Способ лечения эндометритов бактериально-микозной этиологии у коров
Владельцы патента RU 2436570:
Турченко Алексей Николаевич (RU)
Дегтярева Светлана Сергеевна (RU)
Коба Игорь Сергеевич (RU)
Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт (ГНУ Краснодарский НИВИ) (RU)
Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает использование четвертичного аммонийного соединения. При этом в качестве четвертичного аммонийного соединения используют септабик. Предварительно готовят водный раствор септабика при соотношении воды и препарата 100:1. В полученный раствор добавляют бриллиантовый зеленый в соотношении 200:1. Полученную смесь вводят корове внутриматочно ежедневно, однократно в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней. Способ позволяет сократить срок лечения в среднем на 3,2 дня, повысить терапевтический эффект на 10%, снизить количество дней бесплодия на 16,1 дней по сравнению с известными способами. 1 з.п. ф-лы, 5 табл.
Предлагаемое изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарной гинекологии, в частности к лечению острого гнойно-катарального эндометрита бактериально-микозной этиологии у крупного рогатого скота.
Известны различные способы лечения острого гнойно-катарального эндометрита бактериально-микозной этиологии у коров, основанные на применении антибиотиков, сульфаниламидов, препаратов нитрофуранового ряда (В.П.Гончаров, В.А.Карпов Профилактика и лечение гинекологических заболеваний у коров. - М.: Россельхозиздат. - 1981. С.104-111.), действующих бактерицидно и бактериостатически. Однако применение этих препаратов не всегда позволяет достигать желаемого терапевтического эффекта из-за устойчивости микроорганизмов и грибов к указанным препаратам, применения неадекватных доз, угнетения иммунной системы и ряда других причин. Кроме того, длительное применение вышеуказанных препаратов приводит к появлению резистентных штаммов микроорганизмов. В частности, известен способ лечения эндометритов у коров препаратом (аналог) «лозеваль» - представляющий собой масленичную жидкость, которая имеет два активно действующих начала - это морфолиний и этоний. Препарат получают путем последовательного растворения двух активнодействующих веществ в растворителе диметилсульфоксида (В.П.Мирошнеченко. Биологическая активность и применение лозеваля в ветеринарии. Диссертация на соиск. уч. степени канд. вет. наук., Краснодар 1999, с.40). Применяется в качестве антибактериального и антимикозного средства для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров в виде внутриматочных введений в дозе 100 мл один раз в сутки в течение 5-6 дней.
Недостатком этого способа является то, что он малоэффективен при эндометритах бактериально-микозной этиологии.
Известен способ, принятый за ближайший аналог, использования препарата йодинол, где йод (действующее вещество) является продуктом присоединения к поливиниловому спирту (наполнитель). Используют водный раствор, содержащий 0,1% йода, 0,3% калия йодида и 0,9% поливинилового спирта. Препарат вводят внутриматочно в дозе 50 мл с интервалом 48 часов, 5-7 введений, при различных гнойных инфекциях и микозных заболеваниях. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: ООО «Издательство Новая Волна», Т.2, с.374.
Недостатком этого способа является, что препараты йода дают низкий терапевтический эффект и длительное применение приводит к появлению резистентных штаммов микроорганизмов.
Задачи
Техническим результатом является повышение эффективности лечения и расширение спектра действия путем антибактериального и антимикозного эффекта за счет использования бисчетвертичных соединений аммония, в частности септабика и бриллианта зеленого. Срок лечения сокращается в среднем на 3,2 дня, терапевтический эффект повышается на 10% и снижается количество дней бесплодия на 16,1 дня по сравнению с препаратами-аналогами.
Сущностью изобретения является использование четвертичного аммонийного соединения, при этом корове внутриматочно вводят смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и водного раствора бриллиантового зеленого в соотношении 200:1 ежесуточно, однократно в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней. Лечебный препарат условно назван «Эндотон».
Способ получения осуществляют путем растворения септабика в дистиллированной воде в пропорции 1:100 соответственно и дальнейшем растворении в полученном растворе бриллиантового зеленого в пропорции 1:200 соответственно. Полученный препарат представляет собой раствор зеленого цвета, со специфическим запахом мыла, при встряхивании образуется пена. Водородный показатель 8,0-8,4. Массовая доля активнодействующего вещества 29-32%, золы - не более 1% (таблица 1).
| Таблица 1 | ||
| Физико-химические свойства эндотона | ||
| №/№ | Наименование показателя | Норма по НТД |
| 1 | Описание препарата | Раствор со специфическим запахом мыла |
| 2 | Прозрачность и цветность | Раствор зеленого цвета, при встряхивании образуется пена |
| 3 | Кислотность | Водородный показатель 8,0-8,4 |
| 4 | Специфическая активность | Проявляет антимикробное и антимикозное действие |
| 5 | Безвредность | LD50=2000 мг/кг. 3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76 |
Изучение стабильности препарата в процессе хранения - при комнатной температуре, в защищенном от света месте проводили, в течение 18 месяцев. Определение параметров препарата «эндотон»: внешнего вида, цвета, запаха, вкуса, концентрации водородных ионов и безвредность исследовались через каждые 3 месяца (таблица 2).
| Таблица 2 | ||||||||
| Результаты изучения стабильности препарата эндотон | ||||||||
| Показатель | Характеристика (норма) | Исследовано на месяце хранения | ||||||
| 1 | 3 | 6 | 9 | 12 | 15 | 18 | ||
| Внешний вид и цвет | Раствор зеленого цвета, при встряхивании образуется пена | + | + | + | + | + | + | + |
| Запах | Раствор со специфическим запахом мыла. | + | + | + | + | + | + | + |
| Вкус | Мыла | + | + | + | + | + | + | + |
| Концентрация водородных ионов, рН | 8,0-8,4 | 8,1 | 8,1 | 8,1 | 8,1 | 8,0 | 8,0 | 8,0 |
| Безвредность в тест-дозе на одну мышь, мл | 0,2 | - | - | - | - | - | - | - |
На протяжении всего периода исследования эндотон сохранял цвет и внешний вид - зеленый раствор, при встряхивании которого образовывалась пена; специфический запах мыла; безвредность определяли в тест-дозе 0,2 мл на одну мышь; концентрацию ионов водорода рН была в пределах 8,0-8,4.
Проведенными исследованиями установлено, что все показатели препарата эндотон во все месяцы исследований соответствовали первоначальным показателям.
Антимикробные свойства препарата проверяли методом диффузии в агар с использованием лунок и последовательных серийных разведений в жидкой питательной среде.
При определении бактерицидной и фунгицидной активности бромацида в жидкой питательной среде делали его дробные (кратные) разведения в МПБ и среде Сабуро. В бульон, содержащий препарат в убывающей концентрации от 5000 до 39,1 мкг/мл (разведение от 1:2 до 1:256), вносились тест-культуры. Микробная нагрузка составляла 1 млрд микробных тел в 1 мл. Пробирки с питательной средой инкубировали в термостате в течение 18-20 часов при температуре 37°С. Активность препарата определяли по интенсивности ингибиции роста и гибели микроорганизмов. За минимальную бактерицидную (МБцК) и бактериостатическую (МБсК) активность принимали наименьшее количество препарата, задерживающего рост микроорганизмов или вызывающего их гибель.
Эндотон обладает выраженным бактерицидным и бактериостатическим действием в концентрации 312,5 мкг/мл по отношению к культуре Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumonia, а также в концентрации 625 мкг/мл по отношению к культуре Shigella dysenteriae. МБцК для Escherihia coli и Proteus vulgaris составила 625 мкг/мл, а МБсК - 312,5 мкг/мл (таблица 3).
Чувствительность выявленной микрофлоры в матке коров к антибиотикам устанавливали in vitro при помощи следующих методов: диффузии в агар с использованием лунок и методом дисков. В качестве тест-культур использовали суточные полевые очищенные изоляты микроорганизмов, выделенные от коров острым гнойно-катаральным эндометритом.
