Способ получения питательной среды для исследования микробного загрязнения воздуха
Владельцы патента RU 2445363:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова" (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при исследовании микробной загрязненности воздуха. Способ предусматривает следующее. Перемешивают пептон сухой ферментативный, глюкозу, диализат хлебопекарных дрожжей, агар микробиологический в заданных количествах. Полученную смесь добавляют в 1 литр дистиллированной воды и кипятят до полного растворения агара. В горячем виде смесь разливают по флаконам, стерилизуют в автоклаве и охлаждают до температуры 47-55°С. Охлажденную среду разливают по чашкам Петри и выдерживают до полного застывания геля. На застывшую поверхность геля в асептических условиях наносят взвесь нанопорошка цинка в физиологическом растворе в количестве 0,005 мкг нанопорошка цинка на 0,1 мл физиологического раствора из расчета на одну чашку Петри. Изобретение позволяет повысить точность результатов исследования микробной загрязненности воздуха. 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области микробиологии, к санитарной микробиологии.
Известен способ получения питательной среды, используемой для ориентировочной оценки степени микробного загрязнения воздуха, называемой мясопептонным агаром, которая состоит из мясной воды, пептона ферментативного и хлорида натрия (Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской микробиологии. Санкт-Петербург, 2002, с.28).
Недостатком получения питательной среды является то, что на ее поверхности вырастают неприхотливые микроорганизмы и при наличии плесени наблюдается ее сплошной рост, поэтому основная масса имеющихся в исследуемом воздухе микроорганизмов не вырастает, что приводит к неточности результатов исследований.
Известен способ получения питательной среды для исследования микробного загрязнения воздуха патогенными микроорганизмами - кровяного агара, состоящего из мясопептонного агара и 10-25% свежей или дефибринированной крови животных (Розанов Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных. Москва, 1952, с.85).
Недостатком получения питательной среды является ее дороговизна и возможное присутствие микроорганизмов в крови животного-донора, которые, наряду с имеющимися микроорганизмами в исследуемом воздухе, могут прорасти на среде, что приводит к недостоверности результатов исследований.
Известен способ получения питательной среды - агара Сабуро, применяемой для контроля микробной (грибной) загрязненности объектов внешней среды, в том числе для оценки степени микробного загрязнения воздуха, содержащей пептон сухой ферментативный для бактериологических целей, глюкозу, диализат хлебопекарных дрожжей, агар микробиологический и воду дистиллированную (Прототип - Приложение №2 к приказу Министерства здравоохранения РФ от 14 июля 2000 г. №263 «О разрешении медицинского применения питательных сред»). Форма выпуска - в виде геля, помещенного в бутылки, которые нагревают в водяной бане до полного расплавления геля среды, охлаждают среду до температуры (47-2) град. С и разливают в стерильные чашки Петри. После застывания среды чашки подсушивают при температуре (33-2) град. С в течение (40+5) мин. Кроме того, указанную среду выпускают в виде сухой питательной среды, которая содержит следующие соотношения ингредиентов из расчета 1 литр дистиллированной воды: пептон сухой ферментативный для бактериологических целей в количестве 10 г/л, глюкоза в количестве 40 г/л, диализат хлебопекарных дрожжей - 5 г/л, агар микробиологический - 10 г/л (производитель среды Сабуро - ОАО «БИОМЕД» им. И.И.Мечникова).
Недостатком получения среды Сабуро является то, что она обеспечивает рост только микроскопических грибов (плесневых, дрожжеподобных и т.д.), имеющихся в воздухе. При росте колоний грибов они заполняют всю поверхность питательной среды, не дают возможным вырасти колониям других видов микроорганизмов, попавших на эту среду из исследуемого воздуха, что приводит к неточности результатов микробиологических исследований и вследствие к неполной картине санитарной оценки воздуха.
Технической задачей изобретения является повышение точности результатов исследований микробной загрязненности воздуха с целью его санитарной оценки.
Техническая задача достигается способом получения питательной среды для исследования микробного загрязнения воздуха путем смешивания пептона сухого ферментативного для бактериологических целей - 10 г/л, глюкозы - 40 г/л, диализата хлебопекарных дрожжей - 5 г/л, агара микробиологического - 10 г/л, внесения полученной смеси в 1 л дистиллированной воды, кипячения до растворения агара, стерилизации и охлаждения питательной среды до температуры 47-55°С, выдерживания до полного застывания геля с последующим нанесением на поверхность застывшего геля стерильной взвеси нанопорошка цинка в физиологическом растворе в количестве 0,005 мкг нанопорошка цинка на 0,1 мл физиологического раствора из расчета на одну чашку Петри.
Отличие предлагаемого способа получения питательной среды для исследования микробного загрязнения воздуха от прототипа состоит в том, что на поверхность выдержанного до полного застывания геля наносят стерильную взвесь нанопорошка цинка в физиологическом растворе в количестве 0,005 мкг нанопорошка цинка на 0,1 мл физиологического раствора из расчета на одну чашку Петри.
