Способ получения оптически активных

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимый от патента №

Заявлено 13ЛХ.1966 (№ 1101381/23-4) Кл. 12о, 25

Приоритет конвенционный по п. 2 14.IX.1965, приоритет по п. 1 13.IX.1966

МПК С 07с

УДК 547.389.6.07 (088,8) Комитет по делам изобретений н открытий при Совете Министров сссР

Опубликовано 25Лт/.1969. Бюллетень № 15

Дата опубликования описания 17.IX.1969

Авторы изобретения

Иностранцы

Хайнц Гибиан, Клаус Кизлих, Ханс-Йоахим Кох, Хорст Космоль, Клеменс Руфер, Эберхард Шредер и Роземари Фессинг (Федеративная Республика Германии) Иностранная фирма

«Шеринг АГ» (Федеративная Республика Германии) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОПТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ АНТИПОДОВ

РЯДА СТЕРОИДОВ о

1

„ 0

Изобретение относится к области получения оптически активных антиподов ряда стероидов.

Предлагаемый способ состоит в том, что стероидное оптическое неактивное соединение общей формулы: где С обозначает оптически неактивный углеродный атом, Q — группу СН.СНз — или †СНа вЂ, Х вЂ” водород, галоид, карбоксильную группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный радикал с 1 — 4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной амино- или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, У вЂ” остальную часть секостероида, включая кольца А и В, а также его функциональные производные по кетогруппам, подвергают ферментативному превращению, например, с микроорганизмами или выделенными из них ферментами.

Пример 1. Получение 3-метокси-8(14)секо-l, 3, 5 (10), 9 (11)-экстратетраен-14а-ол17-она (13р-метил-14а-ОН-ЯМ1 или 13а-метил17р-ОН-ЯМт) ферментацией грибками. а) Восстановление 3-метокси-8 (14)-секо1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-диона (SM) посредством Aspergillus ochraceus (CBS—

Даме).

Ферментация идет с помощью грибковых тп штаммов в колбах для встряхивания, Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, наполненную 500 смз питательного раствора из следующих веществ, %: 3 глюкозы; 1 жидкости для замочки кукурузы; 0,2 ИаИОз., 0,1 КНзРО4, 15 0,05 MgSO4, 0,05 КС1; 0,002 FeSOg, 0,2

К НР04 стерелизуют нагреванием в течение

30 мин до 120 С и после охлаждения раствор засевают суспензией Aspergillus ochraceus (CBS), которая получается промыванием

20 культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли.

Взбалтывают предварительно культуру в течение 2 дней при 30 С (число колебаний 145 об/мин), перезасевают затем по 50 смз культу25 ры в 10 колб для ферментации емкостью по

2 л с 450 смз такого же питательного раствора, взбалтывают их в течение 16 час при 30 С, добавляют в каждую колбу в стерильных условиях по 5 смз 2%-ного этанолового раствора

30 SM и проводят ферментацию в течение 24 час.

242777

Ход ферментации контролируют с помощью хроматографии в тонком слое. Для этого на пластинки из кизельгеля по Шталю наносят метилизобутилкетоновые экстракты проб из бродильного чана; пластины с рабочей поверхностью свыше 15 см проявляют в системе хлороформа — ацетона 9: 1, опрыскивают реактивом из 1 см концентрированной Н2$04 и 20 см

95%-ного этанола, сушат в течение 10 мин при

140 С и рассматривают в длинноволновом ультрафиолетовом свете.

SN

13р-метил-14а-ОН-SM и 17а-ОН-$М1

13р-метил-14р-ОН-$М1 и 17Р-ОН-$М

RF 0,92, окраска: красновато-желтая

RF 0,72, окраска: красновато-желтая

RF 0 63, окраска: темноватожелтая

Соединенные исходные смеси ферментации экстрагируют дважды 2500 смз метилизобутилкетона и экстракт при температуре ванны

45 С сгущают в вакууме приблизительно до

5 смз. Концентрат очищают хроматографией препарата в тонком слое с применением кизельгеля GF2;4 в качестве абсорбента и бензол-эфира уксусной кислоты 9: 1 в качестве рабочей среды.

Видимую в коротковолновом ультрафиолетовом свете (основную) зону с величиной R F около 0,4 отделяют, извлекают с помощью

100 смз хлористого метилена при комнатной температуре, элюат сгущают при температуре ванны 25 С и остаток перекристаллизовывают из 10 ч. диизопропилового эфира.

Получают 13Р-метил-14а-ОН-$М1, т. пл.

101/102 — 103,5 С, а ро + 47,8 (диокса н, с =

1); 13Р-метил-14а-ОН-$М1 может получаться при таких же экспериментальных условиях ферментацией с помощью Aspergillus niger (АТСС 9142). б) Восстановление SM посредством Rhizopus

nigricaus (АТСС 9142).

