Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации



Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации

 


Владельцы патента RU 2453291:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" РАМН) (RU)

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности к трансплантологии. Для получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации используют донорскую трахею. Образец трахеи механически очищают от жировой и соединительной ткани, промывают дистиллированной водой, инкубируют в течение 14-21 суток в 5% растворе NaClO4, обновляя раствор каждые 72 часа, промывают физиологическим раствором. Способ обеспечивает получение стерильного матрикса трахеи для аллогенной трансплантации в короткие сроки с сохранением макроструктуры и эластичности трахеи и снижением иммуногенности. 12 ил., 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности трансплантологии.

При развитии стеноза трахеи, вызванного злокачественными новообразованиями, инфекционными заболеваниями, послеоперационными осложнениями или травмой, возникает необходимость в резекции значительных участков органа. В ряде случаев невозможно формирование первичного анастомоза и требуется замена дефекта трансплантатом.

Для восстановления целостности трахеи использовались различные протезы и ткани: замещение трахеальных дефектов аутологичными тканями, такими как надкостница, тонкая кишка, мышцы, пищевод, ткани бронха и аорты. Эти способы оказались малоэффективными и не позволяли формировать полноценный каркас трахеи. Кроме того, эти трансплантаты в дальнейшем замещались соединительной тканью, блокирующей воздухопроводящие пути [Grillo НС. Tracheal replacement: a critical review. Ann. Thorac. Surg.. - 2002. - Vol.73. - P.1995-2004].

Известны аллотрансплантаты для замещения дефектов трахеи, содержащие эпителий и хрящевые кольца, которые являлись мишенями для отторжения. Для предотвращения отторжения аллотрансплантата требуется проведение длительной неспецифической иммуносупрессивной терапии, вызывающей ряд побочных эффектов. В большинстве случаев после прекращения иммуносупрессивной терапии наблюдалось отторжение трансплантированных тканей [М. Sykes Immune evasion by chimeric trachea. N. Engl. J. Med. -. 2010 - Vol.362. - P.172-174].

В качестве прототипа заявляемого способа получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации предлагается способ с использованием трупной трахеи, детергентов и энзимов [Р. Macchiarini at al. Clinical transplantation of a tissue-engineered airway. Lancet 2008; 372:2023-2030]. Для снижения иммуногенности и удаления молекул главного комплекса гистосовместимости МНС I и II классов образец трахеи выдерживали в дистиллированной воде в течение 72 часов, затем проводили децеллюляризацию путем инкубирования трахеи в смеси 4% раствора натрия деоксихолата и 2000 ед. дезоксирибонуклеазы в 1 mM/л натрия хлорида, 25 циклов в течение 6 недель.

Недостатки прототипа: 1) не обеспечивает стерильность трансплантата, что может привести к гнойно-септическим осложнениям и к последующему отторжению трансплантата; 2) длительность обработки трансплантата трахеи (6 недель) не позволяет использовать его у больных с острой дыхательной недостаточностью, обусловленной дефектом или обтурацией трахеи; 3) нарушает структуру хрящевой ткани.

Задачей заявляемого изобретения является разработка способа получения стерильного матрикса трахеи для аллогенной трансплантации в более короткие сроки (2-3 недели).

Заявляемый способ предусматривает следующие стадии:

а) механическое очищение донорской трупной трахеи от соединительной и жировой тканей;

б) децеллюляризация донорской трахеи.

Способ осуществляется следующим образом: образцы трахеи механически очищают от жировой и соединительной тканей, промывают дистиллированной водой. С целью децеллюляризации трахею инкубируют в 5% растворе перхлората натрия (NaClO4) в течение 14-21 суток, при этом растворы обновляют каждые 72 часа. Затем образцы трахеи отмывают физиологическим раствором.

