Способ выявления группы риска генетических мутаций и пролиферации у пациенток с доброкачественными узловыми образованиями молочной железы, в которой может развиться рак

Изобретение относится к области медицины, а именно к маммологии, и касается способа выявления группы риска генетических мутаций и пролиферации у пациенток с доброкачественными узловыми образованиями молочной железы, в которой может развиться рак. Сущность способа заключается в том, что в венозной крови пациенток, взятой в 1-ю фазу менструального цикла без добавления гепарина в качестве антикоагулянта, определяют титры Р-белков клеточных мембран эритроцитов. Для этого проводят реакцию агглютинации с антиР-сывороткой кролика, иммунизированного эритроцитами человека первой (0)Rh+ группы крови. При титре Р-белков клеточных мембран эритроцитов 1:1280 выявляют группу риска пролиферации, а при титре Р-белков клеточных мембран эритроцитов 1:2560 - 1:10240 выявляют группу риска с генетическими мутациями, в которых может развиться рак молочной железы. Использование способа позволяет провести выявление ранних (доклинических) отклонений общих регуляторно-адаптационных резервов при патологических состояниях молочной железы и молекулярно-генетических мутациях, способных привести к развитию рака молочной железы. 8 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к маммологии, и может быть использовано для своевременного выявления начальных проявлений рака молочной железы (патологической пролиферации).

Известен способ определения рака молочной железы путем определения моноклонального антитела СА 15-3 отбором из группы, его измерения и определения присутствия или отсутствия болезни, стадии болезни и эффективности лечения (патент СА 2478036, опублик. 18.09.2003 г.). Но данный способ является недостаточно информативным, поскольку не охватывает все белковые комплексы, изменяющиеся при развитии рака молочной железы.

Известен способ получения моноклонального антитела тимидин киназы, включающий определение белков сыворотки пациентки с проведением реакции агглютинации. Указанное моноклональное антитело используется для диагностики образцов тканей опухолей пациентов, для анализирования вероятности повторения опухоли (патент СА 2173834, опублик. 16.02.1995).

Недостатком этого способа является то, что он не позволяет произвести выявление патологической пролиферации и генетических мутаций при различных нозологических состояниях молочной железы, не содержит исследования эритроцитов, всех рецепторных белков мембраны клетки эритроцита и не использовался у пациенток с наличием генетических мутаций.

Техническим результатом, на который направлено данное изобретение, является выявление ранних (доклинических) отклонений общих регуляторно-адаптационных резервов путем исследования роста концентрации Р-белков в биологических жидкостях при патологических состояниях и молекулярно-генетических мутациях генов BRCA 1 и BRCA2.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе выявления патологической пролиферации и генетических мутаций при различных нозологических состояниях молочной железы, включающем определение белков сыворотки пациентки с проведением реакции агглютинации, реакцию агглютинации проводят с эритроцитами и дополнительно исследуют все рецепторные белки (Р-белки) клеточных мембран эритроцитов пациентки путем проведения реакции агглютинации с антиР-сывороткой кролика, полученной при иммунизации кролика эритроцитами донора первой группы (0)Rh+группы крови, и осуществляют контроль проведенных реакций с тест-системой донора первой (0)Rh+группы крови, причем контроль содержания рецепторных белков (Р-белков) сыворотки донора осуществляют путем добавления к ней эритроцитов кролика, иммунизированного эритроцитами донора (0)Rh+группы крови, а контроль содержания рецепторных белков (Р-белков) эритроцитов донора осуществляют добавлением антиР-сыворотки кролика, при этом

- при нормальном состоянии молочной железы (подтвержденном клинико-рентгеномаммографическим исследованием), то есть при отсутствии патологической пролиферации и генетических мутаций, титры рецепторных белков (Р-белков) клеточных мембран эритроцитов у пациентки и у донора составляют 1:80 - 1:320, а титры Р-белков сыворотки - 1:8000 - 16000;

- при диффузной мастопатии, подтвержденной при клинико-рентгеномаммографическом исследовании, и отсутствии генетических мутаций, подтвержденных молекулярно-генетическим исследованием, титры Р-белков клеточных мембран эритроцитов составляют 1:640 - 1:1280, а титры Р-белков сыворотки 1:32000 - 1:64000;

