Композиция для фиксации гематологических и цитологических препаратов
Владельцы патента RU 2422825:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU)
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при микроскопическом исследовании мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов в клинических лабораториях различных лечебных учреждений, а также при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ медицинского и биологического профиля. Композиция для фиксации гематологических и цитологических препаратов содержит следующие ингредиенты: метанол - 1 литр, азур 2 - 1,8-2,2 г, эозин калий - 1,2-1,6 г, лимонная кислота - 0,06-0,1 г, гидрооксид калия - 0,04-0,08 г. Изобретение обеспечивает повышение качества фиксации препаратов.
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при микроскопическом исследовании мазков крови, костного мозга, пунктатов и отпечатков различных органов в клинических лабораториях различных лечебных учреждений, а также при проведении научных морфологических исследований в ВУЗах и НИИ медицинского и биологического профиля.
Для фиксации мазков крови, костного мозга, цитологических препаратов используют метанол, абсолютный этанол, жидкость Никифорова (смесь равных частей спирта и эфира), метаноловый раствор эозина-метиленового синего по Май-Грюнвальду, метаноловый раствор эозина-метиленового синего типа Лейшмана, фиксатор-краситель Райта (Справочник по клиническим лабораторным методам исследования /Под ред. Е.А.Кост, - 2-е изд. - М.: Медицина, 1975. - 393 с.; Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. Изд. Медицина, София, 1963. - 874 с.; Позов С.А., Коломасов И.И. Способ окраски мазков крови. Патент №2081404, опубл. 1997.06.10; Трухачев В.И. и соавт. Способ окраски мазков крови. Патент №2304776, опубл. 2007.08.20). Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является метаноловый раствор эозина-метиленового синего по Май-Грюнвальду. Общее между ними: метанол, эозин-калий, метиленовый синий. Различия: добавление в композицию компонентов буферных смесей в оптимальных соотношениях.
Известные аналоги имеют массу недостатков. Абсолютный этанол и смесь Никифорова не только неудовлетворительно сохраняют цитоплазматические и ядерные структуры клеток крови и различных тканей, но и требуют очень длительной фиксации (30 мин). Общепризнанно, что наилучшим фиксатором является метанол. Однако наши исследования (Михеев А.Г. Зависимость цитохимических показателей лейкоцитов от их морфологических особенностей в сравнительном аспекте и при анафилаксии. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук, Новосибирск, 1996) показали, что при фиксации метанолом растворяется специфическая зернистость базофильных гранулоцитов, неудовлетворительно сохраняется зернистость нейтрофилов и тучных клеток. В предлагаемом изобретении все указанные проблемы аналога решены путем растворения в метаноле азура 2 и эозина-калия в оптимальных молярных соотношениях, добавления буферных компонентов в наилучших весовых соотношениях. Все вышеуказанные компоненты помещают в термостат при температуре 52 градуса на 18-24 часа. При этом происходят многочисленные химические реакции.
Цель предлагаемого изобретения - повысить информативность мазков крови, костного мозга и цитологических препаратов, обеспечив высококачественную фиксацию цитоплазматических и ядерных структур всех типов клеток.
Поставленная цель достигается оптимальным молярным соотношением в композиции для фиксации цитологических препаратов основных тиазиновых красителей и эозина, растворенных в метаноле, с добавлением буферных компонентов. Качественный состав композиции для фиксации гематологических и цитологических препаратов: метанол, азур 2, эозин-калий, лимонная кислота, гидрооксид калия. Количественный состав композиции: метанол - 1 литр, азур 2 - 1,8-2,2 г, эозин калия - 1,2-1,6 г, лимонная кислота - 0,06-0,1 г, гидрооксид калия - 0,04-0,08 г.
Осуществление изобретения. Пример №1. В стеклянную или пластиковую емкость наливают 1 литр метанола, всыпают навеску 1,8 г азура 2 и хорошо перемешивают. Затем в эту же емкость всыпают 1,2 г эозина калия и перемешивают. Метаноловые растворы красителей помещают в термостат при 52 градусах на 18-24 часа. В нагретые растворы красителей всыпают 0,06 г лимонной кислоты и перемешивают. Вскоре всыпают навеску гидрооксида калия 0,04 г и перемешивают. После охлаждения до комнатной температуры композиция для фиксации гематологических и цитологических препаратов готова к употреблению.
Пример №2. В 1 литре метанола растворяют 2,2 г азура 2 и перемешивают. В эту же емкость всыпают 1,6 г эозина калия и перемешивают. Метаноловые растворы красителей помещают в термостат при 52 градусах на 18-24 часа. В нагретые растворы красителей всыпают 0,1 г лимонной кислоты и перемешивают. Затем всыпают навеску гидрооксида калия 0,08 г и перемешивают. После охлаждения до комнатной температуры композиция готова к употреблению.
Предлагаемые композиции для фиксации гематологических и цитологических препаратов используют следующим образом: наливают в контейнер для фиксации и погружают в вертикальном положении в него мазки крови, костного мозга и другие цитологические препараты на 3-5 минут. Мазки удаляют из контейнера и сразу (без промывки) помещают в контейнер с рабочим раствором гематологического красителя, который готовят из композиции для окраски мазков крови. Последняя подана нами как заявка на патент на 3 недели раньше данной заявки. После определенного времени окраски мазки (8-10 минут) промывают дистиллированной водой, на 100 мл которой добавляют 3 мл воды из горячего крана водоснабжения, и высушивают на воздухе. По ГОСТУ горячая водопроводная вода имеет щелочную реакцию, а дистиллированная вода - кислую (рН 5,4-5,7). Поэтому добавление горячей воды в дистиллированную воду делает ее нейтральной. Предлагаемые композиции для гематологических и цитологических препаратов выгодно отличаются от всех известных аналогов тем, что имеют строго определенные интервалы рН, обеспечивающие повышение качества фиксации препаратов. При использовании предлагаемой композиции для фиксации старых мазков крови и костного мозга можно получить хорошую окраску препаратов (эритроциты приобретают розовый цвет, а не полихроматофильную или базофильную окраску, как при известных аналогах). Возможность реализации назначения композиции для фиксации гематологических и цитологических препаратов доказывается микрофотографиями различных клеток.
В лабораторных условиях мы готовим композицию для гематологических и цитологических препаратов объемом от 1 до 3 литров. Поэтому заявленное изобретение соответствуют условию «промышленная применимость», т.к. промышленное изготовление гораздо проще (имеются реакторы и соответствующая аппаратура).
Композиция для фиксации гематологических и цитологических препаратов содержит следующие ингредиенты: метанол - 1 л, азур 2-1,8-2,2 г, эозин калий - 1,2-1,6 г, лимонная кислота - 0,06-0,1 г, гидрооксид калия - 0,04-0,08 г.