Пример 1. Оценка макро- и микроструктуры иммуногистохимических особенностей трасплантата

Исследования проведены на мышах линии C57BL/6 весом 22-25 г. У мышей линии C57BL/6 под эфирным наркозом удаляли трахею и механически освобождали от слизи, мышечных элементов, жировой и соединительной тканей; затем промывали дистиллированной водой. С целью децеллюляризации образцы трахеи инкубировали в 5% растворе NaClO4 в течение 14 суток. Раствор обновляли каждые 72 часа. Затем образцы отмывали физиологическим раствором и проводили морфологическое и иммуногистохимическое исследования. Экспрессию антигенов МНС I и II классов, а также дифференцировочных антигенов натуральных киллеров определяли на отпечатках и криостатных срезах образцов трахеи. Для этих целей использовали антитела NK 1.1 - РЕ, МНС I-FITC и МНС II-FITC фирмы Coltag. Световую и флюоресцентную микроскопию проводили с использованием фотовидеосистемы фирмы Zeiss и программы Axiovision 2.

Как показано на фиг.1, обработка 5% раствором NaClO4 не приводит к выраженным нарушениям структуры хрящевой и соединительной тканей трахеи.

В заявляемом способе получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации образцы сохраняли свою макроструктуру и эластичность. При использовании заявляемого способа наблюдали полное разрушение структуры слизистой оболочки, в то время как хрящевая ткань сохраняла свою структуру, а в хондроцитах определяли невакуолизированную цитоплазму и ядро (Фиг.2, 3). Показано, что после обработки слизистой оболочки 5% раствором NaClO4 были обнаружены лишь отдельные полуразрушенные клетки с вакуолизированной цитоплазмой и безъядерные клеточные фрагменты (Фиг.4, 5). При иммунофлюоресцентном исследовании выявлено, что после воздействия 5% раствора NaClO4 в отпечатках трахеи не обнаружено специфической реакции на антигены гистосовместимости МНС I класса, определяли лишь единичные МНС II-положительные клетки (Фиг.6, 7).

Пример 2. Оценка гетеротопной аллогенной трасплантации матрикса трахеи у мышей

Подготовку трансплантатов осуществляли, как описано в примере 1. Далее у мышей реципиентов линии Balb/c в дорзолатеральной области грудной клетки формировали подкожный карман, в который помещали трансплантат. Через 28 суток трансплантат извлекали и проводили гистологическое исследование. Световую микроскопию проводили с использованием фото-видеосистемы фирмы Zeiss (Германия) и программы Axiovision 2. Гистологическое исследование извлеченного трансплантата позволило установить, что в нем сохранялись хрящевые полукольца и соединительная ткань (Фиг.8, 9).

Пример 3. Оценка гетеротопной аллогенной трасплантации матрикса трахеи у собак

Подготовку образцов донорской трахеи человека осуществляли, как описано в примере 1, но обработка трахеи длилась 21 сутки. Далее у собаки-реципиента в области паховой складки делали дугообразный разрез кожи и формировали межмышечный карман, в который помещали матрикс донорской трахеи, полученный заявляемым способом.

У животного после имплантации трахеи, обработанной по заявляемому способу, не наблюдалось симптомов общей или местной воспалительных реакций. Через 28 суток трансплантат извлекали и проводили гистологическое исследование. Трансплантат сохранил свою форму, хрящевую основу и эластичность (Фиг.10). При гистологическом исследовании было установлено, что микроструктура образца трахеи, обработанной по заявляемому способу, полностью сохранена: целостность хрящевой и мембранозной частей трахеи не претерпела существенных изменений, признаки отторжения тканей отсутствуют (Фиг.11, 12).

Технический результат

Заявляемый способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации обеспечивает в короткие сроки (2-3 недели) снижение иммуногенности, стерильность, сохранение макроструктуры и эластичности трахеи.

Изобретение иллюстрировано следующими фигурами:

Фиг.1 - трахея мыши после обработки 5% раствором NaClO4, микрофотография, ув. 100.

Фиг.2 - срез трахеи после обработки 5% раствором NaClO4, окр. гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 100.

Фиг.3 - срез трахеи после обработки 5% раствором NaClO4, окр. гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 900.

Фиг.4 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, живые клетки, окр. по Романовскому-Гимза, микрофотография, ув. 900.

Фиг.5 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, живые клетки, окр. по Романовскому-Гимза, микрофотография. Ув. 400.

Фиг.6 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, окр. антителами МНС I-FITC, иммунофлюоресценция, микрофотография, ув. 400.

Фиг.7 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, окр. антителами МНС II-FITC, иммунофлюоресценция, микрофотография, ув. 900.

Фиг.8 - аллотрансплантат трахеи после инкубации в 5% растворе NaClO4, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 200.

Фиг.9 - аллотрансплантат трахеи после инкубации в 5% растворе NaClO4, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 400.

Фиг.10 - Матрикс трахеи человека после инкубации в 5% растворе NaClO4, удаленный через 30 суток после трансплантации собаке, макрофотография.

Фиг.11 - матрикс трахеи человека после инкубации в 5% растворе NaClO4, удаленный через 30 суток после трансплантации собаке, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 100.

Фиг.12 - матрикс трахеи человека после инкубации в 5% растворе NaClO4, удаленный через 30 суток после трансплантации собаке, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 400.

Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации, включающий использование донорской трахеи, отличающийся тем, что образец трахеи механически очищают от жировой и соединительной ткани, промывают дистиллированной водой, инкубируют в течение 14-21 сут в 5%-ном растворе NaClO4, обновляя раствор каждые 72 ч, промывают физиологическим раствором.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к области пульмональной терапии. .

Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и предназначено для лечения больных с рубцовым сужением просвета трахеи. .

Изобретение относится к медицинской технике. .

Изобретение относится к хирургическим устройствам и может быть использовано для устранения тяжелой степени недержания мочи у мужчин. .

Изобретение относится к медицине. .

Изобретение относится к медицине, к сосудистой хирургии. .

Изобретение относится к медицине, в частности к торакальной хирургии, и может быть использовано при трансплантации трахеи. .

Изобретение относится к хирургии и может быть применимо для лечения рубцовых стенозов трахеи. .

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к хирургическому инструментарию, и может быть использовано в имплантируемых устройствах для обеспечения и поддержания просвета сосуда или полого органа

Изобретение относится к тканевой инженерии, в частности к имплантации или прикреплению биоинженерных тканевых конструктов для активизации эндотелиализации и васкуляризации в сердце и в соответствующих тканях

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии трахеи и экспериментальной хирургии
Изобретение относится к области ядерной медицинской техники и связано с разработкой способа изготовления полиэтиленовых и тефлоновых билиарных стентов, снабженных ралионуклидсодержащим сегментом и предназначенных для эндоскопической имплантации в желчный проток с целью осуществления радиационной терапии злокачественных опухолей

