Способ лабораторного выявления последствий перинатальных поражений центральной нервной системы и определения степени их тяжести у детей

Изобретение относится к области медицины, в частности к биотехнологии, иммунологии, психиатрии и неврологии, и касается способа лабораторного выявления последствий перинатальных поражений центральной нервной системы и определения степени их тяжести у детей. Сущность способа заключается в том, что в образцах сыворотки крови обследуемых определяют активность лейкоцитарной эластазы (ЛЭ) и α1-протеиназного ингибитора (α1-ПИ), уровень аутоантител (аАТ1) к ряду антигенов нервной ткани, а также соответствующих антиидиотипических аутоантител (аАТ2). Степень отклонения определяемых показателей врожденного и/или приобретенного иммунитета от аналогичных показателей образцов сыворотки здоровых лиц соответствующего возраста характеризует степень тяжести и компенсаторный потенциал у детей с последствиями перинатальных поражений нервной системы. Использование способа обеспечивает высокую точность определения и проведение массовых диспансерных обследований, направленных на выявление лиц, имеющих характерные изменения определяемых иммунологических показателей и относящихся к группам повышенного риска нервно-психических заболеваний. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

 

Область техники: медицина, биотехнология, иммунология, детская неврология, психиатрия.

Уровень техники

Проблема своевременного выявления перинатальных поражений нервной системы (ППНС) и их последствий чрезвычайно актуальна в связи с их широкой распространенностью, высоким риском неблагоприятных последствий (церебральные параличи, умственная отсталость, стойкие сенсорные дефекты, вегетовисцеральные нарушения и т.д.) и декомпенсацией в последующие этапы жизни, в том числе и у детей с минимальными мозговыми дисфункциями. Это означает, что индуцированный ППНС деструктивный процесс может продолжаться и в последующие месяцы/годы.

Использование клинического (невролого-психологического) метода для диагностики ППНС и/или их последствий часто связано с определенными трудностями, в связи с тем, что на первом году жизни эти нарушения проявляются лишь в виде неспецифических симптомокомплексов (повышенная нервно-рефлекторная возбудимость, нарушения мышечного тонуса, нарушение темпов психомоторного развития). Вместе с тем, чрезвычайно важна ранняя диагностика этих состояний для своевременного начала реабилитационных мероприятий на этапах максимальной пластичности нервной системы.

Современные представления о существовании тесных взаимосвязей между нервной и иммунной системами предполагают вовлеченность иммунных механизмов в формирование патологии нервной системы, в том числе ППНС и их последствий, что подтверждено многочисленными исследованиями.

Известно, что одним из основных этиопатогенетических факторов подавляющего большинства ППНС является ишемия, запускающая ряд нейровоспалительных реакций, включающих активацию микроглии, повышенный синтез провоспалительных цитокинов, специфических молекул адгезии и хемотаксических факторов, а также скопление на эндотелии сосудов гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) активированных макрофагов из кровяного русла, вазоактивных веществ. Следствием этого является нарушение проницаемости ГЭБ и выход в кровяное русло нейроантигенов. Вышедшие в кровяное русло нейроантигены связываются с соответствующими аутоантителами (аАТ) из пула физиологических регуляторных аутоантител и, в ряде случаев, активируют соответствующие клоны В-лимфоцитов, продуцирующие специфические аАТ. Изменение уровня аАТ к нейроантигенгам является одним из маркеров нарушения развития и функционирования нервной системы. Определение уровня аАТ к нейроантигенам было предложено ранее определения степени риска развития нервно-психических заболеваний (патент РФ № 2218569 на «Способ выявления групп риска развития нервно-психических заболеваний»; авторы Морозов С.Г., Гнеденко Б.Б., Полещук В.В., Клюшник Т.П. и др.).

