Способ получения индивидуальных n -нитрозо- n -[(2-хлорэтил)карбамоил]-l-лизина и n -[(2-хлорэтил)-n-нитрозокарбамоил]-l-лизина



Способ получения индивидуальных n -нитрозо- n -[(2-хлорэтил)карбамоил]-l-лизина и n -[(2-хлорэтил)-n-нитрозокарбамоил]-l-лизина
Способ получения индивидуальных n -нитрозо- n -[(2-хлорэтил)карбамоил]-l-лизина и n -[(2-хлорэтил)-n-нитрозокарбамоил]-l-лизина

 


Владельцы патента RU 2408576:

Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской Академии Наук (RU)

Предложен новый способ получения индивидуальных Nε-нитрозо-Nε-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-лизина и Nε-[(2-хлорэтил)-N-нитрозокарбамоил]-L-лизина, в котором применяют метод препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенно-фазовом варианте, с использованием в качестве подвижной фазы раствора изопропилового спирта в воде с концентрацией 2-5% и скоростью подачи подвижной фазы 4,0-8,0 мл/мин, при этом объем пробы составляет не более 2,6% от объема колонки. Технический результат заключается в достижении более высоких выходов индивидуальных соединений.

 

Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к способу получения индивидуальных (2-хлорэтил)нитрозоуреидопроизводных L-лизина.

Противоопухолевый препарат "Лизомустин" (Свидетельство на товарный знак «Лизомустин» №236592, зарегистрирован 28.01.2003 г.) представляет собой смесь изомеров положения нитрозогруппы: Nε-нитрозо-Nε-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-лизина (1) и Nε-[(2-хлорэтил)-N-нитрозокарбамоил]-L-лизина (2), в соотношении 75:25. Способ получения смеси изомеров описан в патенте РФ №1744946 «Способ получения смеси изомеров 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллина и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллина». Препарат разрешен для лечения онкологических заболеваний [Гос. рег. №ЛС-002311 от 01.12.2006].

Количественное определение содержания смеси изомеров в препарате проводят спектрофотометрическим методом [Аналитика и контроль. 2001. Т.5, №2. С.168-170], определение соотношения изомеров проводят методом обращенно-фазовой высокоэффективной хроматографии [Аналитика и контроль. 2001. Т.5, №2. С.143-145]. Данные методы являются относительными, и для их использования необходимо применение индивидуальных образцов каждого изомера препарата "Лизомустин".

Известен способ получения индивидуальных изомеров препарата «Лизомустин» с использованием синтетических методов, которые отличаются низким выходом, длительностью и использованием токсичных реагентов [Хим.-фармац. Журнал. 1996, №5. С.23-25].

Изомер 1 получают после длительной (120-140 ч) выдержки при комнатной температуре водного раствора смеси изомеров и концентрирования раствора с последующим выделением и перекристаллизацией. Выход соединения 1 составляет 53% от содержания изомера 1 в исходной смеси. Для получения изомера 2 используют региоселективный метод, основанный на применении «активированных» N-алкилнитрозокарбаматов. Данный способ основан на карбамоилировании медного комплекса L-лизина пентахлорфениловым эфиром N-(2-хлорэтил)-N-нитрозокарбаминовой кислоты. Полученный медный комплекс разлагают сероводородом в разбавленной HCl и выделяют соединение 2 нейтрализацией водным аммиаком. Очистку соединения 2 проводят дополнительным переосаждением из разбавленной HCl водным раствором аммиака. Общий выход соединения 2 в расчете на гидрохлорид L-лизина составляет около 20%.

Задачей изобретения является получение индивидуальных изомеров с сохранением их строения, с высокими выходом и чистотой продуктов, без использования высокотоксичных соединений.

Для анализа и препаративного разделения аминокислот со свободными карбоксильными и аминогруппами в α положении молекул используют методы ионообменной и обращенно-фазовой хроматографии [Л.А.Остерман «Хроматография белков и нуклеиновых кислот». М.: Наука, 1985. С.194-206; с.515-527. А.Хеншин, К.-П.Хупе и др. «Высокоэффективная хроматография в биохимии». М.: Мир, 1988. С.171-260]. В этих методах, как правило, используют буферные системы, которые переводят структуру карбоксильной и аминогруппы в одно из равновесных состояний, кроме того, часто используются ион-парные реагенты, в частности додецилсульфонат натрия.

