Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента c1q комплемента человека


 


Владельцы патента RU 2413224:

Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии. Проводят сорбцию в лунках микропанели аптечного препарата дерината, представляющего собой дезоксирибонуклеат натрия. Затем в лунки вносят анализируемую пробу, содержащую компонент C1q с неизвестной активностью. Проводят инкубацию и после отмывки и осушения планшета в лунки вносят конъюгат фермента с антителами против компонента C1q и субстрат этого фермента. Проводят расчет активности компонента C1q по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат фермента с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и стандарт с известной активностью C1q. Использование способа позволяет повысить достоверность определения компонента C1q с использованием в качестве активатора доступного и стабильного препарата дерината. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.

 

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах.

Наиболее перспективным из современных методов определения белков сыворотки крови является метод иммуноферментного анализа благодаря своей чувствительности, избирательности и возможности автоматизации аналитического процесса. Известен способ определения функциональной активности компонента C1q, который предусматривает сорбцию в лунках микропланшета иммуноглобулина G или М человека [1]. Количество ковалентно связавшегося в результате активации компонента C1q определяют по продукту ферментативной реакции с помощью антител к C1q, конъюгированных с ферментом.

Недостатками этого способа являются трудность получения иммунохимически чистых препаратов иммуноглобулина G или М человека и плохое сохранение активирующей способности при хранении.

Задачей заявленного изобретения является разработка способа и набора на основе иммуноферментного метода, позволяющего определять функциональную активность компонента C1q классического пути системы комплемента человека с использованием доступного и хорошо сохраняемого в обычных условиях коммерческого препарата для использования в качестве активатора классического пути комплемента.

Поставленная задача достигается путем разработки способа определения и набора. Способ определения предусматривает сорбцию в лунках микропанели аптечного препарата дерината, представляющего собой дезоксирибонуклеат натрия, хорошо сохраняемого в обычных условиях, затем внесение в лунки микропанели анализируемой пробы, содержащей компонент C1q комплемента человека и проведение инкубации, в ходе которой C1q связывается на сорбированном активаторе в количествах, зависящих от концентрации функционально активного определяемого компонента C1q, выливание содержимого лунок, а затем внесение конъюгата фермента с антителами против компонента C1q человека и субстрата этого фермента и проведение расчета активности компонента C1q по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции.

Набор содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат фермента с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови в качестве стандарта.

Техническим результатом заявленного изобретения является разработка способа и набора для определения функциональной активности компонента C1q, обладающих хорошей воспроизводимостью результатов и отсутствием необходимости использования трудно выделяемого и плохо сохраняющего свою активирующую способность препарата иммуноглобулинов.

Пример 1. Определение функциональной активности препарата компонента C1q. Растворяют аптечный препарат деринат в фосфатном буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, в концентрациях 10-100 мкг/мл и вносят по 100 мкл раствора в каждую лунку плоскодонной полистироловой 96-луночной микропанели. Закрывают крышкой и оставляют на ночь при 4°С. Содержимое лунок выливают, трижды отмывают планшет ЗФР-Т (фосфатным буфером, рН 7,4, содержащим 0,15 М NaCl и 0,05% твин-20), затем осушают путем вытряхивания остатка жидкости. В лунки планшета вносят по 100 мкл анализируемой пробы, содержащей C1q в ЗФР-Т. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37°С, трехкратной отмывки ЗФР-Т и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл конъюгата пероксидазы с антителами против компонента C1q человека в том же буфере в подобранном разведении. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37°С, трехкратной отмывки ЗФР-Т и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного буфера с ТМБ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин в 15 мл цитратно-фосфатного буфера, рН 5,0, и 50 мкл 3% перекиси водорода). После 5-10 мин инкубации в темноте реакцию останавливают внесением в каждую лунку 50 мкл 14% серной кислоты. Результаты реакции учитывают с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом измерением светопоглощения при 450 нм. Функциональную активность препарата C1q рассчитывают по стандартной кривой (см. чертеж).

Пример 2. Набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента C1q комплемента человека содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат пероксидазы с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и стандарт с известной активностью компонента C1q.

Из приведенных на чертеже результатов следует, что измеряемая оптическая плотность линейно зависит от концентрации активного компонента C1q с коэффициентом корреляции R2=0,996, что позволяет достоверно определять функциональную активность компонента C1q описанным способом с использованием описанного набора.

ЛИТЕРАТУРА

1. Козлов Л.В., Дьяков В.Л., Баталова Т.Н., Гузова В.А., Лысакова С.В. Способ определения функциональной активности субкомпонента C1q комплемента человека. 2000. Патент РФ 2144676. // Бюл. №2. 20.01.2000.

1. Способ определения функциональной активности компонента C1q комплемента человека, предусматривающий сорбцию в лунках микропанели активатора классического пути комплемента, внесение в лунки микропанели анализируемой пробы, содержащей компонент C1q комплемента человека с неизвестной активностью, инкубацию, выливание содержимого лунок, внесение конъюгата фермента с антителами против компонента C1q человека, а затем после инкубации и удаления инкубационного раствора внесение субстрата этого фермента, проведение расчета активности компонента C1q по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции, отличающийся тем, что в качестве активатора классического пути комплемента используют деринат.

