Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии

Авторы патента:


Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии
Способы, композиции и препараты для лечения тиреоидной офтальмопатии

 


Владельцы патента RU 2417100:

Литера, Инк. (US)

Предложены композиции и способы уменьшения накопления глазничного жира у пациента при лечении тиреоидной офтальмопатии, проптоза и родственных состояний (например, офтальмопатии Грейвса). Композиции включают бета-адренергический агонист в виде суспензии кристаллических микрочастиц (например, с пролонгированным высвобождением) для системного или местного введения и/или метилпреднизолона ацетат, флутиказона пропионат также в форме суспензии кристаллических микрочастиц. Способы включают введение соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора (например, кортикостероида) до введения или совместно с введением бета-адренергического агониста. Показано снижение массы жировых тел и снижение объема глазного жира после применения заявленных композиций и способов. 7 н. и 32 з.п. ф-лы, 7 ил., 7 табл.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА

Данная заявка устанавливает приоритет предварительной заявки на патент США №60/852221, поданной 17 октября 2006; 60/898009, поданной 29 января 2007, и 60/919011, поданной 13 апреля 2007, причем данные заявки включены здесь посредством ссылки во всей их полноте.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Болезнь Грейвса представляет собой общее расстройство с заболеваемостью у женщин 1/1000 человек населения в год. Помимо гипертиреоза у 25-50% индивидуумов с болезнью Грейвса развивается клиническое поражение глаз, т.е. тиреоидная офтальмопатия. Офтальмопатия Грейвса (ОГ) представляет собой типичную форму тиреоидной офтальмопатии. Хотя некоторые пациенты с ОГ испытывают лишь умеренный дискомфорт в глазах, 3-5% страдают от интенсивной боли и воспаления с двоением в глазах или даже потерей зрения.

Клинические симптомы и признаки ОГ можно объяснить механически по увеличению объема ткани, выраженному в пределах глазницы. Увеличенные ткани глазницы вызывают смещение глазного яблока вперед и ухудшение венозного и лимфатического оттока из глазницы. Эти изменения в сочетании с локальной продукцией цитокинов и других медиаторов воспаления приводят к проптозу, периорбитальному отеку, конъюнктивальной эритеме и хемозу (Фиг.1).

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Здесь описаны композиции, препараты, способы и системы для лечения тиреоидной офтальмопатии путем приведения в контакт целевого отложения жира в глазу с композицией, содержащей агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия и соединение, которое снижает десенсибилизацию бета-адренергического рецептора в ткани-мишени на агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия. Воплощения данной композиции вводят, например, посредством ретробульбарной (заглазной) инъекции и/или трансокулярно. Глюкокортикостероид имеет дополнительный эффект снижения числа воспалительных клеток и высвобождения воспалительных цитокинов, присутствующих в глазнице и в жировой ткани глазницы.

Соответственно, в одном аспекте здесь предложен способ уменьшения накопления глазничного жира у пациента, нуждающегося в этом (например, у субъекта, страдающего от тиреоидной офтальмопатии), путем введения указанному пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного бета-адренергического агониста и терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора. В некоторых воплощениях пациент, нуждающийся в только что описанном лечении, страдает от офтальмопатии Грейвса. В некоторых воплощениях пациент, нуждающийся в лечении, страдает от увеличения внешних мышц глаза. В некоторых воплощениях указанный пациент страдает от проптоза.

В некоторых воплощениях введение по меньшей мере одного бета-адренергического агониста или по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации является парентеральным, пероральным, внутриглазным, внутриглазничным, внутрироговичным, глазным, ретробульбарным, периорбитальным, местным, внутримышечным, трансдермальным, сублингвальным, интраназальным или введением в дыхательные пути.

В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора вводят до (например, от примерно 3 суток до примерно 7 суток до) по меньшей мере одного бета-адренергического агониста. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение вводят внутриглазным, внутриглазничным, глазным, периорбитальным, ретробульбарным или внутрироговичным путем введения. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение вводят в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение вводят перорально и по меньшей мере один бета-адренергический агонист вводят в глаз. По меньшей мере один бета-адренергический агонист, вводимый в глаз, вводят в препарате кристаллических микрочастиц.

В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист, подлежащий введению пациенту, содержит бета-адренергический агонист длительного действия. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение представляет собой глюкокортикостероид и бета-адренергический агонист длительного действия представляет собой сальметерол, формотерол или их комбинацию. В некоторых воплощениях бета-адренергический агонист, подлежащий введению, представляет собой бета-адренергический агонист, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора. В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист содержит сальметерол, формотерол или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист содержит сальметерол, и терапевтически эффективное количество сальметерола составляет от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки (например, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 10 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, или от примерно 50 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки) сальметерола. В других воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист содержит формотерол, и терапевтически эффективное количество формотерола составляет от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 50 мкг/сутки (например, от 0,01 мкг/сутки до примерно 1,0 мкг/сутки, от примерно 0,1 мкг/сутки до примерно 10 мкг/сутки, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 20 мкг/сутки или от примерно 5 мкг/сутки до примерно 40 мкг/сутки).

В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора представляет собой глюкокортикостероид, антигистаминное средство или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора содержит дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид, кетотифен или любую их комбинацию.

В некоторых воплощениях перед введением по меньшей мере одного бета-адренергического агониста и по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора пациенту вводят терапевтически эффективное количество иммунодепрессанта внутриглазным, внутриглазничным, глазным, периорбитальным, ретробульбарным или внутрироговичным путем введения. В некоторых воплощениях иммунодепрессант вводят в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

В другом аспекте здесь предложен способ лечения проптоза путем введения пациенту, нуждающемуся в лечении, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.

В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист содержит бета-адренергический агонист длительного действия. В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист содержит бета-адренергический агонист, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора. В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист содержит сальметерол, формотерол, бамбутерол, эформотерол, изопротеренол, альбутерол или фенотерол. В некоторых воплощениях композиция содержит смесь по меньшей мере одного бета-адренергического агониста длительного действия и по меньшей мере одного бета-адренергического агониста кратковременного действия. В некоторых воплощениях композиция также содержит терапевтически эффективное количество гиалуронидазы.

В некоторых воплощениях композиция содержит сальметерол, и пациенту вводят терапевтически эффективное количество сальметерола от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки. В других воплощениях композиция содержит формотерол, и пациенту вводят терапевтически эффективное количество формотерола от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 50 мкг/сутки.

В некоторых воплощениях введение данной композиции является парентеральным, пероральным, внутриглазным, внутриглазничным, периорбитальным, глазным, ретробульбарным, внутрироговичным, местным, внутримышечным, трансдермальным, сублингвальным, интраназальным или введением в дыхательные пути.

В другом аспекте здесь предложен способ уменьшения накопления глазничного жира у пациента, нуждающегося в лечении, путем введения указанному пациенту терапевтически эффективного количества одного или более чем одного соединения, стимулирующего путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, и терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора. В некоторых воплощениях одно или более чем одно соединение, стимулирующее путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, содержит катехоламин, альфа-адренергический антагонист, форсколин, аминофиллин или их аналоги.

В еще одном другом аспекте здесь предложена офтальмологическая фармацевтическая композиция, содержащая офтальмологически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество метилпреднизолона ацетата или флутиказона пропионата в форме суспензии кристаллических микрочастиц. В некоторых воплощениях данная офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит солюбилизированный метилпреднизолона ацетат или солюбилизированный флутиказона пропионат. В некоторых воплощениях данная офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-2-агониста длительного действия в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

В другом аспекте здесь предложена офтальмологическая фармацевтическая композиция, содержащая офтальмологически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-2-агониста длительного действия в форме суспензии кристаллических микрочастиц. В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-2-агонист длительного действия содержит сальметерол или формотерол. В некоторых воплощениях офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного солюбилизированного бета-2-агониста длительного действия. В некоторых воплощениях офтальмологическая фармацевтическая композиция дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

В другом аспекте здесь предложено применение по меньшей мере одного бета-адренергического агониста и по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, включающего накопление глазничного жира.

В другом аспекте здесь предложено применение по меньшей мере одного бета-адренергического агониста и по меньшей мере одного соединения для уменьшения (десенсибилизации) бета-адренергического рецептора для применения в способе лечения заболевания, включающего накопление глазничного жира.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

Все публикации и патентные заявки, упомянутые в данном описании изобретения, включены в данное описание посредством ссылки в такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была бы конкретно и отдельно указана как включенная посредством ссылки.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Новые отличительные признаки изобретения конкретно изложены в приложенной формуле изобретения. Лучшее понимание отличительных признаков и преимуществ настоящего изобретения будет получено посредством ссылки на следующее подробное описание, в котором изложены иллюстративные воплощения, в которых используются приниципы данного изобретения, и на сопровождающие графические материалы, в которых:

На ФИГ.1 представлена схематическая иллюстрация липолиза в адипоцитах.

На ФИГ.2 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью бета-2-агониста длительного действия формотерола после трехчасовой инкубации.

На ФИГ.3 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью бета-2-агониста длительного действия сальметерола после трехчасовой инкубации.

На ФИГ.4 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью глюкокортикостероида будесонида после короткого периода инкубации (три часа) и подавление липолиза после более длительных периодов инкубации (18 часов).

На ФИГ.5 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое подавление липолиза в культивируемых адипоцитах бета-2-агонистом длительного действия сальметеролом, который давали один в течение 18 часов, и дозозависимую индукцию липолиза сальметеролом через 18 часов, когда его давали в комбинации с глюкокортикостероидом будесонидом.

На ФИГ.6 представлена гистограмма, иллюстрирующая среднее значение различий массы эпидидимального жирового тела у животного (левое жировое тело по сравнению с правым жировым телом) в жировых телах, в которые инъецировали раствор носителя (2% ПЭГ (полиэтиленгликоль)), один формотерол или формотерол плюс будесонид в течение трехсуточного периода обработки.

На ФИГ.7 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы жирового тела для двух разных комбинаций доз бета-2-агониста формотерола и глюкокортикостероида будесонида в течение трехсуточного периода обработки.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВОПЛОЩЕНИЯ

Изображения, полученные с помощью компьютерной томографии, показывают, что большинство пациентов с ОГ имеют увеличение как глазничного жира, так и внешних мышц глаза, тогда как другие, по-видимому, имеют только поражение жировой ткани или внешних мышц глаза. Сами клетки внешних мышц глаза являются интактными при раннем, активном заболевании, что показывает, что сами по себе они не являются мишенями для аутоиммунной атаки. Скорее увеличение тел внешних мышц глаза происходит из-за накопления в перимизиальных соединительных тканях гидрофильных мукополисахаридов, включающих, в частности, гиалуронан. На более поздней стадии заболевания рассасывающийся воспалительный процесс в мышцах может оставить их фиброзными и смещенными.

Увеличение объема жировых/соединительных тканей в глазнице, по-видимому, в большей степени способствует общему увеличению объема ткани глазницы, чем увеличение внешних мышц глаза. Исследования с помощью компьютерной томографии показывают, что у этих пациентов показатели проптоза наиболее точно коррелируют с объемом жирового компартмента. Этот увеличенный объем жировой ткани, по-видимому, происходит как из-за накопления гиалуронана при сопутствующем отеке, так и из-за появления в этих тканях популяции вновь дифференцированных жировых клеток.

Гистологическое исследование тканей глазницы при ОГ выявляет, что характерные изменения происходят, главным образом, из-за накопления гиалуронана при отеке, увеличения жирового компартмента и инфильтрации данных тканей Т-лимфоцитами. Жировые клетки глазницы при этом состоянии, по-видимому, являются дифференцированными, хотя и меньшими, чем другие жировые клетки данного организма (например, подкожные или сальниковые). В жировых клетках глазницы при ОГ экспрессируются более высокие уровни мРНК транскриптов PPAR-гамма, адипонектина и лептина. Кроме того, жировые клетки глазницы могут содержать меньше 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы типа 1, фермента, участвующего в превращении кортизона до активной формы - кортизола.

Исследования с использованием клеток, полученных из этих тканей, показали, что фибробласты глазницы представляют собой клетки глазницы, которые могут участвовать в этих разнообразных клеточных процессах. Эти клетки являются особенно чувствительными к стимуляции цитокинами и другими иммуномедиаторами, реагируя увеличением экспрессии CD40, синтезируя большие количества гиалуронана и секретируя воспалительные цитокины. Кроме того, преадипоцитная субпопуляция фибробластов способна дифференцироваться в зрелые жировые клетки, которые демонстрируют высокие уровни TSHR. Также было показано, что фибробласты демонстрируют IGF-1R (рецептор инсулиноподобного фактора роста 1). При связывании с IgG от пациентов с офтальмопатией Грейвса эти рецепторы инициируют нижележащие стадии передачи сигнала, что приводит к продукции RANTES (Regulated on Activation, Normal T-cell Expressed and Secreted - цитокин, регулируемый при активации, экспрессируемый и секретируемый нормальными Т-клетками) и IL-16 (интерлейкин-16) и приводит к локальной лимфоцитарной инфильтрации. Относительную сайт-специфичность участия глазницы в болезни Грейвса можно объяснить как относительной чувствительностью этих фибробластов к иммуномедиаторам, так и уникальными анатомическими особенностями этих сайтов, которые, по-видимому, предрасполагают их к сжатию лимфатических и венозных каналов низкого давления.

Жировая ткань представляет собой основую, запасающую энергию ткань организма. Жировые клетки или адипоциты хранят эту энергию в виде триглицеридов. Триглицериды мобилизуются из запасов жира для обеспечения организма энергией посредством гормональной индукции гидролиза триглицеридов. Этот процесс высвобождает свободные или неэтерифицированные жирные кислоты и глицерин в кровь для использования другими тканями организма. Расщепление триглицеридов из запасов жира называется липолизом. Также наблюдается рост новых адипоцитов, который называется липогенезом.