13 -метил-14а-ОН-SN> можно получить при экспериментальных условиях, описанных в примере 1 (а), ферментацией с помощью Rhisopus nigricaus (АТСС 6227Ь). в) Восстановление SM посредством Penicilliшп notatum (ИКК1 2284).

При экспериментальных условиях, описанных в примере 1(а) из SM ферментацией посредством Penicillium notatum (ИКК1 1982) можно получить 13Р-метил-14а-ОН-SN .

Пример 2. Получение 13Р-метил-14а-OHSM> ферментацией посредством дрожжей. а) Восстановление SN посредством Saccharomyces cerevisiac (ИКК1-Y-2250).

Ферментация идет с помощью дрожжей в колбах для встряхивания.

Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, наполненную 500 смз питательного раствора из 5% глюкозы и 2% жидкости для замочки кукурузы, 4 стерилизуют и затем засевают суспензией Sacharomices cerevisiac (NRRL-Y-2250), которая получается промыванием культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли. Взбалтывают предварительную культуру в течение суток при 30 С (число колебаний 145 об/мин), перезасевают по 50 см культуры в 4 колбы для ферментации емкостью 2 л, наполненные каждая 450 см такого же питательного раствора, взбалтывают их в течение 6 час при

30 С, добавляют в каждую колбу 5 слР 2%-ного этанолового раствора $М и проводят ферментацию в течение 20 час.

Суспензии для ферментапии приготовляют, как описано в примере 1(а).

Получают 13р-метил-14а-ОН-SN, т. пл.

101/102 — 104 С; а,", + 46,2 (диоксан, с = 1) в 4 = 21000. б) Восстановление SN посредством Saccharomyces cerevisiac (ИСУС 1021).

При описанных в примере 2(а) условиях из

SM ферментацией посредством Saccharomyces

cerevisiac (ИСУС 1021) получают 13Р-метил14а- О Н-SM>. в) Восстановление $М посредством Sacchar omyces car 1sber gens is (C B S 1505) .

При описанных в примере 2(а) условиях из

SM ферментацией посредством Saccharomyces

carlsbergensis (CBS 1505) получают 13р-метил14а-ОН-SN>. г) Восстановление $М посредством Saccharomyces pastorianus (Институт ферментной промышленности, Берлин).

При условиях, описанных в примере 2(а), но со временем ферментации 40 час, из $М ферментацией посредством Saccharomyces pastorianus может быть получен 13Р-метил-14аОН-$М,.

Пример 3. Получение 13Р-метил-14а-OHSN< ферментацией посредством бактерий. а) Восстановление SM посредством Bacillus

esterificans (ВВА — Берлин).

Ферментация идет посредством бактерий в колбах для встряхивания. Колбу Эрленмейера емкостью 2 л с 500 см питательного раствора из следующих веществ, % 0,5 глюкозы, 0,2 жидкости для замочки кукурузы; 0,1 экстракта дрожжей; 0,1 пептона (Мерк) стерилизуют и затем засевают суспензией Bacillus esterificans, которую получают промыванием культуры косого агара физиологическим раствором поваренной соли. Взбалтывают предварительную культуру в течение суток при 30 С (число колебаний 145 об/мин), переносят по 50 смз культуры в 4 колбы для ферментации емкостью 2 л, каждая из которых наполнена

450 см такого же питательного раствора, взбалтывают эти колбы 4 час при 30 С, добавляют в каждую колбу 5 см 2%-ного этанолового раствора SM и проводят ферментацию еще 20 час.

Суспензию для ферментации приготовляют, как описано в примере 1(а).

242777

Ьо

Получают 13Р-метил-14а-ОН-$М1, т. пл.

101/102 — 104 С. б) Восстановление SM посредством Bacillus

latегоsporus (АТСС 4517) .

При описанных в примере 3(а) экспериментальных условиях, но со временем ферментации 44 час, из SM ферментацией посредством

Bacillus latегоsporus получают 13р-метил-14аОН-SM в) Восстановление SM посредством Brevibacterium vitarumeu (АТСС 10234) .

При описанных в примере 3 (а) условиях SM ферментацией посредством Brevibacterium vitarumeu восстанавливается в 13Р-метил-14аОН-SM,. г) Восстановление SM посредством Propionibacterium arabinosum (АТСС 4965).

Из SM при описанных в примере 3(а) условиях ферментацией посредством Propionibacterium arabinosum получают 13р-метил-14а-OHSM,. д) Восстановление SM посредством Prota minobacter alboflavus (АТСС 8458) .

При указанных в примере 3(б) условиях из

SM ферментацией посредством Protaminobacter

alboflavus получают 13р-метил-14а-ОН-SMi. е) Восстановление SM посредством Mesentericus spec (Институт Роберта Коха, Берлин).

Из SM при. указанных в примере 3(а) условиях ферментацией посредством Mesentericus

spec. получают 13р-метил-14а-ОН-SMь ж) Восстановление SM посредством Mycop1ana dimorpha (АТСС 4279) .

