Способ приготовления суспензии эритроцитов для определения деформируемости эритроцитарных мембран


 


Владельцы патента RU 2454667:

Негосударственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский медицинский институт (НОУ СМИ "РЕАВИЗ") (RU)

Изобретение относится к медицине и описывает способ приготовления суспензии эритроцитов для определения деформируемости эритроцитарных мембран, включающий забор венозной крови, проведение отмывки эритроцитов и ресуспензирование, отличающийся тем, что производят 3-кратную отмывку эритроцитов, каждую отмывку осуществляют в рефрижераторной центрифуге при скорости 2700 об/мин в течение 8 минут, при температуре 36,6°C в растворе низкой ионной силы Liss с pH 7,4, при этом в процессе второй отмывки эритроцитов в отличающийся раствор Liss добавляют трипсин в концентрации 2 мг/мл, при третьей отмывке эритроцитов происходит удаление трипсина, причем после каждой проведенной отмывки эритроцитов удаляют надосадочную жидкость и вновь добавляют на каждые 1,0 мл суспензии эритроцитов 5,0 мл раствора Liss, a после третьей отмывки 0,1 мл отмытых эритроцитов ресуспензируют в 1,9 мл раствора Liss. Изобретение обеспечивает повышение эффективности способа приготовления суспензии эритроцитов с минимально измененными мембранами для определения деформируемости последних, что может быть использовано для регистрации способности эритроцитов крови к деформации, степени сохранности донорских эритроцитов, а также для определения воздействия лекарственных препаратов на клеточную стенку эритроцитов. 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для регистрации способности эритроцитов крови к деформации, степени сохранности донорских эритроцитов, а также для определения воздействия лекарственных препаратов на клеточную стенку эритроцитов.

Известен способ приготовления эритроцитарной массы, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами, включающий отмывание эритоцитов с помощью отмывающего раствора (Руководство по военной трансфузиологии. Министерство обороны Российской Федерации, Главное военно-медицинское управление. М., 2005, с. 59-60).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ приготовления эритроцитарной взвеси путем отмывания эритроцитов с целью удаления из эритроцитарной среды основной части лейкоцитов, тромбоцитов, что существенно улучшает условия хранения эритроцитов, снижается мембранотропное (гемолитическое) действие протеолитических ферментов, освобождающихся из быстро разрушающихся лейкоцитов.

Отмытую эритроцитарную массу, полученную после центрифугирования крови, удаления плазмы, повторно отмывают изотоническим раствором натрия хлорида (0,9 % р-ра NaCl) (Ю.Л.Шевченко, В.Н.Шаболин, М.Ф.Заривчацкий, Е.А.Селиванов. Руководство по общей и клинической трансфузиологии. Санкт-Петербург, Фолиант, 2003, с. 134-136).

Не умаляя достоинств известного способа, принятого за прототип, следует отметить недостаточную отмывку адсорбированных на мембранах белков, которые влияют на истинную деформируемость мембран клеток, а также высокий риск быстрого образования эхиноцитов при инкубации в физиологическом растворе без стандартизации pH и температурного режима. Кроме того, указанная в прототипе 60-70% суