Модифицированная ксиланаза

Настоящее изобретение относится к модифицированной ксиланазе 11-го Семейства. Предложенная ксиланаза содержит последовательность функционального консенсусного сайта гликозилирования. Неограничивающие примеры вводимых сайтов гликозилирования включают замену аминокислоты в положении (34, 131, 180, 182), или в их комбинации, на аспарагин. Указанное положение аминокислоты в ксиланазе 11-го Семейства определяют выравниванием последовательности, представляющей интерес ксиланазы с аминокислотной последовательностью ксиланазы II Trichoderma reesei. Введенный консенсусный сайт гликозилирования обеспечивает повышенную эффективность экспрессии модифицированной ксиланазы по сравнению с эффективностью экспрессии не модифицированной ксиланазы при использовании аналогичных штаммов-хозяев и условий выращивания. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Модифицированная ксиланаза 11-го Семейства, содержащая последовательность, представляющую собой консенсусный сайт N-гликозилирования, отсутствующий в ксиланазе 11-го Семейства дикого типа, содержащая аминокислотную замену на аспарагин (N) в положении, выбранном из группы, состоящей из положения 34 (X34N), положения 131 (X131N), положения 180 (X180N), положения 182 (X182N), и их комбинации, причем положение определено при выравнивании последовательностей модифицированной ксиланазы 11-го Семейства с аминокислотной последовательностью ксиланазы II Trichoderma reesei, определенной в SEQ ID NO.1, причем модифицированная ксиланаза II 11-го Семейства получена из Aspergillus niger, Aspergillus niger awamori var. kawachii, Aspergillus kawachii, Aspergillus tubingensis, Bacillus circulans, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis, Cellulomonas fimi, Clostridium acetobutylicum, Clostridium stercorarium, Fibrobacter succinogenes, Neocallimasterix patriciarum, Ruminococcus flavefaciens, Schizophyllum commune, Streptomyces sp. No. 36a, Streptomyces lividans Xyn B, Streptomyces lividans Xyn C, Thermomonospora fusca, Thermomyces lanuginosus, Trichoderma harzianum, Trichoderma reesei XynI, Trichoderma reesei XynII или Trichoderma viride.

2. Модифицированная ксиланаза по п.l, содержащая замену X131N.

3. Модифицированная ксиланаза по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой Trichoderma ксиланазу.

4. Модифицированная ксиланаза по п.3, отличающаяся тем, что ксиланаза Trichoderma представляет собой ксиланазу I или ксиланазу II из Trichoderma reesei.

5. Модифицированная ксиланаза по п.1, представляющая собой S. lividans ксиланазу С, определенную в SEQ ID NO.39, содержащую аминокислотную замену T131N, причем положение определено при выравнивании последовательностей S. lividans ксиланазы С с аминокислотной последовательностью ксиланазы II Trichoderma reesei, определенной в SEQ ID NO.1.

6. Модифицированная ксиланаза по п.1, представляющая собой Trichoderma reesei ксиланазу I, определенную в SEQ ID NO.2, содержащую аминокислотную замену T131N, причем положение определено при выравнивании последовательностей Trichoderma reesei ксиланазы I с аминокислотной последовательностью ксиланазы II Trichoderma reesei, определенной в SEQ ID NO.l.

7. Модифицированная ксиланаза 11-го Семейства, содержащая последовательность, представляющую собой консенсусный сайт N-гликозилирования, отсутствующий в ксиланазе 11-го Семейства дикого типа, представляющая собой ксиланазу II Trichoderma reesei, определенную в SEQ ID NO.1, и выбранную из группы, состоящей из: N10H, Y27M, N29L, S75A, L105H, Q125A, I129E, T131N, H144R, N157D, Q161R, Q162H и T165R, представленную как ITX1,
N10H, Y27M, N29L, S75A, L105H, Q125A, I129E, T131N, Y135R, H144R, N157D, Q161R, Q162H и T165R, представленную как ITX2,
N10H, Y27M, N29L, S75A, L105H, Q125A, I129E, H144R, N157D, Q161R, Q162H, T165R и F180N, представленную как ITX3,
N10H, Y27M, N29L, S75A, L105H, Q125A, I129E, H144R, N157D, Q161R, Q162H, T165R, F180N и S182T, представленную как ITX3′,
N10H, Y27M, N29L, S75A, L105H, Q125A, I129E, H144R, N157D, Q161R, Q162H, T165R и S182N, представленную как ITX4,
N10H, Y27M, N29L, S75A, L105H, Q125A, I129E, H144R, N157D, Q161R, Q162H, T165R, S182N и S184T, представленную как ITX4′,
N10H, Y27M, N29L, Q34N, S75A, L105H, Q125A, I129E, H144R, N157D, Q161R, Q162H и T165R, представленную как ITX5, и
N10H, Y27M, N29L, Q34N, S36T, S75A, L105H, Q125A, I129E, H144R, N157D, Q161R, Q162H и T165R, представленную как ITX5′.

8. Генетическая конструкция, экспрессирующая модифицированную ксиланазу 11-го Семейства, содержащая промотор, функционально связанный с сигналом секреции, который функционально связан с кодирующей областью, которая кодирует модифицированную ксиланазу по п.1.

9. Генетическая конструкция по п.8, отличающаяся тем, что сигнал секреции генетической конструкции модифицированной ксиланазы представляет собой сигнал секреции Trichoderma.

10. Генетическая конструкция по п.9, отличающаяся тем, что сигнал секреции Trichoderma представляет собой сигнал секреции ксиланазы.

11. Генетическая конструкция по п.10, отличающаяся тем, что сигнал секреции представляет собой сигнал секреции ксиланазы I Trichoderma или сигнал секреции ксиланазы II Trichoderma.

12. Генетическая конструкция по п.9, отличающаяся тем, что промотор выбирают из группы, состоящей из Trichoderma cbh1 промотора, cbh2 промотора, eg1 промотора, eg2 промотора, eg3 промотора, eg5 промотора, xln1 промотора и xln2 промотора и комбинации двух или более из этих промоторов.

13. Генетически модифицированный микроорганизм, содержащий генетическую конструкцию по п.8 и предназначенный для экспрессии модифицированной ксиланазы 11-го Семейства.

14. Генетически модифицированный микроорганизм по п.13, отличающийся тем, что этот микроорганизм относится к роду Trichoderma или Hypocrea.

15. Генетически модифицированный микроорганизм по п.13, отличающийся тем, что промотор выбирают из группы, состоящей из Trichoderma cbh1 промотора, cbh2 промотора, eg1 промотора, eg2 промотора, eg3 промотора, eg5 промотора, xln1 промотора и xln2 промотора и комбинации двух или более из этих промоторов.

16. Способ обработки продукта питания, применяемого в хлебопекарной или пивоваренной промышленности, заключающийся в обработке его модифицированной ксиланазой 11-го Семейства по п.1.

17. Способ обработки кормовой добавки для птицы или свиней, заключающийся в ее обработке модифицированной ксиланазой 11-го Семейства по п.1.

18. Способ производства бумажной пульпы, заключающийся в обработке пульпы модифицированной ксиланазой 11-го Семейства по п.1.