Соединения 1 и 2 относятся к производным аминокислоты лизина, содержащим свободные амино- и карбоксильные группировки в α положении молекулы, в тоже время в структуре молекул соединений 1 и 2 находятся нестабильные 2-хлорэтилнитрозо-карбамоильные группировки в ε положении. Наличие подобных группировок в сочетании с достаточно высокой растворимостью данных соединений в воде не позволяет проводить их концентрирование и отделение от неорганических компонентов буферных систем. Поэтому применение широко используемых в обращенно-фазовой ВЭЖХ подвижных фаз, содержащих буферные растворы, является не пригодным для получения индивидуальных изомеров 1 и 2.

Поставленная задача решается путем использования препаративной ВЭЖХ в обращенно-фазовом варианте с применением в качестве подвижной фазы раствора изопропилового спирта в воде с концентрацией 2-5% (неподвижная фаза - октадецилсиликагель) при скорости подачи подвижной фазы 4,0-8,0 мл/мин и объеме вводимой пробы не более 2,6% от объема колонки.

При несоблюдении указанных параметров - состава подвижной фазы (концентрации изопропилового спирта в воде) и скорости ее подачи, ухудшается разделение соединений 1 и 2 (уменьшается коэффициент разделения) и/или увеличивается время процесса, что приводит к снижению выходов целевых соединений.

Для получения соединений 1 и 2 используется следующее оборудование: система в составе: насос «Gilson 305» 25 SC, инжектор «Rheodyne 7010» с петлей 2,0 мл, УФ-детектор «LCD 2070» с фиксированной длиной волны 254 нм, колонка размерами 250×20 мм, заполненная сорбентом марки «Reprosil-Pur C18», со средним размером гранул сорбента dr=10 мкм, удельной поверхностью Sуд=300 м2/г и размером пор r=100 Å, предварительно уравновешенная подвижной фазой. Температура колонки комнатная 20-24°С. Отбор фракций производят по показаниям детектора и по показаниям самопишущего потенциометра (использован самописец TZ-4620, Чехия) от начала сигнала до выхода показаний на нулевую линию.

Собранные фракции упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не более 40°С, высушивают в вакууме до постоянного веса.

Подлинность и индивидуальность полученных соединений подтверждают данными аналитической ВЭЖХ и спектроскопией 1Н ЯМР.

Характеристики полученных образцов полностью соответствуют веществам, описанным в [Хим. - фармац. Журнал, 1996, №5. С.23-25].

Заявляемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. 2,0 мл раствора субстанции препарата «Лизомустин», содержащей изомеры 1 и 2 в соотношении 75:25 с концентрацией 20,0 мг/мл в 3,0% изопропанол в воде (подвижная фаза), вводят в колонку препаративного жидкостного хроматографа. Соотношение объема пробы к объему колонки составляет 2,6%. Расход подвижной фазы - 6,0 мл/мин. Температура колонки комнатная 20-24°С. Отбор фракций производят по показаниям детектора и по показаниям самопишущего потенциометра, от начала сигнала до выхода показаний на нулевую линию, средний объем полученных фракций составляет 20,0 мл. Собирают фракцию с временем удерживания T1=45,0±1,0 мин и после упаривания получают 29,7 мг изомера 1 (выход 99,0% от содержания изомера 1 в исходном образце); после упаривания фракции с временем удерживания Т2=55,2±1,0 мин получают 9,0 мг изомера 2 (выход 90,0% от содержания изомера 2 в исходном образце).

Пример 2. Согласно примеру 1 расход подвижной фазы 8,0 мл/мин. Изомер 1: время удерживания T1=33,8±1,0 мин (выход 29,6 мг, 98,8% от содержания изомера 1 в исходном образце). Изомер 2: время удерживания Т2=41,4±1,0 мин (выход 9,6 мг, 96,0% от содержания изомера 2 в исходном образце).

Пример 3. Согласно примеру 1 расход подвижной фазы 4,0 мл/мин. Изомер 1: время удерживания T1=67,5±1,0 мин (выход 29,2 мг, 97,3% от содержания изомера 1 в исходном образце). Изомер 2: время удерживания Т2=82,5±1,0 мин (выход 9,8 мг, 98,0% от содержания изомера 2 в исходном образце).

