Способ получения биологически активного тканевого препарата

Изобретение относится к ветеринарии. Способ получения биологически активного тканевого препарата на основе плаценты коров включает фильтрацию, измельчение, гомогенизацию, центрифугирование, причем извлекают беременную матку в первой половине стельности (4-5 мес) в период нутровки стельных коров на скотобойне, выполняют продольный разрез серозно-мышечно-слизистого слоя беременного рога матки, собирают котиледоны путем снимания их с карункулов, сохраняя целостность ворсинок, срезая котиледоны кривыми стерильными ножницами с ткани детской плаценты, путем прокола иглой хориально амниотической оболочки вакуумированием собирают амниотическую жидкость из амниотического пузыря, измельчают срезанные котиледоны резаньем, а затем в механическом гомогенизаторе, добавляют ранее собранную из этой же матки амниотическую жидкость из расчета 10:1 гомогенной массы, медленно перемешивают и отстаивают, затем центрифугируют при 10 тыс. об/мин в течение 10 минут, осуществляют консервацию, надосадочную часть сливают во флаконы и укупоривают. Изобретение обеспечивает повышение эффективности препарата. 2 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу получения биологически активного тканевого препарата из плаценты коров.

Известен способ приготовления препарата из плаценты, включающий измельчение сырья, проведение слабого кислотного гидролиза, выделение продукта центрифугированием, нейтрализацию надосадочной жидкости, выделение и очистку препарата, сублимационное высушивание (1).

Недостатком этого изобретения является то, что извлечение биостимулирующих, лечебных веществ природного происхождения под действием любой степени кислотного гидролиза, а также сублимационной обработки приводит к извлечению уменьшенного количества или свойств лечебного фактора.

Известен также способ получения препарата ПДЭ (плацента денатурированная эмульгированная), при изготовлении которого используются ткани детской плаценты: ткань амниота, хориона (2).

Недостатком этого способа является то, что при получении препарата добавляют химические вещества, приводящие к изменениям природных свойств белковых молекул, нуклеиновых кислот, а также при использовании диспергирования и эмульгирования происходит выделение капельно-жидкой фазы из растворов, что обычно сопровождается разрывом химических связей. Поэтому изменяются природные лечебные свойства препарата, теряя лечебный бактерицидный и стимулирующий эффект.

Наиболее близким к настоящему изобретению по технико-биологической сущности достигаемому результату при использовании является способ получения лекарственных веществ из плаценты.

Предлагаемый способ получения биологически активного тканевого препарата из плаценты человека включает отмывку плаценты, гомогенизацию тканей плаценты без разделения на составные части, гемолиз тканей в очищенной воде, загрузку тканей в роторно-пульсационную установку (РПУ) марки УМ-075. После того заливают в емкость установки 3%-ный раствор перекиси водорода в соотношении 2:1 и выдерживает в течение 50-60 минут при постоянном перемешивании (3).

В качестве основных недостатков для известного способа являются следующие: дважды обработанная плацента в роторно-пульсирующем аппарате кавитационной ударной волной и 60-минутное содержание гомогенной массы в 3% растворе перекиси водорода подвергают разрушению плацентарные ферменты, стволовые клетки в полученном препарате, что приводит к изменению биоструктуры физиологических, регенеративных, репаративных функций.

Задачей предлагаемого изобретения является разработать и создать способ получения тканевого препарата при использовании полученных котиледоновых фракций в течение 1,5-2 часов после извлечения плода из матки для лечения коров с послеродовыми заболеваниями половых органов.

Целью изобретения является повышение лечебных свойств препаратов, изготовленных из плацентарных тканей для лечения коров с болезнями половых органов после тяжелых родов.

Поставленная цель достигается тем, что котиледоны, взятые с детской плаценты стельной коровы в первую половину стельности (4-5 мес), богаты лекарственными веществами, т.к. в этот период развития плода-теленка в амниотической жидкости (продукт котиледонов и карункулов) имеется максимальное количество бактерицидных и бактериостатических ферментов: лизоцим, комплимент, пропердин и др., губительно действующих на микроорганизмы с одной (грамположительные) и двумя (грамотрицательные, вирусы, грибки…) мембранами.

Котиледоны (их у коров на детской плаценте от 90 до 120 шт.) собирали с детской плаценты из изолированной матки с плодом, взятой из брюшной полости у стельных коров на скотобойне в результате объявления банкротства скотофермы.

Последовательность выполнения предлагаемого способа состоит в следующем.

1. Извлекают беременную матку в первой половине стельности (4-5 мес) в период нутровки стельных коров на скотобойне.

2. Выполняют продольный разрез серозно-мышечного слизистого слоя беременного рога матки.