Однако необходимо иметь ввиду, что повышенный синтез аАТ к антигенам нервной ткани - это специфическая реакция иммунитета на деструктивный процесс в ткани мозга. Эта реакция является отставленной по времени, а время полужизни молекул иммуноглобулинов в крови составляет 24-32 дня, поэтому определение аАТ в крови не может быть использовано для мониторинга состояния нервной системы ребенка в короткие интервалы времени (2-3 недели). Кроме того, моногочисленные клинико-иммунологические исследования свидетельствуют о том, что аутоиммунный компонент характерен лишь для наиболее тяжелых поражений нервной системы.

Наиболее ранней и неспецифической реакцией на какое-либо тканевое повреждение является активация врожденного неспецифического иммунитета. Филогенетически более древний врожденный иммунитет выступает как первая линия обороны на пути чужеродного агента. В основе его действия - воспаление и фагоцитоз.

Клеточное звено врожденного иммунитета представлено моноцитами/макрофагами, гранулоцитами, дендритными клетками и натуральными киллерными клетками. Гуморальное звено включает в себя калликреин-кининовую систему, белки острой фазы воспаления, лизоцим, маннансвязывающий лектин. Активированные нейтрофилы секретируют в кровь протеолитический фермент - лейкоцитарную эластазу (ЛЭ). Попадая во внеклеточное пространство, лейкоцитарная эластаза расщепляет основное вещество, эластиновые и коллагеновые волокна сосудистых базальных мембран, выступая в ряде случаев в качестве мощного деструктивного фактора, способствующего поддержанию повреждения ГЭБ и нарушению функций мозга. Проведенные клинико-биологические исследования показали, что нарушения развития и функционирования мозга сопровождаются активацией врожденного иммунитета, а ряд показателей, например активность ЛЭ, коррелирует со степенью тяжести этих нарушений.

Все вышесказанное явилось основанием для разработки лабораторного способа выявления последствий ППНС и определения степени их тяжести у детей первых лет жизни с помощью комплексного определения ряда параметров врожденного и приобретенного иммунитета: активности ферментов - ЛЭ и α1-протеиназного ингибитора (α1-ПИ), уровня идиотипических (аАТ1) и антиидиотипических (аАТ2) аутоантител к спектру различных нейроантигенов.

В качестве наиболее близкого аналога предлагаемого изобретения может служить способ, описанный в патенте РФ № 2231074 на «Способ определения характера патофизиологических нарушений психомоторного развития детей первого года жизни»; авторы Клюшник Т.П., Щербакова И.В., Хачатрян Л.Г. В то же время данный способ обладает рядом существенных недостатков.

Во-первых, он позволяет регистрировать изменение уровня аАТ лишь к одному антигену нервной ткани - фактору роста нервов (ФРН). Вместе с тем, при нарушениях в системе аутоиммунитета с направленностью к антигенам нервной ткани уровни аАТ к различным нейроантигенам не всегда изменяются сонаправленно. Поэтому всегда более точный результат получается при определении уровней аАТ не к одному, а к нескольким антигенам нервной ткани.

Во-вторых, иммуноферментный анализ, примененный в методе-аналоге, позволяет регистрировать лишь уровень идиотипических аАТ к ФРН. Вместе с тем, более целостное представление об изменениях в системе аутоиммунитета дает комплексное исследование содержания аАТ1 вместе с их «функциональными противовесами» - аАТ2. Это связано с тем, что большое значение имеет соотношение аАТ1/аАТ2, которое дает представление о том, насколько аАТ1 «экранированы» соответствующими антиидиотипами, которые могут ограничивать неблагоприятное воздействие повышенных уровней аАТ1.

В-третьих, метод-аналог позволяет регистрировать лишь один параметр врожденного иммунитета, а именно активность ЛЭ - сериновой протеазы, содержащейся в азурофильных гранулах нейтрофилов и секретирующейся во внеклеточное пространство при активации нейтрофилов различными факторами, в том числе эндогенными продуктами деструкции тканей. Вместе с тем, для оценки возможного деструктивного потенциала ЛЭ необходимо оценивать также активность фермента, регулирующего активность ЛЭ, а именно α1-ПИ. α1-ПИ подавляет активность ЛЭ с высокой константой ассоциации (>10⁷ М^-1·с^-1). В сыворотке крови ЛЭ находится преимущественно в комплексе с α1-ПИ и лишена протеолитической активности. α1-ПИ является гликопротеином, синтезирующимся гепатоцитами. Контролируя протеолитическую активность ЛЭ, этот ингибитор создает условия для ограничения очага воспаления или деструкции, поэтому уровень α1-ПИ в сыворотке крови определяет течение многих воспалительных и деструктивных процессов.

