Конъюгаты впч-антиген и их применение в качестве вакцин
Изобретение относится к областям молекулярной биологии, вирусологии, иммунологии и медицины. Описана композиция, содержащая вирусоподобную частицу (ВПЧ) РНКового бактериофага и по меньшей мере один антиген, где ВПЧ получают рекомбинантным путем в хозяине и где количество РНК хозяина, вторичная структура которой содержится в ВПЧ, составляет максимум 20% от количества РНК хозяина, вторичная структура которой исходно содержится в ВПЧ; и где ВПЧ и по меньшей мере один антиген сцеплены друг с другом. Раскрыты также способы получения композиций, предлагаемых в изобретении. Композиции можно применять для получения вакцин, предназначенных для лечения заболеваний, нарушений и состояний. Кроме того, композиции, предлагаемые в изобретении, наиболее целесообразно применять для эффективной индукции гуморальных иммунных ответов на антиген, снижая или устраняя при этом нежелательные Т-клеточные ответы. 7 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Композиция, предназначенная для иммунизации и содержащая:
(а) вирусоподобную частицу (ВПЧ) РНКового бактериофага, включающую белки оболочки, их мутанты или фрагменты, которая несет по меньшей мере один первый сайт присоединения, причем указанный мутант указанного белка оболочки имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную соответствующему белку оболочки дикого типа, и мутант этого белка оболочки способен к сборке в ВПЧ, где ВПЧ получают рекомбинантным путем в хозяине и указанная ВПЧ содержит менее чем 30 мкг РНК хозяина на мг указанной ВПЧ;
(б) по меньшей мере один антиген, который несет по меньшей мере один второй сайт присоединения;
где по меньшей мере один антиген (б) связан с ВПЧ (а) по меньшей мере через один первый сайт присоединения и по меньшей мере один второй сайт присоединения;
(в) по меньшей мере одну полианионную макромолекулу, упакованную внутрь ВПЧ, где полианионная макромолекула представляет собой полианионный полипептид, который выбран из группы, включающей:
(а) полиглутаминовую кислоту;
(б) полиаспарагиновую кислоту;
(в) поли (GluAsp) и
(г) любые химические модификации (а)-(в).
2. Композиция по п.1, в которой полианионный полипептид представляет собой полиглутаминовую кислоту.
3. Композиция по п.1, в которой РНКовый фаг выбран из группы, включающей:
(а) бактериофаг Qβ;
(б) бактериофаг R17;
(в) бактериофаг fr;
(г) бактериофаг GA;
(д) бактериофаг SP;
(е) бактериофаг MS2;
(ж) бактериофаг M11;
(з) бактериофаг МХ1;
(и) бактериофаг NL95;
(к) бактериофаг f2;
(л) бактериофаг РР7 и
(м) бактериофаг АР205.
4. Композиция по п.1, в которой ВПЧ содержит оболочечные белки, и/или их мутанты, и/или их фрагменты РНКового фага Qβ, fr, AP205 или GA.
5. Композиция по п.1, в которой ВПЧ содержит оболочечные белки РНКового фага Qβ.
6. Композиция по п.1, в которой ВПЧ содержит оболочечные белки с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 10.
7. Композиция по п.1, в которой ВПЧ содержит один или более рекомбинантных оболочечных белков с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 10.
8. Композиция по п.1, в которой первый сайт присоединения связан со вторым сайтом присоединения по меньшей мере через одну ковалентную связь, предпочтительно по меньшей мере одну непептидную ковалентную связь.
9. Композиция по п.1, в которой первый сайт присоединения содержит аминогруппу, предпочтительно аминогруппу лизина.
10. Композиция по п.1, в которой второй сайт присоединения содержит сульфгидрильную группу, предпочтительно сульфгидрильную группу цистеина.
11. Композиция по п.1, в которой первый сайт присоединения содержит аминогруппу лизина и второй сайт присоединения содержит сульфгидрильную группу цистеина.
12. Композиция по п.1, дополнительно содержащая линкер, где указанный линкер связан с указанным антигеном с помощью по меньшей мере одной пептидной связи, где указанный линкер включает указанный второй сайт присоединения и линкер включает цистеиновый остаток.
13. Композиция по п.1, в которой по меньшей мере один антиген выбран из группы, включающей:
(а) полипептиды;
(б) углеводы;
(в) стероидные гормоны;
(г) органические молекулы и
(д) гаптены.
14. Композиция по п.1, в которой по меньшей мере один антиген представляет собой аутоантиген, или его фрагмент, или его вариант.