Результаты проведенных исследований отражены в таблице 4.
Анализируя полученные результаты исследований по определению чувствительности условно-патогенной микрофлоры к лекарственным препаратам установлено, что наиболее активно препятствует росту микрофлоры такие антибиотики, как цефазолин, абактан, ципрофлоксацин, энрофлоксацин, левомецитин, энроцид; из нитрофурановых препаратов - фурадонин, фурагин; из четвертичных аммонийных соединений - эндотон, лозеваль; из комплексных препаратов - йодинол, йодовет, жироформ-БМ, энроцид. Антимикозным действием обладали йодинол, эндотон, лозеваль, жироформ-БМ.
Рассмотрев чувствительность некоторых видов микрофлоры к лекарственным препаратам, можно сказать, что St.aureus чувствителен к таким препаратам, как энрофлоксацин, эндотон, цефазолин, фурагин, абактан, ципрофлоксацин, жироформ-БМ, энроцид (31,6 мм-20,3 мм); Str.pyogenes - цефазолин, энрофлоксацин, эндотон (24,7 мм-20,3); Е.coli - энрофлоксацин, лозеваль, абактан, левомецитин, ципрофлоксацин, фурадонин, ампициллин, цефазолин, йодовет, жироформ-БМ (27,8 мм-21,4 мм); Р.vulgaris - энрофлоксацин, абактан, эндотон, фурадонин, йодовет (25,3 мм-20,8 мм); K.pneumoniae - энрофлоксацин, ципрофлоксацин, абактан, эндотон, жироформ-БМ, энроцид (25,4 мм-18,3 мм).
| Таблица 4 | ||||||||
| Определение чувствительности микроорганизмов к различным лекарственным препаратам | ||||||||
| Препараты | Зона задержки роста в мм | |||||||
| St. aureus | Str. pyogenes | E. coli | P. vulgaris | K. pneumoniae | Candida albicans | Aspergillus fumigatus | Mucor racemosus | |
| Левомецитин | 15,3 | 14,6 | 24,3 | - | 12,7 | - | - | - |
| Ципрофлоксацин | 21,4 | 18,7 | 22,5 | 14,7 | 24,6 | - | - | - |
| Канамицин | 18,2 | 8,9 | 14,1 | 16,8 | 12,7 | - | - | - |
| Эритромицин | 15,7 | - | 9,6 | - | 4,3 | - | - | - |
| Ампициллин | 17,2 | - | 22,8 | - | - | - | - | - |
| Цефазолин | 24,1 | 24,7 | 21,6 | - | 14,6 | - | - | - |
| Стрептомицин | 20,0 | 10,7 | 17,7 | 10,1 | - | - | - | - |
| Гентамицин | 20,5 | 13,4 | 14,2 | 15,6 | 14,3 | - | - | - |
| Абактан | 22,4 | 18,7 | 25,4 | 24,8 | 23,6 | - | - | - |
| Фурагин | 22,7 | 20,2 | 19,3 | 11,4 | 15,7 | - | - | - |
| Фурадонин | 14,0 | 14,6 | 22,3 | 20,8 | 19,9 | - | - | - |
| Фуразолидон | 12,4 | 11,6 | 16,1 | 19,8 | 12,3 | - | - | - |
| Энрофлоксацин | 31,6 | 20,9 | 27,8 | 25,3 | 25,4 | - | - | - |
| Йодинол | 12,1 | 10,2 | 16,4 | 19,3 | 10,7 | 15,3 | 12,1 | 17,6 |
| Йодовет | 15,6 | 14,2 | 18,7 | 21,2 | 16,4 | 20,1 | 15,3 | 16,2 |
| Эндотон | 24,7 | 20,3 | 20,5 | 20,8 | 21,6 | 24,3 | 19,7 | 25,3 |
| Лозеваль | 20,2 | 18,6 | 25,4 | 15,5 | 14,6 | 9,3 | 10,4 | 10,3 |
| Телозинокар | 23,1 | 14,7 | 12,3 | 5,4 | 8,6 | - | - | - |
| Жироформ-БМ | 20,6 | 18,3 | 21,4 | 18,7 | 19,5 | 12,9 | 10,6 | 15,3 |
| Ихтиоловые палочки | 14,0 | 11,4 | 10,8 | 11,6 | 10,3 | |||
| Энроцид | 20,3 | 15,7 | 16,8 | 15,9 | 18,3 | - | - | - |
| Диометр | 15,7 | 14,3 | 10,2 | 14,3 | 16,7 | - | - | - |
К грибам Candida albicans проявляли антимикозное действие следующие препараты: эндотон, йодинол, йодовет, жироформ-БМ (24,3 мм - 12,9 мм); к грибам Aspergillus fumigatus - эндотон йодинол, йодовет, жироформ-БМ, лозеваль (19,7 мм - 10,4 мм); к грибам Mucor racemosus - эндотон, йодинол, йодовет, жироформ-БМ, лозеваль (25,3 мм - 10,3 мм).
