Пролекарства антагонистов a2b рецептора аденозина

Изобретение относится к соединениям формулы I, в которой R¹ и R² независимо обозначают C₁-₆алкил; R⁴ обозначает фенил, в случае необходимости замещенный трифторметилом; X обозначает водород или метил; и Y обозначает -C(O)R, где R обозначает С_1-6алкил; или Y обозначает -P(O)(OR⁵)₂, где R⁵ обозначает водород или C_1-6алкил; или их фармацевтически приемлемым солям. Данные соединения являются пролекарствами A_2B рецептора аденозина. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, являющейся антагонистом А_2В рецептора аденозина, на основе соединения формулы I. Соединения формулы I и фармацевтическая композиция могут найти применение при лечении различных болезненных состояний у млекопитающих, таких как желудочно-кишечные расстройства, иммунологические нарушения, аллергические нарушения, неврологические нарушения, сердечно-сосудистые нарушения и заболеваний, связанных с гиперпролиферацией клеток. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к пролекарствам антагонистов А_2В рецептора аденозина и к их применению в лечении у млекопитающих различных болезненных состояний, таких как желудочно-кишечные расстройства, иммунологические нарушения, аллергические нарушения, неврологические нарушения и сердечно-сосудистые заболевания, связанные как с гиперпролиферацией клеток, так и с апоптозом и т.п. Изобретение также относится к способам получения таких соединений и к содержащим их фармацевтическим композициям.

Уровень техники

Аденозин представляет собой природный нуклеозид, который проявляет свои биологические действия, взаимодействуя с семейством рецепторов аденозина, известных как А₁, A_2А, А_2В и A₃, все из которых модулируют важные физиологические процессы. Например, рецепторы аденозина A_2A модулируют расширение коронарных сосудов, рецепторы А_2В участвуют в активации тучных клеток, астме, расширении сосудов, регуляции роста клеток, функционировании кишечника и модуляции нейросекреции (См. Adenosine А_2В Receptors as Therapeutic Targets, Drug Dev Res 45:198; Feoktistov et al., Trends Pharmacol Sсi 19:148-153), и рецепторы аденозина A₃ модулируют процессы пролиферации клеток.

Аденозиновые рецепторы А_2В встречаются повсеместно и регулируют множество биологических активностей. Например, аденозин связывается с рецепторами А_2В на эндотелиальных клетках, таким образом стимулируя ангиогенез. Аденозин также регулирует рост популяций гладкомышечных клеток в кровеносных сосудах. Аденозин стимулирует рецепторы А_2В на тучных клетках, таким образом модулируя аллергические реакции Типа 1. Аденозин также стимулирует секреторную активность желудка путем связывания с А_2В в кишечнике.

Хотя многие из этих биологических действий аденозина необходимы для поддержания нормального гомеостаза тканей, при некоторых физиологических изменениях желательно модулировать его эффекты. Например, связывание рецепторов А_2В стимулирует ангиогенез, промотируя рост эндотелиальных клеток. Такая активность необходима при заживлении ран, но гиперпролиферация эндотелиальных клеток промотирует диабетическую ретинопатию. Кроме того, нежелательное увеличение кровеносных сосудов встречается в онкологических процессах. Соответственно, ингибирование связывания аденозина с рецепторами А_2В в эндотелие уменьшает или предотвращает гиперваскуляризацию, таким образом предотвращая ретинопатию и ингибируя формирование опухоли.

Рецепторы А_2В найдены в толстом кишечнике в базолатеральных областях эпителиоцитов кишечника, и под соответствующим действием лиганда они усиливают секрецию хлоридов, таким образом вызывая диарею, которая является обычным и потенциально фатальным осложнением инфекционных заболеваний, таких как холера и сыпной тиф. Антагонисты А_2В могут поэтому использоваться для блокировки секреции хлоридов в кишечнике, и таким образом они могут быть использованы в лечении воспалительных нарушений желудочно-кишечного тракта, включая диарею.

Нечувствительность к инсулину усиливает диабет и ожирение. Чувствительность к инсулину снижается при взаимодействии аденозина с рецепторами А_2В. Таким образом, блокировка аденозиновых рецепторов А_2В у людей, страдающих диабетом или ожирением, может принести пользу пациентам с этими нарушениями.

Другим неблагоприятным биологическим действием аденозина на рецептор А_2В является гиперстимуляция мозгового IL-6, цитокина, связанного с деменциями и болезнью Альцгеймера. Ингибирование связывания аденозина с рецепторами А_2В поэтому может смягчать те неврологические нарушения, которые являются следствием действия IL-6.

Аллергические нарушения Типа 1, такие как хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), астма, поллиноз и аллергическая экзема, стимулируются связыванием тучных клеток с А_2В-рецепторами. Соответственно, блокировка таких рецепторов аденозина обеспечивает терапевтический эффект в отношении таких нарушений.

Существуют некоторые соединения, используемые в настоящее время в лечении астмы. Например, теофиллин представляет собой эффективное противоастматическое средство, даже при том, что он является слабым антагонистом рецептора аденозина. Однако для его эффективности необходимы высокие плазменные уровни. Дополнительно, теофиллин имеет реальные побочные эффекты, большинство из которых являются следствием его действия на ЦНС, что не обеспечивает никаких благоприятных эффектов в отношении лечении астмы и фактически он неспецифически блокирует все подтипы рецептора аденозина.

Дополнительно, лечение аденозином, такое как ингаляции аденозина (или монофосфата аденозина), вызывает бронхоспазм у астматиков, но не у нормальной популяции. Этот процесс, как известно, включает активацию тучных клеток, в которой он высвобождает медиаторы тучных клеток, включая гистамин, PGD2-β-гексозаминидазу и триптазу. Эта реакция блокируется специфическими блокаторами гистамина Н₁ и хромолином натрия. Соответственно, имеется внутреннее различие в способе, которым аденозин взаимодействует с тучными клетками астматиков, и таким образом антагонисты А_2В особенно пригодны для модуляции функций тучных клеток или для активации клеток человеческого легкого.

В патенте США 6825349 раскрыты новые антагонисты А_2В рецептора аденозина, которые являются мощными и селективными в отношении А_2В рецептора аденозина. Определена категория предпочтительных соединений, раскрытых в указанной заявке на патент, в которых положение 7 ксантиновой части является незамещенным. Известно, что такие соединения являются относительно нерастворимыми в водных средах и представляют трудности для составления с использованием обычных фармацевтических эксципиентов, и, следовательно, потенциально трудны для составления таким образом, который обеспечил бы воспроизводимые плазменные уровни оцениваемого соединения в организме млекопитающих, в частности человека. Авторы изобретения обнаружили соединения, которые являются более растворимыми в водных средах и/или обычных фармацевтических эксципиентах, и неожиданно активны как пролекарства соединений, описанных в '349.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В патенте США 6825349 раскрыты новые антагонисты А_2В рецептора аденозина. Один вариант осуществления изобретения согласно '349 представлен следующей формулой:

в которой

R¹ и R² независимо обозначают низший алкил;

R³ обозначает водород или в случае необходимости замещенный алкил; и

R⁴ обозначает в случае необходимости замещенный фенил;

и фармацевтически приемлемые соли этого соединения.

Один предпочтительный вариант соединений в рамках Формулы A включает соединения, в которых положение 7 ксантиновой части является незамещенным; то есть где R³ обозначает водород. Особенно предпочтительными являются соединения, в которых R¹ и R² являются разными и обозначают низший алкил, а R⁴ обозначает 3-трифторметилфенил. Однако было обнаружено, что предпочтительные соединения относительно нерастворимы в водных средах и представляют трудности для составления с использованием обычных фармацевтических эксципиентов, и, следовательно, потенциально трудны для составления таким образом, который обеспечил бы воспроизводимые плазменные уровни оцениваемого соединения в организме млекопитающих, в частности человека. Неожиданно было обнаружено, что небольшая субпопуляция соединений Формулы A ведет себя как пролекарства предпочтительных соединений. Эти соединения выбраны из соединений Формулы A, в которой R³ обозначает замещенный метил; в частности соединения, в которых замещение на метиле обеспечивает сложный эфир или фосфатное производное. Такие соединения более растворимы в водных средах и/или обычных фармацевтических эксципиентах, чем соединения Формулы A, и обеспечивают более высокие плазменные уровни активной группы (соединения Формулы A, в которой R³ является водородом), чем при непосредственном введении активной группы.

Соответственно, в первом аспекте настоящее изобретение относится к пролекарствам Формулы I, имеющим формулу:

в которой

R¹ и R² независимо обозначают низший алкил;

R⁴ обозначает в случае необходимости замещенный фенил;

X обозначает водород или метил; и

Y обозначает -С(О)R, где R независимо обозначает в случае необходимости замещенный низший алкил, в случае необходимости замещенный арил или в случае необходимости замещенный гетероарил; или

Y обозначает -P(О)(OR⁵)₂, где R⁵ обозначает водород или низший алкил, в случае необходимости замещенный фенилом или гетероарилом; и их фармацевтически приемлемым солям.

Одна предпочтительная группа соединений Формулы I представлена соединениями, в которых R¹ и R² являются этилом или н-пропилом, особенно соединения, в которых R¹ является н-пропилом, а R² - этилом. Предпочтительно, R⁴ обозначает 3-(трифторметил)фенил, и X обозначает водород.