Катехоламины являются главными регуляторами жировой ткани посредством адренергических рецепторов. Жировая ткань имеет бета-1, 2 и 3 адренергические рецепторы и альфа-2-адренергические рецепторы. Связывание бета-агонистов с бета-рецепторами в жировой ткани может приводить к липолизу адипоцитов, тогда как связывание агонистов альфа-рецепторов может ингибировать липолиз. Активация бета-рецепторов также может ингибировать липогенез. У людей бета-2 рецептор часто является наиболее распространенным на поверхностях жировых клеток и представляет собой главный медиатор липолиза, стимулируемого бета-рецептором. Стимуляция липолиза бета-агонистами опосредована аденилатциклазой и усиленным образованием циклического аденозинмонофосфата (циклический АМФ, цАМФ). Альфа-2 рецепторы уменьшают липолиз в зрелых жировых клетках. Альфа-2 адренергические рецепторы могут участвовать в пролиферации преадипоцитов. Глюкокортикостероиды могут оказывать пермиссивный эффект на жировую ткань и увеличивать ответ адипоцитов, такой как липолиз, на стимуляцию катехоламинами. Это пермиссивное действие может быть обусловлено активацией бета-адренергических рецепторов и других компонентов, включенных во вторичные внутриклеточные мессенджеры.

Лечение ОГ неизбежно имело бы целью уменьшение объема увеличенной жировой ткани глазницы. Следовательно, препарат для уменьшения объема адипоцитов посредством липолиза может оказаться полезным для этого состояния. Кроме того, уменьшение воспалительного процесса и воспалительных клеток в глазнице, которые могут быть связаны с увеличением жировой ткани, может дополнительно уменьшить объем тканей глазницы. Кроме того, лечение накопления гиалуронана в глазнице может обеспечить дополнительное уменьшение объема и облегчение офтальмопатии. Наконец, ингибирование липогенеза может улучшить данное состояние.

Предложили и показали, что доставка адренергически активных ингредиентов в подкожную ткань как бета-агонистов, так и альфа-2 антагонистов, приводит к потере регионарного жира и к лучшему виду регионарных накоплений жира. Например, показали, что изопротеренол 11 и йохимбин 8 уменьшают окружность бедра у женщин. Так как эти липолитические агенты, особенно бета-агонисты, действуют кратковременно и могут быстро удаляться из жировой ткани, вероятно, что липолиз происходил только в течение короткого времени после инъекции, снижая посредством этого потенциальную величину эффекта, несмотря на многочисленные инъекции. Кроме того, длительное воздействие бета-агонистов на адипоциты приводит к десенсибилизации и понижающей регуляции рецепторов и к потере липолитической активности. Средства для снижения или предупреждения этих эффектов на рецептор также могут улучшать терапию. Тем не менее, стратегия по обработке адипоцитов при ОГ с использованием адренергических агентов и глюкокортикостероидов для индукции липолиза и ингибирования липогенеза может обеспечить эффективное уменьшение массы ткани, ответственной за клинические признаки и симптомы.

Здесь описаны воплощения фармацевтических композиций, препаратов, способов и систем для лечения тиреоидной офтальмопатии (например, офтальмопатии Грейвса или "ОГ") путем уменьшения массы ткани глазницы. Уменьшение массы ткани глазницы может уменьшить проптоз, восстановить или предупредить потерю зрения и диплопию и уменьшить боль. Это уменьшение массы ткани можно осуществлять, делая по меньшей мере одно из следующего, включая: уменьшение массы глазничного жира, уменьшение воспаления (например, воспалительных клеток и цитокинов) и уменьшение накопления гликозаминоглюканов (ГАГ). Уменьшения массы жира можно добиться посредством модуляции адренергической системы. Как использовано и/или процитировано здесь, термин "модуляция" обычно используется в его общем смысле и более конкретно относится к агонизму адренергического рецептора, антагонизму адренергического рецептора и/или к изменениям в рецептор-ассоциированных сигнальных путях. Один пример изменения в рецептор-ассоциированных сигнальных путях включает увеличение (концентрации) циклического АМФ, например, как схематически проиллюстрировано на ФИГ.1. В некоторых воплощениях "модуляция" относится к повышающей регуляции рецептора или к увеличению числа адренергических рецепторов, к уменьшению дезактивации или секвестрации рецептора, к изменениям активности рецептора (например, к увеличению активности) и/или к изменениям аффинности рецептора. Модуляция адренергических рецепторов предпочтительно может производиться с применением глюкокортикостероида или антигистаминного средства, которые также будут работать для уменьшения воспаления. Аналогично, накопление гликозаминогликана можно уменьшить с применением глюкокортикостероида и можно дополнительно уменьшить с применением фермента для деградации гиалуроновой кислоты, такого как рекомбинантная человеческая гиалуронидаза.

Уменьшение массы жира в ткани глазницы предпочтительно достигают неабляционным путем, инициируя липолиз, ингибируя липогенез или уменьшая накопление липидов. Абляционные способы уменьшения (содержания) жира, такого как фосфатидилхолин или дезоксихолат, могут быть проблематичными для применения позади глаза, где неселективное разрушение ткани может привести к повреждению нервов или мышц и может вызвать рубцевание и фиброз. Стимулирование липолиза, ингибирование липогенеза и уменьшение накопления липидов может быть достигнуто через стимуляцию бета-адренергических рецепторов. Стимуляция бета-адренергических рецепторов также может противодействовать некоторым клеточным транскриптам, которые, как известно, активируются в жировых клетках глазницы при болезни Грейвса, такие как PPAR-гамма, адипонектин и лептин. Например, стимуляция бета-адренергического рецептора может уменьшать экспрессию PPAR-гамма и адипонектина в дифференцированных адипоцитах. Считают, что некоторые воплощения пролонгированной модуляции адренергических рецепторов в жировой ткани приводят к некоторой комбинации пролонгированного липолиза, пониженного содержания липидов адипоцитов, уменьшенного размера клеток адипоцитов, уменьшенной массы жировой ткани и/или уменьшенного накопления жира. Некоторые воплощения обеспечивают селективное уменьшение накопления жировой ткани и адипоцитов в глазнице посредством пролонгированной адренергической модуляции. В некоторых воплощениях пролонгированная адренергическая модуляция приводит к пролонгированному ингибированию пролиферации жировых клеток (липогенеза).

Различные воплощения раскрытых фармацевтических композиций включают по меньшей мере один селективный агонист бета-2-адренергического рецептора (например, селективный бета-2-агонист длительного действия) в комбинации с по меньшей мере одним соединением, которое уменьшает десенсибилизацию бета-адренергических рецепторов, например, десенсибилизацию ткани-мишени на агонист(ы) бета-адренергических рецепторов, например, глюкокортикостероиды или кетотифен, или с их аналогами, и также уменьшает воспаление. Термин "десенсибилизация" включает как кратковременную десенсибилизацию (тахифилаксию), так и долговременную десенсибилизацию, а также десенсибилизацию на протяжении других периодов времени. Агонисты бета-2-адренергических рецепторов также называются здесь "бета-2-агонисты" и "агонисты бета-2 рецептора". Если не указано иначе, ссылки на агонисты бета-2-адренергических рецепторов также включают их аналоги, физиологически приемлемые соли и/или сольваты. В некоторых воплощениях данные композиции содержат от примерно 100:1 до примерно 1:100 селективного бета-2-агониста длительного действия к глюкокортикостероиду.

Как обсуждалось выше, считают, что липолитическая активность, ингибирование пролиферации адипоцитов и уменьшение накопления липидов опосредованы модуляцией адренергических рецепторов в жировой ткани и/или на адипоцитах. В некоторых воплощениях редукционная терапия усиливается посредством длительного воздействия или пролонгированной активности одного или более чем одного агониста адренергического рецептора и/или соединения, стимулирующего (сигнальный) путь, ассоциированный с рецептором, например, катехоламинов, бета-агонистов, альфа-антагонистов, форсколина, аминофиллина, их аналогов или комбинаций.

Некоторые воплощения обеспечивают пролонгированную адренергическую модуляцию посредством применения фармацевтических композиций, содержащих один или более чем один по существу селективный агонист бета-2 рецептора длительного действия. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с пролонгированной активностью содержит один или более чем один подходящий селективный бета-2-агонист длительного действия, например, сальметерол 1, формотерол 2, бамбутерол 3, эформотерол, их физиологически приемлемые соли или сольваты, или их комбинации.

Пролонгированная адренергическая модуляция может не наблюдаться с типичными адренергическими композициями, поскольку адренергическое соединение обычно быстро удаляется из жировой ткани через кровь и/или лимфу, в частности, благодаря их гидрофильности. Кроме того, считают, что длительное воздействие адренергических агентов на жировую ткань, в частности агонистов бета-рецептора, приводит к десенсибилизации рецептора посредством фосфорилирования и секвестрации рецептора. Считают, что эти эффекты ограничивают способность адренергически модулирующей композиции лечить жировую ткань и приводят к тахифилаксии, состоянию, при котором организм демонстрирует быстро ослабевающий ответ на агонист после введения первоначальных доз по отношению к желаемому липолитическому и антилипогенному эффекту. Соответственно, лечебный эффект является кратковременным.

бета-2-Агонисты кратковременного действия часто приводят к тахифилаксии, как обсуждалось выше. Однако, поскольку предпочтительные воплощения селективных бета-2-агонистов длительного действия обладают по существу селективной бета-2-рецепторной активностью и высокой липофильностью, активности бета-2-агонистов длительного действия сохраняются в жировой ткани в течение более длительных периодов времени по сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия. Активность частичного антагониста бета-2 рецептора, которая наблюдается при применении сальметерола, может предотвращать некоторую десенсибилизацию, которая может происходить при непрерывном воздействии полных адренергических агонистов на адипоциты. Кроме того, сальметерол может не полностью активировать аррестиновый сигнальный путь, который приводит к интернализации и деградации рецептора и к долговременной понижающей регуляции рецептора. По сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия, липолиз также происходит в течение более длительного времени после введения, поскольку селективные бета-2-агонисты длительного действия имеют более продолжительные периоды полувыведения. Комбинация более продолжительных периодов полувыведения и активностей может снижать частоту введения фармацевтических композиций. Следовательно, в некоторых воплощениях не требуется ежесуточного введения композиции или ее введения более чем один раз в сутки. Кроме того, предпочтительные воплощения селективных бета-2-агонистов длительного действия демонстрируют также большую селективность в отношении бета-2 рецепторов, обеспечивая по существу аналогичные терапевтические эффекты соединения по сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия, при более низкой дозировке. Кроме того, более селективная бета-2 активность может ограничивать побочные эффекты на сердце, которые часто индуцируются стимуляцией бета-1 рецепторов в сердце.

Как обсуждалось выше, липолиз и/или ингибирование липогенеза и накопления липидов стимулируются бета-1, 2 или 3 подтипами рецептора. Таким образом, агонисты к одному, двум и/или всем трем рецепторам способны стимулировать липолиз и/или ингибировать липогенез. Считают, что у людей активность бета-2 рецепторов является более важной для стимуляции липолиза, особенно в присутствии противовоспалительного стероида или глюкокортикостероида.

Селективные бета-2-агонисты длительного действия, например, сальметерол 1 (±2-(гидроксиметил)-4-[1-гидрокси-2-[6-(4-фенилбутокси)гексиламино]этил]фенол, CAS рег. №94749-08-3) и формотерол 2 (±N-[2-гидрокси-5-[1-гидрокси-2-[1-(4-метоксифенил)пропан-2-иламино]этил]-фенил]метанамид, CAS рег. №73573-87-2), являются предпочтительными в некоторых воплощениях. В некоторых воплощениях данные композиции содержат один или более чем один селективный бета-2-агонист длительного действия в виде физиологически приемлемых солей или сольватов, например, сальметерола ксинафоат и/или формотерола фумарат. Во многих случаях соли и/или сольваты бета-2-агонистов будут иметь желаемую активность. Соответственно, если не указано иначе, ссылки на активный ингредиент, например, на сальметерол 1, формотерол 2, изопротеренол 4, альбутерол 5, фенотерол и форсколин включают сами соединения, а также их физиологически приемлемые аналоги, соли и/или сольваты, или их комбинации.

Некоторые предпочтительные бета-агонисты длительного действия демонстрируют высокую собственную аденилатциклазную активность, которая увеличивает синтез цАМФ. Например, некоторые воплощения включают формотерол 2 в качестве бета-2 селективного агониста длительного действия, который демонстрирует некоторую комбинацию более высокой активности, пониженных системных эффектов, высокой собственной активации аденилатциклазы и/или увеличения (уровня) циклического АМФ, медиатора липолиза.

В некоторых предпочтительных воплощениях формотерол 2 присутствует в виде его физиологически приемлемой соли и/или сольвата. Подходящие физиологически приемлемые соли формотерола 2 включают, например, соли присоединения кислоты, происходящие из неорганических и органических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, бензоат, 4-метоксибензоат, 2-гидроксибензоат, 4-гидроксибензоат, 4-хлорбензоат, пара-толуолсульфонат, метансульфонат, аскорбат, салицилат, ацетат, сукцинат, лактат, глутарат, глюконат, трикарбаллилат, гидроксинафталинкарбоксилат, олеат, их комбинации и тому подобное. Предпочтительные воплощения содержат формотерол 2 в виде его фумаратной соли и/или в виде дигидрата. Подходящая концентрация формотерола 2 в ткани для обработки жировой ткани составляет от примерно 1 пМ до примерно 100 мкМ, более предпочтительно от примерно 0,1 нМ до примерно 10 мкМ, например, от примерно 1 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 40 нМ до примерно 3 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 1 мкМ, или любую другую концентрацию формотерола в ткани от примерно 0,1 нМ до примерно 10 мкМ.

