил)амино или ди(С1-С2алкил)амино. Более предпочтительный R3 означает метил, трифторметил, фтор, хлор или бром. Наиболее предпочтительный R3 означает метил или хлор. Примером наиболее предпочтительной группы R3 является хлор.
Обычно n в формуле (V) равно 0, 1 или 2. Предпочтительно n равно 0 или 1.
Обычно R4 в формуле (V) означает водород или С1-С4алкил.
Предпочтительный R4 означает водород или С1-С4алкил. Более предпочтительный R4 означает водород или метил. Наиболее предпочтительный R4 означает водород.
Если группа R5 в формуле (V) означает гетероциклильную группу, то она обычно присоединена через атом углерода. Обычно R5 означает C1-С6алкил, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил-, арил-С(О)-С(O)-, гетероарил-С(O)-С(O)- или -XR6. Примеры типичных групп R5 включают C1-С6алкил, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил- или -XR6.
Предпочтительный R5 в формуле (V) означает С1-С4алкил, арил, например фенил и дигидробензофуранил, гетероарил, например тиенил, фуранил, изоксазолил, пиридил и бензотиенил, карбоциклил, например циклопентил и циклогексил, гетероциклил, например пиперидинил, морфолинил и пиперазинил, фенил(С1-С2алкил)-, например бензил, гетероарил(С1-С2алкил)-, фенил-С(O)-С(O)-, гетероарил-С(O)-С(O)- или -XR6. Примеры предпочтительных групп R5 включают С1-С4алкил, арил, например фенил и дигидробензофуранил, гетероарил, например тиенил, фуранил, изоксазолил, пиридил и бензотиенил, карбоциклил, например циклопентил и циклогексил, гетероциклил, например пиперидинил, морфолинил и пиперазинил, фенил(С1-С)2алкил-, например бензил, гетероарил(С1-С2)алкил- или -XR6.
Более предпочтительный R5 в формуле (V) означает С1-С4алкил, фенил, тиенил, фуранил, изоксазолил, пиридил, циклопентил, циклогексил, бензотиенил, дигидробензофуранил, фенил-СН2-, фуранил-СН2-, фенил-С(О)-С(O)-, тиенил-С(O)-С(O)- или -XR6. Примеры более предпочтительных групп R5 включают С1-С4алкил, фенил, тиенил, фуранил, изоксазолил, пиридил, циклопентил, циклогексил, бензотиенил, дигидробензофуранил, фенил-СH2-, фуранил-СН2- или -XR6.
Наиболее предпочтительный R5 в формуле (V) означает фенил-СН2-, фуранил-СН2-, -С(O)-С(O)-тиенил или -XR6. Примеры наиболее предпочтительных групп R5 включают фенил-СH2-, фуранил-СН2- или -XR6.
Обычно Х в формуле (V) означает -СО-, -S(O)- или -S(O)2-. Предпочтительный Х означает -СО- или -S(O)2-.
Если R6 в формуле (V) означает группу -NR'R″, a R' или R″ включает арил, гетероарил, карбоциклил или гетероциклил, то указанная группа обычно является незамещенной или содержит 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, С1-С6алкокси, С1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро и циано. Предпочтительный арил, гетероарил, карбоциклил или гетероциклил является незамещенным или содержит 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, С1-С4галогеналкил, C1-С4галогеналкокси и нитро. Примером предпочтительного замещения является случай, когда арил, гетероарил, карбоциклил или гетероциклил является незамещенным или содержит 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4 галогеналкил и нитро. Более предпочтительный арил, гетероарил, карбоциклил или гетероциклил является незамещенным или содержит один или два заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, С1-С2алкил, C1-С2алкокси, С1-С2алкилтио, С1-С2галогеналкил и нитро. Примером более предпочтительного замещения является случай, когда арил, гетероарил, карбоциклил или гетероциклил является незамещенным или содержит в качестве единственного заместителя фтор, хлор, метил, метокси или нитро. Если группа R' или R″ означает гетероарильную или гетероциклильную группу, то указанная группа присоединена через атом углерода.
Обычно R' и R″ в группе -NR'R″ формулы (V) оба не означают водород. Обычно каждый R' и R” являются одинаковыми или различными и означают водород, С1-С4алкил, арил, гетероарил, карбоциклил, арил(С1-С4)алкил- или гетероарил(С1-С4)алкил-. Примеры типичных групп R' и R″ включают группы, в которых каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород, С1-С4алкил, фенил, гетероарил, например тиенил, карбоциклил, например циклогексил или циклопентил, или фенил(С1-С4)алкил-. Кроме того, примеры типичных групп R' и R″ включают группы, в которых каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород, С1-С4алкил, фенил, тиенил, циклогексил, циклопентил или фенил-(СН2)-. Предпочтительно каждый R' и R″ одинаковый или различный и означает водород, С1-С4алкил, фенил, фенил-СН2-, циклогексил или циклопентил. Более предпочтительно один из R' и R″ означает водород. Наиболее предпочтительно один из R' и R″ означает водород, а другой означает С1-С4алкил, фенил, фенил-(СН2)-, циклогексил или циклопентил. Еще более предпочтительно один из R' и R″ означает водород, а другой означает С1-С4алкил, фенил, тиенил или фенил-(СН2)-.
Обычно R6 в формуле (V) означает C1-С6алкил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил-, арил(С1-С4)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С4)гидроксиалкил-, карбоциклил(С1-С4)гидроксиалкил-, гетероциклил(С1-С4)гидроксиалкил-, арил(С1-С4)алкил-O-, гетероарил(С1-С4)алкил-O-, карбоциклил(С1-С4)алкил-O-, гетероциклил(С1-С4)алкил-O- или -NR'R″, причем R' и R″ имеют значения, как определено выше. Примеры типичных групп R6 включают C1-С6алкил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил- или -NR'R″, причем R' и R″ имеют значения, как определено выше.
Предпочтительный R6 в формуле (V) означает C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, арил, например фенил, нафтил, дигидробензофуранил, бензодиоксинил, 9Н-флуорен-9-онил и индолил, гетероарил, например тиенил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, пиразолил, пиридил, бензотиенил и бензофуранил, карбоциклил, например циклопентил и циклогексил, гетероциклил, например пиперазинил, пиперидинил, морфолинил и 1Н-бензо[d]имидазол-2(3Н)-онил, фенил(С1-С2)алкил-, фенил(С1-С2)алкил-O-, фенил(С1-С2)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С2)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С2)алкил- или -NR'R″, причем R' и R″ имеют значения, как определено выше. Примеры предпочтительных групп R6 включают С1-С4алкил, арил, например фенил и дигидробензофуранил, гетероарил, например тиенил, фуранил, изоксазолил, пиридил и бензотиенил, карбоциклил, например циклопентил и циклогексил, гетероциклил, например N-гетероциклил, фенил(С1-С2)алкил-, например бензил, гетероарил(С1-С2)алкил- или -NR'R″, причем R' и R″ имеют значения, как определено выше.
Более предпочтительный R6 в формуле (V) означает С1-С4алкил, C1-С4алкокси, фенил, нафтил, дигидробензофуранил, бензодиоксинил, 9Н-флуорен-9-онил, индолил, тиенил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, пиразолил, пиридил, бензотиенил, бензофуранил, циклопентил, циклогексил, пиперазинил, пиперидинил, морфолинил,
фенил(С1-С2)алкил-, фенил-СН2-СН(ОН)-, фенил-СН(ОН)-СН2-, фенил(С1-С2)алкил-O-, 1Н-бензо[d]имидазол-2(3Н)-онил или -NR'R″, причем R' и R″ имеют значения, как определено выше. Примеры наиболее предпочтительных групп R6 включают С1-С4алкил, фенил, тиенил, фуранил, пиридил, циклопентил, циклогексил, бензотиенил, дигидробензофуранил, изоксазолил, пиперидинил, например N-пиперидинил, морфолинил, например N-морфолинил, пиперазинил, например N-пиперазинил, или -NR'R″, причем R' и R″ имеют значения, как определено выше.