Одна предпочтительная подгруппа включает соединения Формулы I, в которой Y обозначает -C(O)R, особенно соединения, в которых R является метилом, этилом, н-пропилом, изопропилом, н-бутилом, изобутилом, трет.-бутилом или н-пентилом, более конкретно, где R обозначает метил, н-пропил или трет.-бутил. Другая предпочтительная подгруппа включает соединения Формулы I, в которой Y обозначает -P(O)(OR⁵)₂, особенно где R³ обозначает водород.

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к способу применения соединений Формулы I для лечения заболевания у млекопитающего, в отношении которого можно добиться улучшения путем лечения антагонистом А_2В рецептора аденозина, в частности, атеросклероза, ангиогенеза, диабетической ретинопатии, рака, хронического обструктивного заболевания легких или астмы, или воспалительных нарушений желудочно-кишечного тракта, таких как диарея, или неврологических нарушений, таких как старческая деменция, болезнь Альцгеймера или болезнь Паркинсона.

Третий аспект этого изобретения относится к способам получения соединений Формулы I.

Четвертый аспект этого изобретения относится к фармацевтическим составам, включающим терапевтически эффективное количество соединения Формулы I и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

В настоящее время предпочтительными являются следующие соединения:

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилацетат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-2,2-диметилпропаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилбутаноат; и

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метилдигидрофосфат.

Определения и общие параметры

В настоящем описании следующие слова и фразы в целом имеют значения, сформулированные ниже, за исключением случаев, когда контекст, в котором они используются, указывает иное.

Термин "алкил" относится к монорадикалу с разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепью, имеющей 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 атомов углерода. Этот термин иллюстрируется такими группами, как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, н-гексил трет.-бутил, н-децил, тетрадецил и т.п.

Термин "замещенный алкил" относится к:

1) алкильной группе, как она определена выше, имеющей 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, предпочтительно от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, фосфата, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2; или

2) алкильной группе, как она определена выше, которая прервана 1-10 атомами, независимо выбранными из кислорода, серы и NR_а-, где R_а выбран из водорода, алкила, циклоалкила, алкенила, циклоалкенила, алкинила, арила, гетероарила и гетероциклила. Все заместители могут быть в случае необходимости дополнительно замещены алкилом, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2; или

3) алкильной группе, как она определена выше, которая имеет 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, определенных выше, и также прервана 1-10 атомами, определенными выше.

Термин "низший алкил" относится к монорадикалу с разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепью, имеющей 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода. Этот термин иллюстрируется такими группами, как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет.-бутил, н-гексил и т.п.

Термин "замещенный низший алкил" относится к низшему алкилу, как он определен выше, имеющему от 1 до 5 заместителей, предпочтительно 1, 2 или 3 заместителей, как определено для замещенного алкила, или к низшему алкилу, как он определен выше, прерванному 1, 2, 3, 4 или 5 атомами, как определено для замещенного алкила, или к низшему алкилу, как он определен выше, имеющему 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, как определено выше, и также прерванному 1, 2, 3, 4 или 5 атомами, как определено выше.

Термин "алкилен" относится к двухвалентному радикалу с разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепью, имеющему 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 атомов углерода, предпочтительно 1-10 атомов углерода, более предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода. Этот термин иллюстрируется такими группами, как метилен (-СН₂-), этилен (-СН₂СН₂-), изомеры пропилена (например, -CH₂CH₂CH₂- и -CH(CH₃)CH₂-) и т.п.

Термин "низший алкилен" относится к двухвалентному радикалу с разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепью, предпочтительно имеющей от 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода.

Термин "низший алкилен" относится к двухвалентному радикалу с разветвленной или неразветвленной насыщенной углеводородной цепью, предпочтительно имеющей от 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода.

Термин "замещенный алкилен" относится к:

(1) алкиленовой группе, определенной выше, имеющей 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2; или

2) алкиленовой группе, определенной выше, прерванной 1-20 атомами, независимо выбранными из кислорода, серы и NR_а-, где R_а выбран из водорода, в случае необходимости замещенного алкила, циклоалкила, циклоалкенила, арила, гетероарила и гетероциклила, или группами, выбранными из карбонила, карбоксиэфира, карбоксиамида и сульфонила; или

3) алкиленовой группе, определенной выше, имеющей 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, определенных выше, и также прерванной 1-20 атомами, как определено выше.

Примерами замещенных алкиленов являются хлорметилен (-CH(Cl)-), аминоэтилен (-CH(NH₂)CH₂-), метиламиноэтилен (-CH(NHMe)CH₂-), изомеры 2-карбоксипропилена (-CH₂CH(CО₂H)CH₂-), этоксиэтил (-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-), этилметиламиноэтил (-CH₂CH₂N(CH₃)CH₂CH₂-), 1-этокси-2-(2-этокси-этокси)этан (-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-OCH₂CH₂-OCH₂CH₂-) и т.п.

Термин "аралкил" относится к арильной группе, связанной ковалентной связью с алкиленовой группой, где арил и алкилен такие, как определены здесь. "В случае необходимости замещенный аралкил" относится к в случае необходимости замещенной арильной группе, связанной ковалентной связью с в случае необходимости замещенной алкиленовой группой. Такие аралкильные группы иллюстрируются бензилом, фенилэтилом, 3-(4-метоксифенил)пропилом и т.п.

Термин "алкокси" относится к группе R-O-, где R обозначает в случае необходимости замещенный алкил или в случае необходимости замещенный циклоалкил, или R обозначает группу -Y-Z, в которой Y является в случае необходимости замещенным алкиленом, и Z обозначает в случае необходимости замещенный алкенил, в случае необходимости замещенный алкинил; или в случае необходимости замещенный циклоалкенил, где алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил и циклоалкенил такие, как определено здесь. Предпочтительными алкоксигруппами являются в случае необходимости замещенные группы алкил-О- и включают, например, метокси, этокси, н-пропокси, изо-пропокси, н-бутокси, трет.-бутокси, втор.-бутокси, н-пентокси, н-гексокси, 1,2-диметилбутокси, трифторметокси и т.п.

Термин "алкилтио" относится к группе R-S-, где R имеет значение, определенное для алкокси.

Термин "алкенил" относится к монорадикалу разветвленной или неразветвленной ненасыщенной углеводородной группы, предпочтительно имеющей от 2 до 20 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 10 атомов углерода и еще более предпочтительно от 2 до 6 атомов углерода и имеющей 1-6, предпочтительно 1 двойную связь (винильную). Предпочтительные алкенильные группы включают этенил или винил (-CH=CH₂), 1-пропилен или аллил (-CH₂CH=CH₂), изопропилен (-С(СН₃)=СН₂), бицикло[2.2.1]гептен и т.п. Когда алкенил присоединен к азоту, двойная связь не может быть в положении альфа по отношению к азоту.

Термин "низший алкенил" относится к алкенилу, как он определен выше, имеющему от 2 до 6 атомов углерода.

Термин "замещенный алкенил" относится к алкенильным группам, определенным выше, имеющим 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, и предпочтительно 1, 2 или 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "алкинил" относится к ненасыщенному углеводородному монорадикалу, предпочтительно имеющему от 2 до 20 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до 10 атомов углерода и еще более предпочтительно от 2 до 6 атомов углерода и имеющему по меньшей мере 1 и предпочтительно от 1-6 участков ацетиленовой (тройная связь) ненасыщенности. Предпочтительные алкинильные группы включают этинил, (-C≡CH), пропаргил (или проп-1-ин-3-ил, -CH₂OCH) и т.п. Когда алкинил присоединен к азоту, тройная связь не может быть в положении альфа по отношению к азоту.

Термин "замещенный алкинил" относится к алкинильным группам, определенным выше, имеющим 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, и предпочтительно 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "аминокарбонил" относится к группе -C(O)NRR, где каждый R независимо обозначает водород, алкил, арил, гетероарил, гетероциклил или где обе группы R соединены, образуя гетероциклическую группу (например, морфолино). Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "ациламино" относится к группе -NRC(O)R, где каждый R независимо обозначает водород, алкил, арил, гетероарил или гетероциклил. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "ацилокси" относится к группам -О(О)C-алкил, -О(О)C-циклоалкил, -О(О)C-арил, -О(О)C-гетероарил, и -О(О)C-гетероциклил. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "арил" относится к ароматической карбоциклической группе из 6-20 атомов углерода, имеющих единственное кольцо (например, фенил) или множество колец (например, дифенил), или множество конденсированных (слитых) колец (например, нафтил или антрил). Предпочтительные арилы включают фенил, нафтил и т.п.

Термин "арилен" относится к дирадикалу арильной группы, определенной выше. Этот термин иллюстрируется такими группами, как 1,4-фенилен, 1,3-фенилен, 1,2-фенилен, 1,4'-бифенилен и т.п.

Если определение не ограничено другими значениями для арильного или ариленового заместителя, такой арил или арилен могут в случае необходимости быть замещены от 1 до 5 заместителей, предпочтительно от 1 до 3 заместителей, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "арилокси" относится к группе арил-О-, в которой арильная группа имеет определенное выше значение и включает в случае необходимости замещенные арильные группы, как также определено выше. Термин "арилтио" относится к группе R-S-, где R имеет значение, как определено для арила.

