Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека



Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека
Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека
Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека
Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека

 


Владельцы патента RU 2445974:

Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН (RU)

Изобретение относится к области медицины и описывает способ выделения фактора VIII из плазмы крови человека, не инфицированной по данным соответствующего анализа вирусами гепатита и ВИЧ 1/2, заключающийся в последовательных криоосаждении, растворении в водном растворе гепарина и солюбилизации криопреципитата, сорбции факторов протромбинового комплекса гидроксидом алюминия, удалении фибриногена, фибронектина и примесных белков полиэтиленгликолем-4000, вирусной инактивации с помощью сольвент-детергентов и предварительной фильтрации, анионнообменной хроматографии, предпочтительно с применением EDM-TMAE Fractogel, с элюцией натрий хлорид-содержащим буфером, стабилизации раствором альбумина, стерильной фильтрации на мембранных фильтрах с диаметром пор 0,22 мкм, розливе во флаконы (200-300 МЕ/флакон), лиофилизации и повторной термической вирусной инактивации, при этом при очистке используют водный раствор нефракционированного гепарина с концентрациями, равными 5-100 Международных единиц (МЕ)/мл, предпочтительно 10-25 МЕ/мл, полиэтиленгликоля-4000 в конечной концентрации 3,5% и подкисление среды, предпочтительно до величины pH 6,6, сильные анионообменники группы ТМАЕ. Данный способ существенно повышает эффективность очистки и удельную специфическую активность фактора VIII. 1 табл., 4 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности, а именно к биотехнологии получения гемостатических препаратов. Количественный или функциональный дефицит фактора (Ф) VIII свертывания крови вызывает развитие наследственного геморрагического заболевания гемофилии А, основным методом лечения и профилактики которой является заместительная терапия препаратами Ф VIII.

Ф VIII является гликопротеином плазмы крови, нековалентно связанным с фактором Виллебранда, который существенно повышает стабильность Ф VIII. Ген Ф VIII локализован на Х-хромосоме, и его мутации обуславливают развитие гемофилии А, наследуемой по рецессивному признаку. Активированный Ф VIII (Ф VIIIa) является лабильным, не ферментативным белковым ко-фактором Ф IXa. Ф VIII является необходимым компонентом внутреннего пути свертывания крови (Зубаиров Д.М. Фактор VIII. В: Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. 2000, Казань, с.101-110).

В заместительной терапии больных гемофилией А и для ее профилактики применяют препараты, содержащие Ф VIII. В настоящее время потребность здравоохранения РФ в препаратах Ф VIII составляет порядка 300 миллионов Международных единиц (ME), но масштабное отечественное промышленное производство в стране отсутствует (Ямкин А.В. и др. Способ получения и свойства препарата VIII фактора свертывания плазмы крови человека // Сибирский мед. журнал, 2009, №2, с.17-20). Получение Ф VIII осуществляется или фракционированием плазмы крови человека или животных, или рекомбинантными методами генной инженерии. Полученные из плазмы крови препараты могут содержать, кроме Ф VIII, фактор Виллебранда, что предполагает их применение при болезни Виллебранда. К проблемам производства препаратов Ф VIII из плазмы крови человека следует отнести:

- возможность инфицирования реципиента вирусами гепатитов (А, В, С), иммунодефицита человека, парвовирусом, сифилисом и другими патогенами,

- возможность переноса реципиенту с определенной группой группы присутствующих в препаратах (концентраты средней чистоты) антител к антигенам эритроцитов других групп крови,

- контаминация препаратов Ф VIII балластными белками,

- стабильность белка Ф VIII в его концентратах (по существующим требованиям Ф VIII должен быть стабилен в течение 12 часов после растворения лиофилизата) (Burnouf Т. Plasma fractionation in the world: current status // Transfus. Clin. Biol., 2007, v.14 (1), p.41-50).

Для решения этих проблем разработаны соответствующие технологические подходы. Так, при подготовке пула плазмы крови проводят отбор тщательно проверенных здоровых доноров, у которых определяют возможное инфицирование вирусами гепатита, иммунодефицита человека и др. Однако для полной гарантии отсутствия вирусной инфекции в процессе получения концентратов антигемофильного фактора осуществляют вирусную инактивацию. В связи с различной природой вирусов (с или без липидной оболочки) инактивацию наиболее часто проводят комплексно, а именно сольвент-детергентами и соответствующим нагреванием (двойная инактивация) (Guidelines on viral inactivation and removal procedures intended to assure the viral safety of human blood plasma products: Annex 4. - WHO Technical Report, Series N24, 2004, p.177).

