Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона



Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона
Антагонисты vri ванилоидного рецептора на основе ионона

 


Владельцы патента RU 2447064:

ФАРМЕСТЕ С.Р.Л. (IT)

Настоящее изобретение относится с новым соединениям формулы (I), где Y представляет собой группу формулы А, в которой: R′ выбирают из атомов водорода, (С16)алкокси или фенокси, ароматический цикл которого необязательно замещен одним или более атомом галогена; R представляет собой атом водорода; n представляет собой 0; X представляет собой изохинолинил. Также изобретение относится к применению соединения формулы (I) и к фармацевтической композиции на его основе. Технический результат: получены новые соединения, обладающие свойствами антагониста ванилоидного рецептора типа 1. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 6 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к антагонистам ванилоидного рецептора, именно к антагонистам TRPV1.

Уровень техники

Ванилоидный рецептор типа 1 (TRPV1 Transient Receptor Potential Vanilloid 1) играет основную роль в развитии поствоспалительной гипералгезии; таким образом, лиганды TRPV1 могут быть клинически пригодным в качестве анальгезирующих и противовоспалительных лекарственных средств.

Известно, что соединения, полученные из природных продуктов и называемые капсаициноидами и резинифероноидами, являются лигандами TRPV1. Среди них ретванил, ваниламид ретиноевой кислоты, является потенциальным агонистом [1].

Ber. der Deutschen Chem. Gesellschaft, vol. 70, pp. 1009-1012 раскрывает синтез следующих соединений:

но не упоминает о их биологических свойствах.

WO 03/024920 отмечает использование ретиноидов для лечения артритов и воспалительных дерматологических заболеваний.

Chem. Pharm. Bull. 43(1) 100-107 (1995) раскрывает, в частности, следующие соединения:

где R представляет собой атом водорода и R' представляет собой атом водорода или метил и их ретиноидную активность.

WO 03/049702, JOC vol. 48, no. 1, 2005, pp. 71-90 и Neuropharmacology, vol. 46, no. 1, 2004, pp. 133-149 раскрывает N-ариламиды коричной кислоты, содержащие группу, которая может быть представлена следующим образом:

где А представляет замещенный арил. Эти соединения являются антагонистами ванилоидного рецептора и могут быть использованы для лечения ряда воспалительных состояний.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к ингибиторам TRPV1 формулы (I)

где:

Y представляет собой группу формулы:

в которой:

R' выбирают из атомов водорода, галогена, гидрокси, (С16)алкила, (С26)алкенила, (С36)алкинила, (С16)алкокси, (С16)алкиламино, фенила, нафтила, фенокси, нафтокси или фениламино, ароматические циклы которых необязательно замещены одним или более атомом галогена, гидрокси, (С14)алкильной, (С14)алкокси и трифторметильной группами;

R представляет собой метил или атом водорода;

n представляет собой 0 или 1;

X выбирают из фенила, пиридинила, нафтила, хинолинила и изохинолинила, необязательно замещенных одним или более группами, выбранными из атома галогена, гидрокси, (С14)алкила, (С14)алкокси и трифторметила;

за исключением следующих соединений:

Согласно первому предпочтительному варианту осуществления изобретение относится к соединениям формулы (I), где n представляет собой 0 и X представляет собой 5-изохинолинил. Среди них особенно предпочтительными являются соединения, где R представляет собой атом водорода и Y представляет собой группу формулы:

где R' имеет вышеуказанные значения, более предпочтительно означает атом водорода, метокси или фенокси, необязательно замещенный, как указано выше.

Примеры соединений формулы (I) представляют собой следующие:

(2Е)-N-(4-хлорфенил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(4-хлорбензил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(4-хлорфенил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-2-енил)акриламид;

(2Е)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(нафталин-1-ил)акриламид;

(2Е)-N-(4-хлорфенил)-3-(2,6,6-триметил-3-феноксициклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(3-метоксифенил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(5-хлорпиридин-2-ил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(4-хлорфенил)-3-(2,6,6-триметилциклогекса-1,3-диенил)акриламид;

(2Е)-N-(4-(трифторметил)фенил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(хинолин-3-ил)акриламид;

(2Е)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(хинолин-5-ил)акриламид;

(2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(3-метокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(2,6,6-триметил-3-феноксициклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(3-(3-метоксифенил)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид;

(2Е)-3-(3-(4-хлорфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид;

(2Е)-3-(3-(4-фторфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид;

(2Е)-3-(3-(3-фторфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид;

(2Е)-3-(3-(3,4-дифторфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид.