- при наличии диффузной мастопатии, выявленной при клинико-рентгеномаммографическом исследовании, и наличии генетической мутации (полной или частичной генов BRCA1, BRCA2 и СНЕК2, всех вместе или каждого по отдельности). подтвержденной молекулярно-генетическим исследованием, титры Р-белков клеточных мембран эритроцитов составляют 1:2560 - 1:10240, а титры Р-белков сыворотки - 1:8000 - 1:16000;

- при узловой мастопатии, выявленной при клинико-рентгеномаммографическом исследовании, и наличии генетической мутации (полной или частичной генов BRCA1, BRCA2 и СНЕК2, всех вместе или каждого по отдельности), подтвержденной молекулярно-генетическим исследованием, титры Р-белков эритроцитов составляют 1:2560 - 1:10240, а титры Р-белков сыворотки - 1:8000 - 1:16000;

- при раке молочной железы, выявленном при клинико-рентгеномаммографическом исследовании и подтвержденном гистологическим исследованием (после хирургического лечения), и отсутствии генетических мутаций, подтвержденных молекулярно-генетическим исследованием, титры Р-белков клеточных мембран эритроцитов составляют 1:1280, а титры Р-белков сыворотки 1:32000;

- при раке молочной железы, выявленном при клинико-рентгеномаммографическом исследовании и подтвержденном гистологическим исследованием (после хирургического лечения), и наличии мутаций, по результатам молекулярно-генетического исследования, титры Р-белков эритроцитов составляют 1:2560 - 1:10240, а титры Р-белков сыворотки 1:8000 - 1:16000.

А также тем, что выявление нормального состояния (отсутствия диффузной мастопатии, узловой мастопатии и рака) молочной железы осуществляют путем рентгеномаммографии.

А также тем, что выявление генетических мутаций осуществляют путем конформационно-чувствительного электрофореза с последующим подтверждением наличия вариаций в последовательности белков путем секвенирования отдельных участков и их соединения с участками с известной последовательностью белков.

На фиг.1 представлен диагностический ряд титров Р-белков эритроцитов при раке молочной железы (РМЖ) и при нормальном состоянии молочной железы;

на фиг.2 - изменение титров Р-белков эритроцитов при диффузной и узловой мастопатии в сравнении с нормой;

на фиг.3 - заболеваемость молочной железы в зависимости от возраста у женщин, прошедших определение титров Р-белков сыворотки и эритроцитов;

на фиг.4 - титры Р-белков сыворотки в зависимости от состояния молочной железы;

на фиг.5 - титры Р-белков эритроцитов в зависимости от состояния молочной железы;

на фиг.6 - данные для расчета углового критерия Фишера для оценки различий титров Р-белков сыворотки в группе РМЖ до лечения и нормального состояния молочной железы (группа контроля);

на фиг.7 - титры Р-белков эритроцитов и сыворотки при молекулярно-генетических изменениях у женщин, перенесших РМЖ;

на фиг.8 - титры Р-белков эритроцитов, сыворотки и результаты молекулярно-генетических исследований у женщин с онкологической наследственностью (РМЖ у матери) в 2002 г.

Опыт использования иммунологических тестов, к которым относится определение титров рецепторных белков (Р-белков), в смежных областях медицины показал их эффективность в раннем распознавании патологических состояний во время целенаправленных профилактических осмотров. Р-белки, расположенные на мембранах клеток и «плавающие» в жидкостях (крови и лимфе) в результате катаболического распада клеточных рецепторов различной специфичности обеспечивают важнейшие механизмы поддержания биологического равновесия на уровне клетки и организма в целом [2].

У женщин, беременность и роды которых протекают с осложнениями, в сыворотке увеличивается содержание Р-белков и отмечается снижение альбумина до 92%, что служит признаком обострения хронических инфекционных заболеваний [10].

У детей грудного возраста выявлено изменение плотности содержания Р-белков на клеточной мембране в зависимости от вида вскармливания и тяжести заболевания. Отмечены изменения содержания Р-белков при операционном стрессе [7].

