Способ определения суммарной антиокислительной активности растительного масла



 


Владельцы патента RU 2421719:

Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к медицинской и пищевой технологии. Способ включает стадию получения хромогенного радикала путем окисления 2,2'-азинобис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) лакказой, восстановление радикала антиоксидантами растительного масла или стандартным антиоксидантом в н-бутанол-пропанольном растворе, измерение оптической плотности растворов при 405 или 750 нм на планшетном фотометре и расчет суммарной антиокислительной активности растительного масла по предложенной формуле. Достигается упрощение и повышение надежности определения. 1 табл.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к способам оценки суммарной антиокислительной активности (АОА) антиоксидантов в составе растительных масел и может найти применение в медицинской и пищевой технологии.

Уровень техники

Процесс старения, возникновение и развитие широкого круга заболеваний (атеросклероза, гипертонии, ишемии, рака, катаракты и др.) сопровождаются активацией свободнорадикальных реакций перекисного окисления фосфолипидов клеточных мембран, приводящих к их деградации. Этому процессу противодействуют жирорастворимые антиоксиданты. Для поддержания необходимой концентрации в организме жирорастворимых антиоксидантов применяют содержащие их лекарственные препараты, биологически активные вещества, в том числе в виде пищевых продуктов или БАДов. Растительные масла являются природным источником жирорастворимых антиоксидантов (токоферолов, каротиноидов, ликопинов, полифенолов, флавоноидов и др.), поэтому их с успехом используют при антиоксидантной терапии. В состав растительных масел входят жирные кислоты, представляющие большую пищевую ценность. Жирные кислоты, особенно полиненасыщенные, склонны к окислению, а продукты окисления (перекиси, альдегиды) являются токсичными примесями, что делает пищевые продукты непригодными к употреблению. Природные антиоксиданты, входящие в состав растительных масел, предохраняют их от окисления. В связи с этим разработка простого и надежного способа определения концентрации антиоксидантов в растительном масле в виде экспресс-метода является актуальной.

Известен способ определения суммарной АОА биологически активных веществ (патент RU 2238554, 20.10.2004). Способ основан на электрохимическом окислении анализируемого и стандартного веществ в ячейке амперометрического детектора, усилении электрических сигналов, их регистрацию и расчет АОА по предложенной математической зависимости. Недостатками известного способа являются использование только водных растворов анализируемого и стандартного веществ, то есть он неприемлем в случае жирорастворимых антиоксидантов.

Известен способ определения суммарной АОА биологически активных веществ, основанный на взаимодействии анализируемой пробы с перманганатом калия до обесцвечивания последнего (патент RU 2170930, 20.07.2001). Недостатком этого способа является необходимость осуществления трудоемкой стадии пробоподготовки (предварительное извлечений антиоксидантов этиловым спиртом из растительного сырья). Кроме того, в данном способе применяют метод титрования раствора перманганата калия анализируемой пробой - метод трудоемкий и не приемлемый при анализе большого числа проб.

Наиболее близким к предлагаемому способу оценки АОА является способ определения АОА липофильных антиоксидантов, основанный на реакции восстановления антиоксидантом хромогенного радикала АБТС+. (Re R; Pellegrini N; Proteggente A; Pannala A; Yang M; Rice-Evans C. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay // Free Radio Biol Med 1999, Vol.26, P.1231-1237). Прототип имеет следующие недостатки. Во-первых, хромогенный радикал, полученный в условиях окисления АБТС (2,2'-азинобис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)) персульфатом калия, оказался нестабильным (наблюдается уменьшение оптической плотности его растворов при хранении более 3-4 часов). Во-вторых, измерения проводят после растворения липофильных антиоксидантов в этаноле, однако растительное масло в этаноле не растворяется, то есть требуется проведение стадии пробоподготовки - получение этанольных извлечений жирорастворимых антиоксидантов из растительного масла.