Соединения формулы (I) могут быть получены стандартными методами, такими как взаимодействие соединения формулы (II)

где Y и R соответствуют вышеуказанному определению, и карбоксильная группа активирована подходящим способом для реакции амидирования

с коммерчески доступным соединением формулы (III)

X(CH2)nNH2 (III)

где X соответствует вышеуказанному определению.

Изобретение далее иллюстрируется посредством следующих примеров и схем.

ПРИМЕРЫ

Все коммерчески доступные соединения были куплены в Aldrich и использовались без дополнительной очистки. За ходом реакций следили методом тонкослойной хроматографии на силикагеле (покрытые пластины F254 Merck), пятна рассматривали под УФ-излучением и проявляли водным раствором KMnO4. Флэш-хроматографию проводили с использованием силикагеля Merck (230-240 меш). Спектры 1H-ЯМР регистрировали на спектрометре Varian 400 МГц, используя ТМС в качестве внутреннего стандарта. Масс-спектры были получены на спектрометре Waters-Micromass ZMD. Температуры плавления определяли в аппарате Buchi-Tottoli и не исправляли.

Пример 1 - (2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид Ia (схема 1)

Кислота 1 была получена из коммерчески доступного β-ионона галоформной реакцией, как описано в литературе [2]. 1,0 ммоль (194 мг) кислоты 1 растворили в 8 мл безводного ДМФА. EDCI (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид) (1,2 экв., 1,2 ммоль, 230 мг), HOBt (N-гидроксибензотриазол) (1,2 экв., 1,2 ммоль, 162 мг) и 5-аминоизохинолин (1,2 экв., 1,2 ммоль, 173 мг) последовательно добавили при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Растворитель упарили при пониженном давлении и остаток растворили в 50 мл этилацетата. Органическую фазу промыли водой (2 х 20 мл), насыщенным раствором хлорида натрия (1 х 10 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали методом колоночной хроматографии (силикагель, 3/7 этилацетат/гексан, за которым следовал этилацетат) и в заключении перекристаллизовали из диэтилового эфира с образование 150 мг бежевого твердого вещества. Выход = 47%. Тпл: (диэтиловый эфир) 131-133°С. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,10 (6H, с), 1,49 (2H, м), 1,62 (2H, м), 1,81 (3H, с), 2,05 (2H, м), 6,18 (1H, д), 7,62 (2H, м), 7,70 (2H, м), 7,81 (1H, д), 8,38 (1H, уш. с), 8,53 (1H, д, J=5,6 Гц), 9,25 (1H, с); [М+1] 321,7 (C21H24N2O вычислено 320,43).

Пример 2 - (2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(3-метокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акриламид Ib (схема 2)

Синтез 1

Синтез (2Е)-метил 3-(3-метокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)акрилат 3 [3]

Суспензию сложного эфира 2 (8 ммоль, 1,66 г) и N-бромсукцинимида (NBS) (1,1 экв., 8,8 ммоль, 1,56 г) в CCl4 (30 мл) кипятили в течение 1 ч. После фильтрования через слой целлита растворитель упарили. Остаток растворили в MeOH (20 мл) и реакцию кипятили всю ночь. Растворитель упарили и неочищенный остаток растворили в диэтиловом эфире (30 мл) и промыли водой (1 х 20 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и сконцентрировали в вакууме. Очистку неочищенного остатка проводили методом колоночной хроматографии с использованием в качестве элюента смеси 1/9 этилацетат/петролейный эфир и получили 715 мг бесцветного масла. Выход = 37,5% (две стадии). 1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,02 (3H, с), 1,04 (3H, с), 1,38 (2H, м), 1,62 (2H, м), 1,79 (3H, с), 3,37 (3H, с), 3,51 (1H, м), 3,75 (3H, с), 5,84 (1H, д, J=16 Гц), 7,33 (1H, д, J=16 Гц); [М+1] 239,1 (С14Н22O3 вычислено 238,32).

Синтез (2Е)-3-(3-метокси-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил) акриловой кислоты 4

LiOH (5 экв., 630 мг) добавили при 0°С к раствору сложного эфира 3 (3 ммоль, 715 мг) в смеси 3:1:1 ТГФ/МеОН/вода (15 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Растворители удалили при пониженном давлении и остаток разбавили водой (20 мл). Кислоту высадили добавлением 10% HCl и затем экстрагировали AcOEt (3 × 15 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и упарили в вакууме и получили 600 мг маслообразного продукта. Выход = 89%. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,03 (3H, с), 1,05 (3H, с), 1,39 (2H, м), 1,62 (2H, м), 1,80 (3H, с), 3,38 (3H, с), 3,52 (1H, м), 5,86 (1H, д, J=16 Гц), 7,45 (1H, д, J=16 Гц); [М+1] 225,5 (С13Н20O3 вычислено 224,3).