В отличие от рассмотренного выше способа-аналога предла

гаемый новый способ позволяет

- регистрировать изменение уровня аАТ1 и аАТ2 к ряду антигенов нервной ткани, а также определять соотношение АТ1/АТ2;

- регистрировать активность не только ЛЭ, но и α1-ПИ, характеризующего выраженность компенсаторного потенциала.

Комплексное определение вышеперечисленных параметров врожденного и приобретенного иммунитета, связанных с процессами развития и функционирования мозга, позволяет дать более точную оценку состояния нервной системы ребенка, выявить деструктивный процесс в ткани мозга, уточнить его тяжесть, а также выраженность компенсаторного потенциала.

Целью заявляемого способа является повышение надежности прогноза нормального или аномального развития центральной и периферической нервной системы у детей, выявление лиц с текущим деструктивным процессом в мозге, индуцированным перинатальным поражением нервной системы и уточнение его тяжести с помощью определения в сыворотке крови таких параметров врожденного и приобретенного иммунитета как активность ЛЭ, α1-ПИ, уровня aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани. В качестве последних могут быть использованы белок мозга S100, глиофибриллярный кислый белок (GFAP), основной белок миелина (ОБМ), ФРН.

Реализация существенных признаков предлагаемого изобретения осуществляется следующим образом. В образцах сыворотки крови проводится определение активности ЛЭ и α1-ПИ спектрофотометрическим энзиматическим методом и определение уровня aAT1 и аАТ2 к нейроантигенам методом твердофазного иммуноферментного анализа. В ходе тестирования выявляются лица, содержащие измененную (повышенную или пониженную по сравнению с образцами сыворотки здоровых лиц аналогичной возрастной группы) активность/уровень одного или нескольких определяемых иммунологических показателей, что является характерным иммунологичским признаком нарушения развития/функционирования нервной системы. Степень отклонения определяемых показателей врожденного и/или приобретенного иммунитета от аналогичных показателей образцов сыворотки здоровых лиц соответствующего возраста указывает на наличие и характеризует степень тяжести ППНС.

Все определения проводятся в образцах крови, взятой из пальца, пятки или из вены в сухие пробирки. После образования кровяного сгустка образец крови центрифугируют при 2500 g, отбирают с помощью автоматической пипетки сыворотку, которая и используется для анализа. Сыворотка может быть также заморожена и храниться до проведения анализа в течение месяца при температуре от -18°С до -24°С.

Не вытекает из известного уровня техники тот факт, что по комплексной оценке активности ЛЭ и α1-ПИ, а также уровней aAT1 и аАТ2 к нейроантигенам можно выявить наличие последствий ППНС и охарактеризовать степень их тяжести.

Сущность изобретения

Поэтапное проведение определения иммунологических показателей.

I. Определение активности ЛЭ. Для определения активности ЛЭ, находящейся в сыворотке крови в комплексе с α1-ПИ, применяется спектрофотометрический метод с использованием в качестве хромогенного субстрата N-терт-бутокси-карбонил-аланин-n-нитрофенилового эфира (BOC-Ala-ONp) в присутствии ацетонитрила. В присутствии органического растворителя и при определенном составе буферного раствора происходит разрыхление комплекса, приводящее к оттеснению ингибитора и проникновению BOC-Ala-ONp к активному центру фермента.

Ход проведения анализа.

1. Флакон с буферным раствором помещают в термостат при температуре +25°С на 15 мин.

2. Непосредственно перед использованием в пробирку с навеской BOC-Ala-ONp вносят 500 мкл ацетонитрила и тщательно перемешивают.

