Новые антитела к igf-ir и их применение

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Описано антитело или один из его функциональных фрагментов, имеющее высокое сродство к рецептору человеческого инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR) и ингибирующее связывание IGF1 с IGF-IR и связывание IGF2 с IGF-IR. Представлена гибридома, продуцирующая описанное антитело. Изобретение также включает применение антитела в качестве лекарственного средства для профилактического и/или терапевтического лечения рака, при котором происходит оверэкспрессия IGF-IR, стимулируемая или посредством IGF-1, и/или посредством IGF-2, или любой другой патологии, связанной с оверэкспрессией указанного рецептора, а также в способах или в наборах для диагностики заболеваний, связанных с оверэкспрессией рецептора IGF-IR и/или гибридного рецептора IGF-1/Инсулин. Изобретение позволяет получать антитело, которое специфически с высоким сродством распознает IGF-IR и которое также ингибирует не только связывание IGF1 с IGF-IR, но также и связывание IGF2 с IGF-IR. 16 н. и 35 з.п. ф-лы, 11 ил., 4 табл.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Изолированное антитело или один из его функциональных фрагментов, имеющее высокое сродство к рецептору человеческого инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR) и ингибирующее связывание IGFI с IGF-IR и связывание IGF2 с IGF-IR, отличающееся тем, что оно включает тяжелую цепь, включающую три CDR с последовательностями SEQ ID Nos.2, 4 и 6, и легкую цепь, включающую три CDR с последовательностями SEQ ID Nos.1, 3 и 5.

2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что указанный функциональный фрагмент выбирают из фрагментов Fv, Fab, F(ab')2, Fab', scFv, scFv-Fc, диател или пегилированных фрагментов.

3. Мышиная гибридома, способная секретировать антитело по п.1, депонированная в CNCM, Институт Пастера, Париж, 23 июня 2005 года под номером 1-3466.

4. Антитело или один из его функциональных фрагментов, имеющее высокое сродство к рецептору человеческого инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR) и ингибирующее связывание IGFI с IGF-IR и связывание IGF2 с IGF-IR, отличающееся тем, что указанное антитело секретируется гибридомой по п.3.

5. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, отличающееся тем, что указанное антитело включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 7, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 8.

6. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.5, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой химерное антитело, и, кроме того, включает константные области легкой цепи и тяжелой цепи антитела видов, гетерологичных по отношению к мыши.

7. Химерное антитело или один из его функциональных фрагментов по п.6, отличающееся тем, что указанные гетерологичные виды представляют собой человека.

8. Химерное антитело или один из его функциональных фрагментов по п.5, отличающееся тем, что константные области легкой цепи и тяжелой цепи из антитела человека представляют собой области каппа- и гамма-1, гамма-2 или гамма-4 соответственно.

9. Гуманизированное антитело или один из его функциональных фрагментов по п.7, отличающееся тем, что оно включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 17, или тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No.18.

10. Гуманизированное антитело или один из его функциональных фрагментов по п.9, отличающееся тем, что оно включает легкую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No. 17, и тяжелую цепь, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID No.18.

11. Изолированная нуклеиновая кислота, отличающаяся тем, что ее выбирают из следующих нуклеиновых кислот:
a) нуклеиновая кислота, ДНК или РНК, кодирующая антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, имеющее высокое сродство к рецептору человеческого инсулиноподобного фактора роста (IGF-IR) и ингибирующее связывание IGFI с IGF-IR и связывание IGF2 с IGF-IR;
b) нуклеиновая кислота, комплементарная нуклеиновой кислоте, которая была определена в пункте а);
c) нуклеиновая кислота, включающая три CDR с последовательностями SEQ ID No.9, 10 и 11, и/или три CDR с последовательностями SEQ ID No. 12, 13 и 14;
d) нуклеиновая кислота, включающая нуклеиновую кислоту легкой цепи с SEQ ID No. 15 и/или нуклеиновую кислоту тяжелой цепи с SEQ ID No. 16; и
e) нуклеиновая кислота, включающая нуклеиновую кислоту легкой цепи с SEQ ID No. 19 и/или нуклеиновую кислоту тяжелой цепи с SEQ ID No.20.

12. Экспрессирующий вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.11.

13. Клетка-хозяин, включающая вектор по п.12.

14. Способ получения антитела по п.1 или одного из его функциональных фрагментов, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:
a) культивирование в среде и подходящие условия культивирования клетки по п.13; и
b) извлечение указанных антител или одного из их функциональных фрагментов, полученного таким образом, начиная с культуральной среды или с указанных культивируемых клеток.

15. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, отличающееся тем, что оно, кроме того, способно к специфическому связыванию с человеческим рецептором, относящимся к семейству тирозинкиназ, и/или способно к ингибированию тирозинкиназной активности таких рецепторов.

16. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой биспецифическое антитело, включающее второй мотив, способный к специфическому ингибированию связывания EGF с человеческим рецептором эпидермального фактора роста (EGFR) и/или к ингибированию тирозинкиназной активности указанного EGFR.

17. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.16, отличающееся тем, что указанный второй мотив антитела к EGFR происходит из мышиного моноклонального антитела 225, его химерного производного С225 или любого гуманизированного антитела, полученного из антитела 225.

18. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой биспецифическое антитело, включающее второй мотив, способный к специфическому ингибированию активности, регулируемой рецептором HEA2/neu, и/или ингибированию тирозинкиназной активности указанного рецептора HEA2/neu.

19. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.18, отличающееся тем, что указанный второй мотив антитела к HEA2/neu был получен из мышиного моноклонального антитела 4D5 или 2С4 или из гуманизированного антитела Трастузумаба или Пертузумаба.

20. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой биспецифическое антитело, включающее второй мотив, способный к специфическому ингибированию связывания фактора роста гепатоцитов (HGF) с рецептором сМЕТ и/или ингибированию тирозинкиназной активности указанного рецептора сМЕТ.

21. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой биспецифическое антитело, включающее второй мотив, способный к специфическому ингибированию связывания протеина, стимулирующего макрофаги (MSP), на рецепторе RON и/или ингибированию тирозинкиназной активности указанного рецептора RON.

22. Антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1 в качестве лекарственного средства.

23. Композиция, ингибирующая связывание IGFI с IGF-IR и связывание IGF2 с IGF-IR, включающая в качестве активного действующего начала соединение, состоящее из антитела или одного из его фрагментов по п.1.

24. Композиция, ингибирующая связывание IGFI с IGF-IR и связывание IGF2 с IGF-IR по п.23, отличающаяся тем, что она включает, по меньшей мере, второе соединение, которое выбирают из соединений, способных к специфическому ингибированию тирозинкиназной активности IGF-IR, EGFR, HER2/neu, cMET и/или RON.

25. Композиция по п.24, отличающаяся тем, что указанное второе соединение выбирают из изолированных антител к EGFR, IGF-IR, HER2/neu, cMET и/или RON или из их функциональных фрагментов, способных к ингибированию пролиферативной, и/или антиапоптической, и/или ангиогенной активности, и/или активности индуктора распространения метастазов, опосредуемой указанным рецептором (указанными рецепторами).

26. Композиция по п.23, отличающаяся тем, что она включает в качестве комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения, по меньшей мере, ингибитор тирозинкиназной активности IR, IGF-IR, EGFR, HER2/neu, cMET и/или RON.

27. Композиция по п.26, отличающаяся тем, что указанный ингибитор тирозинкиназной активности выбирают из группы, состоящей из производных природных соединений, дианилинофталимидов, пиразоло- или пирролопиридопиримидинов или других хиназолинов.

28. Композиция по п.23, отличающаяся тем, что она, кроме того, включает в качестве комбинированного продукта для одновременного, раздельного или последовательного применения цитотоксическое/цитостатическое средство.

29. Композиция по п.28, отличающаяся тем, что указанное цитотоксическое/цитостатическое средство выбирают из веществ, взаимодействующих с ДНК, антиметаболитами, ингибиторами топоизомеразы I или II или ингибиторами синтеза веретена, или стабилизирующими агентами, или любым другим веществом, которое может быть применено в химиотерапии.

30. Композиция по п.28, отличающаяся тем, что указанное цитотоксическое/цитостатическое средство химически связано, по меньшей мере, с одним из элементов указанной композиции для одновременного применения.

31. Композиция по п.28, отличающаяся тем, что указанное цитотоксическое/цитостатическое средство выбирают из ингибитора синтеза веретена или стабилизирующих веществ, предпочтительно винорелбина, винфлунина или винкристина.

32. Композиция по п.28, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, одно из указанных антител или один из его функциональных фрагментов конъюгированы с клеточным токсином и/или радиоактивным элементом.

33. Композиция по п.28 в качестве лекарственного средства.

34. Применение антитела или одного из его функциональных фрагментов по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или для лечения заболеваний, связанных с суперэкспрессией и/или аномальной активацией IGF- IR, и/или связанных с гиперактивацией пути передачи сигнала, опосредуемого взаимодействием IGF1 или IGF2 с IGF-IR.