При указанных в примере 3(б) условиях из

SM ферментацией посредством Mycoplana dimorpha получают 13Р-метил-14а-OH-SM . в) Восстановление SM посредством Bacillus

thuringiensis (ВВА — Дармштадт) .

Ферментация идет посредством бактерий в бродильном чане.

Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполняют 30 л питательной среды из следующих веществ, ОД„: 05 глюкозы;

0,2 жидкости для замочки кукурузы; 0,5 экстракта дрожжей; 0,1 пептона (Мерк), стерилизуют нагреванием в течение 1,5 час до 120 С и засевают 1 л выдержанной в течение суток взболтанной культуры Bacillus thuringiensis

5ВА — Дармштадт) .

Посевной материал получают при условиях, описаных для выращивания посевов в колбах по примеру 3 (а) .

После однодневного размножения при температуре 29 С, перемешивании (220 об!мин) и аэрации (1,65 м /час) 1,8 л культуры при стерильных условиях переносят в бродильныи чан такого же размера с 28 л того же питательного раствора. После выращивания в течение 6 час при перемешивании и аэрации, как указано выше, добавляют силиконовое масло

SH + 5О, олеомаргарина из свиного сала в качестве предотвращающего вспенивание средства и раствор 15,0 г SM в 800 смз этанола и проводят ферментацию еще в течение 16 час.

Затем суспензию бродильного чана экстрагируют дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны 45 С в вакууме до сиропа и растворяют последний в 150 смз изопропилового эфира. После выдерживания в течение 20 час при 0 С осажденные кристаллы отсасывают, промывают небольшим количеством холодного изопропилового эфира и высушивают при 60 С в вакууме.

Выход: -13,1 г 13р-метил-14а-ОН-SM, т. е.

87 /, теоретического количества, т. пл. 98/99—

100 С.

Вещество может быть очищено перекристаллизацией из 4 ч. спирта. и) Восстановление $М посредством Protaminobacter alboflavus (АТСС 8458).

При описанных в примере 3 (з) условиях $М может быть в значительной степени восстановлен посредством Protaminobacter alboflavus только в том случае, если через 20 час после добавки субстрата подача воздуха полностью прекратится, и затем проводится ферментация еще в течение 20 час. Чтобы изолировать полученный 13р-метил-14а-OH-$М, требуется растворить концентрат сырого экстракта в хлористом метилене и отфильтровать через колонну с кизельгелем, дезактивированную 10О воды, и кристаллизовать элюат, как описано, из диизопропилового простого эфира.

П п и м е 4. Получение 3-метокси-8(14) -секо-l, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен-17 3-ол-14она (13р-метил-17р-ОН-$М ) ферментацией посредством дрожжей. а) Восстановление SM посредством Saccharomyces ellipsoides (штамм Токауера, 22, Берлин).

При описанных в примере 2(а) условиях SM восстанавливают посредством Saccharomyces

elIipsoides (штамм Токауера). Полученный хроматографией препарата в тонком слое сырой продукт перекристаллизовывают дважды из

10 ч. диизопропилового простого эфира.

Получают 138-метил-178-OH-$М1, т. пл.

110/112 — 114 С; а — 39.2 <диоксан, с = 1);

esca = 20,800. б) Восстановление SM посредством Saccha

romyces pastorianus (Институт ферментативной промышленности, Берлин).

При описанных в примере 2(а) условиях из

SM ферментацией посредством Saccharomvces

pastorianus получают 13й-метил-17()-ОН-$М.. в) Восстановление $М посредством Saccharomyces carlsbergensis (CBS 2354).

При описанных в примере 2(а) условиях из

$М ферментапией посредством Saccharomyces

carlsbergens!s (CBS) получают 13Р-метил-17рОН-SM,.

r) Восстановление SM посредством Saccharomvces uvarum (CBS 1508).

Ферментапия идет посредством дрожжей в бподильном чане. Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполняют 30 л питательного раствора пз 504 виноградного сахара и 2О,, жидкости для замочки кукурузы.

242777 стерилизуют нагреванием в течение 30 мин до

120 С и засевают 1 л выдержанной в течение суток взболтанной культурой Saccharomyces

uvarum (CBS 1508). Посевной материал получают при условиях, описанных для выращива- 5 ния посевов в колбах по примеру 2(а).

После однодневного размножения при температуре 29 С, перемешивании (220 об/мин) и аэрации (1,65 м /час) 1,8 л культуры при стерильных условиях переносят в бродильный jo чан такого же размера с 28 л того же питательного раствора. После выращивания в течение 6 час при перемешивании и аэрации, как описано выше, добавляют силиконовое масло

SH + 5 Д олеомаргарина из свиного сала в ка- 15 честве средства, предотвращающего вспенивание, и раствор 45,0 г SM в 800 смз этанола и проводят ферментацию еще в течение 19 час.

Затем экстрагируют суспензию для фермен20

30 тации дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны 45 С в вакууме до сиропа, разбавляют последний

400 см диизопропилового эфира и оставляют полученный раствор на 16 час при 0 С.