Синтез 2

1,0 ммоль (224 мг) кислоты 4 растворили в 10 мл безводного ДМФА. EDCI (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид) (1,2 экв., 1,2 ммоль, 230 мг), HOBt (N-гидроксибензотриазол) (1,2 экв., 1,2 ммоль, 162 мг) и 5-аминоизохинолин (1,2 экв., 1,2 ммоль, 173 мг) были добавлены последовательно при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Растворитель упарили при пониженном давлении и остаток растворили в 50 мл этилацетата. Органическую фазу промыли водой (3 × 20 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (1 × 10 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очищали методом колоночной хроматографии (силикагель, этилацетат) и в заключение перекристаллизовали из диэтилового эфира с образование 160 мг желтого аморфного твердого вещества. Выход = 45%. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,07 (6H, с), 1,42 (2H, м), 1,66 (2H, м), 1,86 (3H, c), 3,40 (3H, c), 3,48 (1H, м), 6,18 (1Н, д), 7,51 (1Н, м), 7,65 (3H, м), 7,84 (1H, д), 8,38 (1H, уш.с), 8,55 (1H, д, J=6 Гц), 9,26 (1H, с); [М+1] 351,2 (С22Н26N2O2 вычислено 350,45).

Пример 3 - (2Е)-N-(изохинолин-5-ил)-3-(2,6,6-триметил-3-феноксициклогекс-1-енил)акриламид Iс (схема 3)

Синтез 1

Синтез (2Е)-метил 3-(2,6,6-триметил-3-феноксициклогекс-1-енил)акрилата 5с [4]

Суспензию сложного эфира 2 (3,12 ммоль, 650 мг) и N-бромсукцинимида (NBS) (1,1 экв., 3,43 ммоль, 611 мг) в CCl4 (15 мл) кипятили в течение 1 ч. После фильтрования через слой целлита растворитель упарили. Остаток растворили в MeOH (5 мл) и по каплям добавили к раствору феноксида натрия (6,24 ммоль) в метаноле (10 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Реакцию вылили в холодный 5% водный раствор гидроксида натрия (15 мл) и продукт экстрагировали эфиром (2 × 20 мл). Органический слой промыли водой (1 × 10 мл), насыщенным раствором хлорида натрия (1 × 5 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и сконцентрировали в вакууме. Очистку неочищенного продукта проводили методом колоночной хроматографии с использованием в качестве элюента смеси 1/9 этилацетат/петролейный эфир и получили 350 мг бесцветного масла. Выход = 37,5% (две стадии). 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,07 (3H, с), 1,12 (3H, с), 1,42 (2H, м), 1,78 (2H, м), 1,86 (3H, с), 3,78 (3H, с), 4,57 (1H, м), 5,92 (1H, д, J=16,4 Гц), 6,95 (3H, м), 7,29 (2H, м), 7,44 (1H, д, J=16,4 Гц); [М+1] 301,2 (С19Н24O3 вычислено 300,39).

Синтез (2Е)-3-(2,6,6-триметил-3-феноксициклогекс-1-енил) акриловой кислоты 6с

LiOH (5 экв., 243 мг) добавили при 0°С к раствору сложного эфира 5 (1,16 ммоль, 350 мг) в смеси 3:1:1 ТГФ/МеОН/вода (12,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Растворители удалили при пониженном давлении и остаток разбавили водой (20 мл). Кислоту высадили добавлением 10% HCl и затем экстрагировали AcOEt (3 × 15 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и упарили в вакууме с получением 300 мг белого твердого вещества. Выход = 90%. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,08 (3H, с), 1,13 (3H, с), 1,44 (2H, м), 1,78 (2H, м), 1,87 (3H, с), 4,58 (1H, м), 5,94 (1H, д, J=16,4 Гц), 6,96 (3H, м), 7,29 (2H, м), 7,52 (1H, д, J=16,4 Гц); [М+1] 287,5 (С18Н22O3 вычислено 286,37).

