Способ получения метилового эфира о-трет-бутил-n-(n -трет-бутоксикарбонил-l-лизил)-l-треонина



Способ получения метилового эфира о-трет-бутил-n-(n -трет-бутоксикарбонил-l-лизил)-l-треонина
Способ получения метилового эфира о-трет-бутил-n-(n -трет-бутоксикарбонил-l-лизил)-l-треонина

 

C07K1/02 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2436794:

Закрытое акционерное общество "Фарм-Синтез" (RU)

Изобретение относится к области пептидной и фармацевтической химии, конкретно к способу получения защищенного метилового эфира O-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина. Сущность изобретения заключается в том, что синтез осуществляется жидкофазным методом путем конденсации пентафторфенилового эфира Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина с метиловым эфиром О-трет-бутил-L-треонина в присутствии N-метилморфолина в среде этилацетата и последующего гидрирования полученного соединения водородом в метиловом спирте с использованием гидроокиси палладия в качестве катализатора. Очистку целевого защищенного дипептида осуществляют через соль с щавелевой кислотой. Исходный пентафторфениловый эфир получают в результате реакции Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина с пентафторфенолом и используют далее без выделения. Заявленный способ позволяет получить целевой продукт с выходом более 96% и высокой степенью чистоты. Полученный защищенный дипептид может быть использован, в частности, для получения октреотида или его аналогов либо иных пептидов, содержащих фрагмент L-лизил-L-треонина.

 

Изобретение относится к области пептидной и фармацевтической химии, конкретно к способу получения метилового эфира O-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина формулы:

Этот защищенный дипептид является ключевым полупродуктом синтеза циклического октапептида октреотида, являющегося синтетическим аналогом соматостатина, обладает сходным с ним фармакологическими эффектами, но значительно большей продолжительностью действия. Октреотид взаимодействует со специфическими рецепторами соматостатина в различных тканях (в т.ч. в ЦНС и ЖКТ), подавляет патологически повышенную секрецию гормонов и пептидов, продуцируемых в гастроэнтеропанкреатической эндокринной системе.

Синтез этого дипептида в литературе не описан. Имеются данные, что он может быть получен в результате реакции метилового эфира О-трет-бутил-L-треонина с N-гидроксисукцинимидным эфиром Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина [1] и последующим снятием бензилоксикарбонильной защиты. Однако конкретная методика получения, пригодная для успешного синтеза дипептида в этом первоисточнике, отсутствует.

Задачей данного изобретения является разработка простого, пригодного для полупромышленного использования способа получения защищенного дипептида - метилового эфира O-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина.

Поставленная техническая задача достигается следующим способом получения метилового эфира O-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина жидкофазным методом, включающим:

а) получение пентафторфенилового эфира Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина взаимодействием Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина с пентафторфенолом в присутствии дициклогексилкарбодиимида и в среде этилацетата при 5-10°C

б) отделение фильтрованием дициклогексилмочевины;

в) конденсацию полученного на стадии а) пентафторфенилового эфира с метиловым эфиром O-трет-бутил-L-треонила в присутствии N-метилморфолина в среде этилацетата:

г) удаление кислых и основных примесей из реакционной массы;

д) гидрирование водородом полученного реакционного продукта в растворе метанола в присутствии катализатора гидроокиси палладия;

е) очистку полученного целевого продукта - защищенного дипептида с помощью щавелевой кислоты

ж) выделение целевого продукта с помощью бикарбоната натрия

Таким образом, сущность заявленного защищенного дипептида заключается в следующем.