Образовавшиеся кристаллы отсасывают, промывают 25 смз ледяного диизопропилового эфира и сушат в вакууме при 60 С.

Выход: 31,8 г 13р-метил-17Р-ОН-$М, т. е, 71 Д теоретического количества; т. пл.

106/108 — 109 С; а О 34,5 (диоксан, с = 1); в 4 = 20,100.

Соединение может быть очищено перекристаллизацией из 4 ч. этанола.

Пример 5. Получение 13Р-метил-17р-ОН$М, восстановлением SM посредством Curvularia lunata (МЯКИН 2434).

Ферментация идет посредством грибков в бродильном чане. Бродильный чан из нержавеющей стали емкостью 50 л наполняют 30 л питательного раствора из следующих веществ, Д,: 3 глюкозы; 1 жидкости для замочки кукурузы; 0,2 ХаХО; 0,2 К НРО,1,. О,1 КН РО1;

0,005 Мд$0, 0,05 КС1; 0,002 Ре$0, стерилизуют нагреванием в течение 30 мин до 120 С и засевают 1 л выдержанной в течение 2 дней взболтанной культуры Curvularia iunata (NRRL

2434). Посевной материал получают при условиях, описанных в примере 1(а) для выращивания посевов в колбах.

После двухдневного размножения при температуре 29 С, перемешивании (220 об/мин) и аэрации (1,65 ло/час1 3 л культуры при стерильных условиях переносят в бродильный чан такого же размера с 27 л того же питательного раствора.

После выращивания в течение 16 час при перемешивании и аэрации, как описано выше, добавляют Pluronic L 81 в качестве средства, предотвращающего вспенигание, и раствор

6,0 г SM в 450 смз этанола и проводят д>епментацию еще в течение 20 час. Зятем экстрягируют суспензию ферментации дважды 15 л метилизобутилкетоня, сгущают экстракт ппи температуре ванны 45 С в вакууме до сиропа, 35

8 отделяют последний хроматографией в колонне на 200 г дезактивированного 10 /О воды кизельгеля в качестве абсорбента и смесях четыреххлористого углерода — хлористого метилена в качестве растворителя для элюирования.

Содержащие 13Р-метил-17Р-ОН-SM, фракции соединяют и после сгущения перекристаллизовывают из изопропилового эфира.

Пример 6. Получение 3-метокси-8 (14) -секо-1, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраена-17п-ол14-она (13р-метил-17а-ОН-$М1) восстановлением SM посредством Arthrobacter simplex (ATCC 6946).

При описанных в примере 3(и) условиях SM подвергается ферментации посредством Arthrobacter simplex.

Получают кристаллизат с т. пл. 91/92 — 95 С.

z — 16 (диоксан, с = 1) . Последний многократной фракционированной кристаллизацией очищают из диизопропилового эфира и из этан ола.

Получают 13Р-метил-17а-ОН-$М; т. пл.

100/101 — 102 С; а D — 44,3 (дио ксан, с = 1); в д — — 20,600.

Пример 7. Получение З-метокси-l, 3, 5 (10) -8, 14-эстрапентаен-17Р-ола С 9Н О (282, 37) .

30,04 г (0,100 моль) 13g-метил-17р-ОН-SM< кипятят с флегмой 2,5 час в 42 мл метанола и

83 мл хлористого метилена с 0,81 мл концентрированной соляной кислочы. Затем раствор выливают в 85 мл воды, отделяют органическую фазу и водную фазу дважды экстрагируют хлористым метиленом. Соединенные органические фазы промывают до нейтрального состояния раствором бикарбоната и водой и сушат. После отгонки растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают

21,00 г (74,4 Ä/,) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14эстрапентаен-17р-ола, т. пл. 107 — 109 С; и ро—

141 (с = 1, СНС1).

Вещество идентично З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17Р-олу, который получают отщеплением рацемата из рацемического материала, по точке плавления, вращению, всем спектрам, а также по газовой хроматографии и хроматографии в тонком слое.

Пример 8. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ола, С1 Н О (284, 38) .

58,00 г (0,205 моль) З-метокси-l, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола гидрируют при помощи 8,2 г предварительно гидрированного

5О, -ного палладия/карбонат кальция в 200 мл тетрагидрофурана. Поглощается в течение

50 мин 4820 мл водорода (95 Д теоретического количества). Раствор отфильтровывают от катализатора.

После выпаривания растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают

39,80 г (68,2 /о) З-метокси-l, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17Р-ола; т. пл. 123 — 126 С; ссD — 71 (с = 1, СНСlз).

242777

9

Пример 9. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10) -эстратриен-17Р-ола (эстрадиолметиловый эфир). С оНзоОз (286, 39).

11,35 г (0,040 моль) Ç-метокси-1, 3, 5 (10)—

8-эстратетраен-17Р-ола растворяют в 120 мл абсолютного тетрагидрофурана и при — 50 С, добавляют к раствору 100 мг лития в 120 мл жидкого аммиака и 9,9 мл анилина. При такой же температуре порциями добавляют 340 мг лития и перемешивают еще в течение 10 мин.