3. В кювету спектрофотометра, предварительно нагретую до +25°С, вносят 480 мкл нагретого до +25°С буферного раствора, добавляют 20 мкл раствора субстрата BOC-Ala-ONp, 5 мкл анализируемой сыворотки и тщательно перемешивают.

4. Параллельно готовят контрольную пробу: 480 мкл буферного раствора с добавлением 20 мкл ацетонитрила.

5. Измеряют оптическую плотность опытной пробы против контрольной 4 раза с интервалом времени 1 мин (точно!) при длине волны 347,5 нм.

6. Рассчитывают изменение оптической плотности анализируемой пробы за 1 мин (ДЕ/мин) по формуле:

ΔЕ/мин=ΔE_n/t,

где ΔE_n - изменение оптической плотности анализируемой пробы, ед. опт. плотн.,

t - интервал времени между определениями, мин.

Активность ЛЭ в анализируемом образце сыворотки определяют по формуле:

А=ΔЕ/мин×0,108/0,005,

где 0,108 - пересчетный коэффициент, учитывающий объем пробы (0,5 мл) и коэффициент молярной экстинкции субстрата (4,6 мл × моль^-1 × см^-1);

0,005 - объем внесенной в кювету сыворотки (в мл).

Измерение активности ЛЭ каждого образца сыворотки проводят 3 раза, после чего рассчитывают среднее арифметическое значение активности ЛЭ.

II. Определение активности α1-ПИ. Спектрофотометрический метод определения активности α1-ПИ в сыворотке крови основан на взаимодействии этого ингибитора с трипсином при использовании в качестве субстрата N-α-бензоил-L-аргининэтилового эфира (БАЭЭ): α1-ПИ сыворотки крови образует с трипсином комплекс, не расщепляющий БАЭЭ. Поэтому активность α1-ПИ определяется по степени торможения расщепления трипсином низкомолекулярного субстрата.

Ход проведения анализа.

1. Вскрывают флакон с буферным раствором, его содержимое переносят в мерный цилиндр и добавляют дистиллированную воду до отметки 100 мл.

2. Растворяют содержимое пробирки с БАЭЭ в 60 мл дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Выдерживают оба раствора в термостате при +25°С в течение не менее 15 мин.

3. Переносят раствор для разведения трипсина в пробирку с трипсином и аккуратно перемешивают покачиванием.

4. Исследуемые образцы сыворотки разводят физиологическим раствором в соотношении 1:50.

5. В кювету спектрофотометра, предварительно нагретую до +25°С, вносят 2,0 мл буферного раствора и 0,01 мл раствора трипсина, перемешивают и инкубируют в кювете в течение 5 мин при +25°С.

6. Добавляют в кювету 1,0 мл раствора субстрата, перемешивают и измеряют оптическую плотность 4 раза с интервалом в 1 мин (точно!) при длине волны 253 нм (контрольная проба).

7. Рассчитывают изменение оптической плотности контрольной пробы за 1 мин (ΔЕ/мин_{контроль}) по формуле:

ΔЕ/мин_{контроль}=ΔЕ_к/t,

где ΔЕ_к - изменение оптической плотности контрольной пробы, ед.опт. плотн., t - интервал времени между определениями, мин.

8. Затем в предварительно нагретую до +25°С кювету вносят 1,9 мл буферного раствора, 0,01 мл раствора трипсина и 0,1 мл предварительно разведенного 1:50 образца анализируемой сыворотки крови, перемешивают и инкубируют в кювете в течение 5 мин при +25°С.

9. Добавляют в кювету 1,0 мл раствора субстрата, перемешивают и измеряют оптическую плотность 4 раза с интервалом в 1 мин (точно!) при длине волны 253 нм (исследуемая проба).

10. Рассчитывают изменение оптической плотности пробы за 1 мин по формуле: ΔЕ/мин_проба=ΔE_n/t,

где ΔE_n - изменение оптической плотности исследуемой пробы сыворотки крови, ед.опт. плотн.; t - интервал времени между определениями, мин.

11. Вычисляют разность изменения оптической плотности контрольной и исследуемой пробы (ΔЕ) по формуле:

ΔЕ=ΔЕ/мин_{контроль}-ΔЕ/мин_проба;

активность α1-ПИ в исследуемой пробе определяют по формуле:

А=ΔЕ×F,

где А - активность α1-ПИ, ИЕ/мл; ΔЕ - разность изменения оптической плотности контрольной и исследуемой пробы, ед.опт. плотн.; F - фактор пересчета.

III. Определение содержания аАТ к нейроантигенам.

В качестве антигенов нервной ткани можно использовать ОБМ, S100, GFAP и ФРН. Возможно использование нескольких из указанных белков в любой комбинации или других нейроантигенов. В качестве антигенов для определения аАТ1 можно брать их самих, а также их иммунохимические аналоги (например, F(ab)₂-фрагменты соответствующих антиидиотипических антител). Для определения аАТ2 в качестве антигенов используют F(ab)₂-фрагменты антиидиотипических антител с направленностью к тем антигенам, которые использовались для определения аАТ1.

При проведении анализа можно не проводить определение аАТ2 к антигенам нервной ткани, однако это может несколько снизить точность полученных результатов.

Ход проведения анализа

1. Растворы используемых в работе антигенов, диализованные против карбонатного буфера, pH 8,5-9,8, вносят в отдельные лунки стандартных 96-луночных плоскодонных планшетов для иммуноферментного анализа. Затем планшеты инкубируют 12-18 ч при +2…+4°С.

2. Удаляют (стряхиванием) из лунок растворы с несвязавшимися компонентами и (без дополнительной отмывки) заливают в них блокирующий буфер (например, 0.5% раствор желатина на 0.15 М NaCl). Инкубируют 1 ч при 37°С.

3. Отмывают планшеты отмывочным буфером (с 0,05% твин-20).

4. Вносят на планшеты образцы тестируемых и эталонной сывороток в разведении 1:200 на отмывочном буфере. Инкубируют 12-18 ч при +4°С.

5. Отмывают планшеты отмывочным буфером.

6. Проявление реакции осуществляют следующим образом. Раствор конъюгата пероксидазы хрена (или иного фермента) с антивидовыми антителами к IgG (или к IgG и IgM) человека вносят во все лунки планшета. Затем планшеты инкубируют 60-90 мин при 37°С или 12-16 ч при +2…+4°С, после чего коньюгат удаляют, а планшеты отмывают отмывочным буфером. Сразу после этого в лунки вносят раствор субстрата (например, 0.01-0.05% о-фенилендиамина с 0.001-0.005% перекиси водовода на 0.01-0.05 М цитрат-фосфатном буфере в случае применения пероксидазных конъюгатов). Инкубируют планшеты в темноте 10-20 мин при комнатной температуре.

7. По достижении оптимального уровня окрашивания реакцию останавливают добавлением 0.2-0.4 М серной кислоты.

8. Интенсивность окрашивания оценивают с помощью ридера для иммуноферментного анализа любой модели.

9. Обрабатывают полученные данные.

а) Из трех дублирующих друг друга значений результатов реакции эталонной и тестируемых образцов сыворотки выбирают среднее.

б) Рассчитывают относительную интенсивность реакции с компонентами тест-системы исследуемых сывороток по отношению к реакции эталонной сыворотки (в процентах) по полученным значениям оптической плотности лунок. Рассчитывают коэффициент I, представляющий собою отношение аАТ1/аАТ2. Коэффициент I рассчитывают для каждой пары аАТ1-аАТ2.

В качестве эталонной сыворотки используют пулированную сыворотку здоровых доноров в возрасте от 18 до 40 лет. Эмпирически были установлены следующие нормативы для различных возрастных групп:

Возраст	Уровни аАТ1 и аАТ2 в норме (в процентах относительно реакции эталонной сыворотки)
до 2 мес	от 50 до 90
от 2 мес до 1 года	от 60 до 100
от 1 года до 3 лет	от 65 до 115
от 3 до 16 лет	от 70 до 125
от 16 до 25 лет	от 75 до 130
Значения коэффициента I для всех возрастных групп в норме составляют 0,7-1,3.

