Способ снижения агрегационной активности тромбоцитов in vitro


 


Владельцы патента RU 2410104:

Учреждение Российской академии медицинских наук Научный центр неврологии РАМН (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к способам исследования агрегационной активности тромбоцитов. Способ заключается в том, что антиагрегационный препарат вводят в богатую тромбоцитами плазму вместе с коллоидным раствором гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи. В процессе предварительной подготовки препарата коллоидный раствор ГСФЛ смешивают с раствором антиагрегационного препарата, затем полученную смесь прогревают 30 минут при температуре 60°С. Использование способа позволяет повысить эффективность действия антиагрегантных препаратов и, вследствие этого, оптимизировать антиагрегантную терапию больных с церебро-васкулярными заболеваниями.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам воздействия на агрегационную активность тромбоцитов in vitro, которые направлены на повышение эффективности медикаментозной коррекции гиперактивности тромбоцитарной функции. Изобретение может быть использовано для улучшения профилактики и лечения больных в ангионеврологических и кардиологических клиниках при применении существующих антиагрегантных препаратов или агента, повышающего эффективность их действия.

Известен способ оптимизации антиагрегантной терапии с помощью сочетания приема традиционных препаратов и потребления в пищу полиненасыщенных жирных кислот омега-3, а именно эйкола (ихтиеновое масло), в дозе 6-8 г в сутки в течение 4 месяцев. Этот способ применяется в случаях выявления неэффективности использования препаратов с антиагрегантными свойствами (патент RU №2188008, кл. А61K 31/202, 35/60, А61Р 25/00, 2000).

Известен также способ исследования агрегационной активности тромбоцитов и оптимизации антиагрегационной терапии у больных с церебро-васкулярными заболеваниями (ЦВЗ) путем введения препаратов, подавляющих агрегацию тромбоцитов (Voen - Med - Zn, 1994, Feb. p.63). Однако у значительной части больных наблюдается определенная резистентность тромбоцитов к воздействию этих препаратов.

Наиболее близким к изобретению является способ снижения агрегационной активности тромбоцитов с целью дальнейшей коррекции стратегии терапии больных в ангионеврологических и кардиологических клиниках путем подбора антиагрегационных препаратов. Он включает в себя забор крови, стабилизацию ее после забора, разделение с получением богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования, введение антиагрегационного препарата с последующим перемешиванием, инкубацию плазмы с препаратом и без него при 36,5-37,5°С. Используют тромбоцитарную тест-систему для оценки in vitro эффектов антиагрегационных препаратов, имеющих различные механизмы действия на тромбоциты (патент RU №2188419 кл. G01N 33/15, 33/86, 2000).

Этот способ позволяет определить индивидуальную чувствительность пациента к тому или иному препарату до назначения курса лечения. Однако остается вопрос о возможности применения минимальных доз антиагрегантов для нивелирования побочных эффектов препаратов.

В механизмах действия применяющихся в современной медицинской практике антиагрегационных препаратов на тромбоцитарные пластинки ведущую роль играет изменение рецепторной чувствительности мембран тромбоцитов (тиклопидин) или понижение активности внутриклеточных каскадов, участвующих в регуляции процесса агрегации. Эти пути включают связывание индуктора агрегации со своим рецептором на внешней мембране тромбоцита и передачу сигнала внутри клетки путем изменения концентрации вторичных внутриклеточных сигнальных факторов. Изложенные оба процесса приводят к активации рецепторов фибриногена, вследствие чего происходит его рецепция и связывание тромбоцитов друг с другом посредством фибриногеновых мостиков. Сопровождается это образованием активных форм тромбоцитов и их агрегатов.

Активация тромбоцитов может быть вызвана множеством различных биологически активных веществ (АДФ, адреналином, коллагеном и пр.), которые действуют через специфические рецепторы на поверхности мембран. Формирование ответа заключается в последовательной активации систем регуляции концентраций вторичных посредников с образованием цепи передачи сигнала и является общим для различных типов клеток.