Таким образом, отмечено, что энрофлоксацин, левомецитин, ципрофлоксацин, ампициллин, абактан обладали антибактериальными свойствами, а препараты эндотон, йодинол, йодовет, жироформ-БМ, лозеваль обладали как антибактериальными, так и антимикозными свойствами.
Проверка эндотона на безвредность.
В процессе проведения опыта было установлено, что после введения препарата животным в дозах 2000, 3000, 3800 мг/кг, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15-30 минут, которое затем переходило в угнетение. Через три часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя пять часов с момента введения эндотон в дозе 3800 мг/кг у животного наблюдали клинические судороги, непроизвольное мочеиспускание. Животное не отвечало на внешние раздражители и через несколько минут констатировали гибель животного.
Исходя из факта гибели подопытного животного №8, не перенесшего дозу 3800 мг/кг живой массы, и оставшегося в живых животного №6 - 2000 мг/кг живой массы, по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами.
После предварительного нахождения LD50 доза 2000 мг/кг живой массы была введена 10 крысам, подобранным по принципу пар-аналогов по полу и живой массе. С соблюдением всех условий, как в опыте по предварительному нахождению смертельной дозы. По результатам опыта установлена гибель 50% животных.
Доза 1800 мг/кг живой массы тела, не вызвавшая гибель животных, является максимально переносимой дозой препарата при его однократном пероральном введении (LD0).
Доза 2000 мг/ кг живой массы является средней смертельной дозой при однократном введении (LD50). Доза 3000 мг/кг массы тела является абсолютно смертельной LD(100).
Следовательно, препарат эндотон по классификации химических веществ, при однократном оральном пути введения относится к III классу токсичности - умеренно токсические вещества.
Терапевтическую эффективность эндотона изучали в сравнение с широко применяемыми препаратами: йодовет, лозеваль, рихометрин, фуразолидоновые палочки. Все эти препараты использовались согласно инструкции по их применению. Опыты проведены на фермах 2 хозяйств Краснодарского края.
Опыт проводили по следующей схеме: 100 коров-аналогов (по возрасту, продуктивности, породности и т.д.) с острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом разделили на 5 групп по 20 животных.
Первой группе животных вводили йодовет, второй группе животных - эндотон, животным в третьей группе - лозеваль, четвертой - рихометрин, пятой - фуразолидоновые палочки (которые предварительно растворяли в 200 мл дистиллированной воды). Препарат эндотон (смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и водного раствора бриллианта зеленого в соотношении 200:1 смесь водного раствора готовили предварительно при t 50°С) вводили в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней. Остальные препараты вводили согласно инструкции по их применению. За животными вели постоянное клиническое наблюдение до их плодотворного осеменения, учитывая срок лечения, кратность введения антимикробных препаратов и терапевтическую эффективность. Полученные результаты отражены в таблице 5.