Затем добавляют 0,72 мл воды в 12 мл тетрагидрофурана, причем раствор становится прозрачным.

После добавления остальных 0,59 г лития раствор перемешивают еще 20 мин и обесцвечивают хлористым аммонием. После выпаривания аммиака добавляют воду, органические растворителя отгоняют в вакууме и остающуюся смесь экстрагируют хлористым метиленом.

Соединенные растворы хлористого метилена освобождают с помощью 1 н. соляной кислоты от анилина и промывают раствором бикарбоната и воддй до нейтрального состояния.

После сушки раствора, отгонки растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 8,5 г (74,0оД) З-метокси-1, 3, 5 (10) -эстратриен-17Р-ола (эстрадиолметиловый эфир); т. пл. 114 — 116 С; а „о + 72 . Вещество идентично полученному из натурального материала эстрадиолметиловому эфиру по точке плавления, вращению и всем спектрам, а также по газовой хроматографии и по хроматограмме в тонком слое.

Пример 10. Получение Ç-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17Р-ола-ацетата

Сз,Н 40з (324, 40).

5,00 г (0,0167 моль) 13р-метил-17р-ОН-SMI обрабатывают в течение 15 час в пиридине при комнатной температуре 30 мл уксусного ангидрида. Затем раствор выливают в соляную кислоту, экстрагируют раствором хлористого метилена, промывают до нейтрального состояния

1 н. соляной кислотой, раствором бикарбоната и водой. Масло, остающееся после сушки и отгонки растворителя в вакууме, поглощается в

800 мл бензола и кипятится в течение 15 мин в водоотделителе с 2,8 г п-толуолсульфокислоты. После охлаждения раствор промывают до нейтрального состояния раствором бикарбоната и водой.

Сушка и отгонка растворителя дает 4,89 г (90Я) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ол-ацетата; т. пл. 79 — 82 С; а о

180 .

На газовой хроматограмме вещество 98о4-ное и может применяться для гидрирования в 3метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17Р-ол-ацетат.

Для сравнения с ацетатом З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола из отщепления рацемата в рацемическом материале оно перекристаллизовывается из этанола. Получают 3,60 г {бб,б II) Ç-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 145

65 эстрапентаен-17Р-ол-ацетата; т. пл. 86 — 87 С; ао 188 р

Этн данные, а также спектры и хроматограммы идентичны данным ацетата, полученного из отщепления рацемата.

П р и и е р 11. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17р-ол-ацетата Сл НгоОз (326,41) .

2,40 г (0,0074 моль) Ç-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17Р-ол-ацетатата сырого гидрируют с помощью 664 мг предварительно гидрированного 5о4-ного палладия на карбонате кальция в 8 мл бензола и 8 мл тетрагидрофурана. За 2 час поглощаются 180 мл водорода (97о, теоретического количества).

После отфнльтрования катализатора, отгонки растворителя в вакууме и перекристаллизации из этанола получают 1,61 г (66,6 "4) 3-метокси-1, 3, 5 (10), 8-эстратетраен-17Р-ол-ацетата; т. пл. 110 — 113 С; а — 49 . (с =- 1, СНС!з) .

П р и м ер 12. Получение 3-мет"..ксн-1,3, 5 (10), 8-эстратетраен-17Р-ола С,Нз40 .(284,38) .

2,70 г (0,0083 моль) Ç-метокси-1,3,5 (10), 8эстратетраен-17Р-ол-ацетата перемешивают при комнатной температуре в течение 3 час в

50 мл 1 н. метанолового калийного щелока.

Прн этом вещество полностью растворяется.

При охлаждении раствора осаждается продукт. Осаждение дополняется 100 мл ледяной воды.

Получают 2,14 г (95,1 о о) Ç-метокси-1,3,5(10), 8-эстратетраен-17р-ола, т. пл. 125 — 127 С; о" — 7,9 (с = 1, СНС1,).

Вещество идентично веществу, полученному гидрированием Ç-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола.

Пример 13. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17р-ола (282,37).

150 мг (0,00046 моль) Ç-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстр апентаен-17Р-ол-ацетата перемешивают в течение 3 час в потоке азота в 3 мл метанолового 1 н. калийного щелока. При этом вещество растворяется постепенно. При охлаждении льдом оно подкисляется 0,6 л л концентрированной кислоты и осаждается 2,4 л л воды.

После перекристаллизапии из этанола/воды получают 107,5 л г (82,5оД) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8,14-эстрапентаен-17р-ола; т. пл. 101—

102 С; а" — 135 С (c = 1, СНС4).

Пример 14. Получение Ç-метокси-13а-1, 3,5 (10) .8,14-эстрапентаен-17р-ол-ацетата.

С„Но,,Оз (324,40).