3. Собираю котиледоны путем снимания их с карункулов, сохраняя целостность ворсинок, срезая котиледоны кривыми стерильными ножницами с ткани детской плаценты.

4. Путем прокола иглой хориально амниотической оболочки вакуумированием собирают амниотическую жидкость из амниотического пузыря.

5. Измельчают срезанные котиледоны резаньем, а затем в механическом гомогенизаторе добавляют ранее собранную из этой же матки амниотическую жидкость из расчета 10:1 гомогенной массы, медленно перемешивают и отстаивают, затем центрифугируют при 10 тыс. об/мин в течение 10 минут, осуществляют консервацию, надосадучную часть сливают во флаконы и укупоривают.

Препарат представляет собой жидкость беловатого цвета с желтоватым оттенком, что отвечает требованиям, предъявленным к лечебным препаратам.

Практическое испытание предлагаемого препарата

Сравнительную оценку способов практического применения предлагаемой нами мазевой 30% формы биологически-активного тканевого препарата, приготовленного способом гомогенизации и фракционирования из котиледонов и амниотической фракции, с 30% мазью биологически активного тканевого препарата, изготовленного способом в прототипе (авторское свидетельство RU 2148408 C1, 10.05.2000), которую готовили, соблюдая методику, предложенную Полковниковым P.M., который для гомогенизации цельной плаценты от стельных коров применял механический с электрическим приводом аппарат.

Мази готовили на ланолине (3:7), добавляя смешиванием 30% каждого испытуемого препарата. Колото-резаные и ожоговые раны смазывали ежедневно в течение 7 дней, а больным коровам в послеродовую шейку матки вводили 50-100 мл 30% мази.

Результат лечения животных, имеющих колотые и резаные ранения, препаратами из плацентарных тканей отражены в таблице 1, 2,

Таблица 1
Результаты лечения свинок с ранениями и ожогами.
Мазь 30%	Животных лечили	Из них выздоровело	Сроки лечения
(голов) 1 число	число	%
Котиледоновая	Резаные раны	4	80	5
Ожоговые раны 9	7	77,7	9
Цельная плацента КРС	Резаные раны 4	3	75	8
Ожоговые раны 9	5	71,4	10

Из таблицы 1 видно, что ожоговые раны под действием котиледонового препарата создают затягивание, купирование и заживление ожоговых ран у 77,7% больных на 5 дней раньше, чем при лечении ожоговых ран цельноплацентарным препаратом, т.е. лечение ожоговых ран предлагаемым препаратом в виде 30% мази после ежедневного смазывания было эффективнее на 6,3%, чем в контрольной группе животных.

Больным коровам с послеродовым цервицитом ежедневно в канал шейки матки вводил 100 мл 30% котиледоновой мази, Результаты лечения коров отражены в таблице 2.

Контрольной группе коров в шейку матки вводили 100 мл 30% мази из цельной плацентарной фракции.

Таблица 2
Эффективность лечебного препарата при лечении коров с заболеваниями шейки матки.
Препарат	Коров всего	Из них выздоровело	Сроки выздоровления (дни)
число	%
Мазь 30%, через 24 ч котиледоновый препарат	5	4	80	10
Цельноплацентарная мазь 30%	8	6	75

Из таблицы 2 видно, что лечебный положительный эффект проявили себя котиледоновая 30% мазь, которая оказалась эффективней на 5%, чем в контрольной группе больных коров.

Использованная литература

1. Патент США №4054648, МПК 6 А 61 к 35/50.

2. Беляев В.И., Нежданов А.Г., Лободин К.А., Семинихин И.П., Тюренков И.Т. «Биологическая активность препаратов из плаценты», Ветеринарная практика, №7 2006 г., стр.58-61 Журнал 3.

3. Полковников P.M. патент №RU 2148408 С1, 14.09.1999.

Способ получения биологически активного тканевого препарата на основе плаценты коров, включающий фильтрацию, измельчение, гомогенизацию, центрифугирование, отличающийся тем, что извлекают беременную матку в первой половине стельности (4-5 мес) в период нутровки стельных коров на скотобойне, выполняют продольный разрез серозно-мышечно-слизистого слоя беременного рога матки, собирают котиледоны путем снимания их с карункулов, сохраняя целостность ворсинок, срезая котиледоны кривыми стерильными ножницами с ткани детской плаценты, путем прокола иглой хориально амниотической оболочки вакуумированием собирают амниотическую жидкость из амниотического пузыря, измельчают срезанные котиледоны резаньем, а затем в механическом гомогенизаторе добавляют ранее собранную из этой же матки амниотическую жидкость из расчета 10:1 гомогенной массы, медленно перемешивают и отстаивают, затем центрифугируют при 10 тыс.об/мин в течение 10 мин, осуществляют консервацию, надосадочную часть сливают во флаконы и укупоривают.