Штамм клубеньковых бактерий вида sinorhizobium fredii кб-11 для изготовления бактериального удобрения под сою

Авторы патента:

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

C05F11/08 - органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и т.п.

Владельцы патента RU 2413707:

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сои Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к изготовлению бактериального удобрения под сою. Штамм клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii КБ-11 выделен из природной популяции клубеньковых бактерий, распространенной в почвах южной зоны Амурской области и депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов под номером В-2457D. Изобретение позволяет повысить урожай семян сои и улучшить его качество. 1 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для производства бактериального удобрения для сои.

Известны штаммы клубеньковых бактерий сои 639А, 648А, используемые для приготовления соевого нитрагина, относящиеся к медленнорастущему виду Bradyrhizobium japonicum.

Недостатками этих штаммов является то, что они растут только при рН 7 и температуре 27-28°С (оптимальные условия для выращивания клубеньковых бактерий сои) и в качестве источника углеродного питания используют только маннит.

Задачей изобретения является получение более технологичного штамма, обладающего высокими адаптационными возможностями, быстрым наращиванием биомассы в условиях, отличных от оптимальных.

Задача решается новым штамом клубеньковых бактерий Sinorhizobium fredii КБ-11, который выделен в 1989 году из клубеньков среднеспелого сорта сои ВНИИС-1, выращиваемой на лугово-черноземовидной почве Константиновского района Амурской области.

Полученный штамм депонирован и хранится во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г.К.Скрябина Российской академии наук под регистрационным номером ВКМ B-2457D и коллекции ГНУ Всероссийского научно - исследовательского института сои под номером КБ-11.

Штамм Sinorhizobium fredii BKM B-2457D характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологе-биохимическими признаками

Культурально-морфологические признаки

В молодом возрасте бактерии штамма Sinorhizobium fredii КБ-11 подвижные, представляют собой удлиненные палочки размером (2,3…2,5)×0,4 мк. Грамотрицательные. Быстрорастущая культура. В чашках Петри на маннитно-соевой твердой питательной среде указанные бактерии вырастают на 3-4 сутки после посева, образуя выпуклые, прозрачные, слизистые колонии диаметром 1,0…3,1 мм. Бактерии Sinorhizobium fredii КБ-11 хорошо растут и на других питательных средах:

Среда Норриса, г/л: К₂НРO₄ - 0,5; MgSO₄ - 0,8; NaCl - 0,2; FеСl₃ - 0,01; дрожжевой экстракт - 2,0; маннит - 10,0.

Соевая среда с маннитом, г/л: К₂НРO₄ - 0,5; КН₂РO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с глюкозой, г/л: К₂НРO₄ - 0,5; КН₂РO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; глюкоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с сахарозой, г/л: К₂НРO₄ - 0,5; КН₂РO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; сахароза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с мальтозой, г/л: К₂НРO₄ - 0,5; КН₂РO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; мальтоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с лактозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; КН₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; лактоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Навеску соевой муки получают путем размола пророщенных соевых семян, заливают 1 литром воды и кипятят в течение 30 минут. В фильтрат, доведенный до 1 литра, вносят соли.

При выращивании штамма КБ-11 в пробирках на всех вышеперечисленных средах (при температуре 28°С в течение 72 часов) отмечен обильный рост штриха гелеобразной прозрачной консистенции. При длительном хранении чистой культуры в холодильнике при температуре 4°С консистенция штриха штамма КБ-11 не изменяется.

Физиолого-биохимические признаки.

Аэроб.

Температурный диапазон роста 27-39°С.Оптимальная температура роста 27-28°С.

Оптимум рН 7,0; диапазон рН 6,0-8,0.

Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает и растет на сахарозе глюкозе, мальтозе, лактозе, манните с образованием продуктов кислотного характера.

Осмоустойчив, дает хороший рост на средах с концентрацией NaCl 0,4µ. Признаки штамма устойчивые. Штамм не патогенен. Пересевается один раз в 6 месяцев. Хранится в пробирках на маннитно-соевом агаре при температуре 4-5°С.

Штамм ВКМ B-2457D идентифицирован по «Определителю» Берги (1980) как штамм вида Sinorhizobium fredii.

Штамм Sinorhizobium fredii ВКМ В-2457D отличается от ранее известных штаммов клубеньковых бактерий сои способностью использовать различные источники углеродного питания, хорошо расти в широком температурном и рН диапазоне.

Изобретение поясняется следующим конкретным примером использования штамма Sinorhizobium fredii ВКМ B-2457D.

Пример

Посевной материал получают выращиванием штамма в пробирках с агаризованной питательной соевой средой с маннитом, г/л: К₂НРO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

После посева пробирки с бактериальной культурой выставляют в термостаты с температурой 27-28°С на 5 суток. За это время в пробирках на косяке плотной питательной среды отмечается обильное нарастание бактериальной массы испытываемого штамма.

Для инокуляции семян в день посева сои готовят бактериально-молибденовую смесь. Для этого в пробирки со штрихом испытываемого штамма клубеньковых бактерий сои вносят по 2,5 мл заранее приготовленного 1,25% раствора молибдена (25 г/л молибдата аммония). Штрих с косяка питательной среды смывают раствором молибдена. Путем встряхивания пробирки получают однородную бактерию - молибденовую смесь, которой сразу же обрабатывают семена сои. Полученный объем суспензии (2,5 мл) используют для предпосевной обработки 250 г семян сои. После нанесения суспензии семена сои тщательно перемешивают, подсушивают в тени и высевают в подготовленную почву.