IV. Интерпретация полученных данных.

Активность ЛЭ и α1-ПИ сыворотки крови отражают степень активации врожденного иммунитета, а также состояние антипротеолитического (компенсаторного потенциала). У детей с текущим деструктивным процессом в мозге, индуцированным ППНС, имеет место повышение активности ЛЭ по сравнению с контролем, коррелирующее с тяжестью клинической симптоматики. Параллельное увеличение, по сравнению с контролем, активности α1-ПИ, направленное на ограничение деструктивных реакций, характеризует сохранность антипротеолитического потенциала. Сниженная, по сравнению с контролем, активность α1-ПИ, является неблагоприятным прогностическим фактором в плане дальнейшего развертывания деструктивного процесса.

Понижение уровня аАТ к антигенам нервной ткани соответствует поражениям мозга легкой и/или средней степени тяжести. При таких патологических состояниях связывание и элиминация поступающих из мозга в кровь нейроантигенов происходит за счет пула естественных (регуляторных) аАТ. Повышение уровня аАТ по сравнению с контролем свидетельствует о запуске специфических аутоиммунных реакций, которые сопровождают наиболее тяжелые поражения нервной системы.

Таким образом, комплексное определение вышеперечисленных показателей иммунитета позволяет выявить наличие патологического деструктивного процесса в ткани мозга и уточнить его тяжесть, а также выраженность компенсаторного потенциала.

По совокупности иммунологических показателей могут быть выделены следующие основные группы образцов сыворотки:

Таблица оценки степени тяжести ППНС ("Таблица степени тяжести")
Активность ЛЭ нмоль/(мин·мл)	Активность α1-ПИ ИЕ/мл	Уровни аАТ1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани	Заключение
105-200	25-35	В норме	Признаки последствий ППНС отсутствуют. Аналогичные показатели могут быть у детей со сформированным дефектом нервной системы, у которых отсутствует текущий деструктивный процесс в мозге.
201-250	Выше 35	В норме или ниже нормы	Текущий деструктивный процесс в ткани мозга легкой степени тяжести с выраженным компенсаторным потенциалом

251-300	Выше 35	В норме или ниже нормы	Текущий деструктивный процесс в ткани мозга средней степени тяжести с выраженным компенсаторным потенциалом
251-300	Ниже 25	В норме или ниже нормы	Текущий деструктивный процесс в ткани мозга средней степени тяжести с истощенным компенсаторным потенциалом, что является неблагоприятным прогностическим фактором в плане дальнейшего утяжеления процесса
Выше 300	35-45	Выше нормы	Текущий деструктивный процесс в ткани мозга тяжелой степени с недостаточно выраженным компенсаторным потенциалом
Выше 300	Ниже 35	Выше нормы	Текущий деструктивный процесс в ткани мозга тяжелой степени с истощенным компенсаторным потенциалом, что является неблагоприятным прогностическим фактором в плане относительной компенсации нарушений развития ребенка
Примечание. Повышение коэффициента I в тех случаях, когда наблюдается повышение уровней аАТ к нейроантигенам, свидетельствует о более тяжелом деструктивном процессе в ткани мозга.

Исследование следует проводить не ранее, чем через 2-3 недели после перенесенного острого инфекционного заболевания для исключения ложноположительных результатов.

Технико-экономическая и социальная значимость

Использование предлагаемого способа позволяет выявить индуцированный ППНС деструктивный процесс на ранних, часто доклинических этапах, что может способствовать своевременному назначению адекватных способов терапии и уменьшению заболеваемости тяжелыми формами патологии нервной системы у детей.

С помощью предлагаемого способа может быть определена степень тяжести деструктивного процесса в мозге ребенка, а также выраженность компенсаторного потенциала, что способствует оптимизации терапевтических мероприятий, в том числе лекарственной терапии.