В эксперименте показано тормозящее влияние продуктов катаболизма клеточных рецепторов на интерфероногенез, бласттрансформацию и транспорт ионов в лимфоцитах при вирусном канцерогенезе, в результате чего выявлена взаимосвязь концентрации Р-белков с гормонально-метаболическими показателями СТГ, АКТГ, кортизолом, цАМФ и цГМФ, нарушением функциональной активности щитовидной железы - низким уровнем ТТГ и снижением конверсии Т4 в более активный Т3, что приводило к задержке роста и массы тела детей. Р-белки способны подавлять фагоцитарную активность макрофагов. Наличие специфических рецепторов к медиаторам и гормонам, супероксид-дисмутазная активность отражает их участие в снижении уровня активного кислорода и повышении вязкости клеточной мембраны. Рост концентрации Р-белков в биологических жидкостях при патологических состояниях позволяет прогнозировать степень тяжести патологического процесса и оценивать эффективность лечебных мероприятий [9].

Автором был проведен анализ информативности титра Р-белков в сыворотке при доброкачественных и злокачественных заболеваниях молочной железы у женщин в 1992 г. [11]. В 2009 г. показана возможность формирования группы риска генетических мутаций, на основе изменения титра Р-белков эритроцитов крови пациенток при скрининге и мониторинге группы риска.

Метод определения Р-белков основан на реакции гемагглютинации (А.Я.Кульберг, 1985). Из сыворотки здоровых доноров методом препаративной химии на базе Института микробиологии им Н.Ф.Гамалеи получили препарат Р-белков высокой степени чистоты, который использовали для иммунизации кроликов. Забор крови у пациенток осуществлялся в 1-ю фазу менструального цикла с параллельным определением базальных гормонов, гематологических и биохимических показателей крови. Добавление к эритроцитам пациентки анти-Р-сыворотки кролика вызывало реакцию гемагглютинации, скорость которой зависела от количества рецепторных белков на мембране эритроцитов пациентки. В сыворотку пациентки добавляли эритроциты кролика, иммунизированного эритроцитами человека первой (0)Rh+группы крови, что позволяло наблюдать реакцию торможения агглютинации эритроцитов кролика при наличии Р-белков в сыворотке пациентки. Реакция прямой и непрямой (торможения) агглютинации с кровью донора, антиР-сывороткой и эритроцитами кролика, служила тест-системой.

Определение Р-белков в сыворотке крови и других биологических жидкостях основано на использовании антиР-сыворотки с известной аминокислотной последовательностью клеточных рецепторов различной специфичности. А.Я.Кульбергом (1987 г.) были установлены участки с высокой степенью консервативности первичной структуры, сходные у разнообразных клеточных рецепторов. Эти участки были воспроизведены в форме синтетических пептидов и использованы для иммунизации с целью получения антиР-сыворотки.

Метод определения Р-белков основан на оценке степени блокирования стандартного количества антиР-сыворотки Р-белком, содержащимся в исследуемой пробе. С целью оценки степени ингибирования используются два метода: метод непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) и метод торможения реакции гемагглютинации.

Ввиду простоты и широкой доступности метода торможения гемагглютинации он получил к настоящему времени широкое распространение, что служит основанием для его применения.

Эмпирическим путем было установлено, что кроличья сыворотка, взаимодействующая с Р-белками человека и полученная, как указано выше, агглютинирует Rh+эритроциты человека первой (0)Rh+группы крови.

Этот принцип был положен в основу метода количественного определения Р-белков в реакции торможения гемагглютинации. Агглютинирующие свойства антиР-сыворотки не являются результатом взаимодействия содержащихся в ней иммуноглобулинов с антигенами собственно эритроцитов и групповыми веществами крови. Об этом свидетельствуют следующие факты. Ввиду использования эритроцитов первой (0) Rh+группы крови реакция с естественными гемагглютининами человека исключается. С другой стороны, были проведены специальные эксперименты с целью сравнения специфичности антиР-сыворотки кролика и сыворотки кролика, иммунизированного эритроцитами человека. Эти опыты показали, что Р-белки человека не блокируют реакцию агглютинации между эритроцитами человека и анти-эритроцитарной сывороткой кролика.

Все необходимые реагенты доступны и могут быть получены в достаточном количестве.

