Препарат, обладающий бактерицидной и антиметастатической активностью
Препарат, обладает повышенной бактерицидной и антиметастатической активностью, что обеспечивается содержанием водного экстракта (вытяжки) чаги и березовой коры, взятых в весовом соотношении 1:4. В целом проведенные исследования показали, что препарат обладает высокой бактерицидной и антиметастатической активностью. 3 табл.
Изобретение относится к области медицины, в частности к области фармакологии и патофизиологии, и может быть использовано в качестве средства, обладающего противовоспалительным и иммуностимулирующим действием.
Известно использование отваров березовых почек и листьев в качестве противовоспалительного средства при простудных заболеваниях, а также при лечении туберкулеза (В.П.Махлаюк. Лекарственные растения в народной медицине. - Саратов: Приволжское книжное изд-во, 1993 г. - С.58).
Однако данный отвар обладает слабым бактерицидным действием.
Известна композиция ингредиентов, обладающая биологической активностью (варианты), содержащая культуральную жидкость чайного гриба и настоя чаги (патент РФ №2280394, опубл. 16.12.04.).
Однако данный препарат обладает слабой антиметастатической активностью и предназначен для приемения в качестве пищевой добавки при производстве различного рода напитков.
Задачей изобретения является разработка препарата, обладающего повышенной бактерицидной и антиметастатической активностью.
Указанная задача решается тем, что препарат, обладающий бактерицидной и антиметастатической активностью на основе водного экстракта растительного сырья, содержит водный экстракт (вытяжку) чаги и березовой коры, взятых в весовом соотношении 1:4.
Изобретение поясняют описание препарата и результаты лабораторных исследований его бактерицидных и антиметастических свойств.
Препарат получают по известной технологии, используя любые типы установок для получения водных экстрактов (вытяжек) из растительного сырья. В качестве последнего используют чагу и березовую кору, взятые в весовом соотношении 1:4. Полученный экстракт (препарат) представляет собой жидкость светло-коричневого цвета, который может быть использован как прямо - при наружном, так и в виде водных и спиртовых растворов необходимой концентрации - при внутреннем применении.
Определение бактерицидной активности препарата проводилось методом вертикальной диффузии на плотной питательной среде «НОВАЯ» (Г.Г.Мордовской, 1972 г.) с использованием лабораторного штамма МБТ Н37Rv.
В ходе исследования навеску культуры лабораторного штамма H37Rv поместили в стерильную фарфоровую ступку, растерли до гомогенной массы постепенно добавляя стерильный физиологический раствор. Полученную суспензию культуры стандартизировали по бактериальному стандарту мутности, соответствующему 1 млрд. микробных тел (10 единиц ГКИ). В пробирки с питательной средой засеяли по 0,1 мл взвеси МБТ, после чего их поместили в горизонтальном положении в термостат на 24 часа при температуре 37°С.
Были приготовлены водные растворы исследуемого препарата в концентрации: 100; 50; 25; 12,5; 6,25%.
В каждую пробирку, засеянную штаммом H37Rv, вносили исследуемый препарат соответствующей концентрации и помещали в термостат при температуре 37°С.
Действие препарата каждой концентрации на МБТ изучали на трех параллельных рядах. Для сравнения в качестве контроля использовали изониазид в аналогичных концентрациях. Регистрацию полученных результатов проводили через 10 дней, учитывая величину зон задержки роста МБТ (в мм). Результаты представлены в таблице.
| Таблица 1 | |||||
| Результаты исследования бактерицидных свойств препарата | |||||
| Препараты | Концентрация препарата, % | ||||
| 100 | 50 | 25 | 12,5 | 6,25 | |
| Исследуемый препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры) | 58 | 50 | 40 | 35 | 27 |
| 55 | 50 | 40 | 30 | 25 | |
| 52 | 46 | 43 | 30 | 27 | |
| 55±2 | 48,7±1,8 | 41±1,3 | 31,7±2,2 | 26,3±0,9 | |
| Концентрация изониазида, мкг/мл | |||||
| Изониазид | |||||
| 25,0 | 12,5 | 6,25 | 3,12 | 1,5 | |
| >70 | 60 | 60 | 45 | 40 | |
| >70 | 58 | 60 | 40 | 40 | |
| >70 | 55 | 45 | 40 | 37 | |
| >70 | 57,7±1,8 | 55±6,7 | 45±3,3 | 39±1,3 |
Из представленных в таблице 1 данных следует, что по своим бактерицидным свойствам предложенный препарат (водный экстракт (вытяжка) чаги и березовой коры), в том числе в 50% концентрации, соответствует бактерицидным свойствам изониазида в концентрации 25,0 мкг/мл.
Для определения антиметастатической активности препарата опыты проведены на мышах с подкожно трансплантированными опухолями, входящими в состав панели опухолевых штаммов для скрининга МБР противоопухолевой активности: аденокарциномы молочной железы Са755, лимфолейкоза Р388 и меланомы В16. Опухолевые штаммы вводили в объеме: Р388 - по 1 млн. кл/мышь, Са755 и В16 - по 40 мг опухолевой ткани на мышь в 0,3-4 мл питательной среды 199.
В опыте с Са755 из 6 групп по 8 мышей 5 групп получали лечение предложенным препаратом и одной группе - контрольная - вводили физиологический раствор. Препарат использовали в 100% и 20% концентрации после разведения стерильным физиологическим раствором путем введения в брюшную полость в разовой дозе 0,1-0,5-1,0 мл на мышь. Введение препарата начали через 72 часа после трансплантации опухолевого штамма и осуществляли ежедневно в течение 5-ти дней. Суммарная доза препарата составила соответственно 0,5-2,5-5,0 мл/мышь.