Синтез 2

0,5 ммоль (143 мг) кислоты 6с растворили в 5 мл безводного ДМФА. EDCI (1,2 экв., 0,6 ммоль, 115,2 мг), HOBt (1,2 экв., 0,6 ммоль, 81 мг) и 5-аминоизохинолин (1,2 экв., 0,6 ммоль, 86,51 мг) добавили последовательно при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Растворитель упарили при пониженном давлении и остаток растворили в 30 мл этилацетата. Органическую фазу промыли водой (2 х 10 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (1 × 10 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенный твердый продукт очищали методом колоночной хроматографии (силикагель, этилацетат/петролейный эфир 8:2) и в заключении перекристаллизовали из диэтилового эфира с образование 100 мг белого твердого вещества. Выход = 48,5%. Тпл.: (диэтиловый эфир) 141-143°С. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,14 (3H, с), 1,17 (3H, с), 1,47 (2H, м), 1,78 (2H, м), 1,95 (3H, с), 4,60 (1H, м), 6,41 (1H, д), 6,97 (2H, д, J=7,2 Гц), 7,26 (4H, м), 7,59 (1H, д, J=16 Гц), 7,80 (1H, т, J=8 Гц), 7,92 (1H, д, J=8 Гц), 8,17 (1H, м), 8,37 (1H, м), 8,52 (1H, уш.с), 9,26 (1H, с); [М+1] 413,6 (С27Н28N2O2 вычислено 412,52).

Пример 4 - (2Е)-3-(3-(4-хлорфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид Id (схема 3)

Согласно синтезу 2, исходя из 0,5 ммоль кислоты 6d, получили 150 мг соединения Id в виде белого твердого вещества. Выход = 67%. Тпл.: (диэтиловый эфир) 168°С. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,11 (3H, с), 1,14 (3H, с), 1,45 (2H, м), 1,66 (2H, м), 1,86 (3H, с), 4,76 (1H, м), 6,61 (1H, д), 7,06 (2H, д, J=8,8 Гц), 7,31 (2H, м), 7,34 (2H, д, J=8,8 Гц), 7,69 (1H, т, J=8 Гц), 7,95 (1H, д, J=8 Гц), 8,04 (1H, м), 8,27 (1H, уш.с), 8,58 (1H, д, J=6 Гц), 9,33 (1H, с); [М+1] 448,4 (С27Н27СlN2O2 вычислено 446,97).

Пример 5 - (2Е)-3-(3-(4-фторфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид Iе (схема 3)

Согласно синтезу 2, исходя из 0,5 ммоль кислоты 6е, получили 100 мг соединения Iе в виде белого твердого вещества. Выход = 46%. Тпл.: (диэтиловый эфир) 135-137°С. 1H ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 1,11 (3H, с), 1,15 (3H, с), 1,44 (2H, м), 1,71 (2H, м), 1,92 (3H, с), 4,50 (1H, м), 6,21 (1H, д), 6,91 (2H, м), 6,98 (2H, м), 7,54 (1H, д, J=15,6 Гц), 7,72 (3H, м), 7,87 (1H, д), 8,41 (1H, уш.с), 8,55 (1H, д, J=6,4 Гц), 9,28 (1H, с); [М+1] 431,6 (С27Н27FN2O2 вычислено 430,51).

Пример 6 (2Е)-3-(3-(3-фторфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид If (схема 3)

Согласно синтезу 2, исходя из 0,5 ммоль кислоты 6f, получили 90 мг соединения If в виде белого твердого вещества. Выход = 42%. Тпл.: (диэтиловый эфир) 147°С. 1H ЯМР (CDCl3, 200 МГц) δ 1,11 (3H, с), 1,14 (3H, с), 1,57 (2H, м), 1,71 (2H, м), 1,88 (3H, с), 4,56 (1H, м), 6,20 (1H, д), 6,70 (4H, м), 7,58 (1H, д, J=15,6 Гц), 7,65 (3H, м), 7,85 (1H, д), 8,38 (1H, уш.с), 8,59 (1H, д, J=5,8 Гц), 9,29 (1H, с); [М+1] 431,5 (С27Н27FN2O2 вычислено 430,51).

(2Е)-3-(3-(3,4-дифторфенокси)-2,6,6-триметилциклогекс-1-енил)-N-(изохинолин-5-ил)акриламид Ig (схема 3)

Согласно синтезу 2, исходя из 0,5 ммоль кислоты 6g, получили 90 мг соединения Ig в виде белого твердого вещества. Выход = 40%. Тпл.: (диэтиловый эфир) 155°С. 1H ЯМР (CDCl3, 200 МГц) δ 1,11 (3H, с), 1,14 (3H, с), 1,53 (2H, м), 1,75 (2H, м), 1,89 (3H, с), 4,55 (1H, м), 6,20 (1H, д), 6,68 (3H, м), 7,50 (1H, д, J=15,6 Гц), 7,65 (3H, м), 7,85 (1H, д), 8,40 (1H, уш.с), 8,60 (1H, д, J=5,8 Гц), 9,29 (1H, с); [М+1] 449,7 (С27Н26F2N2O2 вычислено 448,51).