Сущность изобретения

Технической задачей предлагаемого изобретения является: 1) использование для определения суммарной АОА растительного масла хромогенного радикала АБТС+., образованного при ферментативном окислении АБТС; 2) подбор реакционной среды для растворения растительного масла и последующего проведения в ней реакции восстановления хромогенного радикала антиоксидантами растительного масла; 3) использование для оптических измерений серийного спектрофотометрического оборудования - планшетного фотометра (типа «Униплан», Россия).

Поставленная техническая задача решается описываемым способом определения суммарной АОА растительного масла, который включает окисление АБТС лакказой (п-дифенол:кислород оксидоредуктаза, КФ 1.10.3.2, фермент, относящийся к группе медьсодержащих оксидаз, окисляющих различные органические и неорганические субстраты с одновременным восстановлением молекулярного кислорода), в результате чего образуется хромогенный радикал АБТС+., который в условиях реакционной смеси может храниться не менее 15 дней при комнатной температуре. Реакцию восстановления радикала антиоксидантами растительного масла проводят в н-бутанол-изопропанольном растворе при комнатной температуре в пластиковых 96-луночных планшетах. Показателем суммарной АОА служит величина уменьшения оптической плотности раствора, измеряемой на планшетном фотометре.

Сущность предлагаемого способа определения суммарной АОА заключается в следующем:

1) к раствору растительного масла в н-бутаноле (проба) или к н-бутанолу без масла (контроль), помещенных в лунки 96-луночного планшета, добавляют изопропанол до 70% (v/v), перемешивают и затем вносят раствор хромогенного радикала АБТС+., перемешивают, выдерживают 1-3 мин при комнатной температуре; 2) проводят измерение оптической плотности растворов при 450 или 750 нм на планшетном фотометре. Уменьшение значения оптической плотности пробы по отношению к контролю прямо пропорционально суммарной АОА растительного масла. Расчет концентрации антиоксидантов проводят по формуле в пересчете к стандартному антиоксиданту.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1. Получение хромогенного радикала АБТС+..

232 мг натрия уксуснокислого 2-водного растворяют в 1 мл дистиллированной воды, смешивают с 1 мл 10% уксусной кислоты, получают буферный раствор (pH=4,7). 219 мг АБТС растворяют в 4 мл дистиллированной воды, получают 0,1 М раствор АБТС. Реакцию окисления АБТС проводят следующим образом: смешивают 0,2 мл буферного раствора, 0,4 мл раствора АБТС и 9,4 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мкл фермента (100 ед./мл грибной LacCl/C2 Cerrena unicolor или бактериальной CotA Bacillus pumilus лакказы; за единицу активности принимают минимальное количество фермента, которое в течение 1 мин окисляет 1 мкмоль АБТС при комнатной температуре), инкубируют 30 мин при 50°C. АБТС окисляется в хромогенный радикал АБТС+. практически полностью.

Пример 2. Определение суммарной АОА растительного масла.

5 мг ретинола ацетата (полного трансретинола ацетата, витамина А ацетата) растворяют в 1 мл н-бутанола. 5-10 мкл полученного раствора смешивают с 50-55 мкл н-бутанола (конечный объем 60 мкл) и 140 мкл изопропанола в лунке 96-луночного планшета, перемешивают, добавляют 8 мкл раствора хромогенного радикала, перемешивают и инкубируют 1-3 мин при комнатной температуре. Далее проводят измерение оптической плотности раствора при 405 или 750 нм на планшетном фотометре (показание стандартного антиоксиданта). 0,1 г растительного масла растворяют в 1 мл н-бутанола. Затем разные аликвоты этого раствора смешивают в лунках 96-луночного планшета с н-бутанолом таким образом, чтобы конечный объем раствора в лунке был равен 60 мкл. Добавляют в каждую лунку по 140 мкл изопропанола, перемешивают, добавляют 8 мкл раствора хромогенного радикала, перемешивают и спустя 1-3 мин проводят измерение оптической плотности при 405 или 750 нм на планшетном фотометре (показание анализируемой пробы). При расчете количественной оценки суммарной АОА используют показания для лунки с таким разведением растительного масла, при котором оно составляет от 20 до 80% от показаний оптической плотности в контроле. За контроль принимают показания для лунки, раствор бутанола которой не содержит растительное масло (показание контроля). Количественно суммарную АОА в пересчете на стандартный антиоксидант (ретинола ацетат) рассчитывают согласно формуле