В некоторых воплощениях в описанных здесь композициях и способах используют сальметерол. Сальметерол 1 демонстрирует частичную агонистическую активность, которая, как полагают, уменьшает десенсибилизацию рецептора и может ограничивать аррестиновый сигнальный путь, приводя к меньшей понижающей регуляции рецептора. В некоторых воплощениях сальметерол 1 присутствует в виде его физиологически приемлемой соли и/или сольвата. Подходящие физиологически приемлемые соли сальметерола 1 включают, но не ограничиваются солями присоединения кислоты, происходящими из неорганических и органических кислот, такими как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, тартрат, цитрат, бензоат, 4-метоксибензоат, 2-гидроксибензоат, 4-гидроксибензоат, 4-хлорбензоат, пара-толуолсульфонат, метансульфонат, аскорбат, салицилат, ацетат, фумарат, сукцинат, лактат, глутарат, глюконат, трикарбаллилат, гидроксинафталинкарбоксилат, 1-гидрокси-2-нафталинкарбоксилат, 3-гидрокси-2-нафталинкарбоксилат, олеат, их комбинациями и тому подобным. В некоторых воплощениях сальметерол 1 предложен в виде 1-гидрокси-2-нафталинкарбоксилатной соли (гидроксинафтоата).

В некоторых воплощениях подходящая концентрация сальметерола 1 в ткани для обработки жировой ткани варьирует от примерно 1 пМ до примерно 100 мкМ, предпочтительно от примерно 1,0 нМ до примерно 1 мкМ, например, от примерно 10 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 40 нМ до примерно 3 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 1 мкМ, или представляет собой любую другую концентрацию сальметерола в ткани от примерно 1,0 нМ до примерно 10 мкМ.

В некоторых воплощениях селективный бета-2-агонист длительного действия, подлежащий введению, представляет собой формотерол, и терапевтически эффективное количество формотерола составляет от примерно 0,001 до примерно 100 мкг/сутки, например, от примерно 0,001 до примерно 50, от 0,01 до примерно 1,0, от примерно 0,1 до примерно 10, от примерно 1 до примерно 20, от примерно 5 до примерно 40, от примерно 25 до примерно 75, от примерно 50 до примерно 100 мкг/сутки формотерола, или любую другую дозу формотерола от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки.

В некоторых воплощениях селективный бета-2-агонист длительного действия, подлежащий введению, представляет собой сальметерол, и терапевтически эффективное количество сальметерола, подлежащее введению, составляет от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 1000 мкг/сутки, например, от примерно 0,1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 10 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 50 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, или любую другую дозу сальметерола от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 1000 мкг/сутки.

Используемый здесь термин "терапевтически эффективное количество" относится к достаточному количеству вводимого агента (например, бета-2-агониста длительного действия) или соединения, которое в некоторой степени будет ослаблять один или более симптомов заболевания или состояния, которое лечат. Результатом может быть уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания, или любое другое желаемое изменение биологической системы. Например, "эффективным количеством" для терапевтических применений является количество композиции, содержащей соединение, как здесь раскрыто, необходимое для обеспечения клинически значимого уменьшения симптомов заболевания без нежелательных вредных побочных эффектов. Подходящее "эффективное количество" в каждом отдельном случае может быть определено с использованием таких методов, как исследование увеличения дозы. Термин "терапевтически эффективное количество" включает, например, профилактически эффективное количество. "Эффективное количество" соединения, раскрытого здесь, такого как селективный бета-2-агонист, используемого отдельно или в комбинации с другими соединениями (например, с соединением для уменьшения десенсибилизации бета-2-адренергического рецептора), представляет собой количество, эффективное для достижения желаемого фармакологического эффекта или терапевтического улучшения без нежелательных побочных эффектов. Понятно, что "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" может варьировать от субъекта к субъекту вследствие варьирования метаболизма бета-2-агонистов и соединений, используемых в комбинации с бета-2-агонистами (например, глюкокортикостероидов), возраста, массы, общего состояния субъекта, состояния, которое лечат, тяжести состояния, которое лечат, и решения практикующего врача.

Некоторые воплощения включают оптически чистые изомеры бета-адренергического(их) агониста(ов), которые могут улучшать липолиз и ингибирование липогенеза и уменьшать потенциальные побочные эффекты. В некоторых воплощениях эти оптически чистые изомеры позволяют получать препараты, содержащие большие нагрузки активного ингредиента, например, путем устранения одного или более чем одного изомера, не оказывающего физиологического эффекта, имеющего меньший физиологический эффект, отрицательный эффект и/или невыясненный физиологический эффект. Удаление нежелательных связей из рацемической смеси позволяет выделить активный изомер, или эутомер, обеспечивая таким образом большую нагрузку эутомера в данном препарате путем удаления неактивных компонентов.

Два стереогенных центра в молекуле обычно образуют два диастереомера, названных здесь (R*,R*) и (R*,S*), и их энантиомеры. Диастереомеры представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. зеркальное изображение одного диастереомера не накладывается на другой диастереомер. Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые являются зеркальными изображениями друг друга. Рацемат представляет собой смесь 1:1 энантиомеров. Энантиомеры (R*,R*)-диастереомеров называются (R,R)- и (S,S)-энантиомерами, которые являются зеркальными изображениями друг друга и, следовательно, имеют некоторые общие химические и физические свойства, например, температуры плавления. Аналогично, (R,S)- и (S,R)-изомеры являются энантиомерами (R*,S*)-диастереомера. Например, формотерол 2 доступен в виде рацемата (R,R)- и (S,S)-изомеров в соотношении 1:1, типично в виде дигидрата фумаратной соли. Некоторые воплощения включают (R,R)-энантиомер, (R,R)-формотерол, который более активен в качестве бета-2-агониста длительного действия. Некоторые воплощения включают оптически чистые изомеры других бета-2-агонистов, например, (R)-сальметерол.

Кроме того, в некоторых воплощениях по меньшей мере один селективный бета-2-агонист длительного действия является высоколипофильным, обеспечивая таким образом фармацевтическую композицию с пролонгированной активностью в жировой ткани. Считают, что высокая растворимость в липидах продлевает время пребывания бета-2-агониста в жировой ткани, тем самым устраняя или снижая необходимость в носителе для замедленного и/или контролируемого высвобождения в некоторых воплощениях. В препаратах, содержащих носитель для замедленного высвобождения, например, полимер для замедленного высвобождения, высокая липофильность бета-2-агониста облегчает включение в носитель для замедленного высвобождения, как обсуждается более подробно ниже.

Сальметерол 1 и формотерол 2 имеют высокие растворимости в липидах, что продлевает время их пребывания в жировой ткани и/или в одной или в более чем одной жировой клетке. В некоторых воплощениях композиция содержит высоколипофильный бета-агонист, который снижает или устраняет необходимость в носителе для замедленного или контролируемого высвобождения из-за распределения и изоляции в жировой ткани, посредством чего продлевается эффект лечения. В некоторых воплощениях используют бета-агонисты с коэффициентом распределения в масле-воде по меньшей мере примерно 1000 или по меньшей мере примерно 10000 к 1. Например, сальметерол 1 является по меньшей мере в 10000 раз более липофильным, чем альбутерол 5, гидрофильный бета-агонист кратковременного действия. Дополнительно, сальметерол 1 и формотерол 2 обладают противовоспалительными свойствами, используемыми в лечении ОГ, как обсуждается ниже. В некоторых воплощениях они также стимулируют благоприятные изменения внеклеточного матрикса и снижают накопление жидкости, что улучшает лечение ОГ, и накопление глазничного жира.

Пролонгированная бета-адренергическая активность дополнительно усиливается предотвращением десенсибилизации (тахифилаксии), которая может происходить при непрерывном воздействии адренергических агонистов на адипоциты, как обсуждалось выше. "Соединения, которые уменьшают десенсибилизацию бета-адренергических рецепторов" (например, уменьшают десенсибилизацию ткани-мишени в отношении бета-агониста), включают все подходящие соединения, которые снижают толерантность ткани-мишени к агонистам бета-адренергических рецепторов, включая глюкокортикостероиды и подходящие антигистаминные средства, например кетотифен, и тиреоидные гормоны, например Т3 и Т4. Глюкокортикостероиды также называются здесь "противовоспалительными стероидами", "глюкокортикостероидами" и/или "кортикостероидами". Считают, что глюкокортикостероиды сенсибилизируют накопления глазничного жира путем увеличения числа бета-2 рецепторов, тем самым благоприятствуя липолизу или уменьшению (содержания) жира по сравнению с запасанием жира. Глюкокортикостероиды также могут снижать число альфа-2 рецепторов. Глюкокортикостероиды также могут стабилизировать или уменьшать понижающую регуляцию рецепторов, особенно когда их дают одновременно с бета-агонистом. Примечательно, что болезнь Грейвса и ОГ встречаются у женщин значительно чаще, чем у мужчин. У женщин эстроген может индуцировать экспрессию альфа-2 адренергических рецепторов в подкожной жировой ткани, приводя к соотношению бета-2 рецептора и альфа-2 рецептора менее 1. Считают, что соотношение бета-2 рецепторов и альфа-2 рецепторов более 1 приводит к уменьшению жира, а не накоплению жира в адипоцитах. В некоторых воплощениях композиция, содержащая один или более чем один глюкокортикостероид, является эффективной при обработке участков жира, содержащих пониженное число бета-2 рецепторов и/или повышенное число альфа-2 рецепторов, которые являются резистентными к бета-адренергической стимуляции липолиза или ингибированию липогенеза, например, в подкожной жировой ткани, особенно у женщин.

Таким образом, считают, что глюкокортикостероиды или другие соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов улучшают липолиз, ингибирование липогенеза и/или регионарное уменьшение содержания жира во время воздействия бета-агониста. В некоторых воплощениях обработка адипоцитов глюкокортикостероидом, который увеличивает липолитическую активность, поддерживает и/или повышает как липолитическую активность, так и число бета-рецепторов в ткани-мишени. Примеры подходящих кортикостероидов включают дексаметазон 6, флутиказона пропионат 7, будесонид 8, преднизолон 9, метилпреднизолон 10 и их аналоги. В некоторых воплощениях глюкокортикостероид представляет собой дексаметазон. В некоторых воплощениях кортикостероид представляет собой метилпреднизолон 6, (9-фтор-11,17-дигидрокси-17-(2-гидроксиацетил)-10,13,16-триметил-6,7,8,11,12,14,15,16-октагидроциклопента[а]фенантрен-3-он, CAS рег. №50-02-2) и/или флутиказона пропионат 7.

Как обсуждалось выше, в некоторых воплощениях подходящим соединением для уменьшения десенсибилизации бета-рецепторов является кетотифен 11, который является полезным также в качестве антигистаминного средства. В некоторых воплощениях композиция содержит одно соединение, которое уменьшает десенсибилизацию жировой ткани к бета-2-агонисту.

В некоторых воплощениях используют множество соединений для уменьшения десенсибилизации бета-рецепторов, например множество глюкокортикостероидов. Некоторые предпочтительные воплощения содержат по меньшей мере один глюкокортикостероид и антигистаминное средство кетотифен или аналог кетотифена.

В некоторых воплощениях в человеческих адипоцитах глазницы увеличивается активность или плотность по меньшей мере одного бета-2 рецептора в ответ на введение противовоспалительного стероида или кетотифена, особенно в присутствии бета-агониста. В некоторых воплощениях увеличивающаяся активность и/или плотность бета-2 рецепторов потенцирует эффект бета-2-агонистов длительного или кратковременного действия. Таким образом, в некоторых воплощениях глюкокортикостероид может сенсибилизировать глазничный жир к эффектам стимуляции бета-2 рецепторов, липолиза, ингибирования липогенеза и/или апоптоза, и/или увеличивает соотношение бета-2-адренергических рецепторов к альфа-2 адренергическим рецепторам, тем самым сдвигая баланс в жировой ткани от накопления жира к потере жира. В некоторых воплощениях число бета-2 рецепторов увеличивается или поддерживается, особенно глюкокортикоидом, кетотифеном или тиреоидным гормоном, особенно при совместном введении с бета-2-адренергическим агонистом.

Добавление противовоспалительного агента, такого как глюкокортикостероид или антигистаминное средство, имеет дополнительный эффект уменьшения (числа) воспалительных клеток и воспалительного ответа в глазнице. Глазница и глазничный жир при ОГ имеют диффузный лимфоцитарный инфильтрат, содержащий лимфоидные агрегаты или включения. Другие ткани глазницы, такие как внешние мышцы глаза, имеют похожий инфильтрат лейкоцитов. Тучные клетки также могут присутствовать в больших количествах. Секреция цитокинов этими лимфоцитами согласуется и с клеточно-, и с гуморально-опосредованными ответами. Глюкокортикостероиды уменьшают накопление лейкоцитов, секрецию цитокинов и могут индуцировать апоптоз лейкоцитов. Эти эффекты могут усиливаться селективными бета-2-агонистами длительного действия. Кроме того, селективные бета-2-агонисты длительного действия могут активировать, стабилизировать и стимулировать транслокацию рецептора глюкокортикостероида в ядро в лейкоцитах и даже в адипоцитах, дополнительно потенцируя противовоспалительные эффекты. Глюкокортикостероид и бета-агонист длительного действия могут стабилизировать тучные клетки и могут работать аддитивно или синергично. Кетотифен также может стабилизировать тучные клетки и также может ингибировать TNF-альфа (фактор некроза опухолей-альфа), известный цитокин, участвующий в клеточных воспалительных ответах, опосредованных лимфоцитами.