Пример 4. Согласно примеру 1 расход подвижной фазы (2% раствор изопропанола в воде) 6,0 мл/мин. Изомер 1: время удерживания T1=64,5±1,0 мин (выход 29,2 мг, 97,3% от содержания изомера 1 в исходном образце). Изомер 2: время удерживания Т2=83,5±1,0 мин (выход 9,8 мг, 98,0% от содержания изомера 2 в исходном образце).

Пример 5. Согласно примеру 1 расход подвижной фазы (5% раствор изопропанола в воде) 6,0 мл/мин. Изомер 1: время удерживания T1=35,5±1,0 мин (выход 29,6 мг, 98,7% от содержания изомера 1 в исходном образце). Изомер 2: время удерживания Т2=42,5±1,0 мин (выход 9,6 мг, 96,0% от содержания изомера 2 в исходном образце).

Таким образом, предлагаемое изобретение позволяет получать индивидуальные изомеры препарата «Лизомустин» с высокой степенью чистоты с препаративным выходом, без использования высокотоксичных соединений.

Способ получения индивидуальных Nε-нитрозо-Nε-[(2-хлорэтил)карбамоил] -L-лизина и Nε-[(2-хлорэтил)-N-нитрозокарбамоил] -L-лизина, отличающийся тем, что применяют метод препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенно-фазовом варианте с использованием в качестве подвижной фазы раствора изопропилового спирта в воде с концентрацией 2-5% и скоростью подачи 4,0-8,0 мл/мин, при этом объем пробы составляет не более 2,6% от объема колонки.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтической химии, конкретно к способу получения смеси изомеров 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллина (I) и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллина (II), которая может найти применение в качестве субстанции лекарственного средства, следующих формул Известен способ получения изомера I из водного раствора смеси изомеров I и II, полученной химическим путем, после предварительного полного разложения изомера II при стоянии водного раствора смеси при комнатной температуре в течение 120 ч с выходом 62%.

Изобретение относится к способам получения биурета и циануровой кислоты термическим разложением мочевины, заключающимся в том, что продукт термического разложения мочевины охлаждается для осаждения кристаллов, которые затем растворяются в водном растворе щелочи и охлаждаются для получения биурета высокой чистоты, а после нейтрализации кислотой фильтрованного маточного раствора осаждаются кристаллы циануровой кислоты с получением суспензии кристаллов циануровой кислоты, фильтруют и промывают суспензию кристаллов циануровой кислоты, выделяя кристаллы циануровой кислоты, а также к устройствам для их осуществления.

Изобретение относится к способу получения 1,1-1,6-гексаметилен-3,3,3 ,3 -тетракис(2-оксиэтил)-бисмочевины, которая может быть использована в медицине, заключающемуся во взаимодействии 1,6-гексаметилендиизоцианата с диэтаноламином в водной среде, причем диэтаноламин берут в количестве 1,001÷1,01 от стехиометрического и после проведения синтеза удаляют избыток диэтаноламина на катионообменной смоле, которую добавляют в реакционную смесь в количестве 5-10% от массы исходных компонентов при перемешивании до снижения рН реакционной смеси в интервале 7,0-7,2.

Изобретение относится к способам получения лекарственного вещества, а именно мета-хлордифенилметилмочевины, которая является оригинальным отечественным антиконвульсантом и рекомендована Фармкомитетом СССР к медицинскому применению в качестве противоэпилептического средства под названием галодиф [1] Задачей изобретения является увеличение выхода галодифа и упрощение способа его получения.
Изобретение относится к способу получения циклогексилмочевины, которая является промежуточным продуктом в синтезе гербицидного препарата "ленацил". .

Изобретение относится к новому ряду клинических соединений и способу их получения, а именно к бромзамещенным N-бензгидрил-N'-(трифторацетил)мочевин общей формулы: где R орто, мета, пара-бром.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к способам получения двузамещенных симметричных мочевин. .

Изобретение относится к новому химическому соединению и способу его получения, а именно к N-бензгидрил-N-(трифторацетил) мочевине формулы Химическое соединение синтезировано впервые и ему присвоен государственный регистрационный номер N 9973090.