Определение Р-белков у человека можно проводить как в сыворотке (венозная кровь), так и в плазме (капиллярная кровь, пальцевая проба). Если использовать капиллярную кровь (пальцевую пробу), следует соблюдать определенные правила: 0,05 мл крови из пальца берут в 0,45 мл предварительно разведенного в 4 раза раствора «Глюгицир». тщательно перемешивают и центрифугируют 10 мин при 2000-2500 об/мин. Кровь можно брать автоматической пипеткой, СОЭ-метром. Надосадочная жидкость (плазма, разведенная в 10 раз) используется для определения Р-белка.

Сыворотку крови получают общепринятым способом после взятия крови из вены. Пробы сыворотки и плазмы необходимо хранить в замороженном виде без добавления каких-либо консервантов. Использование гепарина в качестве антикоагулянта при взятии крови для определения Р-белка не рекомендуется.

Как показали исследования, выполненные Л.Ф.Воробьевой с соавторами [8], проводившими определение Р-белка одновременно в венозной и капиллярной крови у одних и тех же лиц, титр Р-белка в венозной крови больше на одно-два разведения, чем в капиллярной. Это обстоятельство следует учитывать при сравнении результатов [2].

Уровень Р-белков как в сыворотке, так и в плазме зависит от эмоционального состояния человека. При остром эмоциональном напряжении (фрустрации) титр Р-белка значительно возрастает у части субъектов спустя 24 часа после событий, приведших к эмоциональной дестабилизации [6]. Непосредственно после эмоционального напряжения и в последующие 1-2 часа изменения Р-белков в плазме крови статистически незначимы. Простым опросом обследуемого врач может установить возможный вклад эмоционального состояния в изменение Р-белков. Следует особо подчеркнуть, что наибольшие сдвиги при эмоциональном напряжении существенно меньше, чем при разнообразных патологических процессах. Хорошо известно бытовое распределение людей на «жаворонков» и «сов». Это находит свое отражение в колебаниях уровня Р-белка у одних и тех же лиц в утренние и вечерние часы. По данным Л.Ф.Воробьевой и др., у «жаворонков» уровень Р-белков в утренние часы на 1-2 разведения ниже, чем в вечерние, а у «сов» наблюдается обратное [2]. Отсутствие разницы в уровне Р-белков в утренние и вечерние часы отражает наличие патологического процесса, в том числе и скрытого. Это открывает дополнительные возможности при диспансерном обследовании.

Средние показатели титра Р-белка у здорового взрослого населения являются величиной достаточно постоянной и мало зависимой от возраста и национальной принадлежности. Однако при проведении массовых обследований в различных регионах всегда следует проводить также обследование здоровых доноров.

Обратная зависимость уровня Р-белков от парциального давления кислорода в биологических жидкостях организма обусловлена, возможно, принадлежностью Р-белков к ферментам, регулирующим уровень активного кислорода в среде [3]. Как известно из энзимологии, избыток субстрата служит ингибитором каталитической активности фермента. Рассмотренное предположение крайне значимо также для понимания механизма реакции, используемой для определения Р-белков. Она не имеет прямой аналогии с общеизвестными серологическими реакциями и сходна с методами иммуноэнзимологии: ингибирование фермента иммунной сывороткой и антителами [4].

Метод определения Р-белков в сыворотке (плазме) крови подробно описан в «Методических рекомендациях по определению Р-белков в сыворотке (плазме) крови человека» [5].

Способ выявления пролиферации и генетических мутаций при различных нозологических состояниях молочной железы осуществляется следующим образом.

Определение титров рецепторных белков (титров Р-белков) эритроцитов и титров рецепторных белков (титров Р-белков) сыворотки проводилось одновременно. Для контроля качества реакции ставилась тест-система.

Основные этапы определения Р-белка в реакции ингибиции гемагглютинации сводились к следующему.

1. Проводится подбор рабочего разведения антиР-сыворотки кролика. Рабочим разведением анти-Р-сыворотки следует считать то разведение, которое с эритроцитами человека дает агглютинацию, оцениваемую в ++, т.е. то разведение сыворотки, которое вызывает агглютинацию эритроцитов, отчетливо отличающуюся от контроля (физиологический раствор + 4% суспензия эритроцитов).

2. Затем проводят ингибицию тест-системы исследуемой сывороткой, плазмой или другой биологической жидкостью. Титром Р-белка в исследуемой пробе считают последнее разведение исследуемого материала, которое дает ингибицию тест системы.