Предложенный способ позволяет проводить мониторинг состояния нервной системы ребенка, объективно оценивать эффективность терапии.

При наличии деструктивного процесса в ткани мозга использование предлагаемого способа позволяет оптимизировать сроки вакцинации больных детей, которую целесообразно проводить в тот период, когда последствия ППНС указанным способом не обнаруживаются или выявляемые изменения незначительны.

Примеры использования изобретения

Пример 1.

Пациент К., возраст 5 мес. При первом обращении к неврологу в возрасте 1 мес наблюдались срыгивание, вздрагивание. Клиническое обследование: голову удерживает нетвердо, взгляд не фиксирует. Безусловные рефлексы нечеткие, проприоцептивные рефлексы R=S. Диагноз: синдром мышечной дистонии ишемического генеза. Лабораторное обследование «Нейротест»: активность ЛЭ 229 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 36 ИЕ/мл, уровни aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани 40-45% относительно эталонной сыворотки, соответствующие коэффициенты аАТ1/аАТ2 0,8-1,1. Результаты анализа соответствуют текущему деструктивному процессу в ткани мозга легкой степени тяжести с выраженным компенсаторным потенциалом.

При повторном обследовании через 4 мес выявлена положительная динамика выявленных неврологических нарушений: относительная нормализация тонуса мышц, твердое удержание головы, ребенок тянется к игрушкам и удерживает их. Остается повышенная реакция на звуковые раздражители. Повторное лабораторное обследование «Нейротест»: активность ЛЭ 200 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 27 ИЕ/мл, уровни aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани - в пределах нормальных значений, соответствующие коэффициенты аАТ1/аАТ2 0,8-1,1. Результаты анализа также свидетельствуют о затухании деструктивного процесса в мозге и соответствуют контрольным показателям.

Пример 2.

Пациент Е., 1 год. При первом обращении к неврологу в 3 мес отмечались признаки задержки психомоторного развития: мышечный гипертонус, повышенная реакция на звуковые раздражители, задержка редукции поискового, хоботкового, сосательного, хватательного рефлексов Моро и Бабкина, нетвердое удержание головы, захвата и удержания игрушки нет, комплекс оживления сформирован недостаточно. Диагноз: задержка психомоторного развития. Лабораторное обследование: активность ЛЭ 280 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 48 ИЕ/мл, уровни aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани 40-50% относительно эталонной сыворотки, соответствующие коэффициенты аАТ1/аАТ2 0,8-1,1. Результаты анализа соответствуют текущему деструктивному процессу в ткани мозга средней степени тяжести с выраженным компенсаторным потенциалом.

При повторном обследовании через 9 мес выявлена в целом положительная динамика отмеченных неврологических нарушений: относительная нормализация тонуса мышц, ребенок самостоятельно сидит, ползает, но не ходит, недостаточное развитие мелкой моторики, отмечается общая моторная неловкость, недостаточное развитие эмоционального резонанса. Остается повышенная реакция на звуковые раздражители, нарушение суточного ритма настроения. Повторное лабораторное обследование «Нейротест»: активность ЛЭ 220 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 36 ИЕ/мл, уровни aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани - в пределах нормальных значений, соответствующие коэффициенты аАТ1/аАТ2 0,8-1,1. Результаты анализа свидетельствуют об относительном улучшении определяемых показателей по сравнению с первым обследованием, однако деструктивный процесс в мозге полностью не прекратился и квалифицируется как процесс легкой степени тяжести.

Пример 3.