Схема 1

Реагенты: i) EDCI, HOBt, 5-аминоизохинолин, ДМФА, Ткомн.

Схема 2

Реагенты: i) NBS/CCl4; ii) MeOH, кипячение; iii) LiOH, ТГФ/MeOH/вода, Ткомн.; iv) EDCI, HOBt, 5-аминоизохинолин, ДМФА, Ткомн.

Схема 3

Реагенты: i) NBS/CCl4; ii) R”PhONa, EtOH, Ткомн.; iii) LiOH, ТГФ/MeOH/вода, Ткомн.; iv) EDCI, HOBt, 5-аминоизохинолин, ДМФА, Ткомн.

Количественное определение биологической активности

Использовались новорожденные и зрелые крысы линии Sprague-Dawley (~250 г) (Harlam, Италия). Все эксперименты соответствовали национальным протоколам и были одобрены региональным комитетом по этическим нормам.

Анализ радиолигандного связывания

Для испытаний использовались самцы крыс линии Sprague-Dawley с массой тела между 250 и 350 г к моменту исследования. Для анализа связывания крыс декапитировали под анестезией, извлекали спинной мозг и разрушали с использованием тканевого гомогенизатора Polytron в ледяном буфере, содержащем 5 мМ KCl, 5,8 мМ NaCl, 0,75 мМ CaCl2, 2мМ MgCl2, 320 мМ сахарозы, 10 мМ Hepes (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), pH 8,6 [5]. Гомогенизированную ткань центрифугировали при 1000 × g в течение 10 мин при 4°С и супернатант снова центрифугировали в течение 30 мин при 35000 × g при 4°С (Beckman Avanti J25). Осадок ресуспендировали в том же буфере, описанном выше, и использовали в экспериментах по связыванию. В экспериментах по насыщению 150 мкг белок/образец из суспензий мембран инкубировали с [3Н]-резинифератоксином ([3H]RTX) (0,003-3 нМ) в исследуемом буфере, содержащем 0,25 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA) без жирных кислот, при 37°С в течение 60 мин. В экспериментах по конкурирующему связыванию мембраны инкубировали при 37°С в течение 60 мин с [3H]RTX (0,4 нМ) и повышая концентрации изучаемых соединений в интервале от 0,1 нМ до 3 мкМ. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 1 мкМ RTX. После инкубации реакционную смесь охладили до 0°С и в течение 15 мин инкубировали с бычьим α1-кислым гликопротеином (200 мкг на пробирку) для уменьшения неспецифического связывания RTX. Мембраносвязанный RTX отделили от свободного RTX центрифугированием образцов при 18500 × g в течение 15 мин. Конец микроцентрифужной пробирки, содержащий осадок, отрезали и радиоактивность измеряли сцинтилляционным методом (Packard 2500 TR). Концентрацию белка определяли согласно методу Bio-Rad c бычьим сывороточным альбумином в качестве стандарта (Bradford, 1976). Результаты исследования по насыщению и конкурентному связыванию анализировали программой Ligand [6].

Измерение Са2+ методом флуоресцентного анализа в культивированных ганглиях тройничного нерва крысы

Двухдневных и новорожденных крыс необратимо анестезировали и декапитировали. Ганглии тройничного нерва были выделены и быстро помещены в холодный раствор фосфатного буфера (PBS) перед перенесением в раствор коллагеназы/диспазы (1 мг/мл растворенный в свободном от Ca2+ и Mg2+ PBS) на 35 мин при 37°С [7]. После ферментативной обработки ганглии промыли три раза свободным от Ca2+ и Mg2+ PBS и затем поместили в 2 мл холодной среды DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) с добавлением 10% сыворотки эмбрионов коров (FBS, инактивированная нагреванием), 2 мМ L-глутамина, 100 μ/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Ганглии диссоциировали на одиночные клетки несколькими пропусканиями через группу инъекционных игл (23G вплоть до 25G). В заключение среду и клетки ганглиев фильтровали через 40 мкм фильтр для удаления дебриса и добавили 8 мл среды DMEM и центрифугировали (200 × g 5 мин). Целевой осадок клеток ресуспендировали в среде DMEM [с добавлением 100 нг/мл фактора роста нервов мыши (мыши NGF-7S) и свободного основания цитозин-β-D-арабинофуранозида (ARA-C) 2,5 мкМ]. Клетки высеивали на покрытые поли-L-лизином (8,3 мкМ) и ламинином (5 мкМ) 25 мм покровные стекла и выдерживали в течение от 5 до 8 дней при 37°С во влажной камере, заполненной 5% СО2 и воздухом. К высеянным нейронам добавили эфир Fura-2-АМ (3 мкМ) в растворе Са2+ буфера со следующим составом (мМ): CaCl2 1,4, KCl 5,4, MgSO4 0,4, NaCl 135, D-глюкоза 5, НЕРЕS (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота) 10 с BSA (бычий сывороточный альбумин) (0,1%), при pH 7,4 на 40 мин при 37°С. Высеянные нейроны затем дважды промыли раствором Са2+ буфера и перенесли в ячейку на предметном столике микроскопа Nikon eclipse TE300. Эфир Fura-2-АМ возбуждали при 340 нм и 380 нм, чтобы измерить относительные изменения концентрации [Са2+]i с помощью отношения F340/F380, которое фиксировалось системой анализа динамического изображения (Laboratory Automation 2.0, RCS, Флоренция, Италия). После перенесения высеянных нейронов в ячейку их оставили (по крайней мере, на 10 мин) для достижения стабильной флуоресценции перед началом эксперимента. Калибровочная кривая была получена с использованием буфера, содержащего эфир Fura-2-АМ и заданную концентрацию свободного Са2+. Затем эту кривую использовали для преобразования данных, полученных из отношения F340/F380 в [Ca2+]i (нМ) [8]. Было изучено влияние премедикации капсазепином (CPZ), SB366791 и соединениями формулы (I) на повышение [Ca2+]i, обусловленное 0,1 мкМ капсаицина.