Предпочтительными соединениями формулы (V) являются соединения, в которых:
R1 означает C1-С6алкил или арил,
R2 означает водород или С1-С4алкил,
R3 означает атом галогена, гидрокси, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, C1-С4алкилтио, С1-С4галогеналкил, С1-С4галогеналкокси, амино, моно(С1-С4алкил)амино или ди(С1-С4алкил)амино или, предпочтительно, R3 означает фтор, хлор, бром, С1-С2алкил, С1-С2алкокси, С1-С2алкилтио, С1-С2галогеналкил, С1-С2галогеналкокси, амино, моно(С1-С2алкил)амино или ди(С1-С2алкил)амино,
n равно 0, 1 или 2,
R4 означает водород или С1-С4алкил,
R5 означает C1-С6алкил, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил-, арил-С(O)-С(O)-, гетероарил-С(O)-С(O)- или -XR6,
Х означает -СО-, -S(O)- или -S(O)2-, a
R6 означает C1-С6алкил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, арил, гетероарил, карбоциклил, гетероциклил, арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил-, арил(С1-С4)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С4)гидроксиалкил-, карбоциклил(С1-С4)гидроксиалкил-, гетероциклил(С1-С4)гидроксиалкил-, арил(С1-С4)алкил-O-, гетероарил(С1-С4)алкил-O-, карбоциклил(С1-С4)алкил-O-, гетероциклил(С1-С4)алкил-O- или -NR'R″, причем R' и R″ каждый являются одинаковыми или различными и означают водород, С1-С4алкил, арил, гетероарил, карбоциклил, арил(С1-С4)алкил- или гетероарил(С1-С4)алкил-,
арил в составе группы R1 является незамещенным или содержит 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, С1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил или C1-С6галогеналкокси,
арил и гетероарил в составе групп R5 и R6 являются незамещенными или содержат 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, С3-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R' или -NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил,
карбоциклил и гетероциклил в составе групп R5 и R6 являются незамещенными или содержат 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, нитро, циано, карбамоил, моно(С1-С6алкил)карбамоил, ди(С1-С6алкил)карбамоил, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, оксо, -CO2R', -CONR'R″, -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)NR'R″, -S(O)2NR'R″, -NH-S(O)2R' или
-NH-CO-R', причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или C1-С6алкил, и
алкил в группах арил(С1-С4)алкил-, гетероарил(С1-С4)алкил-, карбоциклил(С1-С4)алкил-, гетероциклил(С1-С4)алкил- в составе R6 являются незамещенными или содержат один или два гидрокси заместителя.
Предпочтительно в указанных предпочтительных соединениях формулы (V) арил, гетероарил и карбоциклил в составе групп R' и R″ являются незамещенными или содержат 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкоси, нитро и циано.
Кроме того, предпочтительными соединениями формулы (V) являются соединения, в которых:
R1 означает C1-С2алкил или фенил,
R2 означает водород или С1-С4алкил,
R3 означает метил, трифторметил, фтор, хлор или бром,
n равно 0 или 1,
R4 означает водород или С1-С2алкил,
R5 означает С1-С4алкил, арил, например фенил и дигидробензофуранил, гетероарил, например тиенил, фуранил, изоксазолил, пиридил и бензотиенил, карбоциклил, например циклопентил и циклогексил, гетероциклил, например пиперидинил, морфолинил и пиперазинил, фенил(С1-С2)алкил-, например бензил, гетероарил(С1-С2)алкил-, фенил-С(O)-С(O)-, гетероарил-С(O)-С(O)- или -XR6 при условии, что если R5 означает гетероциклил, то он присоединен через атом углерода,
Х означает -СО-, -S(O)- или -S(O)2-, и
R6 означает C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, арил, например фенил, нафтил, дигидробензофуранил, бензодиоксинил, 9Н-флуорен-9-онил и индолил, гетероарил, например тиенил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, пиразолил, пиридил, бензотиенил и бензофуранил, карбоциклил, например циклопентил и циклогексил, гетероциклил, например пиперазинил, пиперидинил, морфолинил и 1Н-бензо[d]имидазол-2(3Н)-онил, фенил(С1-С2)алкил-, фенил(С1-С2)алкил-O-, фенил(С1-С2)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С2)гидроксиалкил-, гетероарил(С1-С2)алкил- или -NR'R″, причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород, С1-С4алкил, фенил, гетероарил, например тиенил, карбоциклил, например циклогексил или циклопентил или фенил(С1-С4)алкил-,
фенил в группе R1 является незамещенным или содержит один или два заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, С1-С4галогеналкил или С1-С4галогеналкокси,
арил в составе групп R5 и R6 является незамещенным или содержит 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, С1-С6алкил, С2-С7ацил, гидрокси, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-6галогеналкокси, амино, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро, циано, -CO2R', -S(O)R', -S(O)2R' и -S(O)2NR'R″, причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород или С1-С4алкил,
гетероарил в составе групп R5 и R6 является незамещенным или содержит 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, C1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро и циано, и
карбоциклил и гетероциклил в составе групп R5 и R6 являются незамещенными или содержат 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей галоген, C1-С6алкил, C1-С6алкокси, C1-С6алкилтио, С1-С6галогеналкил, C1-С6галогеналкокси, моно(С1-С6алкил)амино, ди(С1-С6алкил)амино, нитро, циано и оксо, а
алкил в группах фенил(С1-С2)алкил- и гетероарил(С1-С2)алкил- в составе R6 является незамещенным или содержит единственный гидрокси заместитель.
Предпочтительно в указанных предпочтительных соединениях формулы (V) в группах R' и R″ остатки фенила, гетероарила и карбоциклила являются незамещенными или содержат 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, C1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, C1-С4галогеналкил, С1-С4 галогеналкокси и нитро.
Прежде всего предпочтительными соединениями формулы (V) являются соединения формулы (Va) и их фармацевтически приемлемые соли
где
R1 означает фенил или метил,
R3 означает метил или атом хлора,
n равно 0 или 1,
R4 означает водород или метил,
R5 означает фенил-СН2-, фуранил-СН2-, тиенил-С(O)-С(O)- или -XR6,
Х означает -СО- или -S(O)2-, a
R6 означает С1-С4алкил, С1-С4алкокси, фенил, нафтил, дигидробензофуранил, бензодиоксинил, 9Н-флуорен-9-онил, индолил, тиенил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, пиразолил, пиридил, бензотиенил, бензофуранил, циклопентил, циклогексил, пиперазинил, пиперидинил, морфолинил, фенил(С1-С2)алкил-, фенил-СН2-СH(ОН)-, фенил-СН(ОН)-СН2-, фенил(С1-С2)алкил-O-, 1Н-бензо[d]имидазол-2(3Н)-онил или -NR'R″, причем каждый R' и R″ являются одинаковыми или различными и означают водород, С1-С4алкил, фенил, тиенил, циклогексил, циклопентил или фенил-(СН2)-,
фенил в составе группы R1 является незамещенным или содержит в качестве единственного заместителя фтор, хлор, С1-С2алкил, С1-С2алкокси, C1-С2алкилтио, С1-С2галогеналкил или С1-С2галогеналкокси,
арил в составе групп R5 и R6 является незамещенным или содержит 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, йод, C1-С4алкил, С2-С4ацил, гидрокси, С1-С4алкокси, С1-С4алкилтио, C1-С4галогеналкил, С1-С4галогеналкокси, амино, моно(С1-С4алкил)амино, ди(С1-С4алкил)амино, нитро, -CO2R', -S(O)2R' и -S(O)2NH2, причем R' означает С1-С2алкил,
гетероарил в составе групп R5 и R6 является незамещенным или содержит 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, бром, C1-С2алкил, C1-С2галогеналкил и ди(С1-С2алкил)амино, а
гетероциклил и карбоциклил в составе группы R являются незамещенными или содержат 1 или 2 заместителя, выбранные из группы, включающей фтор, хлор, бром, С1-С4алкил, С1-С4алкокси, С1-С4галогеналкил и нитро.