В таблице приводятся данные об эффективности штамма ВКМ B-2457D в зависимости от условий года, полученные в результате проведения полевых экспериментах. Опыты проводились на лугово-черноземных почвах, с сортом сои Соната. Бактеризованные семена высевают в день обработки. Штамм Sinorhizobium fredii КБ-11, ВКМ B-2457D по сравнению с контролем (фон - естественная инокуляция) стабильно повышал урожайность семян сои в течение 8-ми лет

Штамм	Урожайность семян сои по годам	Средняя урожайность
1992	2001	2002	2003	2004	2005	2006	2007	2008	2009
Контроль без обработки	18,8	32,0	26,7	16,5	11,9	26,0	18,8	18,8	27,3	22,0	21,9
КБ-11 ВКМВ-2457D	18,8	32,7	30,2	16,5	14,7	26,8	21,4	21,4	28,1	24,2	23,5

Штамм клубеньковых бактерий сои вида Sinorhizobium fredii КБ-11, ВКМ В-2457D для изготовления бактериального удобрения под сою является высокотехнологичным, обладает ускоренным ростом на различных источниках углеродного питания.

Штамм клубеньковых бактерий сои вида Sinorhizobium fredii КБ-11, ВКМ B-2457D для изготовления бактериального удобрения под сою.

Изобретение относится к ветеринарной медицине и биотехнологии. .

Способ получения пробиотической кормовой добавки ферм км для сельскохозяйственных животных и птицы // 2412612

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способам приготовления биологически активных кормовых добавок для млекопитающих, птиц, рыб, повышающих эффективность пищеварения, оказывающих разностороннее действие на животный организм и позволяющих применять их как для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний, так и для стимуляции роста и повышения продуктивности животных.

Способ получения питательной среды для проведения микробного синтеза лизина // 2412242

Изобретение относится к биотехнологии, спиртовой и кормовой промышленности, может быть использовано при производстве кормовых добавок, обогащенных белком и аминокислотами.

Способ профилактики желудочно- кишечных заболеваний у животных или людей, способ лечения желудочно-кишечных заболеваний у животных или людей и лекарственное средство для лечения или профилактики желудочно-кишечных заболеваний у животных или людей // 2412241

Изобретение относится к профилактике кишечного заболевания, такого как связанная с антибиотиками диарея, приобретенная диарея, вызванная Clostridium difficile, воспалительное кишечное заболевание и желудочно-кишечное заболевание, введением эффективного количества бактерий Bacillus, которые продуцируют липопептиды.

Питательная среда для выращивания легионелл // 2412240

Изобретение относится к биотехнологии для выращивания легионелл. .

Штамм lactobacillus fermentum z, используемый для производства пробиотических молочнокислых продуктов // 2412239

Изобретение относится к медицине, а именно к профилактике и лечению инфекционной патологии у человека и других млекопитающих. .

Бактерия, принадлежащая к роду pantoea, - продуцент l-аспартата или метаболита, являющегося производным l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболита, являющегося производным l-аспартата // 2411289

Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологической промышленности, в частности к способу получения L-аспартата или метаболита, являющегося производным L-аспартата, с использованием бактерии, принадлежащей к роду Pantoea, модифицированной таким образом, что в ней активность -кетоглутаратдегидрогеназы и цитратсинтазы снижена; активность фосфоенолпируваткарбоксилазы или пируваткарбоксилазы и глутаматдегидрогеназы или глутаматсинтазы повышена.

Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза // 2410425

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при диагностике туберкулеза. .

Питательная среда для культивирования микроорганизмов // 2410424

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к питательным средам для культивирования микроорганизмов, и может быть использовано при промышленном приготовлении бактерийных вакцин.

Способ получения по меньшей мере одной неаллергенной пробиотической бактериальной культуры для изготовления пищевого продукта или фармацевтической композиции, предназначенных для лиц, пораженных целиакией и особенно чувствительных к аллергенным веществам глютенового и/или молочного типа (варианты) // 2410423

Штамм бактерий bacillus mucilaginosus bac 1208, обладающий повышенными фосфор и калий мобилизующими свойствами и удобрение на его основе // 2408722

Штамм бактерий agrobacterium radiobacter ag 1108, обладающий повышенными азотфиксирующими свойствами, и удобрение на его основе // 2408721

Способ получения биогумуса // 2408563

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к производству биоудобрений и средств защиты растений. .

Биопрепарат в виде водной суспензии для повышения почвенного плодородия // 2390518

Изобретение относится к биотехнологии и сельскохозяйственной микробиологии и, в частности, к производству бактериальных препаратов на основе азотфиксирующих бактерий, используемых в агротехнике для повышения плодородия почвы и урожайности.

Способ приготовления бактериального удобрения на основе бактерий рода azotobacter // 2390517

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и может быть реализовано в микробиологической промышленности для получения различных бактериальных удобрений.

Способ приготовления биологически активного органического удобрения (баоу) // 2376270

Изобретение относится к биотехнологии. .

Удобрение из морских планктонов, способ и установка для его получения // 2367637

Изобретение относится к органическим удобрениям из сырья морского происхождения. .

Почвогрунт торфяной "малахит" (варианты) // 2366640

Изобретение относится к почвогрунтам на основе торфа и биокомпоста, полученного при утилизации твердых коммунальных отходов, используемых в зеленом строительстве для выращивания цветов, газонов (Вариант 1) и древесно-кустарниковых хвойных пород (Вариант 2) в лесопарковых зонах, парках и питомниках.

Способ получения торфяного субстрата для посадочного материала лесных культур // 2365569

Изобретение относится к области сельского хозяйства. .

Способ утилизации жиросодержащих отходов и продукт, получаемый этим способом // 2354633

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в переработке жиросодержащих отходов с помощью микроорганизмов. .

Штамм клубеньковых бактерий bradyrhizobium japonicum вкм в-2456d для изготовления бактериального удобрения под сою // 2413762

Изобретение относится к биотехнологии