2,00 г (0,067 моль) 138-метил-14а-ОН-SMI (равноценно 13а-метил-17р-ОH-SM,) обрабатывают в течение 16 час при комнатной температуре 20 мл пиридина с 12 мл уксусного ангидрида. Затем раствор выливают в воду, экстрагируют хлористым метиленом и соединенные фазы хлористого метилена промывают до нейтрального состояния соляной кислотой, бикарбонатом и водой, 242777

5

После сушки и отгонки растворителя в вакууме маслянистый некристаллизующийся остаток поглощается в 50 мл бензола и кипятится в течение 10 мин на водоотделителе с

120 мг и-толуолсульфокислоты. После разбавления простым эфиром раствор промывают до нейтрального состояния водой и бикарбонатом, сушат и растворитель отгоняют в вакууме.

Перекристаллизация из этано7a дает 1,83 г (84,7 Ä/,) З-метокси-13я-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17Р-ол-ацетата; т. пл. 127 †1 C;

+ 183 (с = 1, CHCI ) ..

Пример 15. Получение З-метокси-13а-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17Р-ола С ОНззОз (282, 37).

800 л г (0,00246 моль) 3-метокси-13сс; 1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17Р-ол-ацетата перемешивают в течение 3 «ас в потоке азота с

16 мл 1 н. метанолового калийного щелока.

При этом вещество растворяется. При охлаждении льдом с помощью воды проводят осаждение и основательную промывку.

Получают 681 мг (97,6 )() ) З-метокси-13а-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17(-ола.

Разложение при температуре выше 32 С сРро + 199 (с = 1, СНСIз).

Вещество по всем спектрам и хроматограммам унифицированное, но очень легко разлагается.

Пример 16. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17а-ол-ацетата

Сз Нз40з (324,40) .

300 мл (0,001 моль) 13р-метил-17а-ОН-SM< обрабатывают в течение 16 «ас при комнатной температуре 3 мл пиридина и 2 мл уксусного ангидрида. Затем раствор выливают в воду, экстрагируют хлористым метиленом и соединенные растворы хлористого метилена промывают до нейтрального состояния соляной кислотой, бикарбонатом и водой. После сушки и отгонки растворителя остается масло, которое поглощается в 8 мл бензола и кипятится в течение 10 хин с 18 яг п-толуолсульфокислоты.

После разбавления простым эфиром раствор промывают до нейтрального состояния водой и бикароонатом, сушат и растворитель отгоняют.

Перекристаллизация из этанола дает 244 мг (70,5О, ) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17а-ол-ацетата; т. пл. 126 — 127,5 С; о + 197 (с = 2, СНСIз)

Пример 17. Получение З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17к-ола СОНззОз (282,37) .

200 мг (0,000618 моль) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17и-ол-ацетата перемешивают в течение 3 «ас в потоке азота с 4 мл 1 н. метанолового калийного щелока. При этом вещество полностью растворяется. При охлаждении льдом происходит осаждение водой, осадок отсасывается и основательно промывается.

Получают 128 мг (73,5ОД ) З-метокси-1, 3, 5 (10), 8, 14-эстрапентаен-17а-ола.

Разложение при температуре выше 30 С; а — 197 (с = 1, СНСIз).

Вещество должно храниться в холоде, так как оно быстро разлагается.

Пример 18. Получение 3-метокси 8 (14)секо-9, 14а-оксидо-1, 3, 5(10)-эстратриен-17она С зНз40з (300,38).

400 мг (0,00133 моль) 13а-метил-17Р-OHSMI кипятят в течение 30 мин, с флегмой в

20 мл метанола и 40 мл хлористого метилена с

0,4 мл концентрированной соляной кислоты.

После добавления воды отделяется органическая фаза и водная фаза экстрагируется хлористым метиленом. Соединенные органические фазы промывают до нейтрального состояния бикарбонатом и водой, и растворитель отгоняют в вакууме.

Получают 400 мг (100,) 3-метокси-8, 14-секо-95, 14а-оксидо-1., 3, 5 (10) -эстратриен-17она, который является унифицированным по хроматограмме в тонком слое.

Многократная перекристаллизация из этанола дает 45 мг вещества; т. пл. 59 — 90 С; а

41,7 (с = 1, СНСIз).

Структура была подтверждена инфракрасной частью спектра, ультрафиолетовой частью спектра, NMR масс-спектром.

Пример 19. Получение 13р-метил-14а-OHSMI ферментанцией посредством Saccharomyces uvarum (CBS 1508) по методу остаточной клетки.

30 л культуры Saccharomyces uvarum (CBS

1508) из предварительного бродильного чана, полученной, как описано в примере 4(г), подвергают центрифугированию. Промывают полученные дрожжи дистиллированной водой, центрифугируют еще раз и взвешивают в 30 л дистиллированной воды. По 500 смз суспензии наливают в 8 колб Эрленмейера емкостью 2л, закрывают их ватной пробкой и взбалтывают (число колебаний 145 об мин) при 30 С. Через

4 «ас добавляют в каждую колбу по 250 мг

SM, растворенных в 2,5 смз метилцеллозольва, и проводят ферментацию в течение 20 час.