Предпочтительный R1 в формуле (Va) означает фенил, n равно 0, R4 означает водород, а R5 означает -СО-фенил или -CO-NH-фенил, причем фенильная группа в составе R5 является незамещенной или содержит 1 или 2 заместителя, выбранных из группы, включающей фтор, хлор, С1-С2алкил, C1-С2алкокси, С1-С2галогеналкил, -СО2R' или -S(O)2R', причем каждый R' является одинаковым или различным и означает C1-С2алкил.
Соединения формул (I), (II), (III) или (V), содержащие один или более хиральных центров, можно использовать в форме индивидуальных энантиомеров или диастереоизомеров или в форме смеси изомеров. Химические структуры, приведенные в данном контексте, включают все стереоизомеры указанных соединений, включая рацемические и нерацемические смеси и индивидуальные энантиомеры и/или диастереоизомеры.
Предпочтительные соединения формулы (V) являются оптически активными изомерами. Так, например, предпочтительные соединения формулы (V), содержащие только один хиральный центр, включают в основном чистый R энантиомер, в основном чистый S энантиомер и энантиомерные смеси, которые содержат избыток R энантиомера или избыток S энантиомера. Соединения формулы (V) при необходимости используют в форме сольватов.
Использованный в данном контексте термин «фармацевтически приемлемая соль» означает соль фармацевтически приемлемой кислоты или основания. Фармацевтически приемлемые кислоты включают неорганические кислоты, такие как соляная, серная, фосфорная, дифосфорная, бромистоводородная или азотная кислота, и органические кислоты, такие как лимонная, фумаровая, малеиновая, яблочная, аскорбиновая, янтарная, винная, бензойная, уксусная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая или паратолуолсульфоновая кислота. Фармацевтически приемлемые основания включают гидроксиды щелочных металлов (например, натрия или калия) и щелочноземельных металлов (например, кальция или магния) и органические основания, такие как алкиламины, аралкиламины или гетероциклические амины. Наиболее предпочтительный компонент (b) означает:
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
1,1-диэтил-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
N-(2-oкco-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)пропионамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бутирамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)изобутирамид,
2,2-диметил-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)пропионамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид циклопентанкарбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид циклогексанкарбоновой кислоты,
3-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
4-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-трифторметилбензамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-амид тиофен-2-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид фуран-2 карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид пиперидин-1-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид морфолин-4-карбоновой кислоты,
4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
3-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 4-метилпиперазин-1-карбоновой кислоты,
3,4-дихлор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-трифторметилбензамид,
4-бром-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-метил-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-хлор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-метокси-4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(S)-2-метокси-4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид бензо[b]тиофен-3-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 2,3-дигидробензофуран-5-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид изоксазол-5-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид бензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид тиофен-3-карбоновой кислоты,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)изоникотинамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)никотинамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)метансульфонамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид пропан-1-сульфоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид бутан-1-сульфоновой кислоты,
2-бром-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензолсульфонамид,
3-бром-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензолсульфонамид,
4-бром-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензолсульфонамид,
2-фтор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензолсульфонамид,
3-(2-нитробензиламино)-5-фенил-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
3-(3-нитробензиламино)-5-фенил-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
3-(4-нитробензиламино)-5-фенил-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
3-(2-метоксибензиламино)-5-фенил-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
3-(3-метоксибензиламино)-5-фенил-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
5-фенил-3-(2-трифторметилбензиламино)-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
5-фенил-3-(3-трифторметилбензиламино)-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
5-фенил-3-(4-трифторметилбензиламино)-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
3-[(фуран-2-илметил)амино]-5-фенил-1,3-дигидробензо[е][1,4]диазепин-2-он,
N-(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
N-(7-xлop-2-oкco-5-фeнил-2,3-дигидpo-1H-бeнзo[e][l,4]диaзeпин-3-ил)изобутирамид,
N-(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)метансульфонамид,
(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид фуран-2-карбоновой кислоты,
(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид тиофен-2-карбоновой кислоты,
(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид циклогексанкарбоновой кислоты,
N-(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-метоксибензамид,
N-(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-4-метоксибензамид,
N-(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-нитробензамид,
2-(2-метоксифенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
2-(3-метоксифенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
2-(4-метоксифенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
2-(4-нитрофенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
2-(3-нитрофенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)ацетамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-(2-трифторметилфенил)ацетамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-(3-трифторметилфенил)ацетамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-(4-трифторметилфенил)ацетамид,
1-(2-метоксифенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-нитрофенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-хлорфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(4-хлорфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-пара-толилмочевину,
1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(4-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
(S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
4-метансульфонил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(S)-4-метансульфонил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
5-ацетил-2-этокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(S)-5-ацетил-2-этокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 6-фтор-4Н-бензо[1,3]диоксин-8-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид (S)-6-фтор-4Н-бензо[1,3]диоксин-8-карбоновой кислоты,
(S)-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-4-трифторметилбензамид,
2,4,5-трифтор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(S)-2,4,5-трифтор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-гидрокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(S)-2-гидрокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 1Н-индол-7-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид (S)-1H-индол-7-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 3-метоксинафталин-2-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1H-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид (S)-3-метоксинафталин-2-карбоновой кислоты,
N-[7-хлор-5-(2-фторфенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]-4-метоксибензамид,
1-(2-фторбензил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(4-метоксибензил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(3-метилбензил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-(4-трифторметифенил)мочевину,
4-хлор-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
4-метокси-3-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
3-метокси-2-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
5-хлор-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
5-фтор-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-метокси-4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
5-метокси-2-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
3-метокси-4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
3-(2-метоксифенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)пропионамид,
3-(3-метоксифенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)пропионамид,
3-(4-метоксифенил)-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)пропионамид,
N-[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]-2-метоксибензамид,
N-[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]-4-метоксибензамид,
N-[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]-2-нитробензамид,
N-[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]-4-нитробензамид,
4-метокси-N-[2-оксо-5-(4-трифторметилфенил)-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]бензамид,
2-метокси-N-[2-оксо-5-(3-трифторметилфенил)-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]бензамид,
4-метокси-N-[2-оксо-5-(3-трифторметилфенил)-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]бензамид,
2-этокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2,4-диметокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-бром-5-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-метокси-N-[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]бензамид,
N-[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]-4-нитробензамид,
2-метокси-N-(8-метил-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-хлор-4-метансульфонил-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-диметиламино-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
бензиловый эфир (2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)карбаминовой кислоты,
1-(3,5-диметилфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-(4-трифторметоксифенил)мочевину,
1-(4-бром-2-трифторметилфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(4-бромбензил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2,3-дихлорфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2,6-диметилфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-хлор-6-метилфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(4-нитрофенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-метансульфанилфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2,6-дихлорфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
5-трет-бутил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2,5-диметокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
1-(2,6-дифторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(3-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(3-метоксифенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-(3-трифторметилфенил)мочевину,
1-(3-хлорфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
2-метокси-4-метилсульфанил-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
4-метансульфонил-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
метиловый эфир N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)терефталамовой кислоты,
2-фтор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2,6-дифтор-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-пропоксибензамид,
2-йод-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
метиловый эфир 3-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)терефталамовой кислоты,
4-амино-5-хлор-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-мета-толилмочевину,
2-метилсульфанил-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-5-сульфамоилбензамид,
2-гидрокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-фенилпропионамид,
3-гидрокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-фенилпропионамид,
3-(2-фторфенил)-1-метил-1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
2-метокси-N-метил-4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид,
1-трет-бутил-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-циклогексил-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-этил-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
1-бутил-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 4,5-диметилфуран-2-карбоновой кислоты,
(7-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид пиперидин-1-карбоновой кислоты,
N-[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]ацетамид,
N-[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]изобутирамид,
[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид фуран-2-карбоновой кислоты,
[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид тиофен-2-карбоновой кислоты,
[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид циклогексанкарбоновой кислоты,
[5-(3-хлорфенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид пиперидин-1-карбоновой кислоты,
N-[5-(3-xлopфeнил)-2-oкco-5-фeнил-2,3-дигидpo-1H-бeнзo[e][1,4]диaзeпин-3-ил]изоникотинамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 5-метилфуран-2-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид пиразин-2-карбоновой кислоты,
N-[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]изобутирамид,
[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид тиофен-2-карбоновой кислоты,
[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид циклогексанкарбоновой кислоты,
[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид пиперидин-1-карбоновой кислоты,
[5-(3-метоксифенил)-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил]амид пиперидин-4-карбоновой кислоты,
(8-хлор-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид циклогексанкарбоновой кислоты,
(8-метил-2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид тиофен-2-карбоновой кислоты,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-тиофен-2-илмочевину,
1-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-3-тиофен-3-илмочевину,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид пиридин-2-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты,
6-диметиламино-Н-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)никотинамид,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 2-этоксинафталин-1-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 9-оксо-9Н-флуорен-1-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид 2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-карбоновой кислоты,
трет-бутиловый эфир (2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)карбаминовой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид (S)-4,5-дибромфуран-2-карбоновой кислоты,
(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)амид (S)-бензофуран-2-карбоновой кислоты,
метиловый эфир (2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)карбаминовой кислоты,
этиловый эфир (2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)карбаминовой кислоты,
изобутиловый эфир (2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)карбаминовой кислоты и
2-оксо-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-2-тиофен-2-илацетамид
или их фармацевтически приемлемую соль.
