Способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов


 


Владельцы патента RU 2413945:

Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГОУ ВПО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Сущность способа оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов заключается в том, что эритроциты выделяют, помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ. При этом об изменении состояния цитоскелета судят по снижению агрегационной способности эритроцитов. Использование способа позволяет быстро и просто определить состояние цитоскелета эритроцита. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследований.

Известен способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов, взятый за прототип (Mohandas N. et al., Blood. V.59. P.768-774), включающий выделение эритроцитов из крови, получение из них замкнутых теней и определение механической стабильности при высокой скорости сдвига. Однако способ трудоемок (получение замкнутых теней) и требует дорогого специального оборудования (эктацитометра).

Задача создания нового, несложного, высокочувствительного, не требующего специального оборудования, способа определения изменения состояния цитоскелета эритроцитов является актуальной.

Задача достигается способом, который заключается в том, что эритроциты выделяют из крови, помещают в кювету агрегометра, куда в качестве агента, вызывающего агрегацию эритроцитов, добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ. Процесс агрегации регистрируется фотоколориметрически с записью на самописце в виде агрегатограммы. Об изменении состояния цитоскелета эритроцитов судят по снижению агрегационной способности эритроцитов.

Способ упрощает процедуру оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологического растворе (10 мМ трис-HCl, 146 мМ NaCl, pH 7.4), после чего суспензию клеток помещают в кювету для изучения агрегации и добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ. Регистрацию агрегационной способности эритроцитов осуществляют фотометрическим методом (Шереметьев Ю.А. и др. Биофизика. 2000. Т.45. №1. С.79-82).

Известно, что при pH среды выше 8,0 и при повышенном содержании внутриклеточного АТФ в эритроцитах происходит снижение стабильного состояния цитоскелета (Low P.S. et al., Blood 1991. Vol.7. P.1581-1586; Sheetz M.P., Casaly J.J. Biol. Chem. 1980. Vol.255. P.9955-9960).

Нами выяснено, что при высоких концентрациях хлористого лантана (400-600 мкМ) у эритроцитов с измененным состоянием цитоскелета происходит снижение агрегационной способности.

Пример 1. Оценка изменения состояния цитоскелета эритроцитов, инкубированных при pH 8,5. Из таблицы видно, что после инкубации суспензии эритроцитов при pH 8,5 в течение 10 мин происходит снижение их агрегационной способности после добавления 500 мкМ хлористого лантана.

Пример 2. Оценка изменения состояния цитоскелета эритроцитов, имеющих повышенный уровень АТФ. Эритроциты с повышенным уровнем АТФ (уровень АТФ повышался до 2,86±0,17 мкмоль/мл относительно 1,16±0,08 мкмоль/мл в контроле) получали после их инкубации в буферной среде (15 мМ трис-HCl, 146 мМ NaCl, pH 7,6), содержащей 2 мМ аденина, 10 мМ инозина, 10 мМ глюкозы и 150 мМ Na2HPO4 в течение 15 ч при 37°С.

Из таблицы видно, что при повышении АТФ в эритроцитах происходит снижение их агрегационной способности после добавления 500 мкМ хлористого лантана.

Приведенные примеры показывают возможности применения способа оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов.

Концентрация лантана, мкМ Максимальная амплитуда агрегатограммы, мм
Контроль Эритроциты с повышенным уровнем АТФ pH 8,5
500 60,20±4,50 30,15±3,45 33,61±3,60

Способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегационной способности, отличающийся тем, что изменение состояния цитоскелета определяют по изменению агрегационной способности эритроцитов, при этом эритроциты помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ, об изменении состояния цитоскелета судят по снижению агрегационной способности эритроцитов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к токсикологии, и касается способа оценки тяжести острых отравлений опиоидами. .

Изобретение относится к области биомедицинских технологий. .
Изобретение относится к клинической биохимии и хирургии и касается способа прогнозирования развития остеомиелита при переломах длинных трубчатых костей в послеоперационном периоде.

Изобретение относится к области медицины. .

Изобретение относится к косметической промышленности, в частности составу для ухода за полостью рта, эффективному для снижения неприятного запаха изо рта. .
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и касается способа дооперационного прогнозирования течения послеоперационного периода у пациента после операции на сердце, проводимой в условиях искусственного кровообращения.

Изобретение относится к устройствам - пробоотборникам воздуха, выдыхаемого человеком, и предназначено для взятия пробы. .
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии. .
Изобретение относится к медицине и касается способа определения продолжительности жизни больных с местно-распространенным и диссеминированным почечно-клеточным раком.

Изобретение относится к медицине, а именно к токсикологии, и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике больных с отравлениями опиоидами

Изобретение относится к области ветеринарии

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в лабораторных методах исследования при диагностике злокачественных новообразований
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии и кардиологии, и может быть использовано для ранней диагностики стенокардии напряжения типичного и атипичного течения у больных ХОБЛ
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и касается способа прогнозирования степени насыщения оксигемоглобином эритроцитов пуповинной крови новорожденных, родившихся от матерей, перенесших в третьем триместре герпес-вирусную инфекцию

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии и иммунологии
Изобретение относится к медицине, в частности к способу определения внутрисосудистой активации тромбоцитов

Изобретение относится к медицине, хирургии и может найти применение при выборе способа лечения детей с хирургической септической патологией в послеоперационном периоде
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии
Изобретение относится к медицине, клинико-лабораторной диагностике и экспериментальной медицине
Наверх