В опыте с Р388 было 2 группы по 10 мышей: одной группе вводили препарат 20% концентрации, полученной в результате его разведения физиологическим раствором, а другой - контрольной - физиологический раствор. Введение препарата производили в брюшную полость в разовой дозе 0,5 мл/мышь и осуществляли ежедневно в течение 5 дней, начав через 72 часа после трансплантации опухолевого штамма. Суммарная доза составила 2,5 мл/мышь.
В опыте с В16 из 3 групп мышей две группы получали препарат 20% концентрации и одной - контрольной - вводили физиологический раствор. Введение препарата осуществляли в брюшную полость ежедневно также в течение 5 дней, начиная через 72 часа после трансплантации опухолевого штамма. Разовые дозы составляли 0,25 и 0,5 мл на мышь, суммарные дозы соответственно 1,25 и 2,5 мл/мышь.
После окончания опыта опухоли измеряли, определяли средние объемы и рассчитали стандартный показатель эффективности - торможения роста опухоли (ТРО), который выражали в процентах к показателям контрольной группы. При оценке исходили из того, что показатель эффективности при первичном исследовании (скрининг) - ТРО≥50%. Достоверность результата оценивали по стандартному методу Стьюдента с расчетом доверительного интервала в сравниваемых группах. Различия считались достоверными при p≤0,05.
При анализе результатов опытов установлено нижеследующее.
По опыту с Са755. В группе мышей, которым вводили препарат 100% концентрации все мыши погибли в течение первых суток после второй инъекции. В брюшной полости павших мышей найден введенный препарат, который не всасывался в организм. Причина гибели - местно-раздражающее действие введенного препарата на стенку брюшной полости. В группах, получавших разведенный препарат 20% концентрации, его переносимость была хорошей. Достоверный противоопухолевый эффект ТРО=68-69-72% (последнее значение достоверно, p<0,05), соответствующий минимальному критерию, получен при введении 20% раствора в разовой дозе 0,5 мл на мышь, суммарная доза 2,5 мл/мышь. Сводные данные представлены в таблице 2.
| Таблица 2 | |||||||
| Антиметастатическая эффективность препарата в отношении Са755 | |||||||
| Группа n=10 | Разовая доза (мл/мышь), режим введения | Сутки после перевивки опухоли | |||||
| 10 | 14 | 18 | |||||
| Vcp, мм3 | ТРО % | Vcp, мм3 | ТРО % | Vcp, мм3 | ТРО % | ||
| Контроль, физ. р-р | 0,5×5 раз | 1070±600* | - | 6308±3946 | - | 12673±5172 | - |
| Препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры, 100% коонцентрации) | 1,0×2 раза | 10 мышей пали от токсичности на 2 сутки | |||||
| 0,5×2 раза | 9 из 10 мышей пали от токсичности на 2 сутки, у одной выжившей мыши размеры не отличались от контроля | ||||||
| 0,1×5 раз | 1001±714 | 6 | 2517±1577 | 60 | 5252±4403 | 54 | |
| Препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры, 20% коонцентрации) | 1,0×5 раз | 546±374 | 49 | 35639±2843 | 42 | 5425±4123 | 57 |
| 0,5×5 раз | 339 б. разброс | 68 | 1918±1477 | 69 | 3369±2697 | 72** | |
| Примечания: все растворы вводили внутрибрюшинно ежедневно на 3-7 дня после трансплантации опухоли; ТРО определяли на 3, 7 и 11 сутки после окончания лечения; * - доверительный интервал; ** - p<0,05 |
В опыте с В16 группа мышей, которым вводили препарат 20% концентрации, перенесла его хорошо. Отмечен длительный достоверный противоопухолевый эффект, соответствующий минимальному критерию, ТРО=95-96-94% (p<0,05) на 2-6-12 сутки после окончания опыта. Сводные данные представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | |||||||
| Антиметастатическая эффективность препарата в отношении штамма В16 | |||||||
| Группа n-10 | Разовая доза (мл/мышь), режим введения | Сутки после перевивки опухоли | |||||
| 9 | 13 | 19 | |||||
| Vcp, мм3 | ТРО % | Vcp, мм3 | ТРО % | Vcp, мм3 | ТРО % | ||
| Контроль, физ. р-р | - | 601±174* | - | 2137±682 | - | 6299±1862 | - |
| Препарат (Водный экстракт чаги и березовой коры 20% концентрации) | 0,5×5 раз | 63±56 | 90** | 246±682 | 88** | 938±429 | 85* |
| 0,25×5 раз | 32±31 | 95** | 74±63 | 96** | 409±283 | 94** | |
| Примечания: все растворы вводили внутрибрюшинно ежедневно на 3-7 дня после трансплантации опухоли; ТРО определяли на 2, 6 и 12 сутки после окончания лечения; * - доверительный интервал; ** - p<0,05 |
В опыте с Р388, в группе мышей, получавшей препарат 20% концентрации, отмечен достоверный кратковременный противоопухолевый эффект на 4 сутки ТРО=52% (p<0,05), соответствующий минимальному критерию.
В целом, проведенные исследования показали что предложенный препарат обладает высокой бактерицидной и антиметастатической активностью.
Препарат, обладающий бактерицидной и антиметастатической активностью на основе водного экстракта растительного сырья, отличающийся тем, что содержит водный экстракт (вытяжку) чаги и березовой коры, взятых в весовом соотношении 1:4.