Термин "амино" относится к группе -NH₂.

Термин "замещенный амино" относится к группе -NRR, где каждый R независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, карбоксиалкила (например, бензилоксикарбонил), арила, гетероарила и гетероциклила, при условии, что обе группы R не обозначают водород, или группы -Y-Z, в которой Y является в случае необходимости замещенным алкиленом, и Z обозначает алкенил, циклоалкенил или алкинил. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "карбоксиалкил" относится к группам -C(О)О-алкил, -C(О)О-циклоалкил, где алкил и циклоалкил такие, как определены здесь, и могут быть в случае необходимости дополнительно замещены алкилом, алкенилом, алкинилом, алкокси, галогеном, CF₃, амино, замещенным амино, циано или -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "циклоалкил" относится к карбоциклическим группам, состоящим из от 3 до 20 атомов углерода, имеющим единственное циклическое кольцо или множество конденсированных колец. Такие циклоалкильные группы включают, например, кольцевые структуры с единственным кольцом, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклооктил и т.п., или кольцевые структуры с множеством колец, такие как адамантил, бицикло[2.2.1]гептан, 1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гепт-2-ил, (2,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гепт-2-ил), или карбоциклические группы, с которыми конденсирована арильная группа, например индан, и т.п.

Термин "замещенный циклоалкил" относится к циклоалкильным группам, имеющим 1, 2, 3, 4 или 5 заместителей, и предпочтительно 1, 2 или 3 заместителя, выбранных из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин галоген относится к фтору, брому, хлору и йоду.

Термин "ацил" обозначает группу -C(O)R, в которой R обозначает водород, в случае необходимости замещенный алкил, в случае необходимости замещенный циклоалкил, в случае необходимости замещенный гетероциклил, в случае необходимости замещенный арил и в случае необходимости замещенный гетероарил.

Термин "гетероарил" относится к ароматической циклической группе (то есть полностью ненасыщенной), имеющей 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 атомов углерода и 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из кислорода, азота и серы в составе по меньшей мере одного кольца. Такие гетероарильные группы могут иметь единственное кольцо (например, пиридил или фурил) или множество конденсированных колец (например, индолизинил, бензотиазолил или бензотиенил). Примеры гетероарилов включают, но не ограничены ими, [1,2,4]оксадиазол, [1,3,4]оксадиазол, [1,2,4]тиадиазол, [1,3,4]тиадиазол, пиррол, имидазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индолизин, изоиндол, индол, индазол, пурин, хинолизин, изохинолин, хинолин, фталазин, нафтилпиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, птеридин, карбазол, карболин, фенантридин, акридин, фенантролин, изотиазол, феназин, изоксазол, феноксазин, фентиазин, имидазолидин, имидазолин и т.п., а также N-алкокси-азот-содержащие гетероарильные соединения.

Термин «гетероарилен» относится к дирадикалу гетероарильной группы, определенной выше. Этот термин иллюстрируется такими группами, как 2,5-имидазолен, 3,5-[1,2,4]оксадиазолен, 2,4-оксазолен, 1,4-пиразолен и т.п. Например, 1,4-пиразолен представляет собой:

где A обозначает точку присоединения.

Если определение не ограничено другими значениями для гетероарильного или гетероариленового заместителя, такой гетероарил или гетероарилен могут быть в случае необходимости замещены 1-5 заместителями, предпочтительно 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин «гетероаралкил» относится к гетероарильной группе, соединенной ковалентной связью с алкиленовой группой, где гетероарил и алкилен такие, как определены здесь. «В случае необходимости замещенный гетероаралкил» относится к в случае необходимости замещенной гетероарильной группе, соединенной ковалентной связью с в случае необходимости замещенной алкиленовой группой. Такие гетероаралкильные группы иллюстрируются 3-пиридилметилом, хинолин-8-илэтилом, 4-метокситиазол-2-илпропилом и т.п.

Термин «гетероарилокси» относится к группе гетероарил-О-.

Термин "гетероциклил" относится к монорадикальной насыщенной или частично ненасыщенной группы, имеющей единственное кольцо или множество конденсированных колец, имеющих от 1 до 40 атомов углерода и от 1 до 10 гетероатомов, предпочтительно 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из азота, серы, фосфора и/или кислорода в составе кольца. Гетероциклические группы могут иметь единственное кольцо или множество конденсированных колец и включают тетрагидрофуранил морфолино, пиперидинил, пиперазино, дигидропиридино и т.п.

Если определение не ограничено другими значениями для гетероциклического заместителя, такие гетероциклические группы могут быть в случае необходимости замещены 1, 2, 3, 4 или 5, и предпочтительно 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила, алкокси, циклоалкила, циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, аминокарбонила, алкоксикарбониламино, азидо, циано, галогена, гидрокси, кето, тиокарбонила, карбокси, карбоксиалкила, арилтио, гетероарилтио, гетероциклилтио, тиола, алкилтио, арила, арилокси, гетероарила, аминосульфонила, аминокарбониламино, гетероарилокси, гетероциклила, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SО-алкила, -SО-арила, -SО-гетероарила, -SО₂-алкила, -SО₂-арила и -SО₂-гетероарила. Если определение не ограничено другими значениями, все заместители могут в случае необходимости быть дополнительно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из алкила, карбокси, карбоксиалкила, аминокарбонила, гидрокси, алкокси, галогена, CF₃, амино, замещенного амино, циано, и -S(O)_nR, где R обозначает алкил, арил или гетероарил и n=0, 1 или 2.

Термин "тиол" относитcя к группе -SH.

Термин "замещенный алкилтио" относится к группе -S-замещенный алкил.

Термин "гетероарилтиол" относится к группе -S-гетероарил, в которой гетероарил является таким, как определено выше, включая в случае необходимости замещенные гетероарильные группы, как также определено выше.

Термин "сульфоксид" относится к группе -S(O)R, в котором R обозначает алкил, арил или гетероарил. "Замещенный сульфоксид" относится к группе -S(O)R, в которой R обозначает замещенный алкил, замещенный арил или замещенный гетероарил, как определено здесь.

Термин "сульфон" относится к группе -S(O)₂R, в которой R является алкилом, арилом или гетероарилом. "Замещенный сульфон" относится к группе -S(O)₂R, в которой R обозначает замещенный алкил, замещенный арил или замещенный гетероарил, как определено здесь.

Термин "кето" относится к группе -C(O)-. Термин "тиокарбонил" относится к группе -C(S)-. Термин "карбокси" относится к группе -C(O)-ОН.

"В случае необходимости" означает, что описанный далее случай или обстоятельство могут иметь или, возможно, не иметь место, и что описание включает варианты, где указанный случай или обстоятельство имеет место, и варианты, в которых он(оно) не имеет место.

Термин «соединение Формулы I» охватывает соединения по изобретению, как они раскрыты, и фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сложные эфиры, пролекарства, гидраты и полиморфы таких соединений. Дополнительно, соединения по изобретению могут иметь один или более центров асимметрии, и могут быть получены как рацемическая смесь или как индивидуальные энантиомеры или диастереоизомеры. Число стереоизомеров в любом данном соединении Формулы I зависит от количества центров асимметрии (может быть 2ⁿ возможных стереоизомеров, где n обозначает количество центров асимметрии). Индивидуальные стереоизомеры могут быть получены разделением рацемической или нерацемической смеси промежуточного соединения на некоторой подходящей стадии синтеза или разделением соединения Формулы I обычными средствами. Индивидуальные стереоизомеры (включая индивидуальные энантиомеры и диастереоизомеры), а также рацемические и нерацемические смеси стереоизомеров входят в рамки настоящего изобретения, и все из них предназначены изображаться структурами, приведенными в настоящем описании, если не указано иное.

"Изомеры" представляют собой разные соединения, которые имеют одну и ту же молекулярную формулу.

"Стереоизомеры" представляют собой изомеры, которые отличаются только расположением атомов в пространстве.

"Энантиомеры" представляют собой пару стереоизомеров, которые являются зеркальным ненакладывающимся отображением друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой "рацемическую" смесь. Термин "(±)" используется для обозначения рацемической смеси, где это необходимо.

"Диастереоизомеры" представляют собой стереоизомеры, которые имеют по меньшей мере два асимметрических атома, но которые не являются зеркальными отображениями друг друга.

Абсолютная стереохимия определена согласно Системе R-S Cahn-Ingold-Prelog. Когда соединение представляет собой чистый энантиомер, стереохимия при каждом хиральном углероде может быть определена как R или S. Разделенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, определяются (+) или (-) в зависимости от направления (право- или левовращающего), в котором они отклоняют плоскость поляризованного света при длине волны D-линии натрия.

Термин "терапевтически эффективное количество" относится к такому количеству соединения Формулы I, которое является достаточным для осуществления лечения, как определено ниже, при введении млекопитающему. Терапевтически эффективное количество варьирует в зависимости от пациента и излечиваемого состояния, массы тела и возраста пациента, серьезности болезненного состояния, способа введения и т.п., что может быть легко определено специалистом.

Термин "лечение" означает любое лечение заболевания у млекопитающего, включая

(i) профилактику заболевания, то есть предотвращение развития клинических симптомов заболевания;

(ii) ингибирование заболевания, то есть остановку развития клинических симптомов; и/или

(iii) излечение заболевания, то есть регрессию клинических симптомов.

Во многих случаях соединения согласно настоящему изобретению способны образовывать соли с кислотой и/или основанием благодаря наличию амино и/или карбоксильных групп, или подобных групп. Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений Формулы I и которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Фармацевтически приемлемые соли присоединения с основанием могут быть получены из неорганических и органических оснований. Соли, полученные из неорганических оснований, включают, только в качестве примера, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция и магния. Соли, полученные из органических оснований, включают, но не ограничены ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, такие как алкиламины, диалкиламины, триалкиламины, замещенные алкиламины, ди(замещенный алкил)амины, три(замещенный алкил)амины, алкениламины, диалкениламины, триалкениламины, замещенные алкениламины, ди(замещенный алкенил)амины, три(замещенный алкенил)амины, циклоалкиламины, ди(циклоалкил)амины, три(циклоалкил)амины, замещенные циклоалкиламины, двузамещенный циклоалкиламин, трехзамещенные циклоалкиламины, циклоалкениламины, ди(циклоалкенил)амины, три(циклоалкенил)амины, замещенные циклоалкениламины, двузамещенный циклоалкениламин, трехзамещенные циклоалкениламины, ариламины, диариламины, триариламины, гетероариламины, дигетероариламины, тригетероариламины, гетероциклические амины, дигетероциклические амины, тригетероциклические амины, смешанные ди- и три-амины, где по меньшей мере два из заместителей на амине являются разными и выбраны из группы, состоящей из алкила, замещенного алкила, алкенила, замещенного алкенила, циклоалкила, замещенного циклоалкила, циклоалкенила, замещенного циклоалкенила, арила, гетероарила, гетероцикла и т.п. Также в рамки изобретения входят амины, где два или три заместителя, вместе с азотом аминогруппы, образуют гетероциклическую группу или гетероарил.

Частные примеры подходящих аминов включают, только в качестве примера, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, три(изопропил)амин, три(н-пропил)амин, этаноламин, 2-диметиламиноэтанол, трометамин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, N-алкилглюкамины, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, тетрагидрооксазин, N-этилпиперидин и т.п.

Фармацевтически приемлемые соли присоединения с кислотой могут быть получены из неорганических и органических кислот. Соли, полученные из неорганических кислот, включают соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Соли, полученные из органических кислот, включают уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, пировиноградную кислоту, щавелевую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту и т.п.

В рамках изобретения "фармацевтически приемлемый носитель" включает любой и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и задерживающие поглощение средства и т.п. Использование такой среды и средств для фармацевтически активных веществ известно в уровне техники. Кроме случаев, когда любые стандартные среды или средства являются несовместимыми с активным ингредиентом, их использование в терапевтических композициях является возможным. Дополнительные активные ингредиенты могут также быть включены в композиции.

В рамках изобретения термин "пролекарство" обозначает соединение, которое метаболизируется in vivo в соединение, которое является активным как антагонист A_2B рецептора аденозина.

Номенклатура

Наименование и нумерация соединений по изобретению иллюстрируются на примере соединения Формулы I, в которой R¹ обозначает н-пропил, R² обозначает этил, R⁴ обозначает 3-трифторфенил, X обозначает водород, и Y обозначает -C(O)CH₂CH₂CH₃;

которое называют

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилбутаноат.

Параметры реакции синтеза

Термины "растворитель", "инертный органический растворитель" или "инертный растворитель" означают растворитель, инертный в условиях реакции, описываемой применительно к ним [включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран ("ТГФ"), диметилформамид ("DMF"), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), простой диэтиловый эфир, метанол, пиридин и т.п.]. Если не указано иное, растворители, используемые в реакциях согласно настоящему изобретению, представляют собой инертные органические растворители. Термин "q.s." означает добавление количества, достаточного для достижения заявленной функции, например, для доведения раствора до желательного объема (то есть 100%).

Синтез соединений Формулы I

Способ получения соединений Формулы I, в которой Y обозначает в случае необходимости замещенный низший алкил, в случае необходимости замещенный арил, или в случае необходимости замещенный гетероарил, показан в Схеме Реакции I.

СХЕМА РЕАКЦИИ I

где R¹, R², R⁴, X и Y имеют значения, определенные выше.

В общем, соединение формулы (1) вводят в реакцию в полярном растворителе, например N,N-диметилформамиде, с соединением формулы YOCHXCl. Реакцию проводят при температуре приблизительно от 30 до 80°С, предпочтительно, около 60°C, в присутствии основания, предпочтительно неорганического основания, например, карбоната калия, в течение приблизительно 8-24 часов. Когда реакция в основном завершена, продукт Формулы I выделяют обычными средствами, например, препаративной хроматографией.

Исходное соединение формулы (1) может быть получено методиками, раскрытыми в патенте США 6825349, или раскрытыми в Заявке на патент США №10/719102, номер публикации 20040176399, все содержание которых тем самым включено путем ссылки.

Когда Y обозначает -C(O)R, где R является гетероциклом, соединение формулы (2) (RC(O)OCHXCl) является коммерчески доступным или может быть получено как показано ниже, с использованием, например, пиридина.

В общем, карбоновую кислоту формулы (a) вводят в реакцию в инертном растворителе, например дихлорметане, с хлорметиловым производным формулы (b) в присутствии четвертичной соли, например тетрабутиламмоний сульфата. Реакцию осуществляют при температуре приблизительно 0°C, в присутствии основания, предпочтительно неорганического основания, например бикарбоната натрия, с последующей реакцией при комнатной температуре в течение приблизительно 2-10 часов. Когда реакция в основном завершена, продукт, хлорметилпиридин-3-карбоксилат, выделяют обычными средствами.

Карбаматные производные могут быть получены как показано в схеме реакции II.

СХЕМА РЕАКЦИИ II

где R¹, R² и R⁴ имеют значения, определенные выше, и R_аR_bNH обозначает амин.

В общем, амин формулы R_аR_bNH вводят в реакцию в полярном растворителе, например N,N-диметилформамиде, с хлорметилхлорформиатом при температуре приблизительно 0°C, в присутствии основания, предпочтительно неорганического основания, например карбоната калия, в течение приблизительно 1 часа. Затем добавляют раствор соединения формулы (1) в полярном растворителе при 0°C и осуществляют реакцию в смеси в течение 24 часов, позволяя температуре повыситься до комнатной температуры. Когда реакция в основном завершена, продукт Формулы I выделяют обычными средствами, например, препаративной хроматографией.

Для получения эфирного производного соединения формулы (1), соединение формулы (1) вводят в реакцию обычным образом с подходящим хлорметиловым эфиром.

Способ получения соединения Формулы I, в которой Y обозначает -P(O)(ОН)₂, показан в схеме реакции III.

СХЕМА РЕАКЦИИ III

Стадия 1

В общем, соединение формулы (2) вводят в реакцию с соединением формулы (1) в полярном растворителе, например N,N-диметилформамиде, при температуре приблизительно 30-90°C, в присутствии основания, предпочтительно неорганического основания, например карбоната калия, в течение приблизительно 4-24 часов. Когда реакция в основном завершена, продукт формулы (3) выделяют обычными средствами и очищают, например, препаративной хроматографией.

Стадия 2

В продукте формулы (3) удаляют защитную группу обычным образом с использованием сильной кислоты, например трифторуксусной кислоты, или, альтернативно, слабой кислоты, такой как муравьиная кислота, в инертном растворителе, например дихлорметане. Реакцию проводят при приблизительно комнатной температуре в течение приблизительно 4-24 часов. Когда реакция в основном завершена, продукт Формулы I, в которой Y обозначает -P(O)(ОН)₂, выделяют обычными средствами и очищают, например, препаративной хроматографией.

Исходный материал Формулы (2)

Соединение формулы (2), ди-трет.-бутилхлорметилфосфат, получают из бис(трет.-бутокси)фосфино-1-ола как показано ниже.

Стадия 1

В общем, соединение формулы (a), бис(трет.-бутокси)фосфино-1-ол, вводят в реакцию с окислителем, например перманганатом калия, в присутствии слабого основания, например бикарбоната калия, в водном растворителе. Реакцию первоначально проводят при температуре приблизительно 0°C, и затем при приблизительно комнатной температуре в течение приблизительно 1 часа. Когда реакция в основном завершена, продукт формулы (b), ди-трет.-бутилгидрофосфат, выделяют обычными средствами, например подкислением и фильтрацией образовавшегося фосфата.

Стадия 2

Первоначально соль тетраметиламмония (b) получают реакцией ди-трет.-бутилгидрофосфата с гидроксидом тетраметиламмония в инертном растворителе, например ацетоне, при температуре приблизительно 0°C. Тетраметиламмониевую соль ди-трет.-бутилгидрофосфата выделяют обычными средствами, например удалением растворителя.

Затем тетраметиламмониевую соль ди-трет.-бутилгидрофосфата вводят в реакцию с производным дигалогенметана, например дибромметаном или хлорйодометаном, в инертном растворителе, например 1,2-диметоксиэтане. Реакцию проводят при температуре приблизительно 60-90°C. Когда реакция в основном завершена, продукт формулы (2) выделяют обычными средствами.

Пригодность, тестирование и введение

Общая пригодность

Соединения Формулы I эффективны in vivo для лечения состояний, которые отвечают на введение антагонистов A_2B рецептора аденозина. Такие состояния включают, но не ограничены ими, по меньшей мере одно состояние из числа диареи, атеросклероза, рестеноза, диабетической ретинопатии, рака, сенильной деменции, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, травматического повреждения головного мозга и аллергических реакций Типа 1, включая хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), астму, аллергическую экзему и поллиноз.

Фармацевтические композиции

Соединения Формулы I обычно вводят в форме фармацевтических композиций. Изобретение поэтому относится к фармацевтическим композициям, которые содержат, в качестве активного ингредиента, одно или более соединений Формулы I, или их фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир, и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей, включая инертные твердые разбавители и наполнители, разбавители, включая стерильный водный раствор и различные органические растворители, усилители проникновения, солюбилизаторы и адъюванты. Соединения Формулы I могут вводиться индивидуально или в комбинации с другими терапевтическими средствами. Такие композиции получают способом, известным в области фармации (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, PA 17^th Ed. (1985) и "Modern Pharmaceutics", Marcel Dekker, Inc. 3^rd Ed (G.S. Banker & CT. Rhodes, Eds.).

Введение

Соединения Формулы I могут вводиться в виде единственной дозы или множества доз любым из принятых способов введения средств, имеющих подобную применимость, например, как описано в патентах и заявках на патент, включенных путем ссылки, включая ректальный, щечный, внутриносовой и чрескожный пути, внутриартериальной инъекцией, внутривенно, интраперитонеально, парентерально, внутримышечно, подкожно, перорально, топически, ингаляцией или с помощью пропитанного или имеющего покрытие устройства, такого как стент, например, или вводимый в артерию цилиндрический полимер.

Одним способом введения является парентеральный, особенно путем инъекции. Формы, в которые новые композиции согласно настоящему изобретению могут быть включены для введения путем инъекции, включают водные или масляные суспензии или эмульсии с кунжутным маслом, кукурузным маслом, хлопковым маслом или арахисовым маслом, а также эликсиры, маннит, декстроза или стерильный водный раствор, и подобные фармацевтические носители. Водные растворы в солевом растворе также традиционно используются для инъекции, но менее предпочтительны в контексте настоящего изобретения. Также могут быть использованы этанол, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и т.п. (и подходящие смеси этих веществ), производные циклодекстрина и растительные масла. Внутренняя текучесть может быть обеспечена, например, использованием покрытия, такого как лецитин, поддержанием необходимой величины частиц в случае дисперсии и при помощи поверхностно-активных веществ. Профилактика действия микроорганизмов может осуществляться с различными антибактериальными и противогрибковыми средствами, например парабенами, хлорбутанолом, фенолом, сорбиновой кислотой, тимерозалом и т.п.

Стерильные растворы для инъекций получают, включая соединение Формулы I в необходимом количестве в подходящем растворителе с различными другими ингредиентами, такими как перечисленные выше, в случае надобности, с последующей стерилизующей фильтрацией. Вообще дисперсии получают, включая различные стерилизованные активные ингредиенты в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных растворов для инъекций, предпочтительными способами получения являются методики вакуумной сушки и сушки сублимацией, которые приводят к порошку активного ингредиента плюс любой дополнительный желательный ингредиент из предварительно стерилизованного фильтрацией раствора.

Пероральное введение представляет собой другой путь введения соединений Формулы I. Введение может осуществляться с помощью капсулы или таблетки, покрытой энтеросолюбильным покрытием, и т.п. При получении фармацевтических композиций, которые включают по меньшей мере одно соединение Формулы I, активный ингредиент обычно разбавляют эксципиентом и/или включают в такой носитель, который может быть в форме капсулы, саше, бумажного или другого контейнера. Когда эксципиент служит разбавителем, он может быть твердым, полутвердым или жидким материалом (как указано выше), который действует как носитель, основа или среда для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, леденцов, саше, облаток, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (твердых или в жидкой среде), мазей, содержащих, например, до 10 вес.% активного соединения, мягких и твердых желатиновых капсул, стерильных растворов для инъекций и стерильных упакованных порошков.

Некоторые примеры подходящих эксципиентов включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, стерилизованную воду, сироп и метилцеллюлозу. Составы могут дополнительно включать лубриканты, такие как тальк, стеарат магния и минеральное масло; смачивающие вещества; эмульгаторы и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подслащивающие средства; и ароматизирующие средства.

Композиции по изобретению могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту, с использованием процедур, известных в данной области. Системы доставки лекарственных средств контролируемого высвобождения для перорального введения включают системы осмотического насоса и системы растворения, содержащие покрытые полимером резервуары или составы лекарственное средство-полимерная матрица.

Примеры систем контролируемого высвобождения приведены в Патентах США 3845770; 4326525; 4902514 и 5616345. В другом составе для использования в способах согласно настоящему изобретению используют устройства для чрескожной доставки ("пластыри"). Такие трансдермальные пластыри могут быть использованы для обеспечения непрерывной или периодической инфузии соединений согласно настоящему изобретению в контролируемых количествах. Конструкция и использование трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических средств известны в уровне техники. См., например, патенты США 5023252, 4992445 и 5001139. Такие пластыри могут быть созданы для непрерывной, пульсирующей доставки или по требованию доставки фармацевтических средств.

Композиции предпочтительно составляют в виде лекарственной формы. Термин "лекарственные формы" относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве разовых доз для человека и других млекопитающих, причем каждая форма содержит предопределенное количество активного вещества, рассчитанное таким образом, чтобы производить желаемый терапевтический эффект, в комбинации с подходящим фармацевтическим эксципиентом (например, таблетка, капсула, ампула). Соединения Формулы I являются эффективными в широком диапазоне доз и обычно вводятся в фармацевтически эффективном количестве. Предпочтительно, для перорального введения, каждая лекарственная форма содержит от 10 мг до 2 г соединения Формулы I, более предпочтительно от 10 до 700 мг, а для парентерального введения, предпочтительно от 10 до 700 мг соединения Формулы I, более предпочтительно приблизительно 50-200 мг. Будет понятно, однако, что количество вводимого соединения Формулы I будет определено врачом в свете сопутствующих обстоятельств, включая состояние, подлежащее лечению, выбранный путь введения, фактическое вводимое соединение и его относительная активность, возраст, массу тела и индивидуальную реакцию пациента, серьезность симптомов у пациента и т.п.

Для получения твердых композиций, таких как таблетки, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим эксципиентом, получая твердую предварительную композицию, содержащую гомогенную смесь соединения согласно настоящему изобретению. Под указанием этих предварительных композиций как гомогенных имеется в виду, что активный ингредиент рассеян равномерно по всей композиции так, чтобы композиция могла быть легко подразделена на одинаково эффективные лекарственные формы, такие как таблетки, пилюли и капсулы.

Таблетки или пилюли согласно настоящему изобретению могут иметь покрытие или могут быть иначе составлены, чтобы обеспечить лекарственную форму, имеющую преимущество в отношении длительности действия, или обеспечить защиту от кислых условий среды желудка. Например, таблетка или пилюля могут включать дозу внутреннего компонента и дозу внешнего компонента, причем последний находится в форме защитного покрытия. Эти два компонента могут быть разделены энтеросолюбильным слоем, который служит для устойчивости к разложению в желудке и обеспечения прохождения внутреннего компонента в интактном состоянии в двенадцатиперстную кишку или для отсрочки высвобождения. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий могут использоваться различные материалы, включая множество полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами как шеллак, цетиловый спирт и ацетилцеллюлоза.

Композиции для ингаляции или вдувания включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях, или их смесях, и порошки. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты, как описано выше. Предпочтительно, композиции вводят пероральным или носовым респираторным путем для местного или системного действия. Композиции в предпочтительно фармацевтически приемлемых растворителях могут быть распылены при помощи инертных газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства или распыляющее устройство может быть присоединено к лицевой маске или к промежуточному механизму для создания положительного давления. Композиции в форме раствора, суспензии или порошка могут вводиться, предпочтительно, перорально или через нос, с помощью устройств, которые выдают состав подходящим образом.

Следующие примеры включены для демонстрации предпочтительных вариантов осуществления изобретения. Специалисту будет понятно, что методики, раскрытые в нижеследующих примерах, представляют собой методики, обнаруженные авторами как хорошо функционирующие в практике изобретения, и, таким образом, можно полагать, что они составляют предпочтительные способы для его осуществления на практике. Однако в свете настоящего раскрытия специалисту будет понятно, что в раскрытые частные варианты осуществления могут быть введены различные изменения с получением, тем не менее, похожего или подобного результата, без отступления от духа и объема изобретения.