Соединения формул (I), (II), (III) и (IV) являются известными соединениями. Они описаны, например, в заявках на выдачу патента WO 00/195910, WO 00/004900, WO 03/053344, в патенте US-A-4324794 и в заявке на выдачу патента WO 01/00612, и их получают способами, как описано в указанных документах.
Заявки на выдачу патента WO 00/195910, WO 00/004900, WO 03/053344, патент US-A-4324794 и заявка на выдачу патента WO 01/00612 включены в настоящее описание в качестве ссылок. В настоящем изобретении можно использовать любое из соединений, описанных в указанных документах, в качестве ингибиторов белка слияния.
Соединения формулы (V) получают при взаимодействии глиоксиловой кислоты (НСО-СО2Н) с бензотриазолом и соответствующим бензилкарбаматом при кипячении с обратным холодильником в толуоле в условиях Дина-Старка, при этом получают защищенную аминокислоту формулы (II').
Полученную таким образом аминокислоту (II') вводят затем в реакцию с пригодным хлорирующим агентом, таким как оксалилхлорид, и затем в реакцию с 2-аминобензофеноном формулы (III')
при этом получают промежуточный амид формулы (IV')
который не характеризуют.
Соединение формулы (IV') затем вводят в реакцию аммонолиза с последующим замыканием цикла в уксусной кислоте, содержащей ацетат аммония, при этом получают защищенный бензодиазепин формулы (V).
Из соединения формулы (V') затем удаляют защитную группу в бромистом водороде в уксусной кислоте, при этом получают незащищенный амин формулы (VI').
Соединения формулы (V), в которых R5 означает XR6, а Х означает -СО-, получают при взаимодействии соединения формулы (VI'), указанного выше, с ангидридом кислоты в пригодном растворителе, предпочтительно в пиридине при комнатной температуре или с хлорангидридом в пригодном растворителе в присутствии основания, предпочтительно в ТГФ, в присутствии триэтиламина при комнатной температуре. В другом варианте указанные соединения получают при взаимодействии соединения формулы (VI') с кислотой в пригодном растворителе в присутствии основания и конденсирующего агента, предпочтительно в ТГФ в присутствии триэтиламина и О-бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилуроний гексафторфосфата (HBTU) при комнатной температуре.
Если используемый хлорангидрид означает аминокарбонилхлорид, то соединение формулы (V) означает третичную мочевину. В случае если R6 означает NH-R', указанные соединения получают при взаимодействии соединения формулы (VI') с изоцианатом. Указанную реакцию предпочтительно проводят в ТГФ при комнатной температуре. В другом варианте изоцианат получают in situ из соответствующего амина и фосгена в присутствии основания, обычно триэтиламина, в ТГФ.
Соединения формулы (V), в которых R5 означает -XR6, а Х означает -S(O)2-, получают при взаимодействии соединения формулы (VI') с пригодным сульфонилхлоридом. Аналогичным образом, соединения формулы (V), в которых R5 означает XR6, а Х означает -S(O)-, получают при взаимодействии соединения формулы (VI') с пригодным сульфинилхлоридом.
Соединения формулы (V), в которых R5 не означает XR6, получают известными способами. Например, соединение формулы (VI') вводят в реакцию с соединением формулы R5-L, в котором L означает уходящую группу, такую как атом хлора, мезилат или трифлат. Если R5 означает арил или гетероарил, то L означает -В(ОН)2, и реакцию проводят в присутствии ацетата меди. Указанные реакции конденсации с участием бороновой кислоты известны специалистам в данной области химии. Соединения, в которых R означает арил или гетероарил, получают также при взаимодействии Бухвальда или при взаимодействии соединения формулы (VI') с соответствующим фторарилом или фторгетероарильным соединением. Соединения, в которых R5 означает гетероарильную группу, получают также при взаимодействии соединения формулы (VI') с пригодным хлоргетероарильным или бромгетероарильным соединением. Соединения, в которых R5 означает карбоциклильную группу, также получают известными способами, например соединение, в котором R5 означает циклогексил, получают при взаимодействии соединения формулы (VI') с циклогексаноном в присутствии восстановителя.
Соединения формулы (V), в которых группа R5 означает арил(С1-С6)алкил-, гетероарил(С1-С6)алкил-, карбоциклил(С1-С6)алкил-, гетероциклил(С1-С6)алкил-, получают также при взаимодействии соединения формулы (VI') с альдегидом в присутствии восстановителя. Предпочтительно, указанные реакции между соединениями формулы (VI') и альдегидами проводят в смеси с дихлорметаном и уксусной кислотой в присутствии триацетоксиборгидрида натрия при комнатной температуре.
При получении основного структурного фрагмента бензодиазепина по возможности используют коммерческие соединения аминобензофенона формулы (III'). Соединения формулы (III'), которые не являются коммерческими препаратами, получают известными способами, например при взаимодействии амида типа Вейнреба формулы (VII')
с реагентом R1-Li или реагентом Гриньяра, таким как R1-MgBr. Указанную реакцию предпочтительно проводят в ТГФ при температуре -100°С.
Соединения формулы (VII') являются известными соединениями, или их получают по известным методикам. Например, указанные соединения получают при взаимодействии ангидридов изатоевой кислоты формулы (VIII')
с N,O-диметилгидроксиламином в стандартных условиях проведения реакции.
Исходные соединения формул (II'), (III'), (VII') и (VIII') являются известными соединениями, или их получают по известным методикам.
Дальнейшие превращения указанных соединений формулы (V) стандартными способами позволяют получить другие соединения формулы (V). Бензодиазепины формулы (V) превращают в соль при обработке соответствующей кислотой или основанием.
Несмотря на то что в настоящем описании предлагается пригодный способ получения заявленных соединений в лабораторном масштабе, существует необходимость в масштабировании указанного способа. В обоих случаях используют один и тот же исходный материал (2-аминобензофенон 1), однако в препаративном масштабе циклическую систему бензодиазепина получают сначала по реакции с бромацетилбромидом (или аналогичным реагентом), а затем замыкают цикл при взаимодействии с аммиаком. Указанные реакции проводят в пригодном растворителе, таком как дихлорметан, и при температуре в интервале от -20 до 150°С. Для защиты функциональной NH группы на указанной стадии незамещенный бензодиазепин вводят в реакцию с основанием и алкилирующим агентом, например, с гидридом натрия в ДМФА с последующим добавлением 4-метоксибензилхлорида для образования промежуточного соединения (2), показанного ниже. Затем при взаимодействии указанного соединения с основанием (например, трет-бутоксидом калия) в пригодном растворителе (например, ТГФ или ДМФА) с последующей остановкой реакции в присутствии изоамилнитрита (или другого аналогичного реагента) получают промежуточный оксим (3), который превращают в рацемический первичный амин в присутствии водорода и пригодного катализатора. Указанный амин затем выделяют методом динамическо-кинетического разделения (DKR), который заключается в обработке рацемического амина в присутствии пригодной оптически активной кислоты и пригодного альдегида, при этом получают осадок соли требуемого (S)-амина (4) с высоким выходом и значительным энантиомерным избытком. Пригодной кислотой для указанного превращения является, например, камфорсульфоновая кислота, Вос-фенилаланин или т.п., а пригодным альдегидом является бензальдегид, такой как 3,5-дихлорсалицилальдегид.