В результате получаем нормальный уровень Р-белка в венозной крови - 1: 3000-16900, а в артериально-венозной - 1: 1500-8000. Если получено значение титров выше указанных верхних пределов, то это свидетельствует о гомеостатических нарушениях, обусловленных функциональными или органическими причинами.

Полученное максимальное значение титра Р-белков составляет 1: 1-2×10⁶, что указывает на большой диапазон изменения этого показателя при патологии и чувствительности теста. Устойчивые изменения титра Р-белка, выявленные при повторном обследовании явились следствием изменений гомеостаза патологического характера.

Молекулярно-генетический анализ определения вариаций (мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов) первичной структуры ДНК в генах BRCA (BRest CAncer) BRCA1 и BRCA2 проводится с помощью конформационно-чувствительного электрофореза (CSGE). Последующее подтверждение наличия вариаций и выявление их характеристик осуществлялось путем секвенирования (А.В.Карпухин и др., 2001). Суммарное количество выделенных фрагментов ДНК для амплификации и исследования генов составили 94. Определение результатов электрофореза осуществлялось нерадиоактивными методами (окрашивание флуоресцентным красителем либо серебрение). Данный анализ не зависел от природы исследуемого ДНК и позволил выявить однонуклеотидные замены.

Материалы исследования. Определение титра рецепторных белков эритроцитов и сыворотки в зависимости от возраста и состояния молочных желез с целью отбора в группу риска генетических мутаций было проведено 363 женщинам в возрасте от 20 до 65 лет, которые были взяты в исследование в 1989 г. и прослежены в динамике 20 лет. Из них молекулярно-генетическое исследование генов BRCA ¹/₂ было проведено 27 пациенткам в 2000 г., которые были прослежены в течение 8 лет.

Анализ структуры заболеваемости молочных желез в зависимости от возраста показал, что распределение нозологических состояний молочной железы соответствует распределению в популяции, что отражает репрезентативность выборки: женщины с нормальным состоянием молочной железы составили 20±2% наблюдений (72 женщины). Число больных РМЖ составило 2,75±1% наблюдений (70 больных), узловая мастопатия была выявлена у 65 больных (18±2% наблюдений), диффузная мастопатия у 156 больных (43±7% наблюдений).

Исследование титров Р-белков эритроцитов (фиг.5) при нормальном состоянии молочной железы и отсутствии сопутствующих заболеваний выявило титры от 1:320, которые могут служить диагностическим критерием. Титры 1:1280 ассоциировались с сопутствующими заболеваниями, а 1:2560 и выше ассоциировались с факторами риска (онкологическими заболеваниями матери) и онкологическими заболеваниями желудка и легкого у самих пациенток.

Дифференцированный, в зависимости от возраста и нозологического состояния молочной железы, анализ групп привел к их уменьшению. Оценить статистическую достоверность различий в данной ситуации позволил угловой критерий Фишера, предназначенный для сопоставления двух выборок (Фиг.6) по частоте встречаемости эффекта. Критерий оценивает достоверность различий между процентными долями при нижнем пределе наблюдений 2 в одной из групп и 30 в другой. Сравнение титров Р-белков эритроцитов при РМЖ и нормальном состоянии молочной железы показало эффект >=14,5. Этим подтверждается альтернативная гипотеза на уровне значимости р<=0,01, Fэмп=3.139521, Fкр=2.31, то есть выборка Х превосходит выборку Y по частоте эффекта, что подтверждает, с точностью до 99%, что разница распределения титров эритроцитов при нормальном состоянии молочной железы и РМЖ не случайна.

Для поиска критериев скрининга при молекулярно-генетических мутациях определение титров Р-белков было проведено у 26 женщин с наличием мутаций и ОНП в 2002 г. Анализ диагностического ряда Р-белков и генетический мутаций у больных РМЖ матерей был проведен в зависимости от стадии РМЖ.

Сравнение результатов диагностических значений Р-белков эритроцитов и Р-белков сыворотки показало большую информативность при диагностике молекулярно-генетических мутаций и РМЖ титров Р-белков эритроцитов. Наличие титров Р-белков эритроцитов 1:2560 с «прозоной» было отмечено при РМЖ размером 5 мм при первичном обращении (п.2, п.7, п.12, фиг.7).

