Способ выявления специфических антител к вирусу гриппа типа а у птиц


 


Владельцы патента RU 2407006:

Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхозакадемии) (RU)

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и эпизоотологии. Способ выявления специфических антител к вирусу гриппа типа А у птиц включает отбор, подготовку проб и исследование желтка яйца, путем проведения реакции задержки гемагглютинации (РЗГА) с последующим расчетом содержания специфических антител в сыворотке крови птицы с использованием коэффициента пересчета. Изобретение обеспечивает расширение арсенала диагностических методов для выявления специфических антител к вирусу гриппа у птиц. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, эпизоотологии, а именно к способам выявления специфических антител [AT] к вирусу гриппа [ВГ] типа A у птиц.

Известны способы выявления специфических AT к ВГ в сыворотке крови птицы с использованием тестов реакции задержки гемагглютинации [РЗГА] (Kilbourne, E.D. 1987. Influenza. Plenum Press, New York) и иммуноферментного анализа [ИФА] (Snyder, D.B., W.W.Marquardt, F.S.Yancey, P.K.Savage. 1985. An enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibody against avian influenza virus. Avian Dis. 29:136-44).

Однако данные тесты не позволяют проводить обнаружение AT к ВГ в желтке яйца.

Наиболее близким в техническом отношении и принятым за прототип является способ обнаружения AT к вирусу Ньюкаслской болезни птиц в желтке яйца с использованием тестов РЗГА и ИФА (Czifra G, М Nilsson, D.J.Alexander, R.Manvell, S.Kecskemeti, B.E.Engstrom. Detection of PMV-1 specific antibodies with a monoclonal antibody blocking enzyme-linked immunosorbent assay. Avian Pathol. 1996 Dec; 25(4): 691-703). Авторами показана устойчивая корреляция титра AT к вирусу Ньюкаслской болезни в желтке яйца с титром AT в сыворотке крови птицы.

Однако данные тесты не позволяют выявлять AT к ВГ птиц.

Задачей заявляемого решения является расширение арсенала диагностических методов для выявления специфических антител к вирусу гриппа у птиц.

Поставленная задача решается тем, что в способе выявления специфических антител к вирусу гриппа типа A у птиц, включающем исследование биоматериала от птицы в РЗГА, в качестве биоматериала используют желток яйца птицы.

Сущность изобретения заключается также в том, что полученный в РЗГА титр AT в желтке яйца пересчитывают в эквивалент титра AT в сыворотке крови с использованием коэффициента пересчета: 1,66 - для кур, 1,55 - для уток, при условии, что для исследования птицы использовали желток яйца 1-2-дневной кладки.

Способ осуществляют следующим образом.

Материал: 1-2-суточные яйца диких уток и гусей, кур. Для исследования использовали желток яиц.

Отбор материала: из гнезда/кладки отбирают 1-2 суточные яйца (с чистой скорлупой).

Подготовка проб желтка: желток яйца смешивают с фосфатно-солевым буфером [ФСБ] 0,01M pH 7,2 в соотношении 1:10.

Для постановки РЗГА реакцию проводят по следующему протоколу:

- в первую колонку лунок на планшете вносят по 0,5 мл смеси испытуемых проб 1:10 с ФСБ;

- в остальные лунки планшета вносят по 0,25 мл ФСБ;

- готовят последовательные двукратные разведения желтка яиц 1:20, 1:40… до 1:2660, путем перенесения 0,25 мл суспензии желтка из предыдущей лунки в последующую с предварительным ресуспендированием, 0,25 мл из последней лунки утилизируют;

- добавляют во все лунки 0,25 мл смеси, содержащей по 4 ГАЕ антигена ВГ. Дозу антигена 4 ГАЕ рассчитывают и контролируют по методике, описанной в «Методических указаниях по лабораторной диагностике болезни Ньюкасла и классической чумы птиц (гриппа птиц) - г.Покров, 1972». По данной же методике проводят контроль спонтанной агглютинации эритроцитов и контроль желтка на агглютинацию;

- встряхивают;

- экспозиция 30 минут при 18-22°C;

- добавляют во все лунки по 0,5 мл 1%-ной взвеси куриных/утиных эритроцитов;

- встряхивают;

- экспозиция при 18-22°C;

- учет реакции через 30,40 и 45 минут;

- за титр AT принимают максимальное разведение желтка яиц, которое обеспечило отсутствие агглютинации.

Для иллюстрации способа и обоснования расчета коэффициента пересчета титра AT в желтке яйца в титр AT в сыворотке крови приведены примеры:

Пример 1

Для оценки уровня корреляции титров антител в сыворотке крови и желтке яйца был проведен опыт. Для этого коммерческой вакциной против гриппа птиц типа A было однократно привито 20 домашних уток 2-3-летнего возраста и 20 кур-несушек. Через 25 дней после вакцинации от птиц, содержащихся изолированно, отобрали по одному 1-2-дневному яйцу (известно, что с возрастом яйца титр AT в его желтке снижается). Полученные пробы исследовали в РЗГА. Результаты исследований приведены в таблице 1.

Расчеты статистических величин проводили с использованием программы Microsoft Excel 2002.

Из данных, представленных в таблице 1, можно заключить, что AT к ВГ в желтке яйца обнаруживали во всех случаях их обнаружения в сыворотке крови, кроме тех случаев, когда титр AT в сыворотке крови был 2log2 и ниже. Данная закономерность подтверждена расчетом показателей коэффициентов корреляции содержания AT к ВГ в сыворотке крови и желтке яйца для кур и уток, равных 0,92 и 0,94 соответственно. Для определения коэффициентов пересчета содержания AT в желтке яйца в титр AT в сыворотке крови рассчитаны средние арифметические величины и определена достоверность их разницы на основании критерия Стьюдента. Коэффициентом пересчета принято частное титра AT в сыворотке крови и титра AT в желтке яйца: 1,66 - для кур и 1,55 - для уток.

Приведенные результаты исследований показывают, что использование желтка яйца в качестве биоматериала для выявления содержания у домашних кур и уток AT, специфических к ВГ, воспроизводит результаты серологического исследования птиц с использованием в качестве материала сыворотки крови.

Пример 2

Для проведения исследований в Чановской озерной системе НСО было отловлено 100 особей птиц рода (Anas) речные утки: 35 - вида Кряква, 25 - Шилохвость, 20 - Чирок-свистунок, 15 - Серый гусь, 5 - Свиязь. Отлов проводили при взлете с гнездовья, с последующим отбором у птиц проб крови и 1-2-дневного яйца из кладки. Сыворотку крови и желток яиц исследовали в РЗГА на наличие антител к ВГ типа А. Из 100 исследованных в РЗГА птиц антитела к гриппу в сыворотке крови выделили у 9 особей, желтки 8 яиц, добытых из кладки, этих птиц содержали антигемагглютинины [аГА]. Результаты исследований приведены в таблице 2.

Данные, представленные в таблице 2, подтверждают полученный ранее коэффициент корреляции титров AT к ВГ в сыворотке крови и желтке яйца - 0,94, а также коэффициент пересчета титра AT к ВГ типа A в желтке яйца в титр AT в сыворотке крови - 1,54; следовательно, и то, что использование желтка яйца в качестве биоматериала для выявления содержания у птиц AT, специфических к ВГ, воспроизводит результаты серологического исследования диких уток с использованием в качестве материала сыворотки крови.

Таблица 2
Корреляция титра специфических AT к вирусу гриппа типа A в желтке яиц и сыворотке крови птиц рода (Anas) речные утки
вид материала номер птицы среднее арифметическое, M±m* коэффициент корреляции титра AT в сыворотке крови и желтке яйца, r коэффициент пересчета титра AT в желтке в титр AT в сыворотке крови
1 2 3 4 5 6 7 8 9
титр антител log2
сыворотка крови 5 2 3 5 7 6 5 4 3 4,44±0,53 0,94 1,54
желток яиц 4 - 2 3 5 4 3 3 2 2,89±0,48
Примечание: (-) - антигемагглютинины в исследованном материале не выявлены;
* - разница средних величин достоверна (Р<0,05).

1. Способ выявления специфических антител (AT) к вирусу гриппа типа А у птиц, включающий исследование биоматериала от птицы в реакции задержки гемагглютинации (РЗГА), отличающийся тем, что в качестве биоматериала используют желток яйца птицы.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что полученный в РЗГА титр AT в желтке яйца пересчитывают в эквивалент титра AT в сыворотке крови с использованием коэффициента пересчета: 1,66 - для кур, 1,55 - для уток, при условии, что для исследования птицы использовали желток яйца 1-2-дневной кладки.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности к нейроинфекционной патологии, и может быть использовано для прижизненной диагностики церебральных васкулитов в остром периоде заболевания при нейроинфекциях у детей.

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и терапии, может быть использовано для уточнения прогноза течения язвенной болезни желудка (ЯБЖ). .
Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярно-генетическим исследованиям. .
Изобретение относится к медицине, а именно к выявлению редких труднокультивируемых форм возбудителей воспалительных заболеваний органов дыхания. .

Изобретение относится к медицине и касается способа определения в репродуктивной системе женщин момента появления окна овуляции и его продолжительности. .
Изобретение относится к иммунологии и аллергологии, в частности к моделированию аллергии при стафилококкозе, и может быть использовано для определения аллергенной активности, контроля, стандартизации стафилококкового аллергена, изучения процессов аллергических реакций.
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. .

Изобретение относится к измерительной технике, а именно к фотометрии для контроля агрегационной способности частиц коллоидных систем в широких областях техники. .
Изобретение относится к медицине, экспериментальной биологии, экологии, токсикологии и может быть использовано при исследовании патогенетических механизмов токсического действия тяжелых и цветных металлов, в частности никеля, на функциональное состояние почек.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для прогнозирования в ранние сроки лечения развития затяжного (медленно разрешающегося) течения у больных с тяжелой формой внебольничной пневмонии
Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для морфологической диагностики степени тяжести гестоза
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования

Изобретение относится к области медицины, а именно к нейроинфекциям

Изобретение относится к акушерству и предназначено для прогнозирования преждевременных родов инфекционного генеза

Изобретение относится к области медицины и касается способа выбора медикаментозной терапии метаболического синдрома у детей и подростков

Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, а именно к технике оценки иммунного статуса у животных
Изобретение относится к области медицины, а именно к эндокринологии
Наверх