Полученный таким образом оптически активный амин затем превращают в требуемое производное, такое как амид или мочевина. Получение амида проводят с использованием пригодной карбоновой кислоты и конденсирующего реагента или карбонихлорида или другого пригодного реагента, а мочевину получают при использовании пригодного изоцианата или, в другом варианте, при взаимодействии с фосгеном, а затем с пригодным амином.
В полученных таким образом указанных производных удаляют защитную группу в присутствии кислоты Льюиса, такой как хлорид алюминия, трифторид бора, тетрахлорид титана или т.п. Указанные реакции проводят в пригодном инертном растворителе, таком как дихлорметан. Реакцию можно проводить при температуре в интервале от -20 до 150°С, но обычно реакцию проводят при комнатной температуре или ниже.
Согласно прежде всего предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, компонент (а) означает 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он, {2-[2-(1,2-дигидробензотриазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]этил}диэтиламин, {2-[2-(3-йод-2,3-дигидроиндазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]этил}диметиламин или их фармацевтически приемлемую соль, а компонент (b) означает (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину, (S)-2-метокси-4-нитро-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид, (S)-4-метансульфонил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)бензамид или их фармацевтически приемлемую соль.
В настоящем изобретении предлагается также фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, предназначенная для лечения человека или животного. Предлагается также применение (а) указанного ингибитора белка слияния RSV и (b) указанного производного бензодиазепина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики инфекции RSV.
В настоящем изобретении предлагается также способ лечения или профилактики инфекции RSV у пациента, причем способ включает введение указанному пациенту (а) указанного ингибитора белка слияния RSV и (b) указанного производного бензодиазепина.
Обычно количество компонента (а) в композиции по настоящему изобретению составляет от 0,025 мас.% до 10 мас.%, предпочтительно от 0,25 мас.% до 5 мас.%, более предпочтительно от 1 мас.% до 3,5 мас.%, например приблизительно 2,5 мас.% в расчете на общую массу композиции.
Обычно количество компонента (b) в композиции по настоящему изобретению составляет от 0,025 мас.% до 10 мас.%, предпочтительно от 0,25 мас.% до 5 мас.%, более предпочтительно от 1 мас.% до 3,5 мас.%, например приблизительно 2,5 мас.% в расчете на общую массу композиции.
Обычно общее количество компонентов (а) и (b) в композиции по настоящему изобретению составляет от 0,05 до 20 мас.%, предпочтительно от 0,5 до 10 мас.%, более предпочтительно от 2 до 7 мас.%, например приблизительно 5 мас.% в расчете на общую массу композиции.
Инфекция RSV распространена среди детей младше двух лет, взрослых людей, страдающих от астмы, хронического обструктивного заболевания легких (COPD) или иммунодефицита, а также среди людей пожилого возраста. Прежде всего серьезному риску подвержены дети, которые страдают от хронического заболевания легких. Соответственно, указанная композиция или лекарственное средство в основном предназначены для использования при лечении пациента, т.е. ребенка младше двух лет, пациентов, страдающих от астмы, COPD или иммунодефицита, людей пожилого возраста или пациентов, нуждающихся в долгосрочном медицинском лечении. Обычно указанные дети страдают от хронического заболевания легких.
Кроме того, противовирусная профилактика RSV рекомендуется детям, рожденным на 32 неделе беременности или ранее, до достижения ими 6-месячного возраста, людям пожилого возраста, пациентам с иммунодефицитом, а также пациентам, нуждающимся в долгосрочном медицинском лечении. Соответственно, указанная композиция или лекарственное средство обычно предназначено для использования при профилактике инфекции RSV у детей младше 6 лет, рожденных на 32 неделе беременности или ранее, людей пожилого возраста, пациентов с иммунодефицитом, а также пациентам, нуждающимся в долгосрочном медицинском лечении.
Как описано выше, при лечении RSV быстро развивается резистентность к известным в данной области ингибиторам белка слияния. Чтобы свести к минимуму риск развития резистентности к ингибиторам белка слияния, необходимо объединять указанные ингибиторы с другим ингибитором репликации RSV, характеризующимся другим механизмом действия. Описанные выше производные бензодиазепина относятся к первому классу соединений, которые характеризуются новым способом действия. В связи с этим композиция по настоящему изобретению характеризуется очень низким профилем резистентности, что позволяет использовать указанные соединения прежде всего для лечения и профилактики.
Настоящее изобретение включает также случаи, в которых компонент (а) и компонент (b) вводят каждый в отдельности. Так, например, компонент (а) вводят за 24 ч до введения компонента (b). В другом варианте компонент (b) вводят за 24 ч до введения компонента (а). В большинстве случаев если компоненты (а) и (b) вводят в отдельности, то интервал между введением одного и второго компонента находится в пределах 12 ч, предпочтительно в пределах 6 ч.
В связи с этим в настоящем изобретении предлагается также продукт, включающий (а) указанный ингибитор белка слияния RSV и (b) указанное производное бензодиазепина, предназначенные для раздельного, одновременного или последовательного применения при лечении человека или животного. Обычно указанный продукт предназначен для раздельного, одновременного или последовательного использования при лечении или профилактике инфекции RSV.
Предлагается также применение указанного ингибитора белка слияния RSV для получения лекарственного средства, предназначенного для использования при лечении или профилактике инфекции RSV при совместном введении с указанным производным бензодиазепина. В настоящем изобретении предлагается также применение указанного производного бензодиазепина для получения лекарственного средства, предназначенного для использования при лечении или профилактике инфекции RSV при совместном введении с указанным ингибитором белка слияния RSV.
Если компоненты (а) и (b) вводят в отдельности, то их обычно перерабатывают в композицию, как описано выше. Количество активного ингредиента в каждой отдельной композиции соответствует количеству компонента (а) или (b), указанному выше для смешанной композиции. Таким образом, если компоненты (а) и (b) вводят в отдельности, то обычно первая композиция содержит от 0,025 мас.% до 10 мас.%, предпочтительно от 0,25 мас.% до 5 мас.%, более предпочтительно от 1 мас.% до 3,5 мас.%, например приблизительно 2,5 мас.% указанного ингибитора белка слияния RSV в расчете на общую массу композиции. Аналогичным образом, вторая композиция обычно составляется таким образом, чтобы содержание указанного производного бензодиазепина составляло от 0,025 мас.% до 10 мас.%, предпочтительно от 0,25 мас.% до 5 мас.%, более предпочтительно от 1 мас.% до 3,5 мас.%, например приблизительно 2,5 мас.%, в расчете на общую массу композиции. Указанные две композиции вводят в отдельности в любом порядке.
Предпочтительные композиции и лекарственные средства по настоящему изобретению характеризуются более высокой активностью по сравнению с суммарной активностью, которую проявляют соединения (а) и (b) в отдельности. Таким образом, компоненты (а) и (b) проявляют синергический эффект. В связи с этим предпочтительно, чтобы в композициях и лекарственных средствах по настоящему изобретению содержание каждого компонента (а) и компонента (b) составляло величину, при которой наблюдается синергическое терапевтическое действие при лечении или профилактике инфекции RSV.
Композиции по настоящему изобретению, характеризующиеся противовирусным действием в отношении RSV, вводят в виде различных лекарственных форм. Например, указанные композиции вводят пероральным способом, например в виде пилюль, таблеток, лепешек, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул. Указанные соединения по настоящему изобретению вводят также парентеральным способом, например подкожным, внутривенным, внутримышечным, внутригрудинным, чрескожным или вливанием. Соединения вводят также в виде суппозиториев.