Подходящие концентрации глюкокортикостероидов в ткани, используемых для описанных здесь терапевтических способов, могут варьировать от примерно 0,001 мкМ до примерно 10 мМ, например, от примерно 1,0 мкМ до примерно 5 мМ, от примерно 40 мкМ до примерно 3 мМ, от примерно 100 мкМ до примерно 1 мМ, или могут представлять собой любые другие концентрации глюкокортикостероида в ткани от примерно 10 мкМ до примерно 10 мМ.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой будесонид, и фармацевтически эффективное количество будесонида составляет от примерно 1,0 до примерно 320 мкг/сутки, например, от примерно 80 до примерно 300, от примерно 100 до примерно 280, от примерно 120 до примерно 260, от примерно 140 до примерно 240, от примерно 160 до примерно 220, от примерно 180 до примерно 200, от примерно 185 до примерно 195 мкг/сутки будесонида, или любую другую дозу будесонида от примерно 60 до примерно 320 мкг/сутки.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой флутиказон, и терапевтически эффективное количество флутиказона составляет от примерно 1,0 до примерно 500 мкг/сутки, например, от примерно 120 до примерно 480, от примерно 140 до примерно 460, от примерно 160 до примерно 440, от примерно 180 до примерно 420, от примерно 200 до примерно 400, от примерно 220 до примерно 380, от примерно 240 до примерно 360, от примерно 260 до примерно 340, от примерно 275 до примерно 310, от примерно 290 до примерно 300 мкг/сутки флутиказона, или любую другую дозу флутиказона от примерно 100 до примерно 500 мкг/сутки.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой метилпреднизолон в дозе от примерно 1,0 мкг/сутки до 10000 мкг/сутки или более, например, от 50 до 5000, от 100 до 5000, от 500 до 5000, от 700 до 3000, от 800 до 2500, от 1000 до 2000, или в любой другой дозе от примерно 1,0 до 10000 мкг/сутки. В некоторых воплощениях метилпреднизолона сукцинат можно солюбилизировать в суспензии кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата или вводить совместно с суспензией кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата с получением дозы для немедленного введения или дозы для пролонгированного введения.

В некоторых воплощениях композиция содержит дополнительные возможные ингредиенты. Например, глазница глаза и накопления глазничного жира, особенно в случае ОГ, содержат большие количества гликозаминогликанов, состоящих по существу из гиалуроновой кислоты. В некоторых ситуациях полезно подвергать эту гиалуроновую кислоту деградации, например, для улучшения диффузии препарата бета-адренергического агониста и глюкокортикостероида через глазницу. Кроме того, деградация гиалуроновой кислоты может дополнительно уменьшать массу тканей глазницы и уменьшать отек глазницы, улучшая таким образом состояние проптоза и ОГ. В некоторых воплощениях композиция содержит фермент, такой как гиалуронидаза (например, рекомбинантная человеческая гиалуронидаза, Hylenex, Halozyme Therapeutics, San Diego, CA), который расщепляет гиалуроновую кислоту.

Некоторые воплощения данной композиции включают один или более чем один антилиполитический блокирующий агент, например, селективный антагонист альфа-2 рецептора, такой как фентоламин 12 (CAS рег. №73-05-2) или йохимбин 13 (CAS рег. №146-48-5), который блокирует антилиполитические эффекты при регионарном накоплении жира. Антилиполитические эффекты в адипоцитах и жировой ткани обычно наблюдаются в подкожных и регионарных участках накопления жира. Например, при ввоздействии бета-агонистов подкожный жир имеет меньшую скорость липолиза, чем висцеральный жир. Воздействие антилиполитических блокирующих агентов на глазничный жир в некоторых воплощениях может улучшить липолитическую активность.

В некоторых воплощениях композиция содержит другие адренергические агенты, которые усиливают эффект селективного бета-2-агониста длительного действия. Например, аминофиллин 14 (1,3-диметил-7H-пурин-2,6-дион, диэтиламин CAS рег. №317-34-0) и теофиллин 15 (CAS рег. №58-55-9) представляют собой липолитические агенты, которые блокируют разрушение циклического АМФ.

Другие возможные ингредиенты усиливают вторичные сигналы, создаваемые связыванием бета-агонистов. Например, в некоторых воплощениях композиция содержит форсколин 16 (CAS рег. №66575-29-9), который стимулирует аденилатциклазу, увеличивая таким образом синтез циклического АМФ, инициированный бета-агонистом длительного действия. Повышенная концентрация циклического АМФ помогает поддерживать липолитическую активность.

В некоторых воплощениях композиция содержит гормон роста в комбинации с бета-агонистом длительного действия и глюкокортикостероидом, что, по-видимому, стимулирует липолиз.

В других воплощениях композиция дополнительно содержит один или более чем один неселективный бета-агонист, например изопротеренол 4, и/или селективный бета-2-агонист кратковременного действия, например тербуталин. Некоторые композиции содержат по меньшей мере один альфа-2 антагонист или его физиологически приемлемые соли или сольваты.

Воплощения данной композиции приготавливают в виде препаратов для введения любым подходящим способом, например, как описано в Remington: The Science And Practice Of Pharmacy (21st ed., Lippincott Williams & Wilkins). Примерные пути введения включают, но не ограничиваются этим, парентеральный, пероральный, внутриглазничный, периорбитальный, глазной, ретробульбарный, местный, внутримышечный, трансдермальный, сублингвальный, интраназальный или введение в дыхательные пути. В некоторых воплощениях данную композицию приготавливают в виде препарата для инъекции в область, в которой лечение является желательным, например в глазницу или отложение глазничного жира.

В некоторых воплощениях бета-агонисты, соединения для предотвращения десенсибилизации бета-рецепторов или и те и другие готовят в форме суспензий кристаллических микрочастиц для пролонгирования высвобождения и, тем самым, для дополнительной поддержки адренергической модуляции.

Можно использовать эксципиенты для инъецируемых препаратов. Типично, эксципиент является офтальмологически приемлемым. Другими словами, эксципиент по существу не оказывает длительного или постоянного вредного воздействия на глаз, в который его вводят. Примеры офтальмологически приемлемых носителей включают воду (дистиллированную или деионизированную), физиологический раствор и другие водные среды. Соединения по изобретению предпочтительно являются растворимыми в носителе, который используют для их введения, так что данные соединения вводят в глаз в форме раствора. В качестве альтернативы также можно использовать суспензию активного соединения или соединений (например, суспензию кристаллических микрочастиц) в подходящем носителе. В некоторых воплощениях один или более агонистов бета-2 рецептора или глюкокортикостероидов готовят в виде препарата в жидком носителе, например, в виде раствора, суспензии, геля и/или эмульсии. Некоторые воплощения включают любые подходящие липофильные, например, модифицированные масла (например Cremophor® BASF), соевое масло, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, производные полиэфиров, их комбинации и тому подобное. Некоторые воплощения включают носитель в виде микрочастиц и/или наночастиц по меньшей мере для одного из агонистов бета-2 рецепторов и/или глюкокортикостероидов, как будет обсуждаться более подробно ниже. Некоторые воплощения включают один или более чем один носитель или агент для замедленного или контролируемого высвобождения, например полимерные микросферы. Некоторые воплощения включают эксципиенты, подходящие для стабильных суспензий микронизированных частиц агонистов бета-2 рецептора или глюкокортикостероидов.

Инъецируемые препараты вводят любыми способами, включающими применение одной иглы, множества игл и/или с использованием безыгольного инъекционного устройства. В некоторых воплощениях дозу активных ингредиентов для введения в ткань готовят в виде препарата в подходящем носителе, доставляемом посредством инъекции. В некоторых воплощениях доставка включает одноигольную инъекцию. В некоторых воплощениях доставка включает инъекцию с использованием многоигольного комплекта, который в некоторых воплощениях обеспечивает широкое распределение препарата в ткани-мишени. В некоторых воплощениях препараты инъецируют способом, который обеспечивает распределение в подходящем слое глазничного жира. В некоторых воплощениях препарат инъецируют небольшими аликвотами для уменьшения дополнительного объема, добавляемого в глазницу, и их объем может варьировать от примерно 0,1 мл до примерно 0,5 мл. В некоторых воплощениях используемое для инъекции устройство имеет искривленную иглу для облегчения доставки в ретроорбитальное или внутрироговичное пространство.

В некоторых воплощениях бета-2-агонист и соединение, которое снижает десенсибилизацию, вводят, например инъецируют, в виде отдельных препаратов или, в качестве альтернативы, вводят разными путями (например, глюкокортикостероид вводят перорально с последующей инъекцией бета-2-агониста длительного действия). В некоторых воплощениях соединение, которое уменьшает десенсибилизацию, вводят до бета-2-агониста. В других воплощениях бета-2-агонист вводят до соединения, которое снижает десенсибилизацию.

Интервал между введением соединения, которое уменьшает десенсибилизацию, и введением бета-2-агониста может представлять собой интервал от примерно 5 минут вплоть до 7 суток, например, 30 минут, 1 час, 6 часов, 12 часов, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток или 7 суток, или любой другой интервал времени от примерно 5 минут до примерно 7 суток. В предпочтительном воплощении соединение, которое уменьшает десенсибилизацию (например, кортикостероид), вводят перорально вплоть до 7 суток, например, за 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток или 10 суток до введения бета-2-агониста (например, путем местного нанесения офтальмологического препарата на глаза).

В других воплощениях бета-2-агонист совместно вводят (например, в виде части того же препарата) с соединением, которое уменьшает десенсибилизацию бета-рецептора (например, с глюкокортикостероидом).

В некоторых воплощениях препарат дают субъекту, подлежащему лечению, в виде депо-препарата, который содержит один или более чем один агент для замедленного или контролируемого высвобождения для обеспечения замедленного или контролируемого высвобождения бета-2-агониста или соединения (например, глюкокортикостероида) для ингибирования десенсибилизации бета-рецепторов. В таких препаратах бета-2-агонист, соединение для уменьшения десенсибилизации бета-рецептора или они оба инкапсулированы в агент или носитель для замедленного или контролируемого высвобождения, связаны и/или конъюгированы с агентом или носителем для замедленного или контролируемого высвобождения. В некоторых воплощениях биосовместимые, биодеградируемые препараты с замедленным или контролируемым высвобождением обеспечивают локальную активность в ткани в течение недель-месяцев. Подходящие агенты или носители для замедленного или контролируемого высвобождения включают полимеры, макромолекулы, конъюгаты активного ингредиента, гидрогели, их комбинации и тому подобное. Некоторые воплощения носителя для замедленного высвобождения в целевой жир представляют собой, например, липосомы. Предпочтительно, вещества для замедленного высвобождения выбраны для облегчения доставки по существу равного количества активного вещества в единицу времени, в частности, в течение по меньшей мере примерно 3 суток, более конкретно в течение по меньшей мере примерно 4 суток, вплоть до одного года или более. Для обработки одной области можно осуществить несколько циклов инъекций препарата с замедленным высвобождением. В некоторых воплощениях замедленное высвобождение происходит вследствие приготовления бета-2-агониста или соединения для уменьшения десенсибилизации бета-рецептора, или их обоих в форме суспензии кристаллических микрочастиц лекарственного средства.

В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит полимер, например, полилактиды, полигликолиды, поли(лактидгликолиды), полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полиангидриды, полиортоэфиры, полимеры на основе простых и сложных эфиров, поликапролактоны, полиэфирамиды, поликарбонаты, полицианоакрилаты, полиуретаны, полиакрилаты и комбинации, смеси или сополимеры (полимеров), приведенные выше, которые используют для инкапсуляции, связывания или конъюгирования с активным(и) ингредиентом(ами) (например, с бета-агонистами и/или глюкокортикостероидами). В некоторых предпочтительных воплощениях полимеры для замедленного высвобождения содержат полиэтиленгликолевые группы, с которыми конъюгирован один или более чем один активный ингредиент. В некоторых предпочтительных воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит сополимер 17 поли(лактидгликолид) (PLGA, сополимер молочной и гликолевой кислоты)).

В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит один или более чем один гидрогель, включающий модифицированные альгинаты. Примеры подходящих модифицированных альгинатов включают альгинаты, раскрытые в WO 98/12228. В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит носитель или эксципиент в виде наночастиц на основе альбумина.

В некоторых воплощениях препарат, содержащий раствор преполимера, инъецируют в участок ткани-мишени, где он затем полимеризуется (например, путем фотополимеризации) или отверждается (например, при использовании температурочувствительных гелеобразующих веществ) in vivo.

В некоторых воплощениях вещества для контролируемого высвобождения имеют характеристики высвобождения, разработанные для конкретного приложения по уменьшению ткани. В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения или контролируемого высвобождения приготавливают в форме микрочастиц, таких как микросферы, которые готовят в виде инъецируемого раствора и/или геля. В некоторых воплощениях размер микрочастиц варьирует от примерно 10 мкм до примерно 100 мкм в диаметре, и они обычно являются однородными по размеру. В некоторых воплощениях предложены препараты, содержащие альгинаты и/или сополимеры поли(лактидгликолиды) 17, в виде инъецируемого геля или переработанные в микросферы. В других воплощениях бета-2-агонист или кортикостероид (или другое соединение для уменьшения десенсибилизации бета-рецептора) приготавливают в форме кристаллических микрочастиц. Другие примеры подходящих инъецируемых биодеградируемых биосовместимых веществ, подходящих для образования микрочастиц, включают хитозан, декстран, гидроксиапатит и кремний.