где Aк, Ас, Aп - оптическая плотность контроля, стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы соответственно;

сс, сп, vc, vп - концентрации и объемы аликвот исходных растворов стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы соответственно.

Пояснение к таблице

В таблице приводятся значения суммарной АОА в растительных маслах в пересчете на стандартный антиоксидант - ретинола ацетат (мг%).

Таблица
Метрологическая характеристика способа оценки суммарной антиокислительной активности растительного масла
Проба Число измерений Среднеарифметическое значение (мг%) Стандартное отклонение Коэффициент вариации
Подсолнечное масло, рафинированное* 5 40,3 1,2 2,9
Подсолнечное масло, нерафинированное* 5 51,4 1,3 2,5
Льняное масло* 5 78,2 2,2 2,8
Масло шиповника ** 5 92,5 3,4 3,7
Облепиховое масло** 5 289,8 4,5 1,5
* - измерения проводились при 405 нм
** - при 750 нм

Способ определения суммарной антиокислительной активности (АОА) растительного масла, включающий получение хромогенного радикала, его восстановление антиоксидантами растительного масла и расчет показателя суммарной антиокислительной активности, отличающийся тем, что хромогенный радикал, полученный в реакции окисления 2,2'-азинобис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) лакказой, восстанавливают антиоксидантами растительного масла в н-бутанол-изопропанольном растворе, за ходом реакции следят по уменьшению оптической плотности раствора, измеренной на планшетном фотометре при длине волны 405 или 750 нм и расчет показателя суммарной АОА осуществляют согласно формуле:

где Ак, Ac, Aп - оптическая плотность контроля, стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы соответственно;
сс, сп, vc, vп - концентрации и объемы аликвот исходных растворов стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к пищевой промышленности. .

Изобретение относится к масложировой промышленности. .

Изобретение относится к масложировой промышленности. .
Изобретение относится к масложировой промышленности. .

Изобретение относится к масложировой промышленности. .

Изобретение относится к области практического применения импульсных ЯМР-спектрометров для эскпрессного определения показателей качества семян масличных культур.
Изобретение относится к масложировой промышленности. .

Изобретение относится к пищевой промышленности. .
Изобретение относится к анализу в масложировой промышленности

Изобретение относится к масложировой промышленности и может быть использовано для определения содержания олеиновой кислоты в оливковом масле