В предпочтительном варианте введение осуществляют внутривенным, интраназальным или внутрибронхиальным способами. Прежде всего составы, предназначенные для лечения или профилактики инфекции RSV, предпочтительно вводят интраназально. В связи с этим в настоящем изобретении предлагается ингалятор или распылитель, содержащий лекарственное средство, которое включает (i) композицию по настоящему изобретению, содержащую компонент (а) и компонент (b), как описано выше, и (ii) фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
Композиции по настоящему изобретению, характеризующиеся противовирусным действием в отношении RSV, обычно получают в виде смеси с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Например, твердые формы для перорального введения содержат наряду с активным соединением(ями) разбавители, например лактозу, декстрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный крахмал или картофельный крахмал, замасливатели, например диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция и/или полиэтиленгликоли, связующие, например крахмал, аравийскую камедь, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон, дезинтегрирующие агенты, например крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или натрий гликоляткрахмал, смеси для придания шипучих свойств, красители, подсластители, смачивающие агенты, такие как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты, и в большинстве случаев нетоксичные и фармакологически неактивные соединения, используемые в фармацевтических композициях. Указанные фармацевтические препараты получают известными способами, например смешиванием, гранулированием, таблетированием, нанесением сахарного или пленочного покрытия.
Жидкие дисперсии, предназначенные для перорального введения, представляют собой сиропы, эмульсии и суспензии. Сиропы содержат в качестве носителей, например, сахарозу или сахарозу в смеси с глицерином, и/или маннитом, и/или сорбитом.
Суспензии и эмульсии содержат в качестве носителя, например, природную смолу, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт. Суспензия или растворы для внутримышечных инъекций содержат наряду с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например стерильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например пропиленгликоль, и при необходимости пригодное количество гидрохлорида лидокаина.
Растворы для инъекции или вливания содержат в качестве носителя, например, стерильную воду или предпочтительно они существуют в форме стерильных водных изотонических солевых растворов.
Композиции по настоящему изобретению, характеризующиеся противовирусным действием в отношении RSV, предпочтительно солюбилизируют в носителе, содержащем (а) фармацевтически приемлемое масло, выбранное из продуктов этерификации или полиэтерификации глицеридов жирными кислотами из растительных масел, длина цепи которых составляет 8-10 атомов углерода, и (b) фармацевтически приемлемое ПАВ, выбранное из олеиновых и лауриновых эфиров полиспирта, сополимеризованного с этиленоксидом. Прежде всего предпочтительные носители содержат в качестве масла Labrafil, а в качестве ПАВ - Твин 20 или Твин 80.
Для перорального введения композиции по настоящему изобретению, характеризующиеся противовирусным действием в отношении RSV, суспендируют также в полиэтиленгликоле 400 (ПЭГ 400).
Терапевтически эффективное количество композиции по настоящему изобретению, характеризующейся противовирусным действием в отношении RSV, вводят пациенту. Обычная доза составляет от приблизительно 0,001 до 50 мг, в большинстве случаев от 0,5 до 30 мг, предпочтительно от 1 до 20 мг активного ингредиента на 1 кг массы тела. Указанная доза определяется в соответствии с активностью конкретной композиции, возрастом, массой и состоянием субъекта, нуждающегося в лечении, типом и степенью тяжести заболевания, а также частотой и способом введения. Предпочтительная суточная доза составляет приблизительно от 5 мг до 2 г активного ингредиента.
Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, но не ограничивают его объем. В связи с этим следует понимать, что отдельные анализы, использованные в разделе «Примеры», предназначены только для иллюстрации противовирусной активности. Существует множество анализов, пригодных для определения противовирусной активности указанных соединений в отношении RSV, и, следовательно, отрицательный результат по данным любого отдельного анализа не является определяющим.
Примеры
Пример 1
Диметиламид 3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-сульфоновой кислоты, 1-метансульфонил-3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он, бензиламид 3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-карбоновой кислоты, 5-{3-[1-(3-метансульфонилпропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-ил}-пентаннитрил, 7-[2-(3-изопропенил-2-оксо-2,3-дигидробензимидазол-1-илметил)-бензимидазол-1-ил]гептаннитрил, 1-этил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он, 1-этил-3-[1-(2-гидрокси-2-фенилэтил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он, 1-изопроненил-3-[1-(3-оксобутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он, 1-(4-гидроксибензил)-3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он, 1-изопропенил-3-[1-(3-метилбутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидробензимидазол-2-он, 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он и 1-изопропенил-3-(1-пропил-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он получали, как описано в WO 00195910.
Пример 2
{2-[2-(1,2-дигидробензотриазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]этил}диэтиламин получали, как описано в WO 00004900.
Пример 3
{2-[2-(3-йод-2,3-дигидроиндазол-1-илметил)бензимидазол-1-ил]этил}диметиламин получали, как описано в WO 03053344.
Пример 4
Бис(5-амидино-2-бензимидазолил)метан получали, как описано в US 4324794.
Пример 5
2-{2-[1-[1-(2-аминоэтил)пиперидин-4-иламино]-4-метилбензимидазол-1-илметил}6-метилпиридин-3-ол получали, как описано в WO 0100612.
Пример 6
Соединения общей формулы (V) получены, как описано в PCT/GB 03/04050. Прежде всего (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]бензодиазепин-3-илмочевину и (S)-4-метансульфонил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е])[1,4]диазепин-3-ил)бензамид получали по методике, описанной в примерах 75b и 73b в PCT/GB 03/04050.
Пример 7
Определение ингибирующей активности в отношении слияния RSV
Вирус RSV проникает в клеткику хозяина при связывании с мембраной клетки-хозяина и слиянии с ней. Влияние ингибитора на специфическое слияние вируса с клеткикой измеряют количественно с использованием метода обратного тушению флуоресценции.
В указанном методе анализа используют следующие свойства: вирус RSV связывается с клеткиками при 4°С и 37°С, но слияние происходит только при температуре выше 18°С.
RSV, окрашенный красителем октадецилродамином (R18), предварительно инкубировали в течение 1 ч при 4°С с клеткиками Нер-2 в 6-луночных планшетах, при этом происходило связывание. Несвязанный вирус удаляли промывкой монослоя клеткик. Затем к комплексам вируса с клеткиками добавляли ингибитор, а затем планшет инкубировали для индукции слияния в течение 1 ч при 37°С.
Слияние вируса с клеткикой регистрировали непосредственно во флуоресцентном микроскопе. Если два идентичных флуорофора находятся в непосредственной близости, то наблюдается тушение испускания флуоресценции. После слияния окрашенного вируса с клеточной мембраной расстояние между флуорофорами увеличивается за счет объемной молекулы красителя, что приводит к снижению тушения, и при этом наблюдается увеличение интенсивности флуоресценции R18. Следовательно, ингибирование слияния приводит к снижению флуоресценции R18 по сравнению с необработанным контролем. Если выход флуоресценции R18 в присутствии ингибитора сопоставим с необработанным контролем, это означает, что ингибитор не оказывает влияние на белок слияния.
Пример 8
Определение ингибирующей активности в отношении репликации вируса RSV
Для определения активности и токсичности соединений в 60 внутренних лунок 96-луночного планшета для культивирования клеток высеивали клетки Нер-2 при плотности 4×104 клеток в лунке в 100 мкл среды и инкубировали при 37°С в течение ночи или практически до полного слияния.
Клетки инфицировали 25 мкл вируса RVS, например штамма RSS, который по данным предварительного титрования вызывает гибель 80% клеток. В каждую лунку добавляли 25 мкл анализируемого соединения. Конечная концентрация ДМСО составляла 0,5%. В крайние лунки планшета добавляли по 200 мкл стерильной дистиллированной воды и инкубировали при 37°С в течение 6 сут. В исходный ХТТ-раствор добавляли 0,25 мкл/мл PMS, конечная концентрация PMS составляла 25 мкМ. Затем в каждую лунку добавляли по 25 мкл теплого раствора XTT/PMS и инкубировали в течение 1 ч при 37°С.