Вызванная капсаицином вторичная аллодиния у крыс

Капсаицин (20 нмоль/50 мкл/лапа) был введен в лишенный волос участок кожи подошвенной поверхности правой лапы крысы, под анестезией диэтиловым эфиром (Chaplan et al., 1994). Соединение Id было введено перорально (10 мг/кг) за 2 часа до инъекции капсаицина. Тактильная аллодиния была оценена через 90 мин после введения капсаицина.

Лекарственные вещества и реагенты

Лекарственные вещества и реагенты были получены у указанных компаний: [3Н]-Резинифератоксин (Perkin Elmer, Бостон, MA), SB-366791 (Tocris, Великобритания), капсаицин, капсазепин, иономицин, ламинин, поли-L-лизин, вещество P (Sigma, Италия); мыши NGF-7S и коллагеназа/диспаза (Roche Diagnostics, Италия); модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (DMEM), сыворотка эмбрионов коров (FBS), инактивированная нагреванием, L-глутамин (200 мМ), пенициллин/стрептомицин (10,000 МЕ/мл ± 10,000 мкг/мл), (Gibco, Италия); эфир Fura-2-AM (Società Italiana Chimici, Италия). Исходные концентрации капсаицина (10 мМ), капсазепина (10 мМ), SB-366791 (1 мМ) и соединений формулы (I) были приготовлены в 50% DMSO и 50% Твина 80 (Tween 80). Эфир Fura-2-AM и иономицин растворяли в 100% DMSO. Все другие лекарственные вещества растворяли в дистиллированной воде. Растворы с подходящими степенями разбавления затем были приготовлены в буферном растворе Кребса.

Результаты

Количественное определение биологической активности

Кривая насыщения [3H]-RTX на рецепторах TRPV1, выделенных из спинного мозга крыс, показывает значение KD, равное 0,21 (0,16-0,27), и значение Bmax, равное 57 (53-62) фмоль/мг белка. График Скэтчарда фактически линейный, и компьютерный анализ данных показывает, что присутствует только один тип сайтов связывания с высокой аффинностью. Эксперименты по конкурентному связыванию [3H]-RTX показали, что соединения Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig и эталонного соединения (Е)-3-(4-хлорфенил)-N-(3-метоксифенил)-акриламид (SB-366791) обладают значениями Ki, равными 66 (56-78) нМ, 26,2 (21,1-32,6) нМ, 4,93 (3,40-7,16) нМ, 27 (23-32) нМ, 14,8 (10,2-21,5) нМ, 8,14 (6,87-9,65) нМ, 10,3 (7,9-13,4) нМ и 36 (30-43) нМ соответственно.

Ca2+ флуоресценция

Капсаицин (0,1 мкМ) вызвал увеличение [Ca2+] в подавляющем большинстве (95%) нейронов тройничного нерва, которые по этой причине были определены как TRPV1 экспрессирующие нейроны. Значения IC50 соединений Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If и Ig, ингибирующие вызываемую капсаицином активацию [Ca2+]i, составили 44 (11-184) нМ, 28,4 (25,2-31,9) нМ, 2,12 (1,44-2,82) нМ, 18,2 (4-98) нМ, 5,25 (4,11-6,70) нМ, 0,38 (0,36-0,40) нМ и 0,65 (0,62-0,68) нМ соответственно. Эталонные антагонисты TRPV1, капсазепин и SB-366791 ингибировали отклик капсаицина со значениями IC50, равными 948 (676-1330) нМ и 8,7 (3,4-17,3) нМ соответственно. Результаты выражали в виде среднего значения и границ 95% доверительного интервала.