Для повышения степени очистки получаемых концентратов Ф VIII последовательно используют комплекс процедур фракционирования (преципитацию, различные виды и сочетания высокоэффективных хроматографических методов). Увеличение чистоты препарата обеспечивает повышение его удельной, специфической активности (коагулологическая активность Ф VIII/мг белка) и снижает содержание примесных нежелательных компонентов.

Для повышения стабильности концентратов Ф VIII в процессе его получения применяют удаление белков протромбинового комплекса, добавление альбумина, гепарина, лизина и других веществ.

В настоящее время широко используют следующие препараты Ф VIII из плазмы крови:

Таблица 1
Характеристика антигемофильных препаратов
Препарат Метод получения Удельная активность Ф VIII, МЕ/мг белка Производитель Примечание
Koate-DVI Фракционирование по Кону-Орли, осаждение, хроматография 50 Barer, США +ФВ, с./д. и нагрев
Immunate ИОХ 70 Baxter, США +ФВ, с./д. и нагрев
Octanate ИОХ 100 Octapharma, Австрия +ФВ, с./д. и нагрев
Factor 8Y Осаждение гепарин/глицин 2,5-4 Bio Pro. Lab., Англия +ФВ, сухой нагрев,
Emoclot ИОХ 80 Kedrion, Италия +ФВ, с./д. и сухой нагрев
Примечание: с./д. - сольвент/детергент, +ФВ - присутствие фактора Виллебранда, ИОХ - ионообменная хроматография.

Известны следующие способы выделения из плазмы Ф VIII.

Методом, представленным в Патенте РФ №2324495, Ф VIII получали криофракционированием плазмы крови, растворением криопреципитата, вирусной инактивацией криопреципитата сольвент-детергентным методом с применением три-н-бутилфосфата и тритона Х-100, хроматографией на Сефарозе 4FF, ультрафильтрацией и лиофилизацией.

Патент США 5252709 А1 описывает способ получения концентрата Ф VIII, заключающийся в суспендировании криопреципитата плазмы в растворе гепарината натрия, осаждении балластных белков гидроксидом алюминия, стерилизующей фильтрации получаемого супернатанта, вирусной инактивации сольвент-детергентами, адсорбции целевого продукта на хроматографической колонне с Фрактогелем с последующей элюцией буферным раствором, содержащим хлорид натрия, и лиофилизации.

В Патенте США 5259951 А1 препарат Ф VIII получали из плазмы крови криоосаждением и растворением криопреципитата в растворе, содержащем хлорид натрия, гепарин и глицин, очисткой гидроксидом алюминия, нагреванием полупродукта в присутствии стабилизатора, ионообменной хроматографией, диализом преципитата, нагреванием и фильтрационной стерилизацией с последующей лиофилизацией.

В Патенте США 5259951 А1 высокоочищенный Ф VIII плазмы крови получали последовательным применением криопреципитации, растворения криопреципитата в водном растворе, содержащим гепарин, очистки гидроксидом алюминия и полиэтиленгликолем (ПЭГ)-4000, хроматографии на ионообменнике, стабилизации альбумином, гепарином, ПЭГ-4000, лизином и гистидином, концентрирования, диафильтрации, тепловой вирусной инактивации и лиофилизации.

Наиболее близким к заявляемому методу (прототипом) является способ получения Ф VIII, представленным в Патенте РФ 2253475 С1. Способ заключается в получении из плазмы крови человека криопреципитата, который суспендируют в водном растворе гепарина (1-3 МЕ/мл), в очистке от балластных белков гидроксидом алюминия и ПЭГ-4000 (конечные концентрации 0,3% и 2%, соответственно), в вирусной инактивации сольвент-детергентным методом в присутствии Твина, в микрофильтарции, в хроматографическом фракционировании на ДЭАЭ-содержащем носителе с применением буферных (pH 6,75-6,85) растворов различной ионной силы, в стабилизации полученного раствора Ф VIII альбумином (конечная концентрация 0,1%), стерилизации микрофильтрацией, в лиофилизации и в последующей термообработке с целью дополнительной вирусной инактивации. К недостаткам данного метода можно отнести существенную потерю целевого вещества при хроматографическом фракционировании и недостаточную степень очистки выделяемого Ф VIII. На стадии хроматографической очистки выход Ф VIII составлял 40-45%, содержание и удельная специфическая активность фактора VIII были равны 15-20 МЕ/мл и 80-100 МЕ/мг белка, соответственно.

