Средство, обладающее гипогликемическим действием, способностью повышать физическую выносливость и подавлять аппетит
Владельцы патента RU 2407536:
Открытое акционерное общество Завод экологической техники и экопитания "ДИОД" (RU)
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства, обладающего гипогликемическим действием, повышающее физическую выносливость и подавляющее аппетит. Данное средство представляет собой водный экстракт свежих листьев бадана Bergenia crassifolia, которые перед экстрагированием подвяливают при температуре 50°С (потеря влаги около 30%), затем измельчают, далее ферментируют 24-120 часов при температуре 20-45°С и сушат. Средство расширяет арсенал средств, обладающих гипогликемическим действием, повышающих физическую выносливость и подавляющих аппетит. 5 табл., 3 ил.
Изобретение относится к области фармации, а именно к созданию средства на основе зеленых листьев бадана, обладающего гипогликемическим действием, повышающего физическую выносливость и подавляющего аппетит.
Для создания препаратов на основе бадана в большинстве случаев используются листья после их естественного увядания и ферментации в природных условиях. Черные листья бадана используют для приготовления так называемого «чагирского» или «монгольского» чая (Ж. Наука и жизнь, №7, 1978 г., с.159). Из черных листьев бадана запатентован способ получения чая (патент RU 2168904, опубл. 20.06.2001). Сухие черные листья бадана 1-3-летней давности подвергают замачиванию в воде с температурой 18-25°C в течение 8-24 ч, после чего воду сливают, а листья измельчают до размеров частиц 4-9 мм. После этого их подвергают дополнительной искусственной ферментации при поддержании относительной влажности 95-100% в течение 24-48 ч, после чего проводят термообработку полуфабриката при температуре 90-100°C до влагосодержания 7-9%. Высушенный полуфабрикат измельчают до размеров частиц 1,5-2,0 мм, просеивают через сито и полученный порошок подвергают брикетированию при давлении 10,0-15,0 МПа.
Черные листья бадана входят в состав комплексного средства, обладающего противовоспалительной активностью (патент RU 2331429 С1, опубл. 20.08.2008).
Альтернативой ферментации в природных условиях служит искусственная ферментация, которая позволяет ускорить процесс получения препаратов.
Задачей настоящего изобретения является создание препарата из листьев бадана с помощью искусственной ферментации, обладающего гипогликемическим действием, способностью повышать физическую выносливость и подавлять аппетит при отсутствии побочных эффектов.
Поставленная задача решается созданием средства, обладающего гипогликемическим действием, способностью повышать физическую выносливость и подавлять аппетит, которое представляет собой водный экстракт свежих листьев бадана Bergenia crassifolia, которые перед экстрагированием подсушивают при температуре 50°C (потеря влаги около 30%), измельчают, ферментируют 24-120 часов при температуре 20-45°C и сушат.
Способ приготовления экстракта.
Свежие листья бадана B. crassifolia обрабатывали следующим образом: подвяливали при температуре 50°C (потеря влаги около 30%), затем измельчали, ферментировали 24-120 часов при температуре 20-45°C и сушили. После сушки образец при необходимости измельчали. Затем получали водные экстракты в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI (вып.2).
Содержание основных идентифицированных биологически активных веществ (БАВ) в исследуемом экстракте бадана определяли методом ВЭТСХ в системе растворителей толуол/этилацетат/муравьиная кислота/метанол (3:3:0,8:0,2, по объему) методом прямой денситометрии при 280 нм (Pozharitskaya O.N., Ivanova S.A., Shikov A.N. et al. Separation and evaluation of free radical-scavenging activity of phenol components of green, brown and black leaves of Bergenia crassifolia by using HPTLC-DPPH» method // J Sep Sci. - 2007. - Vol.30, №15. - P.2447-2451).
Содержание основных биологически активных веществ, идентифицированных в водных сухих экстрактах листьев бадана, представлено в таблице 1.
| Таблица 1 | |
| Содержание БАВ, % | Экстракт |
| Выход (с учетом механических потерь) | 42,9 |
| Арбутин | 1,5 |
| Бергенин | 0,6 |
| Эллаговая кислота | 0,5 |
| Галловая кислота | 2,6 |
| Протокатеховая кислота | 0,1 |
| Гидрохинон | 4,0 |
Влияние экстракта бадана на физическую выносливость (актопротекторное действие), массу тела, уровень глюкозы и лактата в крови.
Для исследования влияния экстракта бадана на физическую работоспособность использовали метод принудительного плавания мышей до утопления с грузом, составляющим 5% от массы тела (плавательный тест). Использовали белых нелинейных мышей (самцы). Каждая группа состояла из 9 животных. Экстракт вводили ежедневно внутрижелудочно в течение 7-ми дней. На 7-й день через 2 часа после введения препарата проводили плавательный тест. Влияние экстракта бадана на физическую выносливость, массу тела и уровень глюкозы в крови представлены в таблице 2.
| Таблица 2 | |||
| Группа животных | Длительность плавания, с | Масса животных, г | Глюкоза, моль/л |
| Интактные животные | 519±153 | 25,1±1,0 | 10,7±1,1 |
| Экстракт | 752±106 | 20,6±0,5 | 3,1+1,0 |
На основании полученных данных можно сделать вывод, что экстракт способствует увеличению физической выносливости животных на 45%, при этом наблюдали снижение веса тела животных на 20%.
Биохимические показатели крови (концентрация глюкозы) отражают энергетический баланс организма и его изменения после физической нагрузки. Поступление глюкозы в кровь при физической нагрузке у интактных животных характеризует высвобождение глюкозы из гликогена в печени, однако утилизация глюкозы при этом недостаточна. Исследуемый экстракт способствовал значительному снижению уровня глюкозы.
Влияние экстрактов бадана на аппетит.
Эксперименты проведены на крысах-самках линии Wistar, вес к началу исследования 320-370 г, возраст 6-8 месяцев.
1. Животных размещали в клетках по 3 особи. Кормушки наполняли стандартным кормом. Обеспечивали достаточное количество жидкости.
2. Спустя 2 недели животных взвешивали и наполняли кормушки стандартным кормом и «диетой кафетерия». Регистрировали потребление пищи и вес на протяжении 23 дней.
3. Через 14 дней от начала «диеты кафетерия» вводили исследуемый образец экстракт бадана. Экстракт вводили ежедневно, однократно в одно и то же время суток, в течение 8-ми дней. Разовая доза составляла 50 мг/кг.
4. На 9-й день после начала введения исследуемого образца животных лишали пищи на период 18 часов.
5. Через 18 часов еще раз вводили исследуемый препарат и плацебо. Сразу после этого предварительно взвешенный корм помещали в клетку. Оставшуюся пищу взвешивали через 30, 90 минут, 3, 6 часов после помещения кормушки в клетку.
Рацион вивария представлял собой сухой гранулированный корм по 33,2 г на 1 животное с общей калорийностью на 1 животное 102,8 ккал. «Диета кафетерия» содержала 25-35% жиров и 25-30% легкоусвояемых углеводов в дополнение к стандартному рациону грызунов.
Калорийность питания групп, получавших «диету кафетерия», по сравнению с интактной группой была выше на 23%.
Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемого препарата в граммах представлена в таблице 3.
| Таблица 3 | |||
| День эксперимента | Интактные | Контроль | Экстракт |
| 1 | 22,6±0,2 | 23,0±1,8 | 21,8±0,7 |
| 2 | 26,4±1,2 | 26,2±1,2 | 18,6±1,8 |
| 3 | 27,3±0,6 | 21,2±1,1 | 28,0±0,8 |
| 4 | 19,3±0,6 | 26,0±0,6 | 18,8±0,5 |
| 5 | 23,0±0,6 | 24,6±1,3 | 20,8±1,5 |
| 6 | 26,9±0,1 | 24,0±0,8 | 22,1±1,2 |
| 7 | 27,1±0,7 | 28,3±1,0 | 23,4±1,7 |
| 8 | 21,0±0,8 | 29,2±0,6 | 24,8±1,8 |
| 9 | 23,4±1,1 | 29,9±0,5 | 28,6±1,0 |
| 10 | 23,7±0,8 | 31,2±0,6 | 23,9±1,4 |
| 11 | 28,0±1,2 | 31,5±0,8 | 21,9±1,1 |
| 12 | 19,7±0,3 | 30,1±0,9 | 25,7±1,2 |
| 13 | 23,6±0,3 | 28,2±1,2 | 21,5±1,1 |
| 14 | 24,8±1,1 | 26,5±1,9 | 20,8±0,2 |
| 15 | 22,5±0,8 | 25,4±1,5 | 19,4±0,6 |
| 16 | 19,4±0,8 | 27,0±0,8 | 17,0±0,3 |
| 17 | 27,8±0,7 | 24,5±1,5 | 17,2±0,6 |
| 18 | 28,1±1,4 | 25,7±1,5 | 18,1±1,1 |
| 19 | 21,9±0,7 | 29,9±1,8 | 18,4±0,3 |
| 20 | 27,8±1,5 | 27,3±1,5 | 16,6±0,6 |
| 21 | 31,6±1,1 | 27,8±1,9 | 19,5±2,8 |
| 22 | 27,8±1,5 | 27,3±1,5 | 16,6±0,6 |
| 23 | 31,6±1,1 | 27,8±1,9 | 19,5±2,8 |
| Среднее потребление с 8 по 14 дни | 23,2 | 30,0 | 24,4 |
| Среднее потребление с 16 по 23 дни | 25,5 | 26,8 | 18,4 |
| Δ между средними | -2,3 | +3,2 | +6,0 |
Из представленных данных следует, что на фоне применения «диеты кафетерия» отмечалось увеличение потребления пищи животными, которое носило устойчивый характер: начиная с 8-х суток потребления «диеты кафетерия» во всех группах по сравнению с животными, находящимися на стандартной диете (интактная группа), в 1,2-1,4 раза.
Введение экстракта приводило к снижению аппетита у животных: экстракт способствовал уменьшению потребления пищи через 23 дня на 31%.
Следующим этапом исследования было изучение влияния препарата на аппетит после голодания.
После 18-ти часового голодания животным был возвращен корм, массу потребленного корма регистрировали через 30, 90 минут, 3 и 6 часов. Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» после 18-ти часового голодания и применения исследуемых препаратов в граммах представлены в таблице 4.
| Таблица 4 | ||||
| Группы | 30 мин | 90 мин | 3 часа | 6 часов |
| Интактные | 2,6±0,1 | 2,3±0,2 | 2,1±0,0 | 3,0±0,3 |
| Контроль | 4,8±0,9 | 3,5±0,3 | 3,1±0,5 | 2,5±0,5 |
| Экстракт | 3,3±0,4 | 3,0±0,5 | 2,9±0,4 | 3,2±0,5 |
Между интактной и контрольной группами животных была установлена существенная разница в потреблении корма (табл.4). Контрольные животные через полчаса после возвращения корма в кормовое углубление клетки потребляли корма на 85% больше, чем интактные животные. Через 90 минут разрыв между контрольной и интактной группами сократился до 52%, через 3 часа до 48%, через 6 часов обе группы потребляли уже практически одинаковое количество пищи.
На фоне применения экстракта наблюдалась тенденция к снижению аппетита у животных во всех временных точках: через 30 мин на 31%, через 90 мин на 14%, через 3 ч - на 7%.
Таким образом, экстракт бадана обладает способностью существенно снижать аппетит.
Влияние экстракта на углеводный обмен.