Вызванная капсаицином вторичная аллодиния у крыс

Через 90 мин после введения капсаицина соединение Id вызвало превентивный эффект (54%) против проаллодинического эффекта капсаицина.

ССЫЛКИ

1. Appendino, G. and Szallasi A. Progress in Medicinal Chemistry 2006, 44, 145-180.

2. Shimasaki, H.; Kagechika, H.; Fukasawa, H. Kawachi, E.; Shudo, K. Chemical & Pharmaceutical Bulletin 1995, 43, 100-7.

3. a) Baasov, T. and Sheves, M. Angew. Chem. 1984, 23, 803-804. b) Baraldi, P. G.; Pollini, G. P.; Simoni, D.; Zanirato, V.; Barco, A.; Benetti, S. Synthesis 1986, 9, 781-2.

4. Nanasawa, M. and Kamogawa, H. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1982, 55, 3655-3656.

5. a) Szallasi A. and Blunberg P. M. Neurosciences 1992, 8, 368. b) Szallasi A. and Blunberg P.M. Naunyn Schmiedeberg's Arch Pharmacol. 1993, 347, 84-91.

6. Munson, P.J.; Rodbard, D. Anal. Biochem. 1980, 107, 220-239.

7. Rigoni, M.; Trevisani, M.; Gazzieri, D.; Nadaletto, R.; Tognetto, M.; Creminon, C; Davis, J.B.; Campi, B.; Amatesi, S.; Geppetti, P.; Harrison, S. Br. J. Pharmacol. 2003, 138, 977-985.

8. Kudo, Y.; Ozaki, K.; Miyakawa, A.; Amano, T.; Ogura, A. Jap. J. Pharmacol. 1986, 41, 345-351.

1. Соединение формулы (I)

где Y представляет собой группу формулы

в которой
R' выбирают из атомов водорода, (C1-C6)алкокси или фенокси, ароматический цикл которого необязательно замещен одним или более атомом галогена;
R' представляет собой атом водорода;
n представляет собой 0;
X представляет собой изохинолинил.

2. Соединение по п.1, где X представляет собой 5-изохинолинил.

3. Соединения по п.1 или 2 для применения в качестве лекарственного средства, обладающего свойствами антагониста ванилоидного рецептора типа 1.

4. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами антагониста ванилоидного рецептора типа 1, включающая соединение по любому из пп.1-4 в сочетании с одним или более носителем и/или эксципиентом.

5. Применение соединений по п.1 или 2 для приготовления анальгезирующих и/или противовоспалительных лекарственных средств.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), обладающим антитромботической активностью, которые, в частности, ингибируют фактор свертывания крови IXa, к способам их получения и к их применению в качестве лекарственных средств.

Изобретение относится к замещенным амидам бензойной кислоты формулы (I), их изомерам и солям в качестве ингибиторов тирозинкиназы KDR и FLT, а также к лекарственному средству на их основе.

Изобретение относится к соединениям формулы I, которые могут найти применение в качестве ингибиторов ГФАТ, и к фармацевтической композиции, обладающей ингибирующей активностью в отношении ГФАТ, включающей упомянутое соединение формулы I, в котором R 1 обозначает -низш.

Изобретение относится к способу получения хинаприла, его фармацевтически приемлемых солей, включая гидрохлорид хинаприла. .