Существование в кровяных пластинках многочисленных мембраносвязанных внутриклеточных механизмов активации позволяет вовлекать многоступенчатую модуляцию активности клеток в процесс тромбообразования.

Все это определяет существование многообразных биологически активных соединений, обладающих способностью изменять функцию тромбоцитов и способствующих вовлечению в процесс как активаторных, так и ингибиторных внутриклеточных механизмов. К числу биологически активных соединений, в том числе используемых в качестве лекарственных средств, относятся препараты, обладающие способностью модулировать функцию тромбоцитов посредством вовлечения в процессы ингибирования фосфолипазы А2, циклооксигеназы, тромбоксансинтазы, изменение фосфолипидной композиции мембран клеток, активности образования внутриклеточных посредников (цАМФ, цГМФ, NO) и блокирование специфических рецепторов на мембране клеток.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности действия антиагрегационных препаратов, вследствие чего достигается оптимизация антиагрегационной терапии больных с церебро-васкулярными заболеваниями.

Он достигается тем, что коллоидный раствор гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией 0,01% коллоидного раствора ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи, смешивают с раствором антиагрегационного препарата, затем полученную смесь прогревают при температуре 60 градусов в течение 30 минут и затем вводят ее in vitro в богатую тромбоцитами плазму в эффективных рабочих концентрациях антиагрегационного препарата 0,7 мг/л для аспирина и 0,3 мг/л для тиклопидина.

Для выделения ГСФЛ из головного мозга свиньи производят следующие операции: 1) получение гомогената; 2) обезвоживание холодным ацетоном, эктракция нейтральных липидов; 3) удаление остаточной части нейтральных липидов второй ацетоновой экстракцией; 4) экстракция фосфолипидов спиртом при температуре до 35°С; 5) экстракция ГСФЛ спиртом при температуре до 65°С; 6) кристаллизация ГСФЛ из спиртового раствора; 7) очистка ГСФЛ спиртом/ацетоном от примесей фосфолипидов/нейтральных липидов соответственно по схеме. Контроль состава полученной смеси проводится методом аналитической жидкостной хроматографии.

Способ выполняют следующим образом.

Антиагрегационный препарат вводят вместе с 0,01% коллоидным раствором гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи. В процессе предварительной подготовки препарата коллоидный раствор ГСФЛ смешивают с раствором антиагрегационного препарата, затем полученную смесь прогревают 30 минут при температуре 60°С. При этом происходит разрыв ГСФЛ фибрилл и образование липосом тороидальной формы. Эффект проявляется в значительном снижении параметра АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. При этом проверено, что при воздействии чистого препарата ацетилсалициловой кислоты, АДФ-АТ в среднем снижается на 8,6%. При введении аспирина с помощью ГСФЛ нанокапсул снижение АДФ-АТ составляет 44,2%. При воздействии чистого препарата тиклопидина, АДФ-АТ в среднем снижается на 17%. При введении тиклопидина с помощью ГСФЛ нанокапсул снижение АДФ-АТ составляет 43,8%).

Статистический анализ совместного действия антиагрегационного препарата с ГСФЛ в группах пациентов с пониженной и нормальной чувствительностью к препаратам показывает существенное нивелирование разницы в индивидуальных ответах. Больше всего данный эффект выражен в случае аспирина. Наблюдаемый эффект является результатом собственного действия сфинголипидных липосом как антиагрегантов, так и действия их как агентов повышения эффективности входа других лекарственных антиагрегантных препаратов в клетку.

Таким образом, предложенное изобретение позволяет снизить агрегационную активность тромбоцитов, увеличить эффект антиагрегантных препаратов с различными механизмами действия, понизить их эффективную концентрацию и нивелировать развитие резистентности к антиагрегантным препаратам.