Пациент Д., 4 мес. При первом обращении к неврологу в возрасте 2 мес - тяжелые неврологические нарушения: задержка редукции безусловных рефлексов, нарушение сосательного рефлекса, гипертонус мышц, гиперэргическая реакция на звуки, спонтанный рефлекс Моро, отсутствие комплекса оживления, зрительно-моторной координации. Диагноз: задержка психомоторного развития, органическое поражение мозга. Лабораторное обследование: активность ЛЭ 320 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 35 ИЕ/мл, уровни aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани 110-120% относительно эталонной сыворотки, соответствующие коэффициенты аАТ1/аАТ2 1,3-1,5. Результаты анализа соответствуют текущему деструктивному процессу в ткани мозга тяжелой степени тяжести с недостаточно выраженным компенсаторным потенциалом.

При повторном клиническом обследовании через 2 мес - незначительная динамика выявленных нарушений: остается нарушение мышечного тонуса и гиперэргическая реакция на звуки, ребенок не удерживает голову, комплекс оживления выражен недостаточно, на игрушки не реагирует. Повторное лабораторное обследование: активность ЛЭ 300 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 25 ИЕ/мл, уровни aAT1 и аАТ2 к антигенам нервной ткани 100-125% относительно эталонной сыворотки, соответствующие коэффициенты аАТ1/аАТ2 1,3-1,5. Результаты анализа соответствуют текущему деструктивному процессу в ткани мозга тяжелой степени тяжести с истощенным компенсаторным потенциалом.

Пример 4.

Пациент В., 8 мес. Синдром вегетативной дисфункции: длительное засыпание, поверхностный сон с частыми просыпаниями, диспептические расстройства, слабость сосания. Задержка моторного развития: голову стал удерживать к 4 мес, переворачиваться в 7 мес. Недостаточное развитие мелкой моторики. Мимические нарушения: гипомания, запаздывание формирования улыбки. Лабораторное обследование: активность ЛЭ 260 нмоль/(мин·мл), активность α1-ПИ 45 ИЕ/мл, уровни aAT1 к антигенам нервной ткани 40-50% относительно эталонной сыворотки. Результаты анализа соответствуют текущему деструктивному процессу в ткани мозга средней степени тяжести с выраженным компенсаторным потенциалом.

1. Способ лабораторного выявления последствий перинатальных поражений центральной нервной системы и степени их тяжести у детей, включающий забор крови, получение сыворотки, определение уровня сывороточных аутоантител к антигенам нервной ткани аАТ1 и аАТ2 и их соотношения (коэффициент I), определение активности лейкоцитарной эластазы (ЛЭ), активности α1-протеиназного ингибитора (α1-ПИ) и
- при выявлении активности ЛЭ 201-250 нмоль/(мин·мл) и при уровне аАТ1 и аАТ2 ниже нормы диагностируют деструктивный процесс в ткани мозга легкой степени тяжести;
- при выявлении активности ЛЭ 251-300 нмоль/(мин·мл), активности α1-ПИ выше 35 ИЕ/мл, и при уровне аАТ1 и аАТ2 ниже нормы диагностируют деструктивный процесс в ткани мозга средней степени тяжести с выраженным компенсаторным потенциалом;
- при выявлении активности ЛЭ 251-300 нмоль/(мин·мл), активности α1-ПИ ниже 25 ИЕ/мл и при уровне аАТ1 и аАТ2 ниже нормы диагностируют деструктивный процесс в ткани мозга средней степени тяжести с истощенным компенсаторным потенциалом;
- при выявлении активности ЛЭ выше 300 нмоль/(мин·мл), активности α1-ПИ от 35 до 45 ИЕ/мл и при уровне аАТ1 и аАТ2 выше нормы диагностируют деструктивный процесс в ткани мозга тяжелой степени с недостаточно выраженным компенсаторным потенциалом;
- при выявлении активности ЛЭ выше 300 нмоль/(мин·мл), активности α1-ПИ ниже 35 ИЕ/мл и при уровне аАТ1 и аАТ2 выше нормы диагностируют деструктивный процесс в ткани мозга тяжелой степени с истощенным компенсаторным потенциалом;
- при повышении коэффициента I выше 1,3 судят о более тяжелом деструктивном процессе в ткани мозга.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве антигенов к нервной ткани используют основной белок миелина (ОБМ), S100, GFAP и фактор роста нервов (ФРН).