Вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий
Владельцы патента RU 2406531:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет (RU)
Изобретение относится к области ветеринарной медицины. Вакцина содержит суспензии клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus faecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см3. Вакцина также содержит формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного от павших нутрий из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 24,0-29,0, суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного от павших нутрий из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 24,0-29,0, суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus faecalis, выделенного от павших нутрий из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 24,0-29,0, глюкоза 2,0-1,0, формалин 2,0-1,5, гидроокись алюминия остальное. Вакцина обладает высокой иммуногенной активностью, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении. 1 табл.
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.
Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88, 09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; протеи, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; клебсиелл, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ A61 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.
Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099084 от 30.09.94, МКИ А61 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteurella multosida ВГНКИ №6011, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл питательной среды, глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.).
Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции у нутрий, путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательное и побочное влияние.
Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий содержит суспензии клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см3, формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0-29,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0-29,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0-29,0 |
| Глюкоза | 2,0-1,0 |
| Формалин | 2,0-1,5 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясо-пептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.
Раздельное культивирование чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование баксырья формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов Streptococcus uberis, Pseudomonas aeruginosa и Enterococcus fecalis в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей Streptococcus uberis, Pseudomonas aeruginosa и Enterococcus fecalis, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу против трех опасных инфекционных болезней: стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г., представлены все необходимые сведения о микроорганизмах рода Enterococcus. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.
Методы выделения и характеристика псевдомонад описаны в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: Колос, 2001, на стр.259-261; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных» авторы: Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С., М.: ИзограФъ, 2005, на стр.522-525.
Методы выделения и характеристика стрептококков и энтерококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г., Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., М.: Колос, 1995, стр.90-95; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных» авторы: Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С., М.: ИзограФъ, 2005, на стр.246-257.
Предложенная вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.
Вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции нутрий Enterococcus fecalis, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по стрептококкозу, псевдомонозу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по стрептококкозу, псевдомонозу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см3, а взрослым животным по 1,5 см3. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-х месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см3, вторая - в дозе 1,5 см3. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.
К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.
Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.
Пример 1.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 66,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 22,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 22,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 22,0 |
| Глюкоза | 0,5 |
| Формалин | 1,0 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.
Пример 2.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 72,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0 |
| Глюкоза | 1,0 |
| Формалин | 1,5 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает достаточной иммуногенной активностью.
Пример 3.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 84,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 28,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 28,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 28,0 |
| Глюкоза | 1,7 |
| Формалин | 1,3 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.
Пример 4.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 87,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 29,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 29,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 29,0 |
| Глюкоза | 1,0 |
| Формалин | 1,5 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает высокой иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).
Пример 5.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 90,0, с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus uberis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 30,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 30,0 |
| Суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 30,0 |
| Глюкоза | 2,0 |
| Формалин | 1,5 |
| Гидроокись алюминия | Остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает иммуногенной активностью, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.
Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.
Вакцина ассоциированная против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий, отличающаяся тем, что содержит суспензии клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus uberis, псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus faecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см3, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| стрептококкоза Streptococcus uberis, | |
| выделенного от павших нутрий | |
| из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0-29,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, | |
| выделенного от павших нутрий | |
| из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0-29,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| энтерококковой инфекции Enterococcus faecalis, | |
| выделенного от павших нутрий | |
| из местного эпизоотического очага, | |
| в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 24,0-29,0 |
| глюкоза | 2,0-1,0 |
| формалин | 2,0-1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