Целью настоящего изобретения является разработка способа промышленного производства стабильного высокоочищенного Ф VIII. Данная цель достигается разработкой технологии, обеспечивающей получение лиофилизированной формы концентрата Ф VIII с высокой специфической удельной активностью за счет повышения степени очистки.

Разработку технологии выделения Ф VIII для получения антигемофильного фактора сначала проводили в лабораторных условиях, а затем масштабировали в условиях опытного производства. Производство препарата Ф VIII соответствовало правилам Хорошей Производственной Практики (GMP), надлежащим правилам промышленной деятельности, стандартным операционным процедурам (СОП) и необходимым условиям стерильности.

На всех стадиях производства исходное сырье, промежуточные продукты и целевой препарат тестируют по активности Ф VIII одностадийным коагулологическим методом и содержанию белка методом Бредфорда. На различных стадиях производства определяют коагулологическую активность фактора Виллебранда и протромбина, содержание фибронектина измеряют твердофазным иммуноферментным методом. На уровне промышленного производства строго контролируют степень микробного инфицирования.

Сырьем для получения Ф VIII является свежезамороженная плазма донорской крови с активностью Ф VIII не менее 0,7 МЕ/мл. Необходимое условие использования плазмы заключается в доказанном отсутствии ее инфицирования вирусами гепатитов В и С и иммунодефицита ВИЧ 1/ВИЧ 2. В процессе очистки Ф VIII на стадии осаждения применяют комбинацию полиэтиленгликоля (ПЭГ)-4000 (Merck, Германия) и гидроксида алюминия (Biosector, Дания). Для проведения вирусной инактивации используют 1% раствор Твин 80 и 0,03% три-n-бутилфосфат (Merck, Германия). Анионообменную хроматографию проводят на сильных анионообменниках группы ТМАЕ, не содержащих ДЭАЭ, предпочтительно EMD-TMAE Fractogel (Merck, Германия), с использованием хроматографической колонны Millipore Vantage S2 и хроматографа BioProcess (GE, США). Концентрацию ионов натрия определяли на ионном анализаторе (CIBA-CORNING, США). Стерильную фильтрацию препарата осуществляют с помощью фильтров 0,22 мкм (Millipore, США), а лиофилизацию - на аппарате SERAIL (Франция) по специально разработанному режиму.

Заявляемый способ получения Ф VIII состоит из следующих стадий:

1. Из свежезамороженной плазмы крови человека методом контролируемого оттаивания и центрифугирования выделяют криопреципитат (КП) (отделяемый криосупернатант используют как сырье для получения Ф IX, альбумина и иммуноглобулинов).

2. Полученный КП солюбилизируют с последующей корректировкой pH. Для повышения степени очистки целевого Ф VIII используют водный раствор, содержащий 5-100 международных единиц (ME) нефракционированного гепарина в 1 мл, предпочтительно 10-25 МЕ/мл.

3. Солюбилизированный КП обрабатывают гелем гидроксида алюминия, интенсивно сорбирующим при нейтральных pH факторы протромбинового комплекса. Раствор КП без факторов протромбинового комплекса очищают от фибриногена, фибронектина и других белков с помощью осаждения ПЭГ-4000 и центрифугирования.

Сочетанное применение используемых конечных концентраций гепарина (5-100 МЕ/мл), гидроксида алюминия (0,3%) и ПЭГ-4000 (3,5%) обеспечивает получение промежуточного продукта - очищенного раствора КП - с повышенными стабильностью и удельной специфической активностью Ф VIII за счет более эффективного удаления балластных белков и протеаз. Применение выбранных концентраций гепарина (предпочтительно 10-25 МЕ/мл), величины кислотности (предпочтительно pH=6,6) и конечной концентрации ПЭГ-4000 (3,5%) обеспечивает существенное снижение еще до стадии хроматографической очистки содержания фибриллярного белка фибронектина от 2-4 г/л до 20-30 мг/л (в прототипе - 200-300 мг/л).