Кровь для определения уровня глюкозы забирали пять раз: до начала «диеты кафетерия», на 9 и 15 день «диеты кафетерия» (до начала введения препарата), до и после голодания. Каждый забор крови включал в себя построение сахарной кривой (кровь забиралась натощак, после этого внутрижелудочно вводили раствор глюкозы из расчета 1 г/кг, после чего кровь отбирали через 1 и 2 часа). Был исследован уровень глюкозы «натощак» и после сахарной нагрузки глюкозо-толерантный тест. Концентрация глюкозы в крови животных в ммоль/л на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемых препаратов представлена в таблице 5.
| Таблица 5 | ||||
| Дни эксперимента | Часы | Интактные | Контроль | Экстракт |
| 1 день | 0 | 2,7±0,2 | 3,4±0,3 | 1,5±0,4 |
| 1 | 2,8±0,4 | 2,8±0,4 | 3,3±0,4** | |
| 2 | 2,9±0,2 | 3,8±0,4 | 5,0±0,7* | |
| 9 день | 0 | 1,9±0,2 | 2,6±0,2 | 3,0±0,1 |
| 1 | 2,4±0,3 | 2,8±0,1 | 3,5±0,3 | |
| 2 | 0,2±0,1** * | 0,7±0,3* | 1,6±0,3** * | |
| 15 день | 0 | 3,2±0,3 | 2,9±0,3 | 3,7±0,3 |
| 1 | 4,3±0,3 | 6,0±0,9* | 3,4±0,2 | |
| 2 | 3,1±0,8 | 8,1±1,0* | 5,2±0,5** * | |
| 23 день | 0 | 2,2±0,3 | 2,4±0,3 | 2,6±0,3 |
| 1 | 3,5±0,3 | 6,6±0,6* | 4,5±0,3* | |
| 2 | 3,1±0,2* | 10,3±1,4** * | 7,9±0,5** * | |
| 24 день | 0 | 1,7±02 | 2,1±0,6 | 1,2±0,3 |
| 1 | 3,5±0,2* | 6,8±0,5* | 4,2±0,1* | |
| 2 | 3,0±0,4 | 12,1±0,8** * | 6,4±0,8** * |
| Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 0 часом регистрации глюкозы (натощак); ** * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 1 часом регистрации глюкозы (натощак). |
Изменение уровня глюкозы у группы интактных животных, ммоль/л, показано на фиг.1. У интактных животных уровень глюкозы изменялся в пределах физиологической нормы, в ответ на сахарную нагрузку почечный порог (10 ммоль/л) не был превышен.
Изменение уровня глюкозы у группы контрольных животных, ммоль/л, показано на фиг.2. К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных было отмечено повышение уровня глюкозы в плазме крови через 1 и 2 часа после сахарной нагрузки, что характеризует нарушенную толерантность к глюкозе и является фактором риска для развития сахарного диабета II типа. К концу исследования (23 и 24 день) у животных контрольной группы наблюдалось устойчивое нарушение толерантности к глюкозе с повышением уровня глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки выше почечного порога.
Изменение уровня глюкозы у группы животных, получавших экстракт бадана, ммоль/л, показано на фиг.3. В группах животных, получавших сухой экстракт бадана на фоне «диеты кафетерия» в первые пятнадцать дней пребывания на диете, сахарная кривая практически не отличалась от уровня интактных животных. При проведении сахарной нагрузки на вторые сутки наблюдали снижение содержания глюкозы в крови при применении экстракта: через 1 ч - 32%, через 2 ч - 23%. К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных этой группы было отмечено незначительное повышение уровня глюкозы в плазме крови через 2 часа после сахарной нагрузки в группе. К концу эксперимента у животных, получавших экстракт листьев бадана, уровень глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки не превышал почечного порога.
Таким образом, экстракт обладает способностью подавлять аппетит, повышает физическую выносливость и оказывает гипогликемическое действие.
Средство, обладающее гипогликемическим действием, способностью повышать физическую выносливость и подавлять аппетит, характеризующееся тем, что оно представляет собой водный экстракт свежих листьев бадана Bergenia crassifolia, которые перед экстрагированием подвяливают при температуре 50°С (потеря влаги около 30%), затем измельчают, далее ферментируют 24-120 ч при температуре 20-45°С и сушат.