15. Композиция по п.1, в которой антиген выбран из группы, включающей:
(а) лимфотоксины (предпочтительно лимфотоксин α (LT α), лимфотоксин β (LT β));
(б) рецепторы лимфотоксина;
(в) рецептор-активатор лиганда ядерного фактора kB (RANKL);
(г) сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF);
(д) рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF-R);
(е) интерлейкин-5;
(ж) интерлейкин-17;
(з) интерлейкин-13;
(и) IL-23 p19;
(к) грелин;
(л) CCL21;
(м) CXCL12;
(н) SDF-1;
(о) M-CSF;
(п) MCP-1;
(p) эндоглин;
(с) GnRH;
(т) TRH;
(у) эотаксин;
(ф) брадикинин;
(х) BLC;
(ц) фактор некроза опухоли α;
(ч) амилоидный бета пептид (Aβ1-42);
(ш) Аβ1-6;
(щ) ангиотензин;
(э) гастрин и/или прогастрин;
(ю) СЕТР;
(я) ССR5;
(аа) С5а;
(бб) CXCR4;
(вв) дес-Arg-брадикинин;
(гг) GnRH-пептид;
(дд) пептид ангиотензина;
(ее) TNF-пептид;
(жж) фрагмент антигенов, указанных в (а)-(ее); и
(зз) вариант антигенов, указанных в (а)-(ее).
16. Композиция по п.1, указанная ВПЧ содержит менее чем 20 мкг РНК хозяина на мг, более предпочтительно менее чем 10 мкг и наиболее предпочтительно менее чем 8 мкг на мг указанной ВПЧ.
17. Композиция по п.1, указанная ВПЧ содержит менее чем 6 мкг РНК хозяина на мг, более предпочтительно менее чем 4 мкг на мг и наиболее предпочтительно менее чем 2 мкг на мг указанной ВПЧ.
18. Композиция по п.1, где первый сайт присоединения связан со вторым указанным сайтом присоединения с помощью по меньшей мере одной связи.
19. Композиция вакцины, предназначенная для иммунизации против воспалительных заболеваний и/или хронических аутоиммунных заболеваний, содержащая композицию по п.1, где предпочтительно указанная вакцина содержит по меньшей мере один адъювант.
20. Композиция вакцины по п.19, где указанная композиция вакцины лишена адъюванта.
21. Способ получения композиции по п.1, заключающийся в том, что:
(а) получают рекомбинантным путем в хозяине вирусоподобную частицу (ВПЧ), несущую по меньший мере один первый сайт присоединения, где ВПЧ содержит белки оболочки РНКового бактериофага, их мутанты и фрагменты, причем указанный мутант указанного белка оболочки имеет аминокислотную последовательность по меньшей мере, на 95% идентичную соответствующему белку оболочки дикого типа, и мутант этого белка оболочки способен к сборке в ВПЧ, и
(б) «разбирают» вирусоподобную частицу до белков оболочки РНКового бактериофага, их мутантов или фрагментов;
(в) очищают белки оболочки, их мутанты или фрагменты;
(г) осуществляют повторную сборку очищенных белков оболочки РНКового бактериофага, их мутантов или фрагментов с получением вирусоподобной частицы, где вирусоподобная частица включает менее чем 30 мкг РНК хозяина на мг указанной ВПЧ, причем повторную сборку очищенных белков оболочки осуществляют в присутствии по меньшей мере одной полианионной макромолекулы, причем полианионный полипептид выбирают из группы, включающей:
(а) полиглутаминовую кислоту;
(б) полиаспарагиновую кислоту;
(в) поли(GluAsp) и
(г) любые химические модификации (а)-(в);
(д) связывают по меньший мере один антиген, несущий по меньший мере один второй сайт присоединения, с ВПЧ, полученной на стадии (г).
22. Способ получения композиции по п.1, заключающийся в том, что
(а) получают рекомбинантным путем в хозяине вирусоподобную частицу (ВПЧ), где ВПЧ содержит слитый белок, включающий белок оболочки РНКового бактериофага, его мутант или фрагмент и по меньшей мере один антиген, где предпочтительно указанная ВПЧ является ВПЧ РНКового бактериофага АР205, причем указанный мутант указанного белка оболочки имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную соответствующему белку оболочки дикого типа, и мутант этого белка оболочки способен к сборке в ВПЧ;
(б) «разбирают» ВПЧ до слитых белков,
(в) очищают слитые белки;
(г) осуществляют повторную сборку очищенных слитых белков с получением ВПЧ, где вирусоподобная частица включает менее чем 30 мкг РНК хозяина на мг указанной ВПЧ, причем повторную сборку белков оболочки осуществляют в присутствии по меньшей мере одной полианионной макромолекулы, причем полианионный полипептид выбирают из группы, включающей:
(а) полиглутаминовую кислоту;
(б) полиаспарагиновую кислоту;
(в) поли(GluAsp) и
(г) любые химические модификации (а)-(в);
(д) связывают по меньший мере один антиген, несущий по меньший мере один второй сайт присоединения, с ВПЧ, полученной на стадии (г).
23. Способ иммунизации, заключающийся в том, что вводят эффективное количество композиции вакцины по любому из пп.19 или 20 животному или человеку.
24. Применение композиции по п.1 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, где заболевание предпочтительно представляет собой воспалительное заболевание и/или хроническое аутоиммунное заболевание.
25. Способ предупреждения заболевания, заключающийся в том, что животному или человеку вводят эффективное количество композиции по п.1, где заболевание предпочтительно представляет собой воспалительное заболевание и/или хроническое аутоиммунное заболевание.
