Штамм клубеньковых бактерий bradyrhizobium japonicum вкм в-2456d для изготовления бактериального удобрения под сою

Авторы патента:

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

C05F11/08 - органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и т.п.

Владельцы патента RU 2413762:

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сои Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum БМ-85к выделен из природной популяции клубеньковых бактерий, распространенной в почвах южной зоны Амурской области, и депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г.К.Скрябина Российской академии наук под регистрационным номером BKM B-2456D. Изобретение позволяет повысить урожай семян сои и улучшить его качество. 1 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для производства бактериального удобрения для сои.

Наиболее близким к изобретению является штамм Bradyrhizobium japonicum 648А, используемый для приготовления соевого нитрагина (а.с. СССР №1524432).

Известные штаммы обладают сравнительно низким уровнем вирулентности и активности и в качестве источника углеродного питания используют только маннит.

При создании изобретения ставилась задача получения штамма, обладающего более высокой эффективностью с высокими адаптационными возможностями.

Задача решается новым штаммом клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum БМ-85к, который выделен в 2003 году из клубеньков дикорастущей сои, произрастающей на пойменных почвах Благовещенского района Амурской области.

Полученный штамм депонирован и хранится во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г.К.Скрябина Российской академии наук под регистрационным номером ВКМ B-2456D и коллекции ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института сои под номером БМ-85к.

Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки

В молодом возрасте бактерии штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D подвижные, представляют собой удлиненные палочки размером (2,3…2,5)×0,4 мк. Грамотрицательные. Быстрорастущая культура. В чашках Петри на маннитно-соевой твердой питательной среде указанные бактерии вырастают на 20 сутки после посева, образуя выпуклые, молочно-белые, слизистые колонии диаметром 1,0…3,1 мм. Бактерии Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D хорошо растут и на других питательных средах:

Среда Норриса, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; MgSO₄ - 0,8; NaCl - 0,2; FeCl₃ - 0,01; дрожжевой экстракт - 2,0; маннит - 10,0.

Соевая среда с маннитом, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с глюкозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; глюкоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с сахарозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; сахароза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с мальтозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; мальтоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с лактозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; лактоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Навеску соевой муки получают путем размола пророщенных соевых семян, заливают 1 литром воды и кипятят в течение 30 минут. В фильтрат, доведенный до 1 литра, вносят соли.

При выращивании штамма ВКМ B-2456D в пробирках на всех вышеперечисленных средах (при температуре 28°C в течение 480 часов) отмечен обильный рост штриха гелеобразной молочно-белой консистенции. При длительном хранении чистой культуры в холодильнике при температуре 4°C консистенция штриха штамма ВКМ B-2456D не изменяется.

Физиолого-биохимические признаки

Аэроб.

Температурный диапазон роста 27-30°C. Оптимальная температура роста 27-28°C.

Оптимум pH 7,0.

Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает и растет на сахарозе, глюкозе, мальтозе, лактозе, манните с образованием продуктов кислотного характера.

Признаки штамма устойчивые. Штамм не патогенен. Пересевается один раз в 6 месяцев. Хранится в пробирках на маннитно-соевом агаре при температуре 4-5°C.

Штамм ВКМ B-2456D идентифицирован по «Определителю» Берги (1980) как штамм вида Bradyrhizobium japonicum.

Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D отличается от ранее известных штаммов клубеньковых бактерий сои способностью использовать различные источники углеродного питания.

Изобретение поясняется следующим конкретным примером использования штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D.

Пример

Посевной материал получают выращиванием штамма в пробирках с агаризованной питательной соевой средой с маннитом, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

После посева пробирки с бактериальной культурой выставляют в термостаты с температурой 27-28°C на 20 суток. За это время в пробирках на косячке плотной питательной среды отмечается обильное нарастание бактериальной массы испытываемого штамма.

Для инокуляции семян в день посева сои готовят бактериально-молибденовую смесь. Для этого в пробирки со штрихом испытываемого штамма клубеньковых бактерий сои вносят по 2,5 мл заранее приготовленного 1,25% раствора молибдена (25 г/л молибдата аммония). Штрих с косяка питательной среды смывают раствором молибдена. Путем встряхивания пробирки получают однородную бактериально-молибденовую смесь, которой сразу же обрабатывают семена сои. Полученный объем суспензии (2,5 мл) используют для предпосевной обработки 250 г семян сои. После нанесения суспензии семена сои тщательно перемешивают, подсушивают в тени и высевают в подготовленную почву.

В таблице приводятся данные об эффективности штамма ВКМ B-2456D в зависимости от условий года, полученные в результате проведения полевых экспериментов. Опыты проводили на лугово-черноземовидных почвах с сортом сои Соната. Бактеризованные семена высевают в день обработки. Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D по сравнению с контролем (штамм B.japonicum 648A) стабильно повышал урожайность семян сои в течение трех лет испытаний в среднем на 1,8 ц/га.

