Вакцина для предупреждения и лечения вич-инфекции
Изобретение относится к области биотехнологии. Описаны слитые полипептиды, обладающие иммунной активностью против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Полипептиды образованы слияниям белков Gag, Pol и Nef ВИЧ. Слитые полипептиды могут быть полезны в иммуногенных композициях и вакцинах. Описан также способ очистки таких слитых полипептидов и их использование в фармацевтических композициях. Изобретение может быть использовано в медицине. 8 н. и 19 з.п. ф-лы, 21 ил., 3 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Слитый полипептид, обладающий иммуногенной активностью против ВИЧ (вируса иммунодефицита человека), содержащий Nef, или его иммуногенный фрагмент, или производное, и либо р17 Gag, либо р17 и р24 Gag, или их иммуногенные фрагменты, или производные, причем, когда присутствует и р17, и р24 Gag, между ними имеется по меньшей мере один антиген ВИЧ или его иммуногенный фрагмент.
2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что дополнительно содержит RT, или его иммуногенный фрагмент, или производное.
3. Полипептид по п.1 или 2, отличающийся тем, что RT или его иммуногенный фрагмент представляет собой фрагмент, в котором RT укорочен с С-конца таким образом, что он лишен карбоксиконцевого домена РНКазы Н.
4. Полипептид по п.3, отличающийся тем, что фрагмент RT представляет собой фрагмент р51.
5. Полипептид по п.2, отличающийся тем, что RT содержит мутацию замещения метионина в положении 592 другим остатком, например лизином.
6. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что Nef представляет собой полноразмерный Nef.
7. Слитый полипептид, обладающий иммуногенной активностью против ВИЧ, выбранный из следующих:
1) р24-RT-Nef-р17
2) р24-RT*-Nef-р17
3) р24-P51RT-Nef-р17
4) р24-p51RT*-Nef-р17
5) р17-p51RT-Nef
6) р17-p51RT*-Nef
7) Nef-p17
8) Nef-p17 с линкером
9) р17-Nef
10) р17-Nef с линкером
* означает RT с мутацией замещения метионина592 на лизин,
где указанный линкер представляет собой любую короткую аминокислотную последовательность для уменьшения возможных взаимодействий между двумя слитыми партнерами, которые он связывает вместе, и может иметь длину в 4-10 аминокислот, например GSGGGP.
8. Способ очистки полипептида по любому из пп.1-7, при котором:
1) берут композицию, содержащую неочищенный полипептид;
2) подвергают данную композицию по меньшей мере двум хроматографическим стадиям;
3) возможно подвергают полипептид карбоксиамидированию;
4) осуществляют стадию замены буфера с получением белка в подходящем для фармацевтического препарата буфере.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что осуществляют не более чем две хроматографические стадии.
10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что карбоксиамидирование осуществляют между двумя хроматографическими стадиями.
11. Композиция, обладающая иммуногенной активностью против ВИЧ, содержащая (1) слитый полипептид, который содержит Nef, или его иммуногенный фрагмент, или производное, и р17 Gag, или его иммуногенный фрагмент, или производное, и (2) р24 Gag, или его иммуногенный фрагмент, или производное.
12. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что (1) выбран из:
1) Nef-р17
2) Nef-р17 с линкером
3) р17-Nef
4) р17-Nef с линкером.
13. Композиция по п.11, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит RT, или его иммуногенный фрагмент, или производное.
14. Композиция по п.13, отличающаяся тем, что RT или его иммуногенный фрагмент представляет собой фрагмент, в котором RT укорочен с С-конца таким образом, что он лишен карбоксиконцевого домена РНКазы Н.
15. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что фрагмент RT представляет собой фрагмент р51.
16. Композиция по любому из пп.13-15, отличающаяся тем, что RT содержит мутацию замещения метионина в положении 592 другим остатком, например лизином.
17. Композиция по любому из пп.11 и 12, отличающаяся тем, что Nef представляет собой полноразмерный Nef.
18. Композиция, обладающая иммуногенной активностью против ВИЧ, содержащая (1) слитый полипептид, который содержит Nef, или его иммуногенный фрагмент, или производное, и либо р17 Gag, либо р17 и р24 Gag, или их иммуногенные фрагменты, или производные, причем, когда присутствует и р17, и р24 Gag, между ними имеется по меньшей мере один антиген ВИЧ или его иммуногенный фрагмент, и (2) полипептид р51 RT.
19. Композиция по п.18, отличающаяся тем, что (1) выбран из:
1) Nef-р17
2) Nef-р17 с линкером
3) р17-Nef
4) р17-Nef с линкером.
20. Композиция по п.18, отличающаяся тем, что RT содержит мутацию замещения метионина в положении 592 другим остатком, например лизином.
21. Композиция по любому из пп.18-20, отличающаяся тем, что Nef представляет собой полноразмерный Nef.
22. Слитый полипептид, обладающий иммуногенной активностью против ВИЧ, представляющий собой слияние антигенов ВИЧ, содержащий по меньшей мере четыре антигена ВИЧ, или их иммуногенных фрагмента, или производных, где эти четыре антигена или их фрагмента представляют собой Nef, Pol и Gag или их производные, где Pol представляет собой RT или p51RT, а Gag представляет собой р17 и р24 Gag.
23. Полипептид по п.22, отличающийся тем, что Gag представлен в виде двух отдельных компонентов, разделенных по меньшей мере одним другим антигеном в слиянии.
24. Полипептид по п.22 или 23, отличающийся тем, что Nef представляет собой полноразмерный Nef.
25. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по любому из пп.1-10 и 22-24.
26. Фармацевтическая композиция, обладающая иммуногенной активностью против ВИЧ, содержащая полипептид или полинуклеотид, или композицию полипептидов или полинуклеотидов по любому из пп.1-7 и 11-25, или полипептид, очищенный по любому из пп.8-10, вместе с фармацевтически приемлемым носителем или адъювантом.
27. Фармацевтическая композиция по п.26, отличающаяся тем, что адъювант представляет собой Th1 - индуцирующий адъювант, такой как QS21, или 3D-MPL (3-де-O-ацилированный монофосфориллипид А), или комбинация QS21 и 3D-MPL.