Микросферы и/или микрочастицы образуют с использованием любого способа, включая выпаривание растворителя и/или полимеризацию эмульсии. В некоторых воплощениях микросферы имеют средний диаметр от примерно 5 мкм до примерно 60 мкм, предпочтительно примерно 20 мкм. В некоторых воплощениях PLGA изготовливают с варьирующими соотношениями лактида к гликолиду, в зависимости от желаемой скорости высвобождения активного(ых) ингредиента(ов). Поскольку скорость деградации этого сополимера пропорциональна его кристалличности и доле гликолида в данном препарате, нерацемические смеси лактида и/или гликолида увеличивают кристалличность и снижают скорость деградации. Более высокие соотношения гликолида увеличивают скорость деградации. В некоторых воплощениях соотношение примерно 65%-75% лактида к примерно 25%-35% гликолида обеспечивает высвобождение активных ингредиентов в течение от примерно 2 недель до примерно 45 суток. В других воплощениях соотношение лактида к гликолиду составляет от примерно 0:100 до примерно 100:0, обеспечивая таким образом другие скорости высвобождения.

В некоторых воплощениях микросферы или микрочастицы имеют полое и/или пористое внутреннее строение. В некоторых воплощениях данные микросферы содержат твердую или пористую наружную оболочку,

В некоторых воплощениях препараты, содержащие пористые наружные оболочки и/или микросферы, демонстрируют двухфазный профиль высвобождения активного(ых) ингредиента(ов) с первоначальным взрывным высвобождением активного(ых) ингредиента(ов) и последующим замедленным высвобождением, связанным с деградацией полимерных микросфер. Первоначальный взрыв нагружает ткань эффективной липолитической/ингибирующей липогенез и противовоспалительной концентрацией активного(ых) ингредиента(ов), причем последующее более медленное высвобождение поддерживает желаемую концентрацию. В некоторых воплощениях различные структуры микросфер и профили высвобождения активного ингредиента оптимизируют эффект обработки жировой ткани глазницы и адипоцитов и через модуляцию адренергического рецептора эффект на инфильтрат лейкоцитов для уменьшения воспаления. В некоторых предпочтительных воплощениях поддерживаемые в ткани локальные концентрации селективных бета-2-адренергических агентов длительного действия, таких как сальметерол 1 и/или формотерол 2, представляют собой концентрации от примерно 1,0 пМ до примерно 10 мкМ, например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 5 мкМ, от 0,5 мкМ до примерно 4 мкМ, или любую другую концентрацию от примерно 0,001 мкМ до примерно 10 мкМ. Поддерживаемые в ткани локальные концентрации глюкокортикостероидов могут варьировать от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мМ.

В некоторых воплощениях один или более чем один активный ингредиент является инкапсулированным, связанным и/или конъюгированным с полимером в соотношении примерно 10-12% по массе по сравнению с полимерными микросферами. Количество активного ингредиента в виде массовой процентной доли относительно носителя (например, микрочастиц или микросфер) обозначается здесь как "нагрузка активного ингредиента". Используемые здесь термины "нагруженный" и "нагрузка" относятся к активным ингредиентам, по существу инкапсулированным, связанным и/или конъюгированным с носителем. В некоторых воплощениях нагрузка активного ингредиента составляет вплоть до примерно 75%. Таким образом, некоторые предпочтительные препараты содержат один или более чем один бета-2-адренергически активный ингредиент, такой как сальметерол 1, формотерол 2 и/или их физиологически приемлемые соли и сольваты, нагруженные на полимерные микросферы в концентрации от примерно 1 мг до примерно 20 мг активного ингредиента на примерно от 10 до примерно 200 миллиграммов полимера. В некоторых воплощениях препарата с этой нагрузкой активного ингредиента достаточно для обеспечения от примерно 15-суточного до примерно 45-суточного высвобождения активного ингредиента в концентрации, подходящей для осуществления липолиза и/или ингибирования липогенеза. Аналогично, для получения противовоспалительного эффекта глюкокортикостероиды будесонид и флутиказон в фармацевтически приемлемых формах можно нагружать в концентрации от примерно 1 мг до примерно 20 мг активного ингредиента на примерно от 10 до примерно 200 мг полимера.

В некоторых воплощениях два или более активных ингредиента загружают в одну и ту же микрочастицу, например в липосому или PLGA. Таким образом, в некоторых воплощениях полимер, инкапсулирующий глюкокортикостероид в адренергическом соединении, доставляют в жировую ткань одновременно. В качестве альтернативы, два активных ингредиента загружают в отдельные микрочастицы. Два типа микросфер затем смешивают с получением препарата с желаемым соотношением агониста бета-рецептора и глюкокортикостероида, затем их вводят одновременно. В качестве альтернативы, два типа микрочастиц вводят последовательно.

Микросферы, содержащие активный(е) ингредиент(ы), суспендируют в примерно от 0,5 мл до 10 мл подходящего физиологически приемлемого жидкого носителя. В некоторых воплощениях, где используют отдельные микросферы с активными ингредиентами, данные микросферы смешивают друг с другом в жидком носителе. В других воплощениях каждый тип микросфер смешивают с жидким носителем по отдельности. В некоторых воплощениях жидкий носитель может содержать фармацевтически приемлемую форму (от 1,0 до 15 МЕ/мл) и количество гиалуронидазы. Как использовано здесь, количество "1 ME гиалуронидазы" продуцирует такое же уменьшение мутности в смеси гиалуроновой кислоты и альбумина, как и 1 ME (Международная Единица) стандартного препарата гиалуронидазы. См., например, Mathews et al. (1966), Methods Enzymol 8, 654-662. В некоторых воплощениях суспензию микросфер затем инъецируют в глазницу или в ретробульбарное пространство аликвотами по 0,1-0,5 мл. В качестве альтернативы, инъекции, как описано выше, производят раздельно и последовательно в те же участки с использованием двух препаратов микросфер, инкапсулирующих каждый активный ингредиент.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, такой как дексаметазон 6, будесонид 8 и/или флутиказона пропионат 7, также действует в качестве противовоспалительного агента, снижая таким образом воспаление, вызванное введением данного препарата, например, вызванное полимерами, полимерными микросферами и/или липосомами в препарате с замедленным высвобождением.

Микросферы из PLGA 15 инкапсулируют гидрофобные соединения легче, чем гидрофильные соединения. Для увеличения нагрузки гидрофильных активных ингредиентов в некоторых воплощениях микросферы модифицированы полиэтиленгликолевыми звеньями, как обсуждалось выше. Микросферы определенных размеров по существу не всасываются в кровь или не удаляются лимфой, обеспечивая таким образом высвобождение активного(ых) ингредиента(ов) в желаемом участке. Например, в некоторых воплощениях микросферы имеют диаметр от примерно 20 мкм до примерно 200 мкм. В некоторых воплощениях размер микросфер также влияет на профиль высвобождения активного(ых) ингредиента(ов) в ткань. В общем, более крупные микросферы имеют тенденцию обеспечивать более продолжительный и более однородный профиль высвобождения.

В примерном воплощении препарат с замедленным высвобождением содержит от примерно 0,5 миллиграмма до примерно 7,5 мг (например, примерно 0,7; 1; 1,5; 2,0; 2,5; 3; 3,5; 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5, 7 или любое другое количество от примерно 0,5 мг до примерно 7,5 мг) сальметерола 1 и/или формотерола 2, и от примерно 1,5 мг до примерно 7,5 мг (например, примерно 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 6,5; 7 или любое другое количество от примерно 1,5 до примерно 7,5 мг) дексаметазона 6, флутиказона пропионата 7 и/или будесонида 8, инкапсулированного в примерно 100 миллиграммов микросфер из полилактидгликолидного (PLGA) 15 сополимера в соотношении примерно 70% лактида: 30% гликолида. Количество каждого активного ингредиента в препарате с замедленным высвобождением зависит от необходимого количества суток для контролируемого/замедленного высвобождения (например, примерно 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток или примерно 10 суток). В некоторых воплощениях соотношение сополимеров и инкапсуляция активного ингредиента доставляют вплоть до примерно 1,0 мкг в сутки (например, примерно 0,02; 0,04; 0,06; 0,07; 0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 0,6; 0,8 или любое другое количество от примерно 0,02 мкг до примерно 100,0 мкг в сутки) сальметерола 1 и/или вплоть до примерно 0,5 мкг (например, примерно 0,02; 0,04; 0,06; 0,07; 0,08; 0,09; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 или любое другое количество от примерно 0,02 мкг до примерно 0,5 мкг в сутки) формотерола и вплоть до 5 мкг в сутки (например, примерно 0,2; 0,4; 0,5; 0,7; 0,9; 1,0; 1,5; 2, 2,5; 3; 3,5; 4; 4,5 или любое другое количество от примерно 0,2 до примерно 5 мкг в сутки) флутиказона и/или будесонида 6 на примерно 1 мг сополимера в течение вплоть до примерно 30 суток. В другом примерном воплощении препарат с замедленным высвобождением, подлежащий введению, содержит метилпреднизолона ацетат в форме суспензии кристаллических микрочастиц с бета-2-адренергическим агонистом. Бета-2-адренергический агонист может быть приготовлен в форме раствора или может быть приготовлен также в форме суспензии кристаллических микрочастиц. В некоторых воплощениях препарат с замедленным высвобождением также содержит растворимый метилпреднизолона сукцинат для обеспечения немедленных эффектов (благодаря быстрому высвобождению), в дополнение к пролонгированному эффекту от кристаллической формы метилпреднизолона ацетата.

В некоторых воплощениях предложены один или более бета-2-агонистов и метилпреднизолон, смешанные друг с другом перед введением (например, перед инъекцией). В других воплощениях один или более бета-2-агонистов и метилпреднизолон смешивают во время введения (например, инъекции).

В некоторых воплощениях выбранный препарат кортикостероида с замедленным высвобождением (например, суспензию кристаллов метилпреднизолона, раствор метилпреднизолона или комбинацию суспензии кристаллов и раствора) доставляют один за примерно 7 суток (например, по меньшей мере 12 часов, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток или любой другой промежуток времени от примерно 12 часов до примерно 7 суток) до бета-2-агониста для обеспечения повышающей регуляции бета-рецептора.

В некоторых воплощениях субъекту, подлежащему лечению, дают препарат с незамедленным высвобождением. В некоторых воплощениях препарат с незамедленным высвобождением после одной дозы обеспечивает активность одного или более чем одного селективного бета-2-агониста длительного действия в течение периода времени от примерно четырех часов до примерно 24 часов, например, в течение 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 16 часов, 18 часов, 21 часа или в течение любого другого периода активности бета-2-агониста от примерно четырех часов до примерно 24 часов.

В других воплощениях субъекту, подлежащему лечению, дают препарат с незамедленным высвобождением, содержащий селективные бета-2-агонисты кратковременного действия, которые имеют активности, продолжительность которых составляет меньше чем примерно четыре часа (например, примерно 3,5 часа, 3 часа, 2,5 часа, 2 часа, 1,5 часа, 1,3 часа, примерно 1 час, 0,5 часа или любой другой промежуток времени от менее примерно четырех часов до примерно 0,5 часа).

В примерном воплощении инъецируемые препараты с незамедленным высвобождением содержат от примерно 100 мкг до примерно 250 мкг (например, 105, 110, 125, 150, 175, 190, 200, 210, 225 или любое другое количество от примерно 100 мкг до примерно 250 мкг) сальметерола ксинафоата и от примерно 500 мкг до примерно 1000 мкг (например, 600, 650, 700, 730, 740, 800, 825, 875, 900, 930, 950 или любое другое количество от примерно 500 мкг до примерно 1000 мкг) флутиказона пропионата, приготовленных в объеме вплоть до примерно 10 мл (например, 0,3; 0,5; 0,7; 1,1; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5; 4; 5; 6; 7; 8; 9 или в любом другом объеме от примерно 0,3 до примерно 10 мл) эксципиента, совместимого с введением в глазницу. Концентрация эксципиента может поддерживаться на уровне менее 1% (например 0,05%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,8% или любая другая концентрация от примерно 0,05% до менее чем 1%).

В некоторых воплощениях описанные здесь препараты доставляются через глаз с использованием любого подходящего способа, например, в виде капель для местного применения, или с помощью резервуара, помещенного под веко.

В других воплощениях, где препарат, подлежащий доставке, содержит бета-2-агонисты длительного действия, такие как формотерол 2, сальметерол 1 или бамбутерол 3, и глюкокортикостероиды, местное применение является предпочтительным. В некоторых воплощениях препараты с замедленным высвобождением, доставляемые трансдермально, включают биодеградируемый биосовместимый препарат активного ингредиента с полимером или липосомный препарат, как обсуждалось выше.

В некоторых воплощениях здесь предложен способ лечения тиреоидной офтальмопатии путем локальной доставки препарата, содержащего один или более чем один иммунодепрессант (например, рапамицин, сиролимус или эверолимус), для ингибирования пролиферации фибробластов и превращения преадипоцитов в адипоциты. В некоторых воплощениях иммунодепрессанты вводят в препарате с замедленным высвобождением (например, в депо-препарате), содержащем один или более чем один иммунодепрессант в суспензии кристаллических микрочастиц. В других воплощениях препарат с замедленным высвобождением содержит полимерные микрочастицы (как здесь описано), нагруженные одним или более чем одним иммунодепрессантом. Введение препарата иммунодепрессанта с замедленным высвобождением может осуществляться посредством глазничной, периорбитальной или ретробульбарной инъекции.

В некоторых воплощениях в один из вышеупомянутых препаратов включают тиреоидный гормон для повышающей регуляции бета-рецепторов или для увеличения числа бета-рецепторов на поверхности клеток, или для понижающей регуляции альфа-рецепторов, или для уменьшения числа альфа-рецепторов на поверхности клеток. Для этой цели можно использовать и тироксин (Т4) 18, и трийодтиронин (Т3) 19, и стереоизомеры этих гормонов. Левотироксин представляет собой стереоизомер тироксина, который может иметь более продолжительное время полувыведения. Эти тиреоидные гормоны можно объединять с бета-агонистами и вводить путем глазничной, периорбитальной или ретробульбарной инъекции. Один или более тиреоидных гормонов также можно объединять с бета-агонистами в препарате с замедленным высвобождением, таком как полимер или липосома, как описано выше, для уменьшения частоты введения. Т3 и Т4 можно объединять с селективными бета-2-агонистами длительного действия в полимерных микросферах из полилактида или полилактид/гликолида для инъекции и замедленного высвобождения.