Максимальное наблюдаемое значение OD450нм (неинфицированные, необработанные контрольные клетки) соответствовало 100% ингибирования. Минимальное значение OD450нм (инфицированные контрольные клетки) соотвествовало 0% ингибирования. Величину IC50 рассчитывали методом логарифмической регрессии или графически в координатах OD450нм - концентрация (log 10). IC50 означает концентрацию, вызывающую 50% ингибирование (от максимальной величины).
Пример 9
Синергическое противовирусное действие ингибитора слияния RSV и бензодиазепинов в отношении вируса RSV.
Метод ИФА использовали для оценки совместного действия потенциального бензодиазепинового ингибитора репликации RSV, (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевины (соединение А) и одного ингибитора слияния RSV, выбранного из следующих соединений: 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он (соединение В) или 1-изопропенил-3-(1-пропил-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-он (соединение В).
Методика ИФА
Для оценки снижения количества антигенов RSV использовали мышиные моноклональные антитела против фосфопротеина (Р), нуклеокапсида (N) и белков слияния (F) вируса RSV и конъюгат вторичных кроличьих антимышиных антител с пероксидазой хрена (HRP) и превращение субстрата дигидрохлорида орто-фенилендиамина (OPD) в окрашенный продукт. Количество антигенов определяли по оптической плотности (OD).
Описание методики
Анализ проводили в 96-луночных планшетах с плоским дном. В этих планшетах не наблюдалось значительное различие в степени испарения в крайних лунках и во внутренних лунках в течение 3 сут в ходе анализа (то есть «краевой эффект» не наблюдался).
Клетки высеивали в планшеты за 1 сут до добавления вируса и исследуемых соединений. Затем в течение 3 сут проводили анализ, а на четвертые сут проводили ИФА.
День 0
Заполнение планшетов
Во все 96 лунок микропланшета высеивали клетки Нер-2 при плотности 5×103 клеток в лунке в 100 мкл среды для культивирования клеток (GM), содержащей среду Dulbecco MEM (DMEM), Glutamax-1, пируват натрия, 1000 мг/л глюкозы, пиридоксин (фирмы Invitrogen, номер по каталогу 21885-025) и 10% эмбриональной сыворотки теленка (ЭСТ) (см. планшет 1).
Клетки культивировали на стенках культурального флакона при 37°С в присутствии 5% CO2 до 90% конфлюэнтности.
Монослои клеток промывали 20 мл стерильного буферного раствора ФСБ для удаления сыворотки и обрабатывали 1 мл трипсина для снятия клеток с планшета.
Клетки суспендировали в небольшом определенном объеме среды для культивирования клеток и число клеток подсчитывали, используя гемоцитометр. Клетки суспендировали в среде для культивирования до необходимой концентрации и добавляли в лунки многоканальным дозатором. При этом планшет кратковременно встряхивали для равномерного распределения клеток в лунке.
Планшет 1
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
| клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки | клетки |
Планшеты выдерживали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 24 ч, при этом клетки оседали на дно лунок, образуя монослой.
День 1
Добавление вируса
Флакон с замороженной суспензией RSV (штамм RSS фирмы Vitrogen Ltd) вынимали из морозильной камеры (-80°С) или из дьюара с жидким азотом и разбавляли средой для культивирования до определенной величины множественности инфицирования (m.o.i.).
Величину m.o.i. рассчитывали по данным предварительного титрования исходной вирусной суспензии (методом ИФА), то есть по разности поглощения OD между инфицированными и неинфицированными контрольными лунками, которая достигает по крайней мере 0,8 единиц.
В инфицированные лунки добавляли по 25 мкл (50 мкл в примере 9 с) разбавленной вирусной суспензии с помощью многоканального дозатора. В неинфицированные контрольные лунки добавляли по 25 мкл (50 мкл в примере 9 с) среды для культивирования клеток с помощью многоканального дозатора. Стороны планшет маркировали стрипами для упрощения идентификации планшета в случае замены крышек.
Планшеты инкубировали при 37°С в течение 1 ч для обеспечения адсорбции вируса на клетках.
Получение серийных разведении соединений
Соединение «А» титровали в планшете в горизонтальном направлении, а соединение «В» титровали в планшете в вертикальном направлении вдоль планшета, то есть проводили титрокание в шахматном порядке. Два соединения титровали в присутствии вируса и получали 2-кратные серийные разведения или 1/2-log разведения (в горизонтальном направлении) или сверху вниз (в вертикальном направлении). Каждое разведение соединения выполняли в двухкратных или трехкратных повторах. Двухкратные повторы получали в одном и том же планшете. Трехкратные повторы получали в трех идентичных планшетах. Диапазон разведении составлял концентрации выше значения IC50 для данного соединения и ниже значения IC50 для данного соединения, а также включал контроль (0 мкМ) для каждого соединения.
Серийные разведения соединений получали из концентрированного раствора (8×) в отдельных микропланшетах для титрования в среде для культивирования, содержащей 2% ДМСО (конечная концентрация ДМСО в образце составляла 0,5%). Затем серийные разведения соединения «А» по 25 мкл и серийные разведения соединения «В» по 25 мкл переносили многоканальным дозатором в соответствующие лунки планшета для анализа согласно маркировке в шахматном порядке.
В контрольные лунки соединения «А» (0 мкМ) или соединения «В» (0 мкМ) добавляли по 25 мкл среды для культивирования, содержащей 2% ДМСО. В лунки, не содержащие соединений, добавляли по 50 мкл среды для культивирования, содержащей 2% ДМСО.
Инфицированные вирусом необработанные лунки использовали в качестве вирусного контроля (VC), неинфицированные вирусом необработанные лунки использовали в качестве клеточного контроля (СС). Разность поглощения в лунках СС и лунках VC использовали для анализа.
Планшеты инкубировали при 37°С в присутствии 5% СО2 в течение 3 сут.
Стадия ИФА
День 4
Среду из лунок удаляли непосредственно в раствор Virkon (1% раствор в воде) и планшеты промывали погружением в пластиковую кювету, заполненную раствором ФСБ.
В каждую лунку с помощью многоканального дозатора добавляли по 50 мкл фиксирующего раствора (ацетон/метанол, 75%:25% об./об.) и планшет выдерживали в течение 3 мин.
Затем фиксирующий раствор (ацетон/метанол) удаляли из лунок в раствор Virkon, а лунки промывали ФСБ, как указано выше.
С помощью многоканального дозатора добавляли по 200 мкл в лунку блокирующего буферного раствора (2% Marvel в ФСБ, содержащем 0,05% Твин). Планшеты инкубировали при 37°С в течение 60 мин в инкубаторе при встряхивании.
Блокирующий раствор удаляли и добавляли разбавленные первичные антитела непосредственно в лунки (без промывки).
Мышиные моноклональные антитела NCL-RSV3 против вируса RSV (фирмы Novocastra) разбавляли в соотношении 1:400 в смеси ФСБ/2% Marvel/0,05% Твин и добавляли по 50 мкл в лунку. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 90 мин в инкубаторе при встряхивании.
Затем антитела удаляли, а планшеты промывали четыре раза погружением в раствор ФСБ/0,05% Твин.
Конъюгат кроличьих антимышиных антител фирмы DAKo с пероксидазой хрена HRP (номер по каталогу DAKO P0260) разбавляли в соотношении 1:1000 в растворе ФСБ/2% Marvel/0,05% Твин и добавляли по 50 мкл в лунку. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 60 мин в инкубаторе при встряхивании.
Антитела удаляли и планшеты промывали шесть раз погружением в смесь ФСБ/0,05% Твин.
Для получения субстрата OPD (фирмы SigmaFast) предварительно растворяли одну таблетку мочевины в 20 мл воды. Одну таблетку OPD добавляли в раствор мочевины непосредственно перед использованием (примечание: OPD является светочувствительным) и перемешивали на мешалке Вортекс. В лунку добавляли по 50 мкл раствора субстрата.