При полной мутации гена BRCA1 (п.6, фиг.7) были выявлены титры Р-белков эритроцитов 1:10 тыс.

Идентичные титры 1:10 тыс. 240 были выявлены при наличии и лимфостаза (п.3, фиг.7) сосудистых нарушений (п.11, фиг.7).

Частичные мутации гена BRCA2 (гистологически подтвержденная пролиферативная мастопатия) сопровождались титрами 1:10240 (п.9, фиг.8) и 1:20480 (п.6, фиг 8).

Высокие титры 1:5120 ассоциировались с неблагоприятным прогнозом (п.9, фиг.7) умерла через 6 мес. (п.11, фиг.7) перенесла обширный инсульт.

Анализ диагностического ряда Р-белков и генетических мутаций у дочерей был проведен в зависимости от состояния молочной железы и сопутствующих заболеваний (фиг.8).

В случае отсутствия изменений со стороны молочной железы (5 случаев) и отсутствия мутаций и ОНП гена BRCA1/2 - 3 случая титры Р-белков сыворотки и Р-белков эритроцитов были в пределах нормы (1:640 титр эритроцитов и 1:8 тыс. титр сыворотки).

При наличии ОНП гена BRCA1 (точковые замены ПВ) - в 1 случае титры Р-белков эритроцитов были 1:1280 - 1:2560 при нормальных титрах сыворотки 1:8 тыс. - 1:16 тыс.).

При наличии в титре эритроцитов 1:10 тыс. 240 были выявлены сопутствующие заболевания (миома и бронхиальная астма в стадии обострения),

При титре 1:2560 - (алкогольный гепатит).

При наличии ПВ (частичной мутации) гена BRCA1 и отсутствии обострения обструктивного бронхита повышения титров не выявлено (1:640 титр эритроцитов и 1:32 титр сыворотки).

В случае галакгореи, сочетающейся с обострением бронхиальной астмы, выявлено увеличение титров до 1:20 тыс. 480.

При диффузной мастопатии (6 случаев) во всех случаях выявлены частичные мутации гена BRCA1. Титры Р-белков эритроцитов в 2-х случаях были 1:640 (обструктивный бронхит вне обострения и эндометриоз после хирургического лечения) в 2-х случаях 1:1280 (при миоме) и 2-х случаях 1:10 тыс. при сочетании миомы с анемией и эндометриоза с анемией.

При узловой мастопатии мутации гена BRCA1 не выявлено, а выявлены точковые замены гена BRCA2. Титры Р-белков эритроцитов 1:2560 ассоциировались с отрицательной динамикой мастопатии, хирургическое лечение которой выявило пролиферацию ткани молочной железы.

Отсутствие точковых мутаций одного из генов BRCA ¹/₂ сопровождалось увеличением титров Р-белков сыворотки до 1:32 тыс.

Таким образом, определение рецепторных белков (Р-белков), представляющих собой комплекс поликлональных антител, позволяет сформировать группу риска генетических мутаций и однонуклеотидных замен (ОНП), в которой может развиваться рак молочной железы и соматическая патология.

Определение титров Р-белков у женщин с наличием факторов риска способствует выявлению группы, в которой благодаря определению титров Р-белков, заболевания молочной железы и функционально связанных с нею систем выявляются на ранних этапах развития.

Применение метода определения титров Р-белков сыворотки и эритроцитов способствует контролю эффективности лечения и определяет его индивидуальную продолжительность.

Анализ результатов непрямой (торможения) гемагтлютинации и прямой гемагглютинации выявил зависимость между степенью выраженности реакции (++++ фиг.2), длиной диагностического ряда и состоянием молочной железы.

При нормальном состоянии молочной железы степень выраженности реакции уменьшалась от выраженной (4 плюса) в первых лунках до слабо выраженной (один плюс) с пятой по седьмую лунки (фиг.1).

При диффузной мастопатии длина реакция увеличивалась до 10 лунок, а при наличии сопутствующих заболеваний реакция была короткой, в первых 3 лунках (фиг.2).

При узловой мастопатии до лечения отмечено повышение титров (фиг.2).

При узловой мастопатии после лечения были выявлены нормальные титры Р-белков (фиг.2).

При РМЖ до лечения отмечены высокие титры (от 7 до 10 лунки) (фиг.1).