В некоторых воплощениях вышеописанные препараты дополнительно включают один или более флавоноидов из группы флавонов и флавинонов (например, кверцетин и физетин), которые действуют в качестве ингибиторов цАМФ-фосфодиэстеразы и таким образом усиливают бета-адренергический сигнальный путь.

ПРИМЕРЫ

Следующие конкретные примеры следует истолковывать лишь как иллюстративные и не ограничивающие остальное описание каким-либо образом. Без дополнительного уточнения считают, что специалист в данной области может использовать настоящее изобретение в наиболее полном объеме на основе приведенного здесь описания. Все публикации, процитированные здесь, таким образом включены в данное описание изобретения посредством ссылки во всей их полноте. Там, где ссылка сделана на URL или на другой такой идентификатор или адрес, понятно, что такие идентификаторы могут изменяться, и конкретная информация в Интернете может появляться и исчезать, но эквивалентную информацию можно найти посредством поиска в Интернете. Ссылка на них доказывает доступность и общедоступное распространение такой информации.

Пример 1: Анализ липолиза адипоцитов крыс in vitro под влиянием бета-агонистов и глюкокортикостероидов

В анализе липолиза in vitro определяли глицерин в средах для культивирования клеток посредством спектрофотометрического измерения после химического окисления перекисью водорода. Глицерин измеряли в течение трех часов. Уровни липолиза в культивируемых человеческих адипоцитах тестировали после воздействия одного бета-агониста, одного глюкокортикостероида или комбинации их двух в течение одного или более чем одного периода предварительной инкубации, как описано более подробно ниже.

Выделение преадипоцитов и дифференцировка в адипоциты:

В анализе липолиза использовали человеческие подкожные адипоциты. Жировую ткань отбирали после липосакции или липэктомии, и преадипоциты выделяли следующим образом. Кратко, жировую ткань измельчали и инкубировали при 37°С в бикарбонатном буфере Кребса-Рингера, содержащем 1% бычьего сывороточного альбумина и 0,1% коллагеназы, в камере со встряхиванием, обогащенной кислородом (5% CO2; 75 встряхиваний/мин) в течение 1 часа. Суспензию фильтровали через нейлоновую сеть с ячейками 400 мкм и центрифугировали в течение 1 мин при 100g. Преадипоциты в супернатанте дважды промывали и затем переносили в 96-луночные планшеты при плотности клеток/лунку. Преадипоциты культивировали в поддерживающей среде в течение семи суток, пока они дифференцировались в адипоциты.

Реактивы

Буфер для промывки (буфер Кребса-Рингера (KRB) без сыворотки;

[Sigma, K4002-10X1L]) - хранили при 4°С.

Буфер для анализа (KRB с 1% FBS (сыворотка плодов коровы); [FBS от Gibco, 26140-079]) - хранили при 4°С.

Поддерживающую среду хранили при 4°С.

Глицериновый реактив A (Zen-Bio, RGTL-15 или RGTL-40) - после растворения хранили при 4°С в защищенном от света месте.

Маточный раствор глицерина (1 М), полученный путем разведения глицерина [Sigma G2025-500ML) в буфере для промывки (без сыворотки), хранили при -20°С.

Анализ липолиза:

За 21 час до анализа липолиза из каждой лунки удаляли среду и заменяли ее 75 мкл поддерживающей среды, содержащей подходящие концентрации лекарственного средства или ДМСО (диметилсульфоксид) (носитель) (см. раздел Схема эксперимента, приведенный ниже). Обработку каждым тестируемым лекарственным средством или контрольную обработку проводили в 8 лунках/группу (12 групп обработки на 96-луночный планшет). За 3 часа до анализа липолиза каждую лунку промывали два раза промывочным буфером (200 мкл/промывку), наполняли тестируемым или контрольным растворами, приготовленными на буфере для анализа (75 мкл/лунку) и затем инкубировали в течение трех часов, т.е. до момента измерения содержания глицерина в буфере для анализа. Для некоторых групп лекарственное средство добавляли только в течение трехчасового периода инкубации (см. раздел Экспериментальные и контрольные группы, приведенный ниже). За один час до анализа готовили семь глицериновых стандартов с концентрацией, варьирующей от 200 мкМ до 3,125 мкМ, путем серийного разведения в буфере для анализа.

Содержание глицерина в буфере для анализа из каждой лунки после инкубации использовали как индекс липолиза, где увеличение содержания глицерина свидетельствовало о липолизе. Уровни глицерина анализировали колориметрически с помощью имеющегося в продаже набора для анализа глицерина (Randox Laboratory, United Kingdom) и количественно оценивали путем сравнения со стандартной кривой последовательного разведения глицерина (3 мкМ-200 мкМ). Концентрации глицерина для каждой лунки стандартизировали к плотности клеток.

Схема эксперимента:

В каждой из следующих контрольных или экспериментальных групп n=8 соответствует измерениям глицерина для 8 лунок из 96-луночного планшета для культуры клеток.

Таблица 1
Обобщение схемы эксперимента по анализу липолиза in vitro
Группа(ы) 18-часовая инкубация 3-часовая инкубация Результаты показаны на Фиг.
Эксперимент 1
1 (отрицательный контроль) 0,1% ДМСО 0,1% ДМСО 2*
2-11 0,1% ДМСО Формотерол
(10-13 М-10-4 М)
2
12 (положительный контроль) 0,1% ДМСО Изопротеренол 10-6 М 2
Эксперимент 2
13 (отрицательный контроль) 0,1% ДМСО 0,1% ДМСО 3*
14-18 0,1% ДМСО Сальметерол (10-8 М-10-4 М) 3
19 (положительный контроль) 0,1% ДМСО Изопротеренол 10-6 М 3
Эксперимент 3
20 (отрицательный контроль) 0,1% ДМСО 0,1%ДМСО 4*
21-22 0,1% ДМСО Будесонид
10-10 М и 10-7 М
4
23-26 Будесонид
(10-12 М-10-6 М)
Будесонид (10-12 М-10-6 М) 4
27 (положительный контроль) 0,1% ДМСО Изопротеренол 10-6 М 4
Эксперимент 4
28 (отрицательный контроль) 0,1%ДМСО 0,1%ДМСО 5*
29 Сальметерол 10-6 М Сальметерол 10-6 М 5
30 Сальметерол 10-6 М + Будесонид 10-6 М Сальметерол 10-6 М + Будесонид 10-6 М 5
31 Сальметерол 10-8 М Сальметерол 10-8 М 5
32 Сальметерол 10-8 М + Будесонид 10-6 М Сальметерол 10-8 М + Будесонид 10-6 М 5
33 (положительный контроль) Изопротеренол 10-6 М Изопротеренол 10-6 М 5
*Данные для всех групп представлены на графике как кратность или % различий относительно данных для группы отрицательного контроля

Как показано на Фиг.2, агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия формотерол индуцировал дозозависимое увеличение липолиза более чем в шесть раз после трехчасовой инкубации, которое для концентрации 10-6 М и выше было большим, чем увеличение, наблюдавшееся для изопротеренола. Аналогично, агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия сальметерол также индуцировал дозозависимое увеличение липолиза после трехчасовой инкубации, хотя данный эффект (несколько больше, чем двухкратное увеличение липолиза) не был таким сильным, как эффект, наблюдавшийся для формотерола. Липолиз, индуцированный сальметеролом, был равным или меньшим, чем липолиз, наблюдавшийся для изопротеренола.

Как показано на Фиг.3, глюкокортикостероид будесонид индуцировал небольшое увеличение (вплоть до примерно 1,5-кратного) липолиза после трех часов, которое было меньшим, чем увеличение, наблюдавшееся для изопротеренола (примерно 2,5-кратное). Напротив, инкубация с одним будесонидом в течение 18 часов фактически вызывала небольшое подавление липолиза in vitro.

Инкубация адипоцитов с сальметеролом (10-6 М) в течение 18 часов уменьшала липолиз (Фиг.4). Аналогично, обработка изопротеренолом в течение 18 часов приводила к пониженному липолизу. Однако, когда сальметерол объединяли с будесонидом в течение 18-часового периода инкубации, наблюдали увеличение липолиза (Фиг.4).

На основе этих данных авторы изобретения сделали вывод, что формотерол и сальметерол эффективно индуцируют липолиз в культивируемых адипоцитах в течение трехчасового периода времени. Однако сальметерол фактически уменьшает липолиз при использовании в течение 18 часов, вероятно, из-за десенсибилизации или понижающей регуляции рецептора. Кроме того, в присутствии глюкокортикостероида будесонида сальметерол способен индуцировать липолиз даже после 18 часов. Таким образом, будесонид можно использовать для поддержания или восстановления способности бета-2-адренергического агониста индуцировать липолиз на протяжении длительных периодов времени, вероятно, путем предотвращения понижающей регуляции бета-2-адренергических рецепторов.

Пример 2: Ингибирование липогенеза бета-агонистами и глюкокортикостероидами

Неограничивающий пример такого ингибирования липогенеза является следующим:

Культура клеток:

Клеточную линию преадипоцитов 3T3-L1 (АТСС, Manassas, VA) сеяли с плотностью 4×105 клеток на Т75 мл сосуд в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) с 10% нормальной телячьей сыворотки и 1% антибиотиков (пенициллин/стрептомицин). Клетки инкубировали при 37°С, 5% CO2. Через трое суток клетки открепляли трипсином, подсчитывали и ресуспендировали в 24-луночных планшетах при плотности 6×105 клеток на лунку в 2 мл среды. Через 1-2 суток клетки были близки к конфлюентности и готовы к липогенезу.

Вещества для липогенеза:

Среда для инициации липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы/0,5 мМ IBMX/1 мкМ дексаметазон.

Среда для развития липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы/10 мкг/мл инсулина.

Среда для поддержания липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы.

Среда для отрицательного контроля: DMEM/10% нормальной телячьей сыворотки.

Протокол липогенеза:

1,8 мл среды удаляют из лунок и добавляют 2 мл среды для инициации липогенеза на лунку. Планшеты инкубируют в течение 48 часов при 37°С, 5% CO2. 2 мл среды удаляют и добавляют 2 мл среды на лунку для развития липогенеза. Планшеты инкубируют в течение 48 часов при 37°С, 5% CO2. 2 мл среды удаляют и добавляют 2 мл среды на лунку для поддержания липогенеза. Планшеты инкубируют в течение по меньшей мере 48 часов при 37°С, 5% СО2. Внутриклеточные капельки липидов накапливаются в клетках в течение по меньшей мере 5 суток.

Схема эксперимента:

Перед липогенезом преадипоцитные клетки 3T3-L1 предварительно обрабатывают на разных стадиях бета-2-агонистом и/или глюкокортикостероидом. За 24 ч до добавления среды для инициации липогенеза клетки обрабатывают следующим образом:

Группа 1: нет обработки

Группа 2: 10-10 М сальметерола

Группа 3: 10-8 М сальметерола

Группа 4: 10-6 М сальметерола

Группа 5: 10-4 М сальметерола

Группа 6: 10-10 М сальметерола + 10-6 М будесонида

Группа 7: 10-8 М сальметерола + 10-6 М будесонида

Группа 8: 10-6 М сальметерола + 10-6 М будесонида

Группа 9: 10-4 М сальметерола + 10-6 М будесонида

Группа 10: 10-6 М будесонида

Группа 11: 10-10 М будесонида

Группа 12: 10-6 М капсаицина, известного ингибитора липогенеза.

Другую партию клеток обрабатывают приведенными выше группами за 24 часа до добавления среды для развития липогенеза и еще одну партию обрабатывают за 24 часа до добавления среды для поддержания липогенеза. В контрольной партии клетки обрабатывают приведенными выше группами за 24 часа до добавления среды для отрицательного контроля. В двух других партиях из 12 групп сальметерол заменен на бета-2-агонист длительного действия формотерол в одной партии и на бета-2-агонист кратковременного действия альбутерол в другой партии.

Визуализация внутриклеточных липидов:

Клетки собирают через 5 суток после добавления среды для поддержания липогенеза. Клеточную среду удаляют и планшеты дважды промывают фосфатно-солевым буферным раствором (PBS). Добавляют 0,5 мл раствора Oil Red О (0,36% Oil Red O в 60%-ном изопропаноле) на лунку и планшеты инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре. Раствор для окрашивания удаляют и лунки три раза промывают 60%-ным изопропанолом. Окрашенные планшеты затем фотографируют и/или сканируют для визуального анализа. Липиды окрашены в красный цвет.

Количественная оценка липидов:

В окрашенные лунки добавляют 0,25 мл раствора для экстракции красителя (CHEMICON International). Планшеты устанавливают на орбитальный встряхиватель или шейкер на 15-30 мин. Раствор с экстрагированным красителем переносят в кювету и оптическую плотность считывают на спектрофотометре при 520 нм.

Пример 3: Бета-2-агонисты в комбинации с глюкокортикостероидами снижают массу эпидидимальных жировых тел

Авторы изобретения пытались определить, может ли глюкокортикостероид снижать содержание жира in vivo способом, согласующимся с данными авторов изобретения по липолизу in vitro, как описано в Примере 1. Для этого авторы данного изобретения измеряли массу эпидидимальных жировых тел у крыс, обработанных бета-2-адренергическим агонистом длительного действия формотеролом, одним или в комбинации с будесонидом.