ПРИМЕР 1

Получение соединения Формулы I

Получение соединения формулы I, где R ¹ обозначает н-пропил, R ² обозначает этил, R ⁴ обозначает 3-трифторметилфенил, X обозначает водород и Y обозначает н-бутаноил

К раствору 3-этил-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-2,6-диона (250 мг, 0,56 ммоль) в N,N-диметилформамиде (10 мл) добавляли карбонат калия (230 мг, 1,68 ммоль), затем хлорметилбутират (230 мг, 1,68 ммоль), и смесь перемешивали при 60°C в течение 16 часов. Твердое вещество отфильтровывали и растворитель удаляли из фильтрата при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 30% этилацетат/гексан, получая [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилбутаноат (150 мг). ¹H ЯМР (CDCl₃): δ 7,98 (с, 1Н), 7,97 (с, 1Н), 7,65-7,45 (м, 4H), 6,35 (с, 2H), 5,44 (с, 2H), 4,19 (кВ., J=8 Гц, 2H), 3,98 (кв., J=2 Гц, 2H), 2,33 (т, J=8 Гц, 2H), 1,75-1,60 (м, 4H), 1,36 (т, J=8 Гц, 3H), 0,96 (т, J=8 Гц, 3H), 0,92 (т, J=8 Гц, 3H).

B. Получение других соединений Формулы I

Точно так же, следуя процедуре 1A, описанной выше, но заменяя хлорметилбутират хлорметил-2,2-диметилпропаноатом, получали [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-2,2-диметилпропаноат. ¹H ЯМР (CDCl₃): δ 7,98 (с, 1Н), 7,97 (с, 1Н), 7,65-7,45 (м, 4H), 6,33 (с, 2H), 5,43 (с, 2H), 4,19 (кв., J=8 Гц, 2H), 3,98 (кв., J=2 Гц, 2H), 1,75-1,64 (м, 2H), 1,37 (т, J=8 Гц, 3H), 1,16 (с, 9H), 0,96 (т, J=8 Гц, 3H).

Точно так же, следуя процедуре 1A, описанной выше, но заменяя хлорметилбутират хлорметилацетатом, получали [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилацетат. ¹H ЯМР (CDCl₃): δ 7,98 (с, 1Н), 7,97 (с, 1Н), 7,65-7,45 (м, 4H), 6,35 (с, 2H), 5,44 (с, 2H), 4,19 (кв., J=8 Гц, 2H), 3,98 (кв., J=2 Гц, 2H), 2,33 (т, J=8 Гц, 2H), 1,75-1,60 (м, 4H), 1,36 (т, J=8 Гц, 3H), 0,96 (т, J=8 Гц, 3H), 0,92 (т, J=8 Гц, 3H).

Точно так же, следуя процедуре 1A, описанной выше, но заменяя хлорметилбутират хлор(2S)-1-[бензилоксикарбонил]пирролидин-2-карбоксилатом, получали [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил (2S)-1-[бензилоксикарбонил]пирролидин-2-карбоксилат. ЯМР этого соединения был удовлетворительным.

C. Получение других соединений Формулы I

Точно так же, следуя процедуре 1A, описанной выше, но заменяя хлорметилбутират другими соединениями формулы YOCHXCl, в которой X и Y имеют значения, определенные выше, получали следующие соединения Формулы I:

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-2-метилпропаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилбензоат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]-3-(трифторметил)бензоат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-2-фенилацетат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]этилбутаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилпропаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилпентаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилгексаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилоктаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-3-метилбутаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилциклопентанкарбоксилат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилциклогексанкарбоксилат;

2-({[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил}оксикарбонил)уксусная кислота;

3-({[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил}оксикарбонил)пропановая кислота;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-3-метоксипропаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-3-гидроксибутаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-3-(оксифосфинилоксифосфинил)бутаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-3-[(оксифосфинилоксифосфинил)метокси]бутаноат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилбензоат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-4-пиперазинилбензоат;

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-4-морфолин-4-илбензоат; и

[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилпиридин-3-карбоксилат.

ПРИМЕР 2

Получение карбаматного производного соединения Формулы (1)

Получение [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-трифторметилфенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-4-метилпиперазинкарбоксилата

Хлорметилхлорформиат (0,319 ммоль) и 1-метилпиперазин (0,319 ммоль) смешивали в N,N-диметилформамиде (2 мл) при 0°C в присутствии карбоната калия (1,325 ммоль). Через 1 час добавляли предварительно охлажденный раствор 3-этил-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-2,6-дион (0,265 ммоль) в N,N-диметилформамиде (1 мл), и смесь перемешивали в течение 24 часов, позволяя температуре повыситься до комнатной температуры. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и остаток подвергали тонкослойной препаративной хроматографии, элюируя 5% метанол/метиленхлорид, получая 150 мг [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-4-метилпиперазинкарбоксилат. Точно так же были получены следующие соединения:

N-[2-(диметиламино)этил]{[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метокси}карбоксамид;

N-[2-(диметиламино)этил]{[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метокси}-N-метилкарбоксамид; и

N-[((2S)-1-этил(2-пиперидил))метил]{[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метокси}карбоксамид.

ПРИМЕР 3

Получение фосфатного производного соединения Формулы (1)

Получение [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метилдигидрофосфат

Стадия 1 - Получение ди-трет.-бутилхлорметилфосфата (Формула (2))

a) Получение ди-трет.-бутилгидрофосфата

К перемешиваемому раствору бис(трет.-бутокси)фосфино-1-ола (0,78 г, 4 ммоль) и бикарбоната калия (0,6 г, 2,4 ммоль) в воде (4 мл) при 0°C добавляли (порциями) перманганат калия (0,44 г, 2,8 ммоль). Смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 часа. Добавляли обесцвечивающий активированный уголь (60 мг), и смесь перемешивали при 60°C в течение 15 минут, и затем фильтровали. Таким образом полученное твердое вещество промывали водой (30 мл), и объединенные фильтраты обрабатывали дополнительными 100 мг обесцвечивающего активированного угля при 60°C в течение 20 минут. Смесь отфильтровывали, и фильтрат охлаждали до 0°C и аккуратно подкисляли концентрированной соляной кислотой (2 мл) при перемешивании. Осадок отфильтровывали, промывали холодной водой, получая ди-трет.-бутилгидрофосфат в форме твердого вещества белого цвета.

Получение тетраметиламмониевой соли ди-трет.-бутилгидрофосфата

Раствор ди-трет.-бутилгидрофосфата, полученного на стадии a), растворяли в ацетоне (10 мл) и охлаждали до 0°C. К этому раствору добавляли 10%-ный водный раствор гидроксида тетраметиламмония (2,4 мл, 2,6 ммоль), и гомогенный раствор упаривали при пониженном давлении, получая твердое вещество, которое перекристаллизовывали из нагреваемого с обратным холодильником 1,2-диметоксиэтана, получая ди-трет.-бутилгидрофосфат тетраметиламмония в форме твердого вещества белого цвета.

Ди-трет.-бутилгидрофосфат тетраметиламмония, полученный на стадии b, растворяли в нагреваемом с обратным холодильником 1,2-диметоксиметане (15 мл), и добавляли хлорйодометан (3,2 г, 18,1 ммоль), и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 90 минут. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и остаток, ди-трет-бутилхлорметилфосфат, использовали без дальнейшей очистки.

Стадия 2

Раствор 3-этил-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-2,6-дион (0,47 г, 1 ммоль) растворяли в 20 мл N,N-диметилформамида, и добавляли карбонат калия (0,42 г, 4 ммоль), затем ди-трет-бутилхлорметилфосфат (0,34 г, 1,32 ммоль), и смесь перемешивали при 60°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали, и отфильтрованный осадок промывали этилацетатом. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали тонкослойной препаративной хроматографией, элюируя 4% метанол/метиленхлорид, получая трет-бутил[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метил метилэтилфосфат (0,26 г) в форме бесцветного масла.

Стадия 3

Раствор трет-бутил[3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метил метилэтилфосфата (80 мг, 0,12 ммоль) растворяли в метиленхлориде (6 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (0,72 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и твердый белый остаток растирали в порошок с простым эфиром и забирали фильтрацией, получая [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метилдигидрофосфат (41 мг).

ЯМР ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) δ 8,70 (с, 1Н), 8,15 (с, 1Н), 7,74 (с, 1Н), 7,69-7,71 (м, 1Н), 7,60-7,63 (м, 2H), 6,12 (д, 2H, J=5,4 Гц), 5,54 (с, 2H), 4,06 (кв., 2H, J=13,8 Гц), 3,84 (т, 2H, J=7,4 Гц), 1,52-1,62 (м, 2H), 1,25 (т, 3H, J=7,0 Гц), 0,87 (т, 3H, J=7,4 Гц); MS m/z 579,02 (М⁺+Na).

ПРИМЕР 4

Получение соединения Формулы (1)

Получение соединения Формулы I, в которой R ¹ обозначает n-пропил, R ² обозначает этил, R ⁴ обозначает 3-трифторметилфенил, X обозначает водород и Y обозначает н-бутаноил

A. Получение хлорметилпиридин-3-карбоксилата

Смесь никотиновой кислоты (200 мг, 1,6 ммоль), бикарбоната натрия (540 мг, 6,4 ммоль) и тетрабутиламмоний сульфата (54 мг, 0,16 ммоль) растворяли в смеси 4 мл дихлорметана и 4 мл воды и охлаждали до 0°C. К этой перемешиваемой смеси добавляли хлорметилхлорсульфон (165 мкл, 1,6 ммоль) в 1 мл дихлорметана, и смеси позволяли нагреться до комнатной температуры, перемешивая в течение ночи. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении до желтого масла, которое растворяли в дихлорметане и фильтровали через картридж с силикагелем. Удалением растворителя при пониженном давлении получали хлорметилпиридин-3-карбоксилат (70 мг).