4. Очищенный раствор КП подвергают вирусной инактивации с помощью сольвент-детергента (Твин-80 и три-n-бутилфосфат) и предварительной фильтрации с оптимальными условиями вирусной инактивации: нейтральные значения pH (6,9-7,1), температура 25°С и время обработки 6 часов.

5. Дальнейшее выделение (очистку) Ф VIII из раствора вирус-инактивированного КП проводят анионообменной хроматографией (АОХ) с использованием сильных анионообменников, предпочтительно ионоообменник EMD-TMAE Fractogel. Данный тип сорбентов в комбинации с применением оптимальной ионной силы фракционирования позволяет снизить степень адгезивности фактора Виллебранда и повысить стабильность целевого препарата Ф VIII, содержащего фактор Виллебранда. Хроматографическую очистку проводят при размерах колонки - 10×15 см, количестве наносимого образца - 120-200 тысяч ME, стартовом буфере - трис-цитратном солевом с нейтральным pH, элюции - ступенчатым градиентом NaCl и скорости нанесения и элюции - 80-100 см/час.

6. Целевая фракция Ф VIII, полученная на этапе АОХ, имеет удельную активность не менее 140 (150-200) МЕ/мг белка, что существенно (в 1,5-2 раза) превышает удельную активность Ф VIII известных препаратов из плазмы крови. Эту фракцию разводят трис-цитратным буфером с нейтральным pH до требуемой активности Ф VIII, стабилизируют альбумином до конечной концентрации альбумина в препарате 0,1% и проводят стерильную фильтрацию и розлив раствора Ф VIII во флаконы.

7. Разлитый по флаконам раствор Ф VIII лиофильно высушивают и подвергают дополнительной термической вирусной инактивации; потеря активности при термоинактивации не превышает 5%.

После лиофилизации и термической вирусной инактивации в условиях промышленного масштабирования разработанной технологии получают 70-130 флаконов (20 мл) лиофильно высушенного Ф VIII для раствора для инъекций со специфической активностью Ф VIII 200-300 МЕ/флакон со значением выхода специфической активности Ф VIII всего технологического процесса 13-20%.

Ниже представлены конкретные примеры осуществления изобретения.

Пример 1.

1. 180 л Свежезамороженной плазмы доноров, прошедшей аттестацию на наличие инфекций, с активностью Ф VIII, равной 0,75 МЕ/мл (содержание основного продукта 135000 МЕ), размораживают в реакторе при температуре -0,5°С и выделяют криопреципитат (КП) с помощью проточной центрифуги при 1800 об/мин и 3°С. Масса КП составляла 2,0 кг, содержание целевого продукта 80000 ME (выход по целевому продукту 59%).

2. Полученный КП растворяют в водном растворе гепарина (10 МЕ/мл очищенной воды) и солюбилизировают при 25°С. pH Растворенного и солюбилизированного КП корректируют до 6,8. Объем КП 8,0 л, активность целевого на стадии продукта 72000 ME (выход на стадии 90%).

3. Сорбцию факторов протромбинового комплекса осуществляют добавлением к КП 3% геля гидроксида алюминия в количестве, равном 1/10 от массы КП, с перемешиванием при 25°С в течение 15 минут. Осаждение фибриногена, фибринектина и балластных белков проводят добавлением 32% ПЭГ-4000 до конечной концентрации 3,5%. pH доводят до 6,6 и смесь центрифугируют при 4000 об/мин при 2-4°С. Объем целевого супернатанта 8,0 л, активность целевого продукта 70140 ME (выход на стадии 97%).

Эффективность сорбции факторов протромбинового комплекса и удаления примесных белков представлены на рисунке 1 (Сорбция факторов протромбинового комлекса гидоксидом алюминия) и рисунке 2 (Удаление фибриногена ПЭГ-4000), соответственно.