При РМЖ после лечения у пациенток, 5 наблюдений сохраняются повышенные титры, что свидетельствует о необходимости углубленного исследования гормонов, опухолевых маркеров и функционально связанных систем (фиг.4).

Нормализация титров после лечения РМЖ и диффузной мастопатии может отражать восстановление регуляторно-адаптационных механизмов организма и служить методом динамического контроля эффективности лечения и прогноза течения болезни, а выявление высоких титров Р-белков эритроцитов позволяет выделить группу пациенток с патологической пролиферацией при узловой мастопатии и требующих хирургического лечения, и/или больных, имеющих риск рецидива рака молочной железы после лечения (при наличии полной или частичной генетической мутации).

Сохранение высоких титров свидетельствует об активности процессов пролиферации и сопровождает метастазирование. Полученные результаты позволяют рекомендовать эту реакцию как метод скрининга с целью формирования группы риска РМЖ и при мониторинге пациенток с доброкачественными, узловыми образованиями для оценки эффективности и продолжительности лечения.

Определение титров рецепторных белков эритроцитов позволяет на этапе скрининга выделить группу риска генетических мутаций, нуждающуюся в проведении молекулярно-генетических исследований.

Определение титров Р-белков эритроцитов и сыворотки может применяться при мониторинге состояния молочной железы и функционально связанных с нею систем у женщин, для решения вопроса об эффективности и продолжительности лечения.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет провести выявление ранних (доклинических) отклонений общих регуляторно-адаптационных резервов путем исследования, роста концентрации Р-белков в биологических жидкостях (сыворотке и эритроцитах крови) при патологических состояниях молочной железы и молекулярно-генетических мутациях, способных привести к развитию рака молочной железы.

Список литературы

1. Бартова Л.М., Кулагина Н.Н., Маргулис Г.У. и др. Методические рекомендации по определению Р-белков в сыворотке (плазме) крови человека. М.: НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи МЗ РФ, М., 1994, 10 с.

2. Гармашова И.В. Иммунохимические критерии отбора контингента риска соматической патологии (опыт диспансеризации производственных коллективов). Автореф. канд. биол. наук, М., 1993, 20 с.

3. Кравцова Т.Н. Бласттрансформация, циклические нуклеотиды и транспорт ионов в лимфоцитах при вирусном канцерогенезе. Автореф. канд. биол. наук. М., 1984, 21 с.

4. Кульберг А.Я. Молекулярная иммунология. М.: Высшая школа, 1985, 287 с.

5. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа. М.: Медицина, 1986, 224 с.

6. Кульберг А.Я. Рецепторы клеточных мембран. М., 1987, 103 с.

7. Михеева И.Г. Клиническое значение продуктов катаболического распада клеточных рецепторов в норме и при патологии у детей. Автореф. докт. мед. наук, 1998, 42 с.

8. Петяев И.М., Кульберг А.Я. // Иммунология, 1988, №5, с.12-14.

9. Чекнев С.Б. Механизмы обеспечения регуляторного баланса в комплексе естественных цитотоксических реакций. Автореф. докт. мед. наук. М., 1997, 54 с.

10. Яковлева Н.И. Естественные антитела и иммуноглобулины при инфекционной патологии у беременных женщин. Автореф. канд. биол. наук. М., 1986, 21 с.

11. Семикопенко В.А. Возможности лучевых и нелучевых методов отбора женщин в группу риска рака молочной железы. Автореф. канд. мед. наук. М., 1992, 25 с.

Способ выявления группы риска генетических мутаций и пролиферации у пациенток с доброкачественными узловыми образованиями молочной железы, в которой может развиться рак, включающий забор венозной крови пациентов в 1-ю фазу менструального цикла без добавления гепарина в качестве антикоагулянта; определение титров Р-белков клеточных мембран эритроцитов пациентки путем проведения реакции агглютинации с антиР-сывороткой кролика, иммунизированного эритроцитами человека первой (0)Rh+ группы крови; и при титре Р-белков клеточных мембран эритроцитов 1:1280 выявляют группу риска пролиферации; при титре Р-белков клеточных мембран эритроцитов 1:2560 - 1:10240 выявляют группу риска с генетическими мутациями, в которых может развиться рак молочной железы.