B. Получение [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метилпиридин-3-карбоксилата

Раствор 3-этил-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-2,6-диона (200 мг, 0,43 ммоль) растворяли в 2 мл N,N-диметилформамида, и добавляли карбонат калия (120 мг, 0,86 ммоль), затем хлорметилпиридин-3-карбоксилат (220 мг, 1,3 ммоль). Смесь перемешивали при 60°C в течение ночи, твердый материал отфильтровывали и фильтрат упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали тонкослойной хроматографией, элюируя 5% метанол/дихлорметаном, получая [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил пиридин-3-карбоксилат (66 мг).

ЯМР продукта был удовлетворительным.

ПРИМЕР 5

Получали твердые желатиновые капсулы, содержащие следующие ингредиенты:

	Количество
Ингредиент	(мг/капсула)
Активный ингредиент	30,0
Крахмал	305,0
Магния стеарат	5,0

Указанные ингредиенты смешивали и заполняли в твердые желатиновые капсулы.

ПРИМЕР 6

Формулу таблетки получали, используя ингредиенты, перечисленные ниже:

	Количество
Ингредиент	(мг/капсула)
Активный ингредиент	25,0
Целлюлоза, микрокристаллическая	200,0
Коллоидный диоксид кремния	10,0
Стеариновая кислота	5,0

Компоненты смешивали и прессовали, получая таблетки.

ПРИМЕР 7

Получали сухой порошковый состав для ингаляции, содержащий следующие компоненты:

Ингредиент	вес.%
Активный ингредиент	5
Лактоза	95

Активный ингредиент смешивали с лактозой и смесь добавляли в прибор для ингаляции сухого порошка.

ПРИМЕР 8

Таблетки, каждая из которых содержит 30 мг активного ингредиента, получали следующим образом:

	Количество
Ингредиент	(мг/таблетка)
Активный ингредиент	30,0 мг
Крахмал	45,0 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	35,0 мг
Поливинилпирролидон (в форме 10%-ного раствора в стерилизованной воде)	4,0 мг
Натрий карбоксиметил крахмал	4,5 мг
Магния стеарат	0,5 мг
Тальк	1,0 мг
Общее количество	120 мг

Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускали через сито с размером пор No. 20 mesh U.S. и тщательно перемешивали. Раствор поливинилпирролидона смешивали с полученными порошками, и полученную смесь пропускали через сито с размером пор No. 16 mesh U.S. Полученные таким образом гранулы высушивали при температуре от 50°C до 60°C и пропускали через сито с размером пор No. 16 mesh U.S. Натрий карбоксиметил крахмал, магния стеарат и тальк, предварительно пропущенные через сито с размером пор No. 30 mesh U.S, добавляли к гранулам, которые, после смешивания, прессовали на машине для таблетирования, получая таблетки весом 120 мг каждая.

ПРИМЕР 9

Суппозитории, каждый из которых содержит 25 мг активного ингредиента, получали следующим образом:

Ингредиент	Количество
Активный ингредиент	25 мг
Глицериды насыщенной жирной кислоты до	2000 мг

Активный ингредиент пропускали через сито с размером пор No. 60 mesh U.S. и суспендировали в глицеридах насыщенной жирной кислоты, предварительно расплавленных с использованием минимально необходимой температуры. Смесь затем выливали в форму для отлива суппозиториев номинальной емкостью 2,0 г и оставляли для охлаждения.

ПРИМЕР 10

Суспензии, каждая из которых содержит 50 мг активного ингредиента в дозе 5,0 мл, получали следующим образом:

Ингредиент	Количество
Активный ингредиент	50,0 мг
Ксантановая смола	4,0 мг
Натрийкарбоксиметилцеллюлоза (11%)
Микрокристаллическая целлюлоза (89%)	50,0 мг
Сахароза	1,75 г
Бензоат натрия	10,0 мг
Ароматизатор и краситель	q.v.
Очищенная вода до	5,0 мл

Активный ингредиент, сахарозу и ксантановую смолу смешивали, пропускали через сито с размером пор No. 10 mesh U.S., и затем смешивали с предварительно приготовленным раствором микрокристаллической целлюлозы и натрийкарбоксиметилцеллюлозы в воде. Бензоат натрия, ароматизатор и краситель разбавляли частью воды и добавляли при перемешивании. Затем добавляли воду в количестве, достаточном для получения необходимого объема.

ПРИМЕР 11

Состав для подкожного введения может быть получен следующим образом:

Ингредиент	Количество
Активный ингредиент	5,0 мг
Кукурузное масло	1,0 мг

ПРИМЕР 12

Получают препарат для инъекций, имеющий следующую композицию:

Ингредиент	Количество
Активный ингредиент	2,0 мг/мл
Маннит, USP	50 мг/мл
Глюконовая кислота, USP	q.s. (рН 5-6)
Вода (дистиллированная, стерильная)	q.s. до 1,0 мл
Газообразный азот, NF	q.s.

ПРИМЕР 13

Получают препарат для топического нанесения, имеющий следующую композицию:

Ингредиент	граммы
Активный ингредиент	0,2-10
Span 60	2,0
Tween 60	2,0
Минеральное масло	5,0
Вазелин	0,10
Метилпарабен	0,15
Пропилпарабен	0,05
БГА (бутилированный гидроксианизол)	0,01
Вода	q.s. до 100

Все указанные ингредиенты, кроме воды, объединяют и нагревают до 60°C при перемешивании. Достаточное количество воды с температурой 60°C добавляют при энергичном перемешивании, чтобы эмульгировать ингредиенты, и затем добавляют q.s. воды до 100 г.

ПРИМЕР 14

Тесты на А _2В рецепторах аденозина

Способы

Связывание меченого лиганда с А _2В рецепторами аденозина.

кДНК А_2В рецептора аденозина человека устойчиво трансфицируют в клетки HEK-293 (называемые клетками HEK-A2B). Мономолекулярный слой клеток HEK-A2B промывают PBS один раз и собирают в буфер, содержащий 10 мМ HEPES (рН 7,4), 10 мМ EDTA и ингибиторы протеазы. Эти клетки гомогенизируют в политроне в течение 1 минуты в положении 4 и центрифугируют при 29000 g в течение 15 минут при 4°C. Осажденные клетки промывают один раз буфером, содержащим 10 мМ HEPES (pH 7,4), 1 мМ EDTA и ингибиторы протеазы, и повторно суспендируют в том же самом буфере, дополненном 10%-ной сахарозой. Замороженные аликвоты сохраняют при -80°C. Начинают тесты на конкуренцию, смешивая 10 нМ ³H-ZM214385 (Tocris Cookson) с различными концентрациями тестируемых соединений и 50 мкг мембранных белков в буфере TE (50 мМ Tris и 1 мМ EDTA), дополненном 1 единица/мл аденозиндеаминазы. Тестируемые образцы инкубируют в течение 90 минут, останавливают фильтрацией, используя Packard Harvester, и промывают четыре раза охлажденным на льду буфером ТМ (10 мМ Tris, 1 мМ MgCl₂, рН 7,4). Неспецифическое связывание определяют в присутствии 10 мкМ ZM214385. Сродство соединений (т.е. величину Ki), вычисляют, используя программное обеспечение GraphPad.

Связывание меченого лиганда с другими рецепторами аденозина

Человеческие кДНК А₁, A_2A, А₃ рецепторов аденозина устойчиво трансфицируют в клетки CHO или клетки HEK-293 (называемые CHO-A1, HEK-A2A, CHO-A3). Мембраны получают из этих клеток, используя тот же самый протокол, как описано выше. Начинают тесты на конкуренцию, смешивая 0,5 нМ ³H-CPX (для CHO-A1), 2 нМ ³H-ZM214385 (HEK-A2A) или 0,1 нМ ¹²⁵I-AB-MECA (CHO-A3) с различными концентрациями тестируемых соединений и соответствующих мембран в буфере TE (50 мМ Tris и 1 мМ EDTA для CHO-A1 и HEK-A2A) или буфере ТЕМ (50 мМ Tris, 1 мм EDTA и 10 мМ MgCl₂ для CHO-A3), дополненными 1 единица/мл аденозиндеаминазы. Тестируемые образцы инкубируют в течение 90 минут, останавливают фильтрацией, используя Packard Harvester и промывают четыре раза охлажденным на льду буфером ТМ (10 мМ Tris, 1 мМ MgCl₂, рН 7,4). Неспецифическое связывание определяют в присутствии 1 мкМ CPX (CHO-A1), 1 мкМ ZM214385 (HEK-A2A) и 1 мкМ IB-МЕСА (CHO-A3). Сродство соединений (т.е. величину Ki), вычисляют, используя программное обеспечение GraphPad.

Измерения цАМФ

Мономолекулярный слой трансфицированных клеток собирают в PBS, содержащем 5 мМ EDTA. Клетки промывают один раз DMEM и повторно суспендируют в DMEM, содержащем 1 единицу/мл аденозиндеаминазы, в плотности 100000-500000 клеток/мл. 100 мкл суспензии клеток смешивают с 25 мкл, содержащими различные агонисты и/или антагонисты, и реакционные образцы сохраняют при 37°C в течение 15 минут. В конце 15 минут добавляют 125 мкл 0,2 н. HCl, чтобы остановить реакцию. Клетки центрифугируют в течение 10 минут при 1000 об/мин. 100 мкл супернатанта собирают и ацетилируют. Концентрации цАМФ в супернатанте измеряют, используя прямой цАМФ-тест от Assay Design.