Затем соединяют исходные смеси ферментации, экстрагируют их дважды с помощью 1 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт в вакууме при температуре ванны 45 С до сухого состояния и перекристаллизовывают остаток

1 раз из смеси бензола — гексана и 1 раз из этанола.

Получают 13 3-метил-14а-ОН-$М, т. пл.

101/102 — 10 С; e + 45,4 (с =1, диоксан).

Пример 20, Получение 13р-метил-14а-OHSM< ферментацией посредством $ассЬаготусез пс.arum (СВ$1508) — сухого порошка.

Из 30 л культуры CBS 1508 предварительного бродильного чана получают, как описано в примере 19, центрифугированием дрожжи. Последние взвешивают в 3 л ацетона, перемешивают суспензию в течение 15 мин, отсасывают дрожжи, взвешивают снова в 3 з ацетона, перемешивают, отсасывают дрожжи и сушат ц

242777

65 гечейие 3 час в вакууме при комнатной температуре.

Полученный сухой порошок взвешивают в

30 л дистиллированной воды и пр именяют эту суспензию для ферментации.

Ферментация $М и переработка исходных смесей происходит, как описано в примере 19.

Получают 13Р-метил-14а-ОН-$М, т. пл.

100/102 — 103 С; а + 43 (с = 1, диоксан).

Пример 21. Получение 13р-метил-14аОН-$М посредством раствора 20Р-гидроксистероиддегидрогеназы.

К смеси 4,4 мл 0,022 М фосфатного буферного раствора (рН 5,5), 0,7 мл 0,4 Д,-ного

DPN н. раствора и 0,03 мл разбавленной в отношении 1: 5 суспензии 20р-гидроксистероиддегидрогеназы (фирма «Ц. Ф. Берингер унд

Зене», Общество с ограниченной ответственностью Мангейм) добавляют 1 мг SM в 0,05 мл этанола и взбалтывают в течение 15 мин при комнатной температуре В результате анализа хроматографией в тонком слое (см. пример 1,а) обнаруживают в качестве единственного продукта превращения 13Р-метил-14а-ОН-SM

Пример 22. Получение 13р-этил-3-метокси-8 (14)-секо-18-нор-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17I3-ол-14-îíà (13I3-этил-17Р-ОН-SM,) .

При условиях, описанных в примере 4(г), 15,0 г 13р-этил-3-метокси-8 (14)-секо-18-нор-1, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен-14, 17-диона (13р-этил-$М) подвергают ферментации посредством Saccharomyces uvarum (СВ$1508) в течение 20 час. Затем суспензию ферментации экстрагируют дважды 15 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт при температуре ванны

45 С до сиропа и перекристаллизовывают полученный продукт из изопропилового эфира.

Получают 13р-этил-3-метокси-8 (14) секо-18нор-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17Р-ол-14он; т. пл. 85 — 86,5 С; а р + 15,2 (с = 1, диоксан) .

Согласно NMR-спектру гидроксильная группа P — постоянная относится к 13Р-этиловой группе.

Пример 23. Получение 3-метокси-8 (14)секо- D-гомо-1, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен17сф-ол-14-îíà (17ар-OH) - (D-гомо-SM) .

1,6 г 3-метокси-8 (14)-секо-D-гомо-1, 3,5 (10), 9 (11) -эстратетраен-14, 17а-диона (D-гомо-SM) подвергают ферментации, как описано в примере 20, посредством ацетонового сухого порошка Saccharomyces uvarum (CBS 1508). Полученный сухой продукт очищают, как описано в примере 1,а, хроматографией препарата в тонком слое и перекристаллизовывают из изопропилового эфира.

Получают 3-метокси-8 (14) -секо-D-гомо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17пР-ол-14-он; т. пл.

115 — 116,5 С; ао + 28,5 (с = 1, диоксан).

Пример 24. Получение 2-метил-3-метокси8(14)-секо-1,3,5 (10), 9 (11) - эстратетраен14а-ол-17-она.

По 500 смз суспензии$ассБагогпусез uvarum (СВ$1508) — сухого порошка (пример 20) вво14 дят в 16 колб Эрленмейера емкостью 2 л, за. крывают их ватной пробкой и взбалтывают (числом колебаний 145 об/мин) при 30 С. Через 1 час добавляют в каждую колбу по 100 мг

2-метил-3-метокси-8 (14) -секо-1, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен-14, 17-диона, взбалтывают еще 48 час.

Этот не описанный до сих пор исходный продукт приготовляют известным способом следующим образом: б-метокси-7-метил-тетралин окисляют хромовой кислотой в б-метокси7-метилтетралоне-1 (т. пл. 102 — 104 С), из которого после реакции с Гриньяровским соединением, с винилом-бромидом магния и последующей конденсации полученного «висколя», посредством 2-метилциклопентандиона-1, 3 получают 2-метил-3-метокси-8 (14) -секо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-дион (т. пл.