Группа изобретений относится к медицине. Медицинская ограничивающая система содержит: имплантируемое ограничивающее устройство, которое является регулируемым и предназначено для образования ограничения в пациенте; и имплантируемый микроэлектромеханический насос, соединенный с возможностью прохождения текучей среды с ограничивающим устройством. Система выполнена с возможностью возврата при отсутствии энергии или падения энергии ниже заданного предельного значения в состояние, в котором ограничение является по меньшей мере одним из свободного или открытого состояния. Раскрыто имплантируемое медицинское устройство, выполненное с использованием имплантируемого микроэлектромеханического насоса. Изобретения обеспечивают снижение размеров имплантируемого оборудования. 2. н. и ф-лы, 11 з.п. ф-лы, 8 ил.
Изобретение относиться к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении центральных стенозирующих злокачественных опухолей трахеи и бронхов. Для реканализации просвета трахеи или бронха в место стенозирующей опухоли имплантируют непокрытый металлокаркасный эндопротез. Аргоноплазменную коагуляцию проводят при пролабировании опухолевой ткани через стенку эндопротеза при мощности 35-45 Вт. Способ позволяет снизить количество осложнений и обеспечить быстрое и полное восстановление функции внешнего дыхания и уменьшение интоксикации за счет способности непокрытого металлокаркасного эндопротеза раздвигать опухолевую ткань до запрограммированных размеров и возможности проводить аргоноплазменную коагуляцию через его стенку, что позволяет ограничиться малой активностью подачи аргона. 1 з.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии. Устанавливают в простатический отдел уретры стент в виде металлической спирали с резьбой посредством проводника и катетера Фолея. Полый жесткий металлический проводник изогнут по кривизне уретры, снабжен ручкой на наружном конце, c внутренней резьбой на внутреннем конце. К проводнику присоединяют стент-спираль и вставляют в них катетер Фолея. Вводят устройство в простатический отдел уретры. Баллон катетера Фолея опорожняют. Извлекают катетер. Отсоединяют от спирали проводник и выводят его из уретры. Способ упрощает доставку и обеспечивает точную установку уретрального стента в простатический отдел уретры за счет исключения необходимости применения эндоскопического оборудования с простым извлечением из уретры проводника и катетера. 3 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к торакальной хирургии, и может быть использовано при замещении циркулярных дефектов трахеи. Устройство выполнено комбинированным и состоит из полипропиленовой сетчатой трубчатой части и закрепленного на ее поверхности спиралеобразного каркаса из полипропиленовой нити. Внутри упомянутой части расположен дополнительный слой. Трубчатая часть выполнена разомкнутой с атравматичными цельновязаными краями с возможностью перекрытия их на 8-10 мм и в виде основовязаной сетки из полипропиленовых мононитей диаметром 0,13-0,15 мм с плотностью вязания вдоль петельного столбика 14-16 петель/см и петельного ряда 4-5 петель/см и выступающими через 8-10 мм на внешней поверхности в поперечном направлении рядами петель, в которых установлена меандровая спираль из полипропиленовой мононити диаметром 0,8-1,0 мм с продольным направлением трансляции ее витков, шагом 8-10 мм и отступом гребней волны спирали от краев разомкнутой части на 12-15 мм. Внутри трубчатой части совпадающая с ней по длине расположена свернутая в трубку и с возможностью перекрытия ее краев на 8-10 мм по ширине биосовместимая съемная пленочная разделительная мембрана. Изобретение обеспечивает снижение количества рецидивов и послеоперационных осложнений, ускорение заживления и сокращение продолжительности оперативного вмешательства за счет прочной фиксации меандровой каркасной спирали в структуре сетки при одновременном регулировании прорастания протеза аутотканями путем размещения свободно прилегающей к его внутренней поверхности съемной пленочной разделительной мембраны. 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к реконструктивно-восстановительной хирургии, и может быть использовано при замещении циркулярных дефектов трахеи. Дефектный участок трахеи оборачивают полипропиленовой биосовместимой гибкой разделительной пленочной мембраной. Мембрану накладывают с перекрытием ее сторон на 8-10 мм по окружности трахеи и отступом по длине за края дефекта не менее 5 мм. Сверху мембраны устанавливают разомкнутый по длине трубчатый протез, разомкнутой частью обращенной к пищеводу. Протез устанавливают с возможностью перекрытия на 8-10 мм цельновязаных атравматичных краев его разомкнутой части. Длина протеза соответствует длине мембраны. Рану ушивают. Протез выполнен в виде основовязаной сетки из полипропиленовых мононитей диаметром 0,13-0,15 мм с плотностью вязания вдоль петельного столбика 14-16 петель/см и петельного ряда 4-5 петель/см. Также на протезе представлены выступающие через 8-10 мм на внешней поверхности в поперечном направлении ряды петель, в которых расположена меандровая спираль. Спираль выполнена из полипропиленовой мононити диаметром 0,8-1,0 мм с продольным направлением трансляции ее витков, шагом 8-10 мм и отступом гребней волны спирали от краев разомкнутой части протеза на 12-15 мм. Через три-четыре недели выполняют циркулярную резекцию дефектного участка трахеи по краям протеза. Удаляют дефектный участок вместе с мембраной. С помощью узловых швов формируют однорядные анастомозы между капсулированным протезом и неизмененными проксимальным и дистальным концами трахеи. Способ обеспечивает снижение травматичности, сокращение времени операции, уменьшение количества послеоперационных осложнений и рецидивов за счет использования протеза оптимальной конструкции, техники укладки протеза на дефект, проращивания протеза аутотканью непосредственно в области дефекта трахеи с непрерывным питанием сформированной капсулы по всей длине. 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, хирургии. Протез ортотопического искусственного мочевого пузыря представляет собой баллон из многослойной оболочки. Оболочка выполнена из многослойного мягкого и эластичного синтетического материала. Биологическая совместимость протеза обеспечивается внутренним и внешним углеродным покрытием. Баллон снабжен двумя полыми трубчатыми элементами для плотной посадки мочеточников и усеченно-коническим элементом для соединения уретры с протезом без использования швов. Протез искусственного мочевого пузыря позволяет заменить естественный пузырь, не требует использования швов для прикрепления мочеточников и уретры, обеспечивает биологическую совместимость и снижение риска отторжения. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 7 ил.
Наверх