Реакцию останавливали добавлением 25 мкл в лунку 20% серной кислоты, при этом наблюдается окрашивание достаточно высокой интенсивности, а фон клеточного контроля практически не окрашивается (приблизительно 5 мин).
Планшеты считывали на спектрофотометре Spectra Max (Molecular Device) при длине волны 490 нм с помощью програмного обеспечения SOFTmax Pro.
Из лунок удаляли среду, промывали водопроводной водой и монослой клеток окрашивали, добавляя по 50 мкл в лунку 2% раствора красителя кристаллического фиолетового в 20% метаноле/воде и выдерживая клетки в течение по крайней мере 1 ч. Затем лунки промывали, сушили на воздухе и монослой клеток анализировали под микроскопом для оценки цитотоксичности.
Результаты
Данные файла SOFTmax экспортировали в программу Excel. Полученные данные обрабатывали с использованием специально созданных матриц Excel, строили графики дозозависимости и рассчитывали величины IC50.
Все значения в повторах усредняли. Результаты рассчитывали по разности между средним значением вирусного контроля (VC) и средним значением клеточного контроля (СС). Для каждого соединения среднее значение СС вычитали из полученных средних значений для каждой концентрации. Затем для каждой концентрации рассчитывали величину в % от контроля и строили график зависимости величины в % от концентрации. При этом получали прямо пропорциональную зависимость (прямую) и величину IС50 рассчитывали по углу наклона прямой и по отсекаемым ею на координатах значениям.
Величину IС50 для соединения «А» определяли для каждого фонового значения концентрации соединения «В». Аналогичным образом величину IC50 для соединения «В» определяли для каждого фонового значения концентрации соединения «А».
Пример 9а
(S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-мочевина (соединение В) в комбинации с 1-изопропенил-3-(1-пропил-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-оном (соединение А)
Значение IC50 по данным ИФА для соединения В в отношении вируса RSV, штамм RSS, составляло 2 мкМ.
Значение IC50 по данным ИФА для соединения А в отношении о вируса RSV, штамм RSS, составляло 0,5 мкМ.
При использовании комбинации при концентрациях соединения А ниже его значения IC50 (1, 0,3 и 0,1 мкМ) величина IC50 для соединения В снижалась от 0,5 мкМ по крайней мере до 0,16 мкМ (снижение в 3,2 раза). При концентрациях соединения В ниже его значения IC50 (0,3 и 0,1 мкМ) величина IC50 для соединения А снижалась от 2 мкМ по крайней мере до 0,65 мкМ (снижение в 3 раза).
Пример 9b
(S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-мочевина (соединение В) в комбинации с 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-оном (соединение А).
Значение IC50 по данным ИФА для соединения В в отношении вируса RSV, штамм RSS, составляло 1,4 мкМ.
Значение IC50 по данным ИФА для соединения А в отношении о вируса RSV, штамм RSS, составляло 0,015 мкМ.
При использовании комбинации при концентрациях соединения В ниже его значения IC50 (1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкМ) величина IC50 для соединения А снижалась от 0,015 мкМ по крайней мере до 0,0007 мкМ (снижение в 21,4 раза). При концентрациях соединения А ниже его значения IC50 (0,01, 0,003, 0,001 и 0,0003 мкМ) величина IC50 для соединения В снижалась от 1,4 мкМ по крайней мере до 0,26 мкМ (снижение в 5,4 раза).
Пример 9с
(8)-4-метансульфонил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-бензамид (соединение А) в комбинации с 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-оном (соединение В).
Значение IC50 по данным ИФА для соединения А в отношении вируса RSV, штамм RSS, составляло 1 мкМ.
Значение IС50 по данным ИФА для соединения В в отношении вируса RSV, штамм RSS, составляло 0,08 мкМ.
При использовании комбинации при концентрациях соединения А ниже его значения IC50 величина IС50 соединения В снижалась от 0,08 мкМ до по крайней мере 0,03 мкМ (снижение в 2,66 раз). При концентрациях соединения В ниже его значения IС50 величина IC50 соединения А снижалась от 1 мкМ до по крайней мере 0,3 мкМ (снижение в 3,33 раз).
Для расчета синергического действия использовали следующее уравнение, где
ФИК означает фракционную ингибирующую концентрацию.
Сравнение активности соединения в комбинации (соединение А + соединение В) с активностью каждого соединения в отдельности (соединения А или соединения В)
| Если значения ФИК | <0,5 | наблюдается синергизм |
| 0,5-1,0 | аддитивное действие | |
| 1,0-2,0 | активность отсутствует | |
| >2,0 | антагонистическое действие |
Значение ФИК для (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил) мочевины в комбинации с 1-изопропенил-3-(1-пропил-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-оном составляло <0,25.
Значение ФИК для (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевины (соединение В) в комбинации с 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-оном составляло <0,04.
Значение ФИК для (S)-4-метансульфонил-2-метокси-N-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)-бензамида в комбинации с 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-оном составляло 0,0675.
1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения или профилактики респираторно-синцитиального вируса (RSV), включающая фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и следующие компоненты:
(а) ингибитор белка слияния респираторно-синцитиального вируса (RSV), выбранный из 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она и 1-изопропенил-3-(1-пропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она, и
(б) производное бензодиазепина, способное ингибировать репликацию RSV, представляющее собой (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
где содержание каждого компонента (а) и компонента (б) составляет величину, при которой наблюдается синергическое терапевтическое действие при лечении или профилактике инфекции RSV.
2. Композиция по п.1, в которой содержание компонента (а) составляет от 0,025 до 10 мас.%.
3. Композиция по п.1, в которой содержание компонента (б) составляет от 0,025 до 10 мас.%.
4. Композиция по любому из пп.1-3, предназначенная для применения при лечении человека или животного.
5. Применение (а) ингибитора белка слияния RSV, выбранного из 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она и 1-изопропенил-3-(1-пропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она, и
(б) производного бензодиазепина, представляющего собой (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
для получения лекарственного средства, предназначенного для применения при лечении или профилактике инфекции RSV.
6. Применение по п.5, в котором лекарственным средством является композиция по п.2 или 3.
7. Продукт для лечения или профилактики респираторно-синцитиального вируса (RSV), включающий:
(а) ингибитор белка RSV, выбранный из 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она и 1-изопропенил-3-(1-пропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она, и
(б) производное бензодиазепина, способное ингибировать репликацию RSV, представляющее собой (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
предназначенный для отдельного, одновременного или последовательного введения при лечении человека или животного, где содержание каждого компонента (а) и компонента (б) составляет величину, при которой наблюдается синергическое терапевтическое действие при лечении или профилактике инфекции RSV.
8. Способ лечения или профилактики инфекции RSV у пациента, который включает введение указанному пациенту
(а) ингибитора белка слияния RSV, выбранного из 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она и 1-изопропенил-3-(1-пропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она, и
(б) производного бензодиазепина, представляющего собой (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину,
в количестве, при котором наблюдается синергическое терапевтическое действие при лечении или профилактике инфекции RSV.
9. Применение ингибитора белка слияния RSV, выбранного из 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она и 1-изопропенил-3-(1-пропил)-1H-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она, для получения лекарственного средства, предназначенного для применения при лечении или профилактике инфекции RSV, причем лечение проводят при совместном введении с производным бензодиазепина, представляющим собой (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е] [1,4]диазепин-3-ил)мочевину.
10. Применение производного бензодиазепина, представляющего собой (S)-1-(2-фторфенил)-3-(2-оксо-5-фенил-2,3-дигидро-1Н-бензо[е][1,4]диазепин-3-ил)мочевину, для получения лекарственного средства, предназначенного для применения при лечении или профилактике инфекции RSV, причем лечение проводят при совместном введении с ингибитором белка слияния RSV, выбранным из 1-циклопропил-3-[1-(4-гидроксибутил)-1Н-бензимидазол-2-илметил]-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она и 1-изопропенил-3-(1-пропил)-1Н-бензимидазол-2-илметил)-1,3-дигидроимидазо[4,5-с]пиридин-2-она.