Осуществляют реакцию Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина и пентафторфенола в присутствии дициклогексилкарбодиимида в среде этилацетата и температуре 5-10°C приводит к образованию пентафторфенилового эфира Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина. Раствор полученного соединения после отделения фильтрованием дициклогексилмочевины используют для реакции конденсации с метиловым эфиром O-трет-бутил-L-треонина с использованием N-метилморфолина в качестве акцептора выделяющегося пентафторфенола. После фильтрования соли пентафторфенола и N-метилморфолина реакционную массу обрабатывают, например, насыщенным раствором бикарбоната натрия (для удаления кислых примесей), 5% раствором, например, лимонной кислоты (для удаления основных примесей), органическую фазу упаривают и получают метиловый эфир O-трет-бутил-N-(Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина без дальнейшей очистки гидрируют в растворе метилового спирта с использованием гидроокиси палладия в качестве катализатора. Технический метиловый эфир O-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина для очистки переводят в оксалат, промывают его серным эфиром для удаления примесей и выделяют свободное основание (целевой продукт) с использованием бикарбоната натрия. Полученный продукт представляет собой белое кристаллическое соединение с содержанием основного вещества более 96% по анализу ВЭЖХ.

Для удаления кислых и основных примесей, а также выделения целевого продукта в способе используют традиционные вещества в синтезе пептидов.

Экспериментальная часть.

Аналитическую ВЭЖХ проводили на хроматографе фирмы Shimadzu. Колонка: Grom-Sil 12J ODS-4HE, 5 µm, 250*4,6 mm. Условия: градиент с 20% B до 40% B за 20 минут, A - вода+фосфатный буфер pH 3, B - ацетонитрил.

Описываемый способ иллюстрируется следующими примерами, не ограничивающими его.

Пример 1. Получают метиловый эфир O-трет-бутил-N-(Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина.

В 6 л 3-горлой колбе, снабженной механической мешалкой, растворяют 447 г (1,17 моль) Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина и 216 г (1,17 моль) пентафторфенола в 2 л этилацетата, охлаждают на ледяной бане до температуры 5°C, после чего прикапывают раствор 243 г (1,18 моль) дициклогексилкарбодиимида в 0,6 л этилацетата с такой скоростью, чтобы температурара не превышала 10°C. После прибавления реакционную массу перемешивают 2 часа при 10°C. Фильтруют выпавшую мочевину, промывают ее на фильтре 200 мл и объединяют промывные воды с органической фазой. Органическую фазу охлаждают до 5°C и при перемешивании прикапывают 223 г (1,18 моль) метилового эфира O-трет-бутил-L-треонина в 1,5 л этилацетата при температуре ниже 10°C. Перемешивают реакционную массу при этой же температуре 30 мин, после чего добавляют 120 г (1,19 моль) N-метилморфолина. Перемешивают 2 часа при комнатной температуре и оставляют реакционную массу при температуре 5°С на 12 часов. Кристаллическую соль фильтруют, промывают 200 мл ЭА. Объединенную органическую фазу промывают последовательно 500 мл воды, 2 раза по 500 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, 4 раза по 250 мл 5% раствором лимонной кислоты и 500 мл воды. Этилацетат упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40°C. Получают 608 г (94,2%) желтоватого густого масла, которое используют на следующей стадии без очистки.

Пример 2. Получают целевой продукт - метиловый эфир O-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина.

В 6 л одногорлой колбе растворяют 532 г (0,96 моль) метилового эфира O-трет-бутил-N-(Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина в 3 л метилового спирта и осуществляют стадию гидрирования, добавляя 8 г 30% водной суспензии гидроокиси палладия и пропуская ток водорода до исчезновения по ВЭЖХ исходного продукта (20-40 часов). Фильтруют катализатор, упаривают метиловый спирт на роторном испарителе, остаток растворяют в 2 л этилацетата и промывают 2 раза по 0,5 л воды. Сушат органическую фазу сульфатом натрия и упаривают досуха. Маслообразный остаток растворяют в 2 л серного эфира и при перемешивании быстро присыпают 88 г щавелевой кислоты. Выпавший белый осадок через 30 мин фильтруют и промывают на фильтре 200 мл серного эфира. Сушат на воздухе до испарения большей части эфира. Далее осуществляют выделение целевого продукта. Растворяют в 1 л воды 150 г бикарбоната натрия, прибавляют 1,5 л этилацетата и при перемешивании присыпают полученный оксалат дипептида. Перемешивают 30-60 мин до полного растворения. Отделяют органическую фазу, промывают 300 мл воды и сушат сульфатом натрия. Растворитель отгоняют на роторном испарителе. Через некоторое время полученное масло кристаллизуется. Получают 310 г (77,3%) белого кристаллического вещества. Анализ ВЭЖХ показал содержание основного вещества 96,4%.