Изобретение относится к новым замещенным 4-фенилтетрагидроизохиналина общей формулы где R1, R2, R3 и R4, независимо друг от друга, означают Н, F, Cl, Br, CaН2a+b где один или более атомов Н замещены F, NR11R12 или SO j-R15; а 1-8, R11 и R12 независимо друг от друга, означают Н, CeH2e+1 или C rrH2rr-1; е означает 1-4; rr означает 3, 4; или вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют цикл, выбранный из группы, состоящей из пирролидинила, пипперидинила, N-метилпиперазинила, пиперазинила или морфолина; j означает 1 или 2; R15 означает CkH 2k+1; k означает 1-8; R5 означает Cp H2p+1 или CssH 2ss-1; p означает 1-8; ss означает 3-8; R6 Н; R7, R8 и R9, независимо друг от друга, означают SOw R23, NR32COR30, NR32CSR30, NR32SObbR30, Н, F, Cl, Br, ОН, NH2, С ееН2ее+1 NR40R41, CONR40R41 или COOR42; w означает 0,1 или 2; bb означает 2 или 3; R23 означает NR25R26; R25 и R26, независимо друг от друга, означают Н, или C zH2z+1, Czz H2zz-1; z означает 1-8; zz означает 3-8, где в CzH2z+1, C zzH2zz-1 один или более атомов Н замещены атомом фтора и одна или более CH2 -группы замещены на C(=O) или NR27; R27 означает Н или C aaH2aa+1; аа означает 1-4; или R25 и R26 вместе с атомом азота, с которым они связаны образуют 5-, 6- или 7-членный цикл, R30 означает Н, Ссс Н2сс+1, CyyH 2yy-1, пирролидинил, пиперидинил, в циклах которых группа СН2- может быть замещена на О или NR33; R32 и R33 независимо друг от друга означают Н или C hH2h+1; ее означает 1-8; yy означает 3-8; h означает 1-8; где в ChH 2h+1 один или более атомов водорода замещены на атом фтора и в группах CccH2cc+1 и CyyH2yy-1 один или более атомов водорода могут быть замещены атомами фтора и группа СН2 может быть замещена О или NR31; R31 означает Н, метил, этил, ацетил или SO2 CH3; или R30 6-членный гетероарил с 1-4 атомами азота, ноль или 1 S-атомам или ноль или 1 O-атомом, который является незамещенным или замещенным до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из F, Cl, Br, I, Coo H2oo+1 где один или более атомов водорода могут быть замещены атомом фтора, NO2 или NR70R71; oo 1-8; R70 и R71 независимо друг от друга означают Н, CuuH2uu+1 или COR72; uu означает 1-8; R72 означает Н, Cvv H2vv+1; vv означает 1-8; ее означает 1-8; R40 и R41 означают независимо друг от друга Н, C ttH2tt+1 или C(NH)NH 2; tt означает 1-8; где в группе Ctt H2tt+1 один или более групп СН 2- могут быть замещены на NR44; R44 означает C ggH2gg+1; gg означает 1-8; R42 означает Н или ChhH2hh+1; hh означает 1-8; причем однако, два заместителя из группы R7, R8 и R9 одновременно не могут означать ОН, и по меньшей мере один из остатков R7, R8 или R9 должен быть выбран из группы, состоящей из CONR40R41, -OvSO wR23, NR32COR30, NR32CSR30 и NR32SObb R30, Изобретение относится также к применению вышеуказанных соединений, для получения лекарственного средства.

Изобретение относится к новым соединениям, фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к их применению в терапии, в частности, в качестве антипсихотических агентов.

Изобретение относится к области химии гетероциклических соединений, а именно к способам получения 1-замещенных производных 3,3-диалкил-3,4-дигидроизохинолина. .

Изобретение относится к медицине, в частности для лечения заболеваний, обусловленных персистирующим антиогенезом, который может являться причиной различных заболеваний, таких как псориаз, артрит, такой как ревматоидный артрит, гемангиома, ангиофиброма, глазные болезни, такие как диабетическая ретинопатия, неоваскулярная глаукома, заболевания почек, такие как гломерулонефрит, диабетическая нефропатия, злокачественный нефросклероз, тромбозная микроангиопатия, отторжения трансплантатов и гломерулопатия, фиброзные заболевания, такие как цирроз печени, заболевания, связанные с пролиферацией мезангиальных клеток, и артериосклероз, или может привести к прогрессированию этих заболеваний.

Изобретение относится к способу очистки изохинолина, который заключается в том, что фракцию изохинолина, полученную путем обработки битумной каменноугольной смолы, содержащую приблизительно до 1 мас.% хинолина и приблизительно до 8 мас.% хинальдина, охлаждают до температуры 4-18oС и проводят суспензионную кристаллизацию путем центрифугирования маточного раствора.

Изобретение относится к способу получения 1-замещенных 3,3-диметил-3,4-дигидроизохинолинов формулы (I), где R=OMe; Me; X=Me; SMe; Ph; CH2COOEt; CH2CONH2, который заключается в том, что в среду концентрированной серной кислоты одновременно вводят изомасляный альдегид, 1,2- или 1,4-диметокси- (или -диметил) замещенный бензол и нитрил формулы RCN (где R=Me; SMe; Ph; CH2COOEt; CН2CONH2) при мольном соотношении реагентов соответственно 1:1:1.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новым соединениям класса амидов NH-ацил-5-йодантраниловой кислоты общей формулы (I), где: R1=CH2C 6H5, R=4-NO2 (I); R1=CH 2CH=CH2, R=3-NO2 (II); R1 =CH2CH=CH2, R=4-CH3 (III).
Наверх