A_2A и А_2В рецепторы аденозина соединяются с белками Gs и таким образом агонисты A_2A рецептора аденозина (такие как CGS21680) или А_2В рецептора аденозина (такие как NECA) увеличивают накопления цАМФ, тогда как антагонисты этих рецепторов предотвращают увеличение накопления цАМФ, вызванное агонистами. А₁ и A₃ рецепторы аденозина соединяются с белками Gi, и таким образом агонисты А₁ рецептора аденозина (такие как СРА) или А₃ рецептора аденозина (такие как IB-МЕСА) ингибируют увеличение накопления цАМФ, вызванное форсколином. Антагонисты А₁ и A₃ рецепторов предотвращают ингибирование накопления цАМФ.

ПРИМЕР 15

Сравнение биодоступности пролекарств А _2В рецептора аденозина с антагонистом А _2В рецептора аденозина

Следующие исследования проводили, чтобы сравнить фармакокинетику антагониста А_2В рецептора аденозина и его соответствующего пролекарства. Выбранное родственное соединение представляло собой соединение формулы A, в которой R¹ обозначает н-пропил, R² обозначает этил, R³ обозначает водород и R⁴ обозначает 3-трифторметилфенил; т.е.

где Z обозначает водород (соединение 1).

Пролекарства, выбранные для сравнения, были следующими:

где Z обозначает -CH₂-O-C(O)CH₂CH₂CH₃ (соединение 2);

где Z обозначает -CH₂-O-C(O)CH₃ (соединение 3);

где Z обозначает -CH₂-О-C(О)C(CH₃)₃ (соединение 4);

где Z обозначает -CH₂-О-C(О)N(CH₃)CH₂CH₂N(CH₃)₂ (соединение 5);

где Z обозначает -CH₂-O-P(O)(ОН)₂ (соединение 6),

где Z обозначает (соединение 7);

где Z обозначает (соединение 8),

где Z обозначает(соединение 9),

где Z обозначает -CH₂-О-C(О)NHCH₂CH₂N(CH₃)₂ (соединение 10);

где Z обозначает -СН₂-ОСН₃ (соединение 11) и

где Z обозначает метил (соединение 12).

Исследования проводили на крысах Sprague Dawley. Тестируемые соединения вводили перорально путем скармливания группам из трех крыс, используя единственную пероральную дозу тестируемого соединения в 2 и 30 мг/кг. Все пероральные дозы были получены в форме суспензии в смеси DMSO/этанол/PEG300/0,1% N-метил-D-глюкамин или в форме суспензии в 0,5% метилцеллюлозы в воде. Пробы крови получали последовательно от каждой крысы в моменты времени 0, 5, 15, 30 минут и затем в моменты времени 1, 1,5, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения.

Определение концентраций соединения 1 и соответствующего пролекарства в плазме

Концентрации соединения 1 и/или соответствующего пролекарства в плазме крыс определяли ВЭЖХ в тандеме с масс-спектрометрией (LC/MS/MS). Кратко, 0,1 мл образца плазмы обрабатывали 0,5 мл смеси ацетонитрил-метанол (9:1, об./об.), содержащей 25 нг соединения 1, имеющего в положении 3 дейтеризованный этил вместо этила (Internal Standard, LS.), чтобы осадить белок. Смесь отфильтровывали через фильтр с 96 лунками и фильтрат собирали и упаривали досуха на испарителе для планшетов с 96 лунками. Остаток ресуспендировали с 400 мкл 20% метанола и подвергали анализу LC/MS/MS. Количественный анализ соединения 1 осуществляли масс-спектрометрией, используя режим Multiple Reaction Monitoring (MRM), контролируя переходы в m/z 447,1>159,1 для соединения 1 и 452,1>159,1 для I.S. Предельные количества в этом тесте составили 0,38 нг/мл для анализа образцов при пероральной дозе и 10 нг/мл при анализе образцов при внутривенной дозе с использованием 0,1 мл плазмы.

Фармакокинетический анализ

Некомпартментальные фармакокинетические параметры определяли, используя коммерческую программу WinNonLin Professional, Version 4.1 (Pharsight, Mountain View, CA). Плазменную концентрацию ниже уровня обнаружения считали нулевой для вычисления средств и фармакокинетических параметров.

Для перорального введения определяли максимальную концентрацию (C_max) и время достижения C_max (T_max), AUC_(0-t), AUC_(0-∞) и биодоступность (%F). Пероральную биодоступность определяли по соотношению регулируемой дозы AUC_(0-∞) соответствующей пероральной дозы и среднего значения AUC_(0-∞) для внутривенных доз 0,1 и 0,5 мг/кг.

Результаты представлены ниже в форме таблицы. Таблица показывает результаты, полученные при использовании суспензии тестируемого соединения в суспензии в смеси DMSO/этанол/PEG300/0,1% N-метил-D-глюкамин на крысах.

	Пролекарство	Соединение 1
Соединение	Средняя регулируемая дозой AUC	Средняя C max (нг/мл)	Средняя регулируемая дозой AUC	Средняя C max (нг/мл)
Соединение 1	Не применимо	Не применимо	700	1900
Соединение 2	Не обнаруживается	<5 нг/мл	13790	3220
Соединение 3	Не обнаруживается	<5 нг/мл	9993	1767
Соединение 4	Не обнаруживается	<5 нг/мл	5476	1008
Соединение 5	Не обнаруживается	<5 нг/мл	2021	466
Соединение 6	Не обнаруживается	<5 нг/мл	11800	28700
Соединение 7	51,0	30,0	1817	408
Соединение 8	Не обнаруживается	<5 нг/мл	1089	241
Соединение 9	4,57	6,39	1062	160
Соединение 10	Не обнаруживается	<5 нг/мл	384	36,9
Соединение 11	533	158	Не обнаруживается	<5 нг/мл
Соединение 12	926	279	Не обнаруживается	<5 нг/мл

Когда введение осуществляют в суспензии в 0,5% метилцеллюлозы в воде крысам в дозе 30 мг/кг, соединение 6 обеспечивает регулируемую дозой AUC соединения 11800 нг/ч/мл и Cmax 28700 нг/мл. Соединение 2 обеспечивает регулируемую дозой AUC соединения 1 8300 нг/ч/мл и Cmax 19200 нг/мл. Соединение 1 само по себе обеспечивает регулируемую дозой AUC соединения 1 700 нг/ч/мл и Cmax 1900 нг/мл.

Результаты

По результатам, показанным выше, можно заметить, что соединения 2-6 имеют идеальный профиль биодоступности, обеспечивая намного более высокие плазменные уровни родительского антагониста А_2В рецептора аденозина (соединения 1) после перорального введения, чем при пероральном введении родительского соединения (формулы 1) непосредственно. Дополнительно, никаких следов пролекарства не обнаруживается в плазме. Это находится в резком контрасте с соединениями 7-11, которые обеспечивают более низкие плазменные уровни родительского антагониста A_2B рецептора аденозина после перорального введения, чем полученные при пероральном введении родительского соединения (формулы 1) непосредственно, и, кроме того, соединения 7, 9 и 10-11 обнаруживаются в плазме неметаболизированными. Соединение 5 обеспечивает профиль биодоступности, который является приблизительно тем же самым, как у родительского антагониста A_2B рецептора аденозина (соединение 1).

1. Соединение формулы:

в которой:
R¹ и R² независимо обозначают C₁-₆алкил;
R⁴ обозначает фенил, в случае необходимости замещенный трифторметилом;
X обозначает водород или метил; и
Y обозначает -C(O)R, где R обозначает С_1-6алкил; или
Y обозначает -P(O)(OR⁵)₂, где R⁵ обозначает водород или С_1-6алкил; или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1, в котором R¹ и R² независимо обозначают этил или н-пропил.

3. Соединение по п.1, в котором R⁴ обозначает 3-(трифторметил)фенил.

4. Соединение по п.3, в котором R¹ обозначает н-пропил и R² обозначает этил.

5. Соединение по п.4, в котором X обозначает водород.

6. Соединение по п.5, в котором Y обозначает -C(O)R.

7. Соединение по п.6, в котором R обозначает метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил или н-пентил.

8. Соединение по п.7, в котором R обозначает метил, а именно [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилацетат.

9. Соединение по п.7, в котором R обозначает н-пропил, а именно [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метилбутаноат.

10. Соединение по п.7, в котором R обозначает трет-бутил, а именно [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)-1,3,7-тригидропурин-7-ил]метил-2,2-диметилпропаноат.

11. Соединение по п.5, в котором Y обозначает -P(O)(OR⁵)₂.

12. Соединение по п.11, в котором R⁵ обозначает водород, а именно [3-этил-2,6-диоксо-1-пропил-8-(1-{[3-(трифторметил)фенил]метил}пиразол-4-ил)(1,3,7-тригидропурин-7-ил)]метилдигидрофосфат.

13. Фармацевтическая композиция, являющаяся антагонистом А_2В рецептора аденозина, включающая, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество соединения по п.1.