Самцов крыс Sprague Dawley (~500 г) подвергали анестезии под 4% изофлураном с использованием испарителя Matrx 3000. Затем животным, как перечислено в Таблице 2 ниже, инъецировали в 5 мм спереди от заднего конца жирового тела 0,4 мл носителя (2% ПЭГ); формотерола (3,48 мкг/мл; доза = 1,39 мкг) в носителе или формотерола (3,48 мкг/мл) и будесонида (10 мкг/мл; доза = 1,39 мкг формотерола и 4 мкг будесонида) в носителе. Каждое животное получало обработку лекарственным средством на одной стороне и обработку носителем (2% ПЭГ) на противоположной стороне; для каждой группы обработки правой и левой стороны были уравновешены в отношении лекарственного средства и носителя (см. Таблицу 2).

Таблица 2
Экспериментальная схема анализа липолиза in vivo
Группа № животного Правое эпидидимальное жировое тело Левое эпидидимальное жировое тело
1 1 Один формотерол Носитель
2 Один формотерол Носитель
3 Носитель Один формотерол
4 Носитель Один формотерол
2 5 Формотерол + будесонид Носитель
6 Формотерол + будесонид Носитель
7 Носитель Формотерол + будесонид
8 Носитель Формотерол + будесонид

Инъекции повторяли через 24 и 48 часов, всего осуществляли три инъекции. Через двадцать четыре часа после последней инъекции животных умерщвляли внутрибрюшинной избыточной дозой пентобарбитала (150 мг/кг), левые и правые эпидидимальные жировые тела от каждого животного собирали и взвешивали (результаты показаны в Таблице 3 и на Фиг.6). Для статистического анализа использовали парный t-критерий и стандартный t-критерий.

Таблица 3
Изменение массы жировых тел (лекарственное средство-носитель)
Группа
1 2
Животное 1 и 5 -0,036 -0,599
Животное 2 и 6 -0,138 -0,115
Животное 3 и 7 0,118 -0,574
Животное 4 и 8 0,166 -0,124
Среднее 0,028 -0,353
SD 0,140 0,270

Данные по обработке одним формотеролом и формотеролом + будесонидом, показанные в Таблице 3, анализировали с помощью парного t-критерия Стьюдента, результаты этого анализа показаны в Таблице 4.

Таблица 4
Статистический анализ изменений массы жировых тел (лекарственное средство-носитель) после обработки одним формотеролом или формотеролом + будесонидом
Группы Значение двухстороннего р
Группа 1 (формотерол) относительно носителя 0,63
Группа 2 (формотерол + будесонид) относительно носителя 0,0792

Как показано в Таблице 4, животные Группы 1 (обработанные одним формотеролом) демонстрировали различия и изменчивость, соответствующие наивному необработанному контролю. Средний эффект обработки одним формотеролом составлял + 0,028 г ± 0,140 г. Статистический анализ дал значение р 0,63, которое согласуется с отсутствием тенденции к эффекту обработки. С другой стороны, животные Группы 2 (обработанные формотеролом + будесонидом) демонстрировали эффект обработки. Средний эффект обработки составлял -0,353±0,270 со значением р=0,079.

Авторы данного изобретения также провели статистический анализ (t-критерий Стьюдента) значимых различий между эффектом обработки одним лекарственным средством и комбинацией лекарственных средств, а также значимых различий между обработкой комбинацией лекарственных средств относительно необработанных контрольных животных. Результаты этих статистических анализов показаны в Таблице 5.

Таблица 5
Статистический анализ различий эффектов одного формотерола относительно формотерола + будесонида и формотерола + будесонида относительно необработанных
Сравнение (среднее различие массы эпидидимальных жировых тел) Значение двухстороннего р
Группа 2 (формотерол + будесонид) относительно Группы 1 (один формотерол) 0,05
Группа 2 относительно необработанных 0,0131

Как показано в Таблице 5 и на Фиг.6, имело место статистическое различие между Группой 2 и Группой 1 (р=0,05). Имело место значимое различие между средним уменьшением массы жировых тел в Группе 2 относительно необработанных животных с р=0,013.

В следующем эксперименте авторы данного изобретения проверили способность формотерола плюс будесонида снижать массу жировых тел в анализе, описанном выше. Как показано на Фиг.7, введение комбинации доз 1,4 мкг/сутки формотерола + 4,0 мкг/сутки будесонида приводило к значимому различию средней эпидидимальной массы в обработанной группе относительно необработанной группы (р=0,01). Аналогично, даже при более низкой комбинации доз (0,7 мкг/сутки формотерола+2,0 мкг/сутки будесонида, которая достигалась путем дозировки через день) различие между обработанными комбинацией и необработанными контрольными животными было значимым (р=0,04).

На основании этих данных и их анализа авторы данного изобретения сделали вывод, что комбинация бета-2-агониста длительного действия (например, формотерола) и глюкокортикостероида (например, будесонида), по-видимому, является эффективной для индукции липолиза и уменьшения жира in vivo.

Пример 4: Клиническое тестирование лечения офтальмопатии Грейвса композициями, содержащими бета-агонист и глюкокортикостероид

Неограничивающий пример такого клинического тестирования лечения офтальмопатии Грейвса представляет собой следующее:

Выбор пациентов:

Пациенты должны быть в возрасте 18 лет или старше и не должны иметь гиперчувствительности к вводимым лекарственным средствам. У них выявлены симптомы проптоза, ассоциированного с офтальмопатией Грейвса, с помощью ультрасонографии, экзофтальмометрии, МРТ (магнитно-резонансная томография) или компьютерной томографии. В частности, выбраны пациенты с односторонним или двухсторонним проптозом 0,5 мм или 3 мм или более, с другими симптомами или без них. Пациенты также могут иметь двоение в глазах, ограничение движения глаз в крайних положениях и очевидное ограничение движения, изъязвление роговицы, боль, косметические дефекты и низкое качество жизни. Пациенты возможно подвергались тиреоидэктомии по поводу гипертиреоза. Для лечения гипертиреоза не должны использоваться другие стероидные терапии. Все исследования должны проводиться при условии одобрения институционального комитета по этике и согласия пациента.

Схема исследования:

Тест 1: Это многоцентровое исследование с увеличением дозы комбинированной терапии бета-2-агонистом длительного действия сальметеролом с глюкокортикостероидом будесонидом. Пациенты получают ежесуточную инъекцию парентеральной композиции лекарственного средства. Пациенты, у которых не достигается улучшение проптоза или частичный, или полный ответ, но у которых имеется стабильное заболевание после 1 недели терапии, будут получать дополнительную 1-недельную терапию более высокой дозой, чем та, которую назначают первоначально. Когорты из 3-6 пациентов получают возрастающие дозы комбинированного лекарственного средства до тех пор, пока не будет определена максимально переносимая доза (МПД). МПД определяют как дозу, предшествующую дозе, при которой 2 из 3 или 2 из 6 пациентов испытывают дозолимитирующую токсичность.

Тест 2: Это рандомизированное многоцентровое исследование. Продолжительность данного исследования составляет 60 суток. Пациентов рандомизируют в 1 из 18 групп обработки. В группе 1 пациентам ежесуточно дают один сальметерол или формотерол в МПД. В группе 2 пациентам ежесуточно дают один будесонид в МПД. В группе 3 пациентам дают одновременно сальметерол и будесонид в МПД. В группе 4 пациентам ежесуточно дают сальметерол или формотерол и будесонид - через сутки. В группе 5 пациентам ежесуточно дают будесонид и сальметерол или формотерол - через сутки. В группе 6 пациентам дают будесонид в каждые нечетные сутки и сальметерол - в каждые четные сутки. Группы 7-12 имеют ту же самую схему дозировки, что и группы 1-6, за исключением того, что дозировка составляет одну четвертую МПД. Группы 13-18 также имеют ту же схему дозировки, что и группы 1-6, за исключением того, что дозировка составляет одну десятую МПД. В дополнение к обработанным группам контрольную группу оставляют необработанной.

Оценка ожидаемых результатов:

Пациентов оценивают по уменьшению проптоза и уменьшению объема глазничного жира и внешних мышц глаза в момент завершения исследования. Также оценивают улучшение смыкания век и движения глаз. 20%-ное уменьшение в пределах 60 суток считается положительным результатом.

Пример 5: Фармацевтические композиции

Неограничивающие примеры таких фармацевтических композиций являются следующими:

Парентеральные композиции

Пример 5А. Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно 100 мкг водорастворимой соли формотерола и примерно 3 мг кетотифена растворяют в ДМСО и затем смешивают с 10 мл 0,9%-ного стерильного физиологического раствора. Данную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.

Пример 5В. Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно 50 мкг водорастворимой соли сальметерола и примерно 100 мкг флутиказона пропионата растворяют в ДМСО и затем смешивают с 10 мл 0,9%-ного стерильного физиологического раствора, содержащего примерно 20% об./об. ПЭГ-400. К данной смеси добавляют гиалуронидазу до конечной концентрации 8 МЕ/мл. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.

Пример 5С. Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно от 50 до 100 мкг водорастворимой соли сальметерола растворяют в ДМСО и затем смешивают с 10 мл 0,9%-ного стерильного физиологического раствора, содержащего примерно 20% об./об. ПЭГ-400. Данную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.

Пример 5D. Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно 50 мкг водорастворимой соли флутиказона пропионата растворяют в ДМСО и затем смешивают с 10 мл 0,9%-ного стерильного физиологического раствора. К данной смеси добавляют гиалуронидазу до конечной концентрации 10 МЕ/мл. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.

Композиции в виде геля для местного введения

Пример 5Е. Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг сальметерола и примерно 100 мг преднизолона смешивают с 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл пропиленгликоля, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP (Фармакопея США). Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.

Пример 5F. Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг формотерола и примерно 100 мг будесонида смешивают с примерно 10 мг гиалуронидазы, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл пропиленгликоля, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.

Пример 5G. Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг сальметерола смешивают с примерно 10 мл ПЭГ-400, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.

Пример 5Н. Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг преднизолона смешивают с примерно 10 мл ПЭГ-400, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.

Композиции в виде офтальмологического раствора

Пример 5I. Для получения фармацевтической композиции в виде офтальмологического раствора примерно 100 мг соединения сальметерола и примерно 100 мг будесонида смешивают с 0,9 г NaCl в 100 мл очищенной воды и фильтруют с использованием 0,2 мкм фильтра. Полученный изотонический раствор затем помещают в устройства для офтальмологической доставки, такие как контейнеры для глазных капель, которые подходят для офтальмологического введения.

Пример 5J. Для получения фармацевтической композиции в виде офтальмологического раствора примерно 100 мг соединения формотерола и примерно 100 мг будесонида смешивают с 0,9 г NaCl в 100 мл примерно 10%-ного об./об. ПЭГ-400 в очищенной воде и фильтруют с использованием 0,2 мкм фильтра. Полученный изотонический раствор затем помещают в устройства для офтальмологической доставки, такие как контейнеры для глазных капель, которые подходят для офтальмологического введения.

Пример 5К. Для получения фармацевтической композиции в виде офтальмологического раствора примерно 100 мг соединения формотерола и примерно гиалуронидазы (до конечной концентрации 10 МЕ/мл) смешивают с 0,9 г NaCl в 100 мл примерно 10%-ного об./об. ПЭГ-400 в очищенной воде и фильтруют с использованием 0,2 мкм фильтра. Полученный изотонический раствор затем помещают в устройства для офтальмологической доставки, такие как контейнеры для глазных капель, которые подходят для офтальмологического введения.

Пример 5L. Для получения фармацевтической композиции в виде офтальмологического раствора примерно 100 мг соединения кетотифена смешивают с 0,9 г NaCl в 100 мл примерно 20%-ного об./об. ПЭГ-400 в очищенной воде и фильтруют с использованием 0,2 мкм фильтра. Полученный изотонический раствор затем помещают в устройства для офтальмологической доставки, такие как контейнеры для глазных капель, которые подходят для офтальмологического введения.

Пероральные композиции

Пример 5М. Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 100 мг соединения преднизолона смешивают с 750 мг крахмала. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.

Пример 5N. Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 50 мг соединения будесонида смешивают с 375 мг желатина. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.

Пример 5O. Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 200 мг соединения кетотифена смешивают с 1500 мг гидроксипропилметилцеллюлозы. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.

Пример 5Р. Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 50 мг соединения флутиказона пропионата смешивают с 600 мг крахмала. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.

Пример 6: Схемы введения бета-агонистов и глюкокортикостероида

Неограничивающие примеры таких схем введения являются следующими:

Пример 6А. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5D.

Пример 6В. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, вводят терапевтически эффективное количество композиции 5D в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С.

Пример 6С. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, ежесуточно вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5D.

Пример 6D. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, ежесуточно вводят терапевтически эффективное количество композиции 5D. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С.

Пример 6Е. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С в сутки 1 с последующими выходными в течение двух суток. Во вторые выходные пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5D. Это введение затем повторяют.

Пример 6F. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, вводят терапевтически эффективное количество композиции 5D в сутки 1 с последующими выходными в течение двух суток. Во вторые выходные пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С. Это введение затем повторяют.

Пример 6G. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, вводят терапевтически эффективное количество композиции 5М в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С.

Пример 6Н. Пациенту, страдающему от офтальмопатии Грейвса, ежесуточно вводят терапевтически эффективное количество композиции 5С. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 5М.

Автор изобретения провел эксперименты и получил данные, которые устанавливают промышленную применимость заявленных композиций. Например, два таких экспериментальных теста подтверждают, что бета-адренергический агонист и соединение для снижения десенсибилизации ткани-мишени к бета-адренергическому агонисту эффективно лечат заболевание, в которое вовлечено накопление глазничного жира, включающее как один из примеров болезнь Грейвса.