35. Применение по п.34, отличающееся тем, что введение указанного лекарственного средства не вызывает или вызывает лишь в незначительной степени вторичные эффекты, связанные с ингибированием рецептора инсулина IR.

36. Применение по п.34 для получения лекарственного средства, предназначенного для ингибирования трансформации нормальных клеток в клетки с признаками опухоли и/или для ингибирования роста и/или пролиферации клеток опухоли, предпочтительно IGF-зависимых, по меньшей мере, IGF2-зависимых клеток.

37. Применение по п.34 для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или для лечения рака.

38. Применение по п.37, отличающееся тем, что указанный рак представляет собой рак, который выбирают из рака предстательной железы, остеосаркомы, рака легких, рака молочной железы, рака эндометрия, множественной миеломы, рака яичников или рака толстой кишки.

39. Применение по п.38, отличающееся тем, что указанный рак представляет собой рак толстой кишки.

40. Применение по п.34 для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или для лечения псориаза или атеросклероза.

41. Способ диагностики in vitro патологического состояния, характеризуемого аберрантной экспрессией IGF-IR по сравнению с нормой, включающий контакт биологического образца, в котором предполагают присутствие IGF-IR, с антителом по п.1, в условиях, благоприятных для образования комплекса IGF-IR/антитело, и обнаружение указанного комплекса в качестве свидетельства присутствия указанного IGF-IR в указанном образце.

42. Способ по п.41, в котором указанное антитело помечено радиоактивной меткой для возможности его детектирования.

43. Способ по п.41, в котором аберрантная экспрессия IGF-IR представляет собой суперэкспрессию IGF-IR.

44. Способ по п.41, в котором аберрантная экспрессия IGF-IR представляет собой недостаточную экспрессию IGF-IR.

45. Способ диагностики для предсказания онкогенного потенциала образца клеток предстательной железы, включающий:
(а) предоставление образца ткани легкого или ткани молочной железы человека и
(b) определение в образце присутствия IGF-IR, указанная стадия включает контакт указанного образца с антителом по п.1, в условиях, способствующих образованию комплекса IGF-IR/антитело, в котором присутствие указанного комплекса свидетельствует об онкогенном потенциале указанных клеток в указанной ткани.

46. Способ по п.45, в котором присутствие указанного комплекса служит признаком того, что пациент подвержен повышенному риску развития или возникновения патологического нарушения, которое характеризуется суперэкспрессией указанного IGF-IR.

47. Способ дальнейшего совершенствования терапевтического режима, предназначенного для облегчения патологического нарушения, характеризуемого аномальной экспрессией IGF-IR, включающий:
(a) анализ образца, полученного от субъекта, для определения уровня IGF-IR в начальный момент, уровень IGF-IR определяют с помощью антитела или одного из его функциональных фрагментов по п.1;
(b) анализ указанного образца во второй момент времени; и
(c) сравнение указанного уровня в указанный второй момент времени с уровнем, определенным в пункте (а), для обнаружения эффекта указанного терапевтического режима, где снижение уровня IGF-IR в указанном образце рассматривают как признак регрессии указанного патологического нарушения у указанного пациента или увеличение уровня IGF-IR рассматривают как признак прогрессирования указанного патологического нарушения у указанного пациента.

48. Набор или комплект, необходимый для осуществления способа диагностики заболеваний, вызванных суперэкспрессией или недостаточной экспрессией IGF-IR, или для осуществления способа обнаружения и/или количественного определения суперэкспрессии или недостаточной экспрессии IGF-IR в биологическом образце, предпочтительно суперэкспрессии указанного рецептора, отличающийся тем, что указанный набор или комплект включает следующие элементы:
a) антитело или один из его функциональных фрагментов по п.1;
b) реагенты для создания среды, благоприятной для иммунологической реакции;
c) реагенты, позволяющие продемонстрировать присутствие комплексов IGF-IR/антитело, получаемых с помощью иммунологической реакции.

49. Применение антитела или одного из его функциональных фрагментов по п.1 для получения лекарственного средства, предназначенного для специфической направленной доставки биологически активного соединения к клеткам, экспрессирующим или суперэкспрессирующим IGF-IR.

50. Способ регулирования активности IGF-IR в IGF-IR-чувствительных клетках млекопитающих, включающий контакт клеток с антителом по п.1 в условиях, достаточных для регулирования активности указанного IGF-IR относительно IGF-IR-нечувствительных клеток.

51. Способ снижения активности IGF-IR в IGF-IR-чувствительных клетках млекопитающих относительно нормальных клеток, включающий контакт клеток с антителом по п.1.