Настоящее изобретение относится к способу количественного определения содержания восков и воскоподобных веществ в рафинированных растительных маслах, при котором в кювете размещают пробу горячего растительного масла, производят одновременно облучение пробы и изменение ее температуры, пробу охлаждают от начальной температуры до температуры полного застывания пробы, непрерывно измеряют световые потоки: проходящий через пробу и рассеянный, определяют в зависимости от температуры отношение проходящего и рассеянного световых потоков и по максимуму этого отношения на основе предварительно полученной на эталонных пробах калибровочной кривой определяют количественное содержание восков и воскоподобных веществ в растительном масле. Устройство включает корпус с термоэлектрическим модулем в виде устройства охлаждения-нагрева, управляющий вход которого соединен с выходом устройства управления-регистрации, термоизолированную кювету, установленную в корпусе с возможностью теплового контакта дна кюветы с устройством охлаждения-нагрева и снабженную термодатчиками, подключенными к устройству управления-регистрации, в стенки кюветы вмонтированы первый, второй и третий волоконно-оптические световоды, из которых первый соединен с излучателем, а второй и третий соединены с фотоприемниками, оптические оси световодов находятся на одном уровне в одном поперечном сечении кюветы, причем оптические оси торцов первого и второго световодов совпадают, а оптическая ось торца третьего световода расположена нормально к оптической оси первого и второго световодов, выходы термодатчиков и пропорциональных фотоприемников подключены к устройству управления-регистрации. Изобретение обеспечивает оперативный и информативный экспресс-метод, позволяющий значительно сократить длительность проведения испытания и исключить субъективные ошибки оператора. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования медико-социальной эффективности комплексного лечения больных артериальной гипертонией (АГ). Определяют прогностические факторы: клинико-лабораторные данные: уровень общего холестерина крови, показатели суточного мониторирования АД: среднесуточную величину САД, параметры внутрисердечной гемодинамики: толщину задней стенки левого желудочка в диастолу (ТЗСЛЖД), показатели качества жизни по шкале физической активности (PF) вопросника SF-36. Далее с помощью множественного регрессионного анализа строят уравнение для расчета количества дней временной утраты трудоспособности. Затем по величине результативного признака прогнозируют количество дней временной утраты трудоспособности в течение последующих 12 месяцев после проведенного комплексного лечения, что позволяет определить медико-социальную эффективность медикаментозной терапии в сочетании с обучающими программами. Способ позволяет осуществить прогнозирование медико-социальной эффективности комплексного лечения больных АГ по количеству дней временной утраты трудоспособности с помощью метода регрессионного анализа путем комплексного клинико-функционального обследования. 4 пр.

Изобретение относится к способам выделения и аналитического газохроматографического определения количества экстрагента в растительном сырье, преимущественно растительном масле. Способ определения количества экстрагента - н-гексана и петролейного эфира в растительном сырье, предпочтительно масле, заключается в том, что отбирают пробу растительного сырья, выделяют из нее оставшийся в ней экстрагент и затем проводят его газохроматографический анализ, экстрагент выделяют препаративной дистилляцией, причем предварительно в отобранную пробу добавляют растворитель, имеющий хроматографически определяемые собственные примеси в области хроматографического выхода н-гексана и компонентов петролейного эфира ниже 1-2% масс., при этом в качестве растворителя выбрано вещество из группы: изооктан, н-бутанол, н-бутилацетат, толуол, о-ксилол, а в пробу добавляют растворитель, количество которого к пробе составляет от 1 к 1 до 1 к 10. В результате достигается возможность повышения точности определения количества оставшегося в растительном сырье экстрагента за счет более полного его извлечения из растительного сырья. 1 з.п. ф-лы, 2 пр., 1 ил.

Группа изобретений относится к области анализа органических веществ, в частности к отрасли общественного питания применительно к оценке качества обезжиривания столовой посуды в лечебно-профилактических учреждениях разного профиля. Индикаторный состав включает в себя краситель Судан III, одноатомный спирт, низкомолекулярный гликоль и/или низкомолекулярный полигликоль при следующем соотношении компонентов, мас.%: краситель Судан III 0,1-0,4; одноатомный спирт 5,0-19,0; низкомолекулярный гликоль и/или низкомолекулярный полигликоль 12,0-65,0; очищенная вода остальное. Способ получения указанного состава осуществляют путем смешения компонентов при комнатной температуре без принудительного нагревания, при котором в смеситель холодного смешения последовательно загружают низкомолекулярный гликоль и/или низкомолекулярный полигликоль, краситель Судан III и 0,5 части одноатомного спирта. Полученную смесь гомогенизируют в течение не менее 40 минут. Одновременно в другой емкости с мешалкой смешивают в течение 20-30 минут 0,5 части одноатомного спирта и очищенную воду. Готовую смесь из емкости перекачивают в смеситель холодного смешения и обе части состава гомогенизируют в течение не менее 15 минут. После окончания процесса смешения производят контроль качества состава. Достигается повышение надежности, безопасности и экономичности. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл.
Наверх