Как видно из вышеприведенных примеров, описанный способ пригоден для получения метилового эфира O-трет-бутил-N-(Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина с достаточно высоким выходом в полупромышленном масштабе. Кроме того очистка с использованием щавелевой кислоты позволяет получать продукт высокой степени чистоты и не прибегать к более трудоемким и дорогим методам, как, например, препаративная ВЭЖХ.

Целевой продукт может быть использован, в частности, для получения октреотида или его аналогов либо иных пептидов, содержащих фрагмент L-лизил-L-треонина.

Источники информации, принятые во внимание при оформлении заявки

1. J. Chem. Soc. Perkin Tr.1 N6, p.989 (1986).

Способ получения метилового эфира О-трет-бутил-N-(Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизил)-L-треонина:

жидкофазным методом, включающий:
а) получение пентафторфенилового эфира Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина взаимодействием Nα-бензилоксикарбонил-Nε-трет-бутоксикарбонил-L-лизина с пентафторфенолом в присутствии дициклогексилкарбодиимида и в среде этилацетата при 5-10°С;
б) отделение фильтрованием дициклогексилмочевины;
в) конденсацию полученного на стадии а) пентафторфенилового эфира с метиловым эфиром О-трет-бутил-L-треонила в присутствии N-метилморфолина в среде этилацетата:
г) удаление кислых и основных примесей из реакционной массы;
д) гидрирование водородом полученного реакционного продукта в растворе метанола в присутствии катализатора гидроокиси палладия;
е) очистку полученного целевого продукта - защищенного дипептида с помощью щавелевой кислоты;
ж) выделение целевого продукта.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединениям, обладающим агонистической или антагонистической активностью нейротрофинов NGF и BDNF и представляющим собой мономерные или димерные замещенные дипептиды, которые являются аналогами экспонированных наружу участков петель 1 или 4 этих нейротрофинов, близких к бета-изгибам этих петель или совпадающих с ними.

Изобретение относится к липодипептиду, представляющему собой 1-гексадецил-5-(1-пиренбутил)-N-(L-орнитил)-L-глутамат бисхлорид, который проявляет способность доставлять нуклеиновые кислоты в клетки и содержит в своей структуре стабильную флуоресцентную метку в виде пирена.

Изобретение относится к ингибиторам ферментов, расщепляющих белок после пролина, таким как ингибиторы дипептидил пептидазы IV, как и к их фармацевтическим композициям, и способам применения таких ингибиторов.

Изобретение относится к производным 2-гидрокситетрагидрофурана общей формулы (I), которые обладают способностью ингибировать калпаины и/или способностью захватывать активные формы кислорода и могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для ингибирования калпаинов и/или пероксидирования липидов.

Изобретение относится к соединениям формулы (I) где r равно 1, 2 или 3; s равно 0; t равно 0; R1 выбран из группы, включающей R11-CO и R12 -SO2-; R11 выбран из группы, включающей (С6-С14)-арил, (C1-C8 )-алкилокси, где все указанные группы являются незамещенными или замещенными одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями R40; R12 обозначает (С 6-С14)-арил, где указанная группа является незамещенной или замещенной одним или несколькими одинаковыми или разными заместителями R40; R2 обозначает R 21(R22)CH-, R23-Het-(CH2 )k-, R23(R24)N-(CH2 )m-D-(CH2)n- или R25 (R26)N-CO-(CH2)p-D-(CH2 )q-, где D обозначает двухвалентный остаток -C(R31)(R32)-, двухвалентный (С6 -С14)-ариленовый остаток или двухвалентный остаток, полученный из ароматической группы Het, содержащей 5 или 6 атомов в цикле, из которых 1 или 2 являются одинаковыми или различными циклическими гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот и серу; числа k, m, n, р и q равны 0, 1, 2; R21 и R22, которые являются независимыми друг от друга, и могут быть одинаковыми или разными, выбраны из группы, включающей водород, (С1-С12)алкил, (С6-С 14)-арил, и т.д.; R23 обозначает водород; R27-SO2- или R28-CO-; R 24, R25 и R26 обозначают водород; R27 выбран из группы, включающей (С1-С 8)-алкил, (С6-С14)-арил, и т.д.; R28 выбран из группы, включающей R27, (С 1-С8)-алкилокси; R31 и R 32 обозначают водород; R40 выбран из группы, включающей галоген, гидрокси, (С1-С8)-алкилокси, (С1-С8)-алкил, (С6-С14 )-арил, и т.д.; R91, R92, R93 и R96 обозначают водород; R95 обозначает амидино; R97 обозначает R99-(C1 -С8)алкил; R99 выбран из группы, включающей гидроксикарбонил- и (C1-С8)алкилоксикарбонил-; Het обозначает насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую моноциклическую структуру, содержащую от 3 до 6 атомов в цикле, из которых 1 или 2 являются одинаковыми или разными гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот и серу; во всех его стереоизомерных формах, а также их смеси в любых соотношениях, и его физиологически приемлемые соли.