Способ снижения агрегационной активности тромбоцитов in vitro путем введения антиагрегационного препарата, отличающийся тем, что коллоидный раствор гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией 0,01%-ного коллоидного раствора ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи, смешивают с раствором антиагрегационного препарата в эффективных рабочих концентрациях 0,7 мг/л для аспирина и 0,3 мг/л для тиклопидина, затем полученную смесь прогревают при температуре 60° в течение 30 мин и затем вводят in vitro в богатую тромбоцитами плазму.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к проктологии, и касается коррекции патологии тазового дна, обусловленной врожденной недостаточностью или повреждением мышечных структур запирательного аппарата прямой кишки.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано при лечении ретинопатии при недоношенности или родственных ретинопатических заболеваний.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу лечения глазных заболеваний. .

Изобретение относится к медицине и представляет собой биотрансплантат на основе высокопористого керамического материала системы оксид циркония - оксид алюминия и мультипотентных стромальных клеток костного мозга человека для восстановления протяженных дефектов костной ткани, характеризующийся тем, что содержит аутологичные или донорские мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) из костного мозга и носитель, созданный на основе высокопористого керамического материала системы оксид циркония - оксид алюминия по технологии дублирования пенополиуретановой основы, при этом носитель плотно засевают ММСК, культивированными от 1 до 3-х пассажей, при этом на одном носителе иммобилизовано от 200 до 500 тысяч клеток, витальность которых составляет не менее 90%, а функциональная направленность подтверждается способностью к направленной дифференцировке в мезодермальные линии и демонстрируется экспрессия стромальных маркеров CD90 и CD 105 у 60-90% клеток и отсутствие экспрессии маркера CD34.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для лечения детского церебрального паралича (ДЦП). .
Изобретение относится к области медицины и представляет собой биотрансплантат для лечения дегенеративных и травматических заболеваний костной ткани, характеризующийся тем, что содержит аутологичные или донорские мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК) из костного мозга или жировой ткани взрослых доноров, которые распределены в фибриновом сгустке в концентрации 5-7 млн клеток в 1 мл, представляющем собой полимеризованную обогащенную тромбоцитами плазму крови пациента, и матрицу-носитель, имеющую в основе своей структуры коллаген-минеральный комплекс, идентичный по составу натуральному костному материалу, или биосовместимый полимер.
Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургической стоматологии, и может быть использовано для лечения периимплантита. .
Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при лечении пациентов с ишемией нижних конечностей. .
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и предназначено для лечения пародонтита. .
Изобретение относится к медицине, а точнее к офтальмологии, и может быть использовано для повышения эффективности фотодинамической терапии хориоидальной неоваскуляризации вследствие возрастной макулярной дистрофии, высокой осложненной миопии и другой этиологии.

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, травматологии и ортопедии, и представляет собой способ совмещения культивированных остеогенных клеток и трехмерного материала-носителя путем иммобилизации клеток, обладающих остеогенным потенциалом, на поверхности материала-носителя, отличающийся тем, что перед совмещением клетки помещают в гелевый носитель из природного коллагена с сохраненными телопептидами, а затем, до полимеризации геля, полученной композицией пропитывают макропористый материал-носитель, представляющий собой деминерализованный костный матрикс, из расчета 10 млн клеток на 1 см3 пористого носителя

Изобретение относится к медицине и касается биоинженерной конструкции для закрытия костных дефектов с восстановлением в них костной ткани, которая представляет собой гибридный имплантат в виде пористой мембраны из политетрафторэтилена с многофункциональным, биосовместимым, нерезорбируемым покрытием МБНП, легированным элементами M-Ca-P-C-O-N или M-Ca-C-O-N, где M - металл, выбранный из ряда, включающего Ti, Zr, Hf, Nb, Та, на поверхности которого пассированы аутогенные или аллогенные стромальные клетки, выделенные из жировой ткани или костного мозга
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при химиотерапии опухолей позвоночника
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения больных с рецидивами рака носоглотки

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к экспериментальным моделям иммунопатологических состояний, и может быть использовано для оценки антиэрготипического ответа на вакцинацию поликлонально активированными клетками
Наверх