4. Вирусную инактивацию сольвент-детергентным методом проводят добавлением 11% раствора Твин 80 до конечной концентрации 1% с последующим медленным добавлением три-n-бутилфосфата до конечной концентрации 0,3%; pH доводят до 6,8. Вирус-инактивированный полупродукт фильтруют через фильтры Millipore диаметром пор 2-8 мкм. Объем предварительно отфильтрованного раствора составляет 9,0 л, содержание на стадии целевого продукта 69300 ME (выход на стадии 99%).

5. Хроматографическое фракционирование проводят с помощью ионообменника EMD-TMAE Fractogel, стартового, промежуточного и элюирующего буферов с концентрациями ионов натрия 130, 170 и 450 ммоль/л и проводимостью 15, 18 и 48 мСм/см. Объем элюирующего буфера 3,5 л, скорость элюции 4,7 л/час. Объем продукта 0,4 л, количество 45000 ME. Выход на стадии целевого продукта составляет 65%, активность Ф VIII в целевой фракции равна 110 МЕ/мл, а удельная специфическая активность Ф VIII повысилась от 45 до 150 МЕ/мг белка. Данные представлены на рисунке 3 (Хроматографическая очистка Ф VIII).

6. Стерильную фильтрацию целевой фракции хроматографической очистки после разведения до требуемой активности и стабилизации альбумином (конечная концентрация 0,1%) проводят с помощью фильтров Millipore с диаметром пор 0,22 мкм и стерильный продукт разливают во флаконы. На выходе стадии после проведения соответствующих анализов объем целевого продукта составляет 2,2 л, суммарная активность Ф VIII - 44000 ME (98%).

7. Целевой продукт замораживают при -50°С и давлении, равном 1 бар, в течение 75 часов и затем лиофилизируют в условиях -20°С-+30°С при давлении 60 мкбар в течение 40,5 часа. Затем проводят термическую вирусную инактивацию при 80°С и давлении 60 мкбар в течение 72 часов. Выход целевого препарата Ф VIII равен 40000 ME. Выход на стадии 90%. Выход всего технологического процесса - 30%.

Пример 2.

1. 220 л Свежезамороженной плазмы доноров, прошедшей аттестацию на наличие инфекций, с активностью Ф VIII, равной 0,9 МЕ/мл (содержание основного продукта 198000 ME), размораживают в реакторе при температуре -0,5°С и выделяют криопреципитат (КП) с помощью проточной центрифуги при 18000 об/мин и 3°С. Масса КП составляет 2,2 кг, содержание целевого продукта 109470 ME (выход по целевому продукту 55,3%).

2. Полученный КП растворяют в водном растворе гепарина (20 МЕ/мл, очищенная вода) и солюбилизируют при 25°С. pH Растворенного и солюбилизированного КП корректируют до 6,8.

3. Сорбцию факторов протромбинового комлекса осуществляют добавлением к КП 3% геля гидроксида алюминия в количестве, равном 1/10 от массы КП, с перемешиванием при 25°С в течение 15 минут. Осаждение фибриногена, фибринектина и балластных белков проводят добавлением 32% ПЭГ-4000 до конечной концентрации 3,5%. pH Доводят до 6,6 и смесь центрифугируют при 4000 об/мин при 2-4°С. Содержание целевого продукта 88450 ME (выход на стадии 81%).

4. Вирусную инактивацию сольвент-детергентным методом проводят добавлением 11% раствора Твин 80 до конечной концентрации 1% с последующим медленным добавлением три-n-бутилфосфата до конечной концентрации 0,3%; pH доводят до 6,8. Вирус-инактивированный полупродукт фильтруют через фильтры Millipore диаметром пор 2-8 мкм. Содержание на стадии целевого продукта 87 565 ME (99%).

5. Хроматографическое фракционирование проводят с помощью ионообменника EMD-TMAE Fractogel, стартового, промежуточного и элюирующего буферов с концентрациями ионов натрия 130, 170 и 450 ммоль/л и проводимостью 15, 18 и 48,0 мСм/см. Объем элюирующего буфера 3,5 л, скорость элюции 4,7 л/час. Содержание целевого продукта 68 400 ME. Выход на стадии целевого продукта составляет 78%, удельная специфическая активность Ф VIII равна 165 МЕ/мг белка.

6. Стерильную фильтрацию целевой фракции хроматографической очистки после разведения до требуемой активности и стабилизации альбумином (конечная концентрация 0,1%) проводят с помощью фильтров Millipore с диаметром пор 0,22 мкм и стерильный продукт разливают во флаконы.