2. Набор для определения функциональной активности компонента C1q комплемента человека, характеризующийся тем, что он содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат фермента с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и стандарт с известной активностью компонента C1q.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к анализу технического углерода (сажи) и может быть использовано при разработке технологии получения новых марок сажи для резин. .

Изобретение относится к области исследований или анализа защитных свойств материалов лицевых частей противогазов при воздействии на них капель , '-дихлордиэтилсульфида (ДДС) путем использования его имитатора - бутил- -хлорэтилсульфида (БХЭС) в качестве вещества, моделирующего проникающую способность иприта.

Изобретение относится к способу измерения совокупности технологических параметров химического процесса, осуществляемого в химическом реакторе. .

Изобретение относится к методам оценки структурной неоднородности полимеров, в частности к способу выявления макронеоднородности структуры эластомеров. .

Изобретение относится к технологии резины, а именно к измерению и контролю параметров процесса вулканизации резиновых смесей, и может быть использовано в лабораторной практике и научных исследованиях в соответствующей технико-технологической области промышленности.

Изобретение относится к легкой промышленности и может быть использовано при определении потостойкости капиллярно-пористых волокнистых и пленочных материалов, например натуральной и искусственной кожи.
Изобретение относится к способу изготовления резинотехнических изделий для вакуумных систем, в частности для резин с пониженной влагопроницаемостью, стойких к газообразным фторидам элементов и фтористому водороду, применяемых в газовой центрифуге.

Изобретение относится к способам для оценки эксплуатационных свойств топлив, в частности оценки совместимости топлив для реактивных двигателей (авиакеросинов) с резинами преимущественно на основе нитрильного каучука, применяемыми в топливных системах авиационных газотурбинных двигателей, и может быть использовано в нефтехимической, авиационной и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к методам исследования свойств многослойных полимерных материалов, используемых для изготовления эластичных резервуаров, поддонов, рукавов, фильтроэлементов, трубопроводов, бочек, канистр, барабанов, внутренних покрытий и т.д.

Изобретение относится к кожевенной промышленности
Изобретение относится к способу создания хрупкого покрытия на поверхности изделий из светостабилизированного полиэтилена для экспериментального исследования напряженного состояния изделий методом хрупких покрытий
Изобретение относится к легкой промышленности

Изобретение относится к способу оценки влияния нанокомпонентов на санитарно-химические свойства полимерных материалов заключается в газохроматографическом анализе летучих органических соединений из газовых проб, отобранных из камеры при тестировании образцов полимерных материалов с модифицирующими минеральными добавками

Изобретение относится к испытательной технике и может быть использовано для неразрушающего контроля физико-механических характеристик кожи и подобных ей мягких композитов

Изобретение относится к способу оценки концентрации смолоподобных веществ в водной суспензии титрованием и может быть использовано в области экспериментальной и промышленной биотехнологии

Изобретение относится к определению марки вулканизированной резины и может быть использовано в машиностроении

Изобретение относится к области производства углерод-углеродных композиционных материалов различного назначения, предназначено для сравнительной оценки пропитки жгутов углеродного волокна (УВ) расплавами пеков и может быть использовано при отработке технологий производства углерод-углеродных композиционных материалов, имеющих различные свойства, посредством модификации или замены пекового связующего и/или углеродного волокна, например, в научных лабораториях, в частности, при проведении лабораторных работ. Для определения степени пропитки жгутов углеродного волокна пеками жгут углеродного волокна помещают в стеклянную трубку так, чтобы конец жгута выступал из стеклянной трубки, а углеродные волокна в жгуте были ориентированы по оси стеклянной трубки, при этом толщину жгута выбирают таким образом, чтобы он плотно держался в стеклянной трубке, выступающий конец жгута углеродного волокна приводят в соприкосновение с расплавленным пеком и выдерживают в таком положении, затем жгут углеродного волокна извлекают из трубки и определяют высоту пропитки жгута углеродного волокна пеком. Достигается упрощение и ускорение определения. 1 пр., 3 ил.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть применено для установления наличия первично-множественного синхронного рака толстой кишки. Сущностью изобретения является то, что у больных раком толстой кишки обоего пола в предоперационном периоде определяют содержание в крови фолликулостимулирующего гормона. При его концентрации у женщин в границах от 26,01 до 60,91 МЕ/л, а у мужчин - в границах от 2,71 до 5,67 МЕ/л устанавливают наличие у пациентов одиночной опухоли, а при концентрации гормона у женщин в границах от 2,70 до 5,50 МЕ/л и у мужчин в границах от 12,88 до 52,04 МЕ/л устанавливают наличие в толстой кишке синхронно развивающихся новообразований. Способ может быть осуществим на дооперационном этапе, легко воспроизводим в условиях стационара лечебных учреждений онкологического профиля. 6 пр.
Наверх