Изобретение относится к простому, эффективному способу получения N2-(1(S)-карбокси-3-фенилпропил)-L-лизил-L-пролина (2), который включает первую стадию осуществления щелочного гидролиза N2-(1(S)-алкоксикарбонил-3-фенилпропил)-N6-трифторацетил-L-лизил-L-пролина (1) в смешанном растворе, состоящем из воды и гидрофильного органического растворителя с использованием неорганического основания в количестве n молярных эквивалентов (n3) на моль вышеуказанного соединения (1), вторую стадию нейтрализации продукта гидролиза при использовании неорганической кислоты в количестве от (n-1) до n молярных эквивалентов (n3) и удаления неорганической соли, получаемой при ее осаждении из системы растворителей, пригодной для уменьшения растворимости неорганической соли, и третью стадию - кристаллизацию соединения (2), присутствующего в смеси после удаления неорганической соли, из системы растворителей в его изоэлектрической точке и тем самым извлечение соединения (2) в форме кристаллов, при этом соли, содержащие соль органической кислоты - производную трифторуксусной кислоты, остаются в растворенном состоянии в маточном растворе.

Изобретение относится к замещенным производным бензо (b) тиепин-1,1-диоксидов и их аддитивным солям с кислотами формулы I, в которой R1 - метил, этил, пропил, бутил; R2 - Н, ОН; R3 - остаток аминокислоты, остаток диаминокислоты, причем остаток аминокислоты, остаток диаминокислоты в случае необходимости одно- или многократно замещены аминозащитной группой; R4 - метил, этил, пропил, бутил; R5 - метил, этил, пропил, бутил; Z - ковалентная связь.

Изобретение относится к нитрату АСЕ-ингибитора формулы I или II, где Y - фенил, Х - C(RIII)RIV, RIII, RIV, RV и RVI - водород, содержащему стехиометрическое количество азотной кислоты.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для интродуцирования нуклеиновых кислот в клетки. .

Изобретение относится к области фармацевтической химии, конкретно к способу получения октреотида жидкофазным методом путем окислительной циклизации с использованием в качестве окислительного и деблокирующего реагента трииодида калия в водно-метанольном растворе.

Изобретение относится к области фармацевтической химии, конкретно к способу получения октреотида жидкофазным методом путем окислительной циклизации с использованием в качестве окислительного и деблокирующего реагента трииодида калия в водно-метанольном растворе.
Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения полипептида, гетерологичного для E.coli. .

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам иммунохимической оценки пролиферации лимфоцитов человека, и может быть использовано в фундаментальных исследованиях и в клинико-лабораторной практике для оценки пролиферативной активности клеток при онкологических и онкогематологических заболеваниях.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови VIIa человека. .

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. .

Изобретение относится к области очистки белков с использованием поверхностно-активных веществ. .
Изобретение относится к твердофазному способу синтеза пептида формулы H-D- -Nal-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2, в котором используются и Вос-защищенные, и Fmoc-защищенные аминокислоты и смола из хлорметилированного полистирола
Наверх