101 — 103 С) .

Затем соединяют исходные смеси ферментации, экстрагируют их дважды 2 л метилизобутилкетона, сгущают экстракт в вакууме при температуре ванны 45 С, очищают остаток хроматографией препарата в тонком слое (пример 1,а) и перекристаллизовывают продукт из изопропилового эфира.

Получают 2-метил-3-метокси-8 (14) -секо-1, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен-14а-ол-17-он; т..пл. 135 — 137 С; а, +47,8 (с = 1, диоксан).

Согласно NMR-спектру гидроксильная группа а-постоянная относится к 13р-метиловой группе.

Пример 25. Получение 4-метил-3-метокси8 (14) -секо-1, 3, 5 (10), 9 (11) -эстратетраен-17Рол-14-она, 30 л суспензии Saccharomyces uvarum (CBS

1508) — сухого порошка (пример 20) перемешивают в бродильном чане из нержавеющей стали при 30 С (число колебаний 200 об/мик) и аэрируют 300 л/час воздуха, Добавляют 3,0 г

4-метил-3-метокси-8 (14) -секо-1, 3, 5 (10);

9 (11) -эстратетраен-14, 17-диона, растворенного в 800 смз этанола.

Этот не описанный до сих пор исходный продукт получают следующим образом: 5-метил-б-метокситетралон-1 вводят в реакцию с

Гриньяровским соединением посредством винила-хлорида магния и полученный при этом соответствующий «винол» конденсируют посредством 2-метилциклопентадиона в 4-метил-3-метокси-8 (14)-секо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-14, 17-дион (т. пл. 154 — 155 С).

Затем перемешивают в течение 48 час с аэрацией и 60 час без аэрации. Экстрагируют, как обычно, метилизобутилкетоном, сгущают экстракт, отделяют остаток хроматографией препарата в тонком слое и перекристаллизовывают полученный сырой продукт из изопропилового эфира.

Получают 4-метил-3-метокси-8 (14) -секо-1, 3, 5 (10), 9 (11)-эстратетраен-17р-ол-14-он; т. пл, 242777

) — а

15

Составитель П. Йивницкая

Техред Л. Я. Левина Корректоры: М. В. Радзинская и В. И. Жолудева

Редактор А. Петрова

Заказ 3080/19 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр, Сапунова, 2

167 — 168 С; с — 43,6 (с = 1, диоксан). Согласно NNR-спектру гндроксильная группа Рпостоянная относится к 13)5-метиловой группе.

Предмет изобретения

1. Способ получения оптически активных антияодов ряда стероидов, отличающийся тем, что соединение общей формулы где С обозначает оптически неактивный атом углерода, а Q — группу — СН вЂ” СН вЂ” или — СН вЂ”, X — водород, галоид, карбоксильную 20 группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный радикал с 1 — 4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной группой, амино- 25 группой или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, Y— остаточную часть секостерорда, включая кольца A и В, а также его функциональные производные по кетогруппам, подвергают ферментативному превращению, например, с микроорганизмами или выделенными из них ферментами.

2. Способ получения оптических активных антиподов ряда стероидов, отличающийся тем, что соединение общей формулы где С обозначает оптически неактивный атом углерода, Q — группу — СН.— СНв — или — СН вЂ”, Х вЂ” водород, галоид, карбоксильную группу в свободной или этерифицированной форме или насыщенный или ненасыщенный алкильный остаток с 1 — 4 атомами углерода, который дополнительно может быть замещен галоидом или гидроксильной группой, аминогруппой или карбоксильной группой в свободной или функционально измененной форме, Y — остаточную часть секостероида, включая кольца А и В, подвергают ферментативному восстановлению, например, с микроорганизмами, как грибы, дрожжи, бактерии или с выделенными из них ферментами.

Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных Способ получения оптически активных 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу выделения энантиомеров из рацемической смеси противоточной экстракцией при помощи по меньшей мере двух жидкостей, имеющих взаимно различную хиральность, причем эти жидкости полностью смешиваются и разделены друг от друга фазой, с которой они не смешиваются

Изобретение относится к способу преобразования первого изомера во второй изомер, в котором первый и второй изомеры являются эпимерами одного и того же соединения

Изобретение относится к способу получения моногидрата ропивакаина гидрохлорида формулы I, который включает следующие стадии: стадию 1: (i) рацемическое исходное вещество - гидрохлорид пипеколоксилидида формулы II освобождают от НСl, образующего с ним соль, путем экстракции органическим растворителем, содержащим разбавленное основание, (ii) полученный пипеколоксилидид обрабатывают разделяющим реагентом и разбавителем, образующим стабильную кристаллизационную систему с водой, и выделяют кристаллический продукт - (S)- пипеколоксилидид формулы III путем экстракции разбавленным основанием в органическом растворителе, который растворяет минимум около 1 мас

 

Наверх