Изобретение относится к способу получения соединения формулы I: или его соли, где: у представляет собой 0; R1 и R2 взяты вместе для образования 3-тетрагидрофуранового кольца; R9 представляет собой водород; R10 представляет собой 5-оксазолил; R11 представляет собой метокси-, этокси- или изопропоксигруппу; каждый V1 независимо выбирают из галогена, NO2, CN, OR 12, OC(O)R13, OC(O)R12, OC(O)OR 13, OC(O)OR12, OC(O)N(R13)2 , OP(O)(OR13)2, SR13, SR 12, S(O)R13, S(O)R12, SO2 R13, SO2R12, SO2N(R 13)2, SO2NR12R13 , SO3R13, C(O)R12, C(O)OR 12, C(O)R13, C(O)OR13, NC(O)C(O)R 13, NC(O)C(O)R12, NC(O)C(O)OR13, NC(O)C(O)N(R13)2, C(O)N(R13) 2, C(O)N(OR13)R13, C(O)N(OR13 )R12, C(NOR13)R13, C(NOR 13)R12, N(R13)2, NR 13C(O)R12, NR13C(O)R13 , NR13C(O)OR13, NR13C(O)OR 12, NR13C(O)N(R13)2, NR 13C(O)NR12R13, NR13SO 2R13, NR13SO2R12 , NR13SO2N(R13)2, NR13SO2NR12R13, N(OR 13)R13, N(OR13)R12, P(O)(OR 13)N(R13)2 и P(O)(OR13 )2; где каждый R12 представляет собой моноциклическую или бициклическую кольцевую систему, состоящую из 5-6 членов в каждом кольце, где указанная кольцевая система, необязательно, содержит вплоть до 4 гетероатомов, выбранных из N, О или S, и где CH2, расположенный рядом с указанным N, О или S, может быть замещен посредством С(O); а каждый R12 , необязательно, содержит вплоть до 3 заместителей, выбранных из R11; где каждый R13 независимо выбирают из Н, (С1-С4)-неразветвленного или разветвленного алкила или (С2-С4)-неразветвленного или разветвленного алкенила; и где каждый R13, необязательно, содержит заместитель, представляющий собой R14; где R14 представляет собой моноциклическую или бициклическую кольцевую систему, состоящую из 5-6 членов в каждом кольце, где указанная кольцевая система, необязательно, содержит вплоть до 4 гетероатомов, выбранных из N, О или S, и где CH2 , расположенный рядом с указанным N, О или S, может быть замещен посредством С(O); а каждый R14, необязательно, содержит вплоть до 2 заместителей, независимо выбранных из Н, (С1 -С4)-неразветвленного или разветвленного алкила или (С2-С4)неразветвленного или разветвленного алкенила, 1,2-метилендиокси-, 1,2-этилендиоксигруппы или (CH 2)n-Z; где Z выбирают из галогена, CN, NO 2, CF3, OCF3, ОН, S(С1 -С4)алкила, SO(С1-С4)алкила, SO2(С1-С4)алкила, NH2 , NH(C1-C4)-алкила, N((С1-С 4)алкила)2, СООН, С(O)O(С1-С 4)алкила или O(C1-C4)-алкила; и где любой атом углерода в любом R13, необязательно, заменен на О, S, SO, SO2, NH или N(C1-C4 )алкил; где указанный способ включает стадию приведения во взаимодействие соединения формулы II с соединением формулы III в полярном или неполярном апротонном, практически безводном растворителе или их смеси, и необязательно в приемлемом основании, выбранном из органического основания, неорганического основания или сочетания органического основания и неорганического основания; и при нагревании реакционной смеси приблизительно от 30°С до приблизительно 180°С в течение приблизительно от одного часа до приблизительно сорока восьми часов в практически инертной атмосфере: где: LG представляет собой - OR16; где R16 представляет собой -(С1-С6 )-неразветвленный или разветвленный алкил; -(С2-С 6)-неразветвленный или разветвленный алкенил или алкинил; или моноциклическую кольцевую систему, состоящую из 5-6 членов в каждом кольце, где указанная кольцевая система, необязательно, содержит вплоть до 3 гетероатомов, выбранных из N, О или S, а каждый R16, необязательно, содержит вплоть до 5 заместителей, независимо выбранных из (С1-С4)-неразветвленного или разветвленного алкила, (С2-С4)-неразветвленного или разветвленного алкенила или (CH2)n-Z; n представляет собой 0, 1, 2, 3 или 4; V1, y, Z, R 1, R2, R9, R10 и R 11 являются такими, как указано выше; и при условии, что R16 не является галогензамещенным (С2-С 3)-неразветвленным алкилом

Изобретение относится к способу получения мочевиновой консистентной смазки, который осуществляют в устройстве, использующем экструдер и содержащем несколько реакционных зон, смонтированных в ряд и связанных по текучей среде
Наверх