Содержание фактора VIII - 65830 ME, выход целевого продукта на стадии составил 96%.

7. Целевой продукт замораживают при -50°С и давлении, равном 1 бар, в течение 75 часов и затем лиофилизируют в условиях -20°С-+30°С при давлении 60 мкбар в течение 40,5 часа. Затем проводят термическую вирусную инактивацию при 80°С и давлении 60 мкбар в течение 72 часов. Выход целевого препарата Ф VIII равен 59100 ME. Выход на стадии 90%. Выход всего технологического процесса - 30%.

Полученные антигемофильные концентраты Ф VIII были стерильными, характеризовались суммарным содержанием белка (эндогенный белок и экзогенный альбумин) 1,5-1,8 мг/мл, концентрацией ионов натрия 165-175 ммоль/л; целевой Ф VIII (после хроматографической очистки) обладал высокой специфической удельной активностью (не менее 140 МЕ/мг белка). Фармакокинетика полученного препарата Ф VIII в плазме практически не отличалась от таковой антигемофильного препарата Immunate (Baxter, США); данные представлены на рисунке 4 (Фармакокинетика полученного препарата Ф VIII и препарата Immunate).

Полученный препарат Ф VIII, согласно разрешению на медицинское применение, использовали в клинике Гематологического научного центра РАМН для лечения 20 больных гемофилией А. Показаны высокая лечебная эффективность и хорошая степень восстановления полученного препарата Ф VIII.

Способ выделения фактора VIII из плазмы крови человека, не инфицированной по данным соответствующего анализа вирусами гепатита и ВИЧ 1/2, заключающийся в последовательных криоосаждении, растворении в водном растворе гепарина и солюбилизации криопреципитата, сорбции факторов протромбинового комплекса гидроксидом алюминия, удалении фибриногена, фибронектина и примесных белков полиэтиленгликолем-4000, вирусной инактивации с помощью сольвент-детергентов и предварительной фильтрации, анионообменной хроматографии, предпочтительно с применением EDM-ТМАЕ Fractogel, с элюцией натрий хлоридсодержащим буфером, стабилизации раствором альбумина, стерильной фильтрации на мембранных фильтрах с диаметром пор 0,22 мкм, розливе во флаконы (200-300 МЕ/флакон), лиофилизации и повторной термической вирусной инактивации, отличающийся тем, что при очистке используют водный раствор нефракционированного гепарина с концентрациями, равными 5-100 Международных (МЕ)/мл, предпочтительно 10-25 МЕ/мл, полиэтиленгликоля-4000 в конечной концентрации 3,5% и подкисление среды предпочтительно до величины pH 6,6, сильные анионообменники группы ТМАЕ, то есть новую комбинацию условий, существенно повышающую эффективность очистки и удельную специфическую активность фактора VIII.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в медицине. .
Изобретение относится к области препаративной биохимии, фармации и медицины и касается способа получения концентрата VIII фактора свертывания крови и продукта его содержащего.
Изобретение относится к биотехнологии и касается способов получения фактора VIII свертывающей системы крови человека. .

Изобретение относится к медицине, точнее к новой стабильной готовой форме фармацевтической композиции, содержащей фактор VIII. .

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармацевтическому препарату, содержащему фактор VII или родственный фактору VII полипептид и фактор VIII или родственный фактору VIII полипептид.
Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных веществ из донорской крови. .
Изобретение относится к области фармацевтической промышленности и биотехнологии. .
Изобретение относится к медицине, онкологии, и может быть использовано для комбинированного лечения больных со злокачественными опухолями кожи век. .

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и может быть использовано при лечении больных раком молочной железы. .

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении больных раком молочной железы. .
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения гонадотропина из крови жерёбых кобыл. .

Изобретение относится к медицине и касается способа получения препарата для лечения воспалительных и дегенеративных процессов и для стимуляции регенерации тканей, в частности, аутологичного тромбоцитарного геля.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в лечении больных с перстневидноклеточным раком желудка. .
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к набору для профилактики гипогалактии у женщин с заболеваниями щитовидной железы. .

Изобретение относится к способу дезинфекции биологических материалов. .
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении рака молочной железы (РМЖ). .

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении опухолей позвоночника
Наверх