Эффективность штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D
Штамм	Урожайность семян сои по годам, ц/га	Средняя урожайность, ц/га
2004 г.	2006 г.	2007 г.
Контроль (штамм 648A)	17,1	24,8	16,6	19,5
БМ-85к (ВКМ B-2456D)	18,5	27,4	18,0	21,3

Штамм клубеньковых бактерий сои вида Bradyrhizobium japonicum BKM B-2456D для изготовления бактериального удобрения под сою.

Штамм бактерий bacillus sp., обладающий иммуномодулирующей и геропротекторной активностью // 2413760

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к штаммам микроорганизмов. .

Штамм клубеньковых бактерий вида sinorhizobium fredii кб-11 для изготовления бактериального удобрения под сою // 2413707

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к изготовлению бактериального удобрения под сою. .

Штамм бактерий escherichia coli eb387 для защиты животных семейства псовых от токсикозов, вызванных цитотоническими токсинами типа a1b5, и пробиотический препарат на его основе // 2412992

Изобретение относится к ветеринарной медицине и биотехнологии. .

Способ получения пробиотической кормовой добавки ферм км для сельскохозяйственных животных и птицы // 2412612

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности к способам приготовления биологически активных кормовых добавок для млекопитающих, птиц, рыб, повышающих эффективность пищеварения, оказывающих разностороннее действие на животный организм и позволяющих применять их как для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний, так и для стимуляции роста и повышения продуктивности животных.

Способ получения питательной среды для проведения микробного синтеза лизина // 2412242

Изобретение относится к биотехнологии, спиртовой и кормовой промышленности, может быть использовано при производстве кормовых добавок, обогащенных белком и аминокислотами.

Способ профилактики желудочно- кишечных заболеваний у животных или людей, способ лечения желудочно-кишечных заболеваний у животных или людей и лекарственное средство для лечения или профилактики желудочно-кишечных заболеваний у животных или людей // 2412241

Изобретение относится к профилактике кишечного заболевания, такого как связанная с антибиотиками диарея, приобретенная диарея, вызванная Clostridium difficile, воспалительное кишечное заболевание и желудочно-кишечное заболевание, введением эффективного количества бактерий Bacillus, которые продуцируют липопептиды.

Питательная среда для выращивания легионелл // 2412240

Изобретение относится к биотехнологии для выращивания легионелл. .

Штамм lactobacillus fermentum z, используемый для производства пробиотических молочнокислых продуктов // 2412239

Изобретение относится к медицине, а именно к профилактике и лечению инфекционной патологии у человека и других млекопитающих. .

Бактерия, принадлежащая к роду pantoea, - продуцент l-аспартата или метаболита, являющегося производным l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболита, являющегося производным l-аспартата // 2411289

Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологической промышленности, в частности к способу получения L-аспартата или метаболита, являющегося производным L-аспартата, с использованием бактерии, принадлежащей к роду Pantoea, модифицированной таким образом, что в ней активность -кетоглутаратдегидрогеназы и цитратсинтазы снижена; активность фосфоенолпируваткарбоксилазы или пируваткарбоксилазы и глутаматдегидрогеназы или глутаматсинтазы повышена.

Штамм клубеньковых бактерий вида sinorhizobium fredii кб-11 для изготовления бактериального удобрения под сою // 2413707

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к изготовлению бактериального удобрения под сою. .

Штамм бактерий bacillus mucilaginosus bac 1208, обладающий повышенными фосфор и калий мобилизующими свойствами и удобрение на его основе // 2408722

Штамм бактерий agrobacterium radiobacter ag 1108, обладающий повышенными азотфиксирующими свойствами, и удобрение на его основе // 2408721

Способ получения биогумуса // 2408563

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к производству биоудобрений и средств защиты растений. .

Биопрепарат в виде водной суспензии для повышения почвенного плодородия // 2390518

Изобретение относится к биотехнологии и сельскохозяйственной микробиологии и, в частности, к производству бактериальных препаратов на основе азотфиксирующих бактерий, используемых в агротехнике для повышения плодородия почвы и урожайности.

Способ приготовления бактериального удобрения на основе бактерий рода azotobacter // 2390517

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и может быть реализовано в микробиологической промышленности для получения различных бактериальных удобрений.

Способ приготовления биологически активного органического удобрения (баоу) // 2376270

Изобретение относится к биотехнологии. .

Удобрение из морских планктонов, способ и установка для его получения // 2367637

Изобретение относится к органическим удобрениям из сырья морского происхождения. .

Почвогрунт торфяной "малахит" (варианты) // 2366640

Изобретение относится к почвогрунтам на основе торфа и биокомпоста, полученного при утилизации твердых коммунальных отходов, используемых в зеленом строительстве для выращивания цветов, газонов (Вариант 1) и древесно-кустарниковых хвойных пород (Вариант 2) в лесопарковых зонах, парках и питомниках.

Способ получения торфяного субстрата для посадочного материала лесных культур // 2365569

Изобретение относится к области сельского хозяйства. .

Штамм клубеньковых бактерий sinorhizobium fredii вкм в-2458d для изготовления бактериального удобрения под сою // 2415924

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для изготовления бактериального удобрения под сою