| Таблица 5 | |||||
| Терапевтическая эффективность препаратов | |||||
| Вводимые препараты | Кол-во животных в группах | Срок лечения (дней) | Кратность введения препаратов | Терапевтическая эффективность (%) | Кол-во дней бесплодия |
| Иодовет | 20 | 11,4 | 11,4 | 80 | 127,4 |
| Эндотон | 20 | 5,4 | 5,4 | 90 | 94,5 |
| Лозеваль | 20 | 8,6 | 2,4 | 80 | 110,6 |
| Рихометрин | 20 | 14,7 | 4,6 | 70 | 119,3 |
| Фуразолидоновые палочки | 20 | 20,0 | 20,0 | 60 | 156,5 |
В результате наблюдения за животными установлено: у коров второй группы, где применяли препарат эндотон терапевтический эффект оказался наилучшим и составил 90%, в первой и третьей группах эффективность лечения находится на одном уровне 80%, однако количество дней лечения в первой группе выше на 2,8 дня, а кратность введения препарата на 9 дней, количество дней бесплодия выше на 16,8 дней по сравнению с третьей группой, где применялся лозеваль. Наиболее низкие показатели терапевтической эффективности были в четвертой и пятой группах 70% и 60%, а количество дней бесплодия составило 119,3 и 156,5 дней, соответственно.
В ходе опыта проводился постоянный клинический осмотр животных, который показал, что у коров первой группы отмечено резкое увеличение выделений гнойно-катарального экссудата из матки на 4-5 день после начала лечения, на 7-8 день лечения количество маточных выделений уменьшалось, они становились прозрачными и к 10-11 дню лечения прекращались. Во второй группе увеличение выделений гнойно-катарального экссудата регистрировали на 1-2 день лечения, а на 5-6 день выделений не регистрировалось. В третьей группе усиленное выделение экссудата отмечали в 1-3 день, постепенно количество маточных выделений уменьшалось, они становились прозрачными и к 8-9 дню выделения прекращались. В четвертой и пятой группе коров гнойно-катаральные выделения из матки были незаметными и выделялись небольшими порциями, в основном после ночного отдыха. Примесь гноя в маточной слизи регистрировали до 9-10 дня лечения. Появления чистой прозрачной, очень липкой слизи, отмечали на 10-12 день, а ее полное прекращение на 14-20 день.
При ректальном исследовании матки коров установили, что ее сократительная способность в первой и третьей группе восстанавливается на 4-5 день, во второй группе на 2-3, а в четвертой и пятой группах на 5-8 день лечения.
Пример. Нами было взято на курацию животное (корова), больное эндометритом бактериально-микозной этиологии. Для лечения использовали препарат эндотон (смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и водного раствора бриллианта зеленого в соотношении 200:1, смесь водного раствора готовили предварительно при t 50°С), который вводили внутриматочно в дозе 100 мл. ежедневно в течение 5 дней. В результате клинических исследований было установлено, что на 2 день лечения происходит увеличение выделений гнойно-катарального экссудата, а на 4 день выделения не регистрировались. При ректальном исследовании матки коровы установили, что ее сократительная способность восстановилась на 2 день, а к четвертому дню лечения матка была в тазовой полости и полностью реагировала сокращением на ректальный массаж.
Таким образом, применение препарата эндотон при лечении эндометрита бактериально-микозной этиологии уменьшает срок лечения, а также ускоряет нормализацию некоторых показателей крови. В 5-10% случаев требуется применение повторного курса лечения.
1. Способ лечения эндометритов бактериально-микозной этиологии у коров, включающий использование четвертичного аммонийного соединения, отличающийся тем, что корове внутриматочно вводят смесь водного раствора септабика в соотношении воды и препарата 100:1 и в дальнейшем растворении в полученном растворе бриллиантового зеленого в соотношении 200:1 ежесуточно, однократно в дозе 80-100 мл, в течение 5-6 дней.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что смесь водного раствора готовят предварительно при t 50°C.