1. Эксперимент 1: Инъекция бета-адренергического агониста и десенсибилизирующего соединения в периорбитальную ткань человека

Эксперимент проводили путем инъекции сальметерола ксинафоата (бета-адренергического агониста) и будесонида (соединения для уменьшения десенсибилизации к бета-адренергическому агонисту) в образцы ткани из орбитального жирового тела нормальных людей и людей с болезнью Грейвса.

А. Протокол: глазной жир был получен после информированного согласия от пациентов, проходящих декомпрессию глазницы для лечения тяжелой офтальмопатии Грейвса, или от индивидуумов без известного аутоиммунного заболевания или заболевания щитовидной железы, проходящих блефаропластику с удалением жира. Образцы ткани исходного объема 1 мл (оцененного путем вытеснения жидкости) имплантировали в правый и левый бок мышей SCID NODγ-/-. После восстановления после операции (14 суток) в эксплантаты инъецировали подкожно, непосредственно в имплантированный жир, 0,1 мл носителя (3,5% ПЭГ400 в 0,9% физиологическом растворе) или 0,1 мл носителя, содержащего 10 мкг сальметерола ксинафоата и 4 мкг будесонида, ежесуточно в течение 10 суток, а затем каждые 3-5 суток в течение 6 недель. Затем эксплантаты собирали и определяли объем ткани.

Б. Результаты: Изменение объема не наблюдали в эксплантатах, обработанных носителем, ни от нормальных субъектов, ни от субъектов с болезнью Грейвса. В эксплантатах, обработанных 10 мкг сальметерола ксинафоата и 4 мкг будесонида, объем был снижен на 30%-80% в эксплантатах от субъектов с болезнью Грейвса; изменение в объеме не отмечено в эксплантатах от нормальных субъектов.

В. Таблица 1
Терапевтические эффекты варьирующих инъекционных доз бета-адренергического агониста и соединения для уменьшения десенсибилизации ткани-мишени по сравнению с контрольными дозами носителя:
№ мыши/ Сторона имплантата Источник ткани Обработка Начальный объем (мл) Конечный объем (мл) Снижение, %
2/Л Болезнь Грейвса Носитель 0,1 0,1 0
3/П Болезнь Грейвса Носитель 0,1 0,1 0
3/Л Нормальный Носитель 0,1 0,1 0
1/П Болезнь Грейвса 10 мкг SX + 4 мкг будесонида 0,1 0,02 80
1/Л Болезнь Грейвса 10 мкг SX + 4 мкг будесонида 0,1 0,07 30
4/П Болезнь Грейвса 10 мкг SX + 4 мкг будесонида 0,1 0,05 50
4/Л Нормальный 10 мкг SX + 4 мкг будесонида 0,1 0,1 0
SX- сальметерола ксинафоат

2. Эксперимент 2: Инъекция десенсибилизирующего соединения одного и в комбинации с бета-адренергическим агонистом в периорбитальную ткань человека

Второй эксперимент проводили путем инъекции сальметерола ксинафоата (бета-адренергического агониста) и флутиказона пропионата (соединения для уменьшения десенсибилизации к бета-адренергическому агонисту) в образцы ткани из орбитального жирового тела субъектов-людей с болезнью Грейвса.

А. Протокол: глазной жир был получен после информированного согласия от пациентов, проходящих декомпрессию глазницы для лечения тяжелой офтальмопатии Грейвса, или от индивидуумов без известного аутоиммунного заболевания или заболевания щитовидной железы, проходящих блефаропластику с удалением жира. Образцы ткани исходного объема 1 мл (оцененного путем вытеснения жидкости) имплантировали в правый и левый бок мышей SCID NODγ-/-. После восстановления после операции (14 суток) в эксплантаты инъецировали подкожно, непосредственно в имплантированный жир, 0,1 мл носителя (3,5% ПЭГ 400 в 0,9% физиологическом растворе) или 0,1 мл носителя, содержащего 10 мкг сальметерола ксинафоата и 4 мкг флутиказона пропионата ежесуточно в течение 10 суток, а затем каждые 3-5 суток в течение 6 недель. Затем эксплантаты собирали и определяли объем ткани.

Б. Результаты: В имплантатах, получавших носитель лекарственного средства, проявлялся увеличенный объем в диапазоне от 2,3- до 4-кратного. Объемы тех имплантатов, которые получали флутиказон в качестве единственного агента, оставались такими же, как их первоначальные объемы. Введение комбинации приводило в результате к снижению объема, которое находилось в интервале от 20% до 70%. Эта комбинация также приводила к значительному нарушению нормальной структуры жирового тела и существенному фиброзу.

В. Таблица 2
Терапевтические эффекты варьирующих инъекционных доз десенсибилизирующего соединения, одного и в комбинации с бета-адренергическим агонистом:
№ мыши Источник ткани Обработка Начальный объем (мл) Конечный объем (мл) Изменения, %
1 Болезнь Грейвса Разбавитель 0,05 0,20 +4-кратное
2 Болезнь Грейвса Разбавитель 0,1 0,23 +2,3-кратное
3 Болезнь Грейвса 4 мкг FP 0,1 0,1 0
4 Болезнь Грейвса 4 мкг FP 0,1 0,1 0
5 Болезнь Грейвса 10 мкг SX + 4 мкг FP 0,1 0,08 -20%
6 Болезнь Грейвса 10 мкг SX + 4 мкг FP 0,1 0,03 -70%
SX- сальметерола ксинафоат, FP- флутиказона пропионат

Следует понимать, что описанные здесь примеры и воплощения служат только для иллюстративных целей и что различные модификации или изменения с их учетом находятся в пределах сущности и содержания данной заявки и объема приложенной формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, процитированные здесь, таким образом включены посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.

1. Способ уменьшения накопления глазничного жира у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение указанному пациенту
(а) терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного бета-адренергического агониста; и
(б) терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора.

2. Способ по п.1, где указанный пациент страдает от тиреоидной офтальмопатии.

3. Способ по п.1, где введение является парентеральным, пероральным, внутриглазным, внутриглазничным, глазным, периорбитальным, ретробульбарным, внутрироговичным, местным, внутримышечным, трансдермальным, сублингвальным, интраназальным или введением в дыхательные пути.

4. Способ по п.1, где по меньшей мере одно соединение вводят до по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.

5. Способ по п.4, где по меньшей мере одно соединение вводят от примерно 3 суток до примерно 7 суток до по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.

6. Способ по п.5, где по меньшей мере одно соединение вводят внутриглазным, внутриглазничным, глазным, периорбитальным, ретробульбарным или внутрироговичным путем введения.

7. Способ по п.6, где по меньшей мере одно соединение вводят в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

8. Способ по п.4, где по меньшей мере одно соединение вводят перорально и по меньшей мере один бета-адренергический агонист вводят в глаз.

9. Способ по п.8, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист вводят в препарате суспензии кристаллических микрочастиц.

10. Способ по п.1, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой длительно действующий бета-адренергический агонист.

11. Способ по п.1, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой бета-адренергический агонист, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора.

12. Способ по п.1, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой сальметерол, формотерол или их любую комбинацию.

13. Способ по п.12, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой сальметерол, и терапевтически эффективное количество сальметерола составляет от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки.

14. Способ по п.13, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой формотерол, и терапевтически эффективное количество формотерола составляет от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 50 мкг/сутки.

15. Способ по п.1, где по меньшей мере одно соединение представляет собой глюкокортикостероид, антигистаминное средство или их любую комбинацию.

16. Способ по п.1, где по меньшей мере одно соединение представляет собой дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид, кетотифен или их любую комбинацию.

17. Способ по п.6, где по меньшей мере одно соединение представляет собой глюкокортикостероид, и по меньшей мере один длительно действующий бета-адренергический агонист представляет собой сальметерол, формотерол или их комбинацию.

18. Способ по п.1, дополнительно включающий введение терапевтически эффективного количества иммунодепрессанта внутриглазным, внутриглазничным, глазным, периорбитальным, ретробульбарным или внутрироговичным путем до введения по меньшей мере одного соединения.

19. Способ по п.18, где терапевтически эффективное количество иммунодепрессанта вводят в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

20. Способ лечения проптоза, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.

21. Способ по п.20, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой длительно действующий бета-адренергический агонист.

22. Способ по п.20, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой бета-адренергический агонист, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора.

23. Способ по п.20, где по меньшей мере один бета-адренергический агонист представляет собой сальметерол, формотерол, бамбутерол, эформотерол, изопротеренол, альбутерол или фенотерол.

24. Способ по п.20, где композиция содержит смесь по меньшей мере одного длительно действующего бета-адренергического агониста и по меньшей мере одного кратковременно действующего бета-адренергического агониста.

25. Способ по п.23, где композиция содержит сальметерол, и терапевтически эффективное количество сальметерола составляет от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки.

26. Способ по п.23, где композиция содержит формотерол, и терапевтически эффективное количество формотерола составляет от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 50 мкг/сутки.

27. Способ по п.23, где введение является парентеральным, пероральным, внутриглазным, внутриглазничным, внутрироговичным, глазным, ретробульбарным, местным, внутримышечным, трансдермальным, сублингвальным, интраназальным или введением в дыхательные пути.

28. Способ по п.20, где композиция дополнительно содержит терапевтически эффективное количество гиалуронидазы.

29. Способ уменьшения накопления глазничного жира у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение указанному пациенту
(а) терапевтически эффективного количества одного или более чем одного соединения, стимулирующего путь, ассоциированный с адренергическим рецептором; и
(б) терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора.

30. Способ по п.29, где одно или более чем одно соединение, стимулирующее путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, представляет собой катехоламин, альфа-адренергический антагонист, форсколин, аминофиллин или их аналоги.

31. Офтальмологическая фармацевтическая композиция, содержащая офтальмологически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество метилпреднизолона ацетата или флутиказона пропионата в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

32. Офтальмологическая фармацевтическая композиция по п.31, дополнительно содержащая солюбилизированный метилпреднизолона ацетат или солюбилизированный флутиказона пропионат.

33. Офтальмологическая фармацевтическая композиция по п.32, дополнительно содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного длительно действующего бета-2-агониста в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

34. Офтальмологическая фармацевтическая композиция, содержащая офтальмологически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного длительно действующего бета-2-агониста в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

35. Офтальмологическая фармацевтическая композиция по п.34, где по меньшей мере один длительно действующий бета-2-агонист представляет собой сальметерол или формотерол.

36. Офтальмологическая фармацевтическая композиция по п.34, дополнительно содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного солюбилизированного длительно действующего бета-2-агониста.

37. Офтальмологическая фармацевтическая композиция по п.34, дополнительно содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергического рецептора в форме суспензии кристаллических микрочастиц.

38. Применение по меньшей мере одного бета-адренергического агониста и по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации ткани-мишени к бета-адренергическому агонисту для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, включающего накопление глазничного жира.

39. Применение по меньшей мере одного бета-адренергического агониста и по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации ткани-мишени к бета-адренергическому агонисту для применения в способе лечения заболевания, включающего накопление глазничного жира.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринной хирургии, и может быть использовано для профилактики развития аутоиммунного процесса при оперативном лечении узлового зоба.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к биологически активным веществам пептидной природы, модулирующим активность некоторых факторов роста по отношению к стимуляции пролиферации тироксинпродуцирующих фолликулярных клеток щитовидной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается лечения аутоиммунного тиреоидита. .
Изобретение относится к медицине, а именно к терапевтической офтальмологии, и может быть использовано для терапии острых тромбозов вен сетчатки. .

Изобретение относится к биотехнологии. .

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к защитному средству для нейронов сетчатки. .
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано при лечении оптического неврита. .
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может применяться в качестве репаративного и регенерационного офтальмологического средства. .
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано при лечении фибриноидного синдрома после экстракции катаракты с имплантацией интраокулярной линзы у пациентов с псевдоэксфолиативным синдромом.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. .

Изобретение относится к лекарственным средствам и касается фармацевтической комбинации, предназначенной для использования в способе лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или нарушений, или отторжения трансплантатов, включающей 2-амино-2-[2-(4-октилфенил)этил]пропан-1,3-диол (FTY720), фосфат или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения и ингибитор киназы JAK3, представляющий собой моноцитрат 3-{(3R-,4R)-4-метил-3-[метил-(7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила (СР-690555), в эффективных количествах.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к композиции для ранозаживляющего наполнения кожного повреждения, при котором имеет место потеря кожного материала.

Изобретение относится к лекарственным средствам и касается фармацевтической композиции, включающей (i) фармакологически эффективные количества каждого из действующих веществ: а) ингибитора нейтральной эндопептидазы, b) ингибитора эндогенной продуцирующей эндотелин системы и с) ингибитора ГМГ (гидроксиметилглутарил) СоА редуктазы, выбранного из группы, включающей аторвастин и симвастатин или любые их физиологически приемлемые соли, сольваты или эфиры, где субкомбинация ингибитора нейтральной эндопептидазы а) и ингибитора эндогенной продуцирующей эндотелин системы (b) является соединением двойного действия, которое способно ингибировать нейтральную эндопептидазу и человеческую растворимую эндопептидазу, которым является даглутрил, и (ii) предпочтительно фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества и/или носители, для профилактики или лечения сердечно-сосудистых расстройств у млекопитающих и человека.
Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии. .

Изобретение относится к лекарственным средствам и касается фармацевтической композиция для профилактики или лечения сердечно-сосудистых заболеваний, включающей фармакологически эффективное количество а) даглутрила и/или его физиологически совместимых солей и б) гидрохлортиазида или любых его физиологически совместимых таутомеров, солей, сольватов или сложных эфиров.
Наверх