Питательную среду для микробиологической оценки воздуха готовят следующим образом. Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей в количестве 10 г/л, глюкозу в количестве 40 г/л, диализат хлебопекарных дрожжей - 5 г/л, агар микробиологический - 10 г/л равномерно перемешивают. Перемешанную смесь добавляют в 1 литр дистиллированной воды и кипятят до полного расплавления агара. В горячем виде смесь разливают по флаконам, стерилизуют в автоклаве, затем охлаждают до температуры, оптимальной для переливания в чашки Петри, в частности до температуры 47-55°С. Разливают в стерильные чашки Петри и выдерживают до полного застывания геля. Как правило, гель застывает при положительной температуре. Например, при температуре 30-33°С гель застывает в течение 30 минут. При температуре ниже 30°С, но не ниже 0°С, гель застывает быстрее. В асептических условиях на поверхность застывшего геля наносят взвесь нанопорошка цинка в физиологическом растворе. Для получения данной взвеси предварительно нанопорошок цинка взвешивают в количестве 0,005 мкг (из расчета на одну чашку Петри), стерилизуют, вносят в 0,1 мл стерильного физиологического раствора (из расчета на одну чашку Петри). Физиологический раствор в количестве 0,1 мл достаточен для его равномерного распределения по всей поверхности одной чашки Петри. Взвесь нанопорошка цинка в физиологическом растворе наносят на поверхность геля, равномерно распределяют по поверхности, дают взвеси впитаться в гель в течение часа, после чего питательная среда готова к применению. Готовая питательная среда может храниться в течение 3-х суток в холодном месте.
Пример. В студенческой столовой Саратовского аграрного университета им. Н.И.Вавилова исследовано микробное загрязнение воздуха с использованием питательной среды с составом по прототипу и с составом согласно изобретению. Производили подсчет количества видов микроорганизмов и подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ) с определением микробного числа на 1 м3 воздуха по формуле Омелянского. В таблице 1 приведена сравнительная характеристика результатов исследований микробной загрязненности воздуха, проведенных с использованием питательной среды с составом по прототипу и по предлагаемому изобретению.
| Таблица 1 | ||
| Сравнительная характеристика результатов исследований микробной загрязненности воздуха после 72 часов инкубирования. | ||
| Показатели | Состав среды по прототипу | Состав предлагаемой среды |
| Бактерии: | ||
| - микрококки | не обнаружены | обнаружены |
| - стафилококки | обнаружены | обнаружены |
| - стрептококки | не обнаружены | обнаружены |
| - бациллы | не обнаружены | обнаружены |
| Плесневые грибы: | ||
| - аспергилы | обнаружены | обнаружены |
| - пеницилы | обнаружены | обнаружены |
| Дрожжи | обнаружены | обнаружены |
| Актиномицеты | не обнаружены | обнаружены |
| Общее микробное число (КОЕ) | 263±5 | 802±10 |
Как видно из таблицы 1, при исследовании микробной загрязненности воздуха с использованием питательной среды с составом по прототипу обнаружено в 2 раза меньше видов микроорганизмов, и, кроме того, общее микробное число (КОЕ) в 3 раза ниже, в чем с использованием состава предлагаемой среды.
В таблице 2 приведена сравнительная характеристика концентраций нанопорошка цинка с размером частиц 18-20 нм, взвешенного в 0,1 мл физиологического раствора.
| Таблица 2 | |||||||
| Количество видов микроорганизмов на питательной среде в зависимости от концентрации нанопорошка цинка. | |||||||
| Показатель | Концентрация раствора нанопорошка цинка в 0,1 мл физиологического раствора | ||||||
| 0,001 | 0,002 | 0,003 | 0,004 | 0,005 | 0,006 | 0,007 | |
| Количество видов микроорганизмов | 4 | 5 | 6 | 6 | 8 | 8 | 8 |
Как видно из таблицы 2, при концентрации нанопорошка цинка в количестве 0,005 мкг обнаружено наибольшее число видов микроорганизмов.
Способ получения питательной среды для исследования микробного загрязнения воздуха путем смешивания пептона сухого ферментативного для бактериологических целей - 10 г/л, глюкозы - 40 г/л, диализата хлебопекарных дрожжей - 5 г/л, агара микробиологического - 10 г/л, внесения полученной смеси в 1 л дистиллированной воды, кипячения до растворения агара, стерилизации и охлаждения питательной среды до температуры 47-55°С, выдерживания до полного застывания геля с последующим нанесением на поверхность застывшего геля стерильной взвеси нанопорошка цинка в физиологическом растворе в количестве 0,005 мкг нанопорошка цинка на 0,1 мл физиологического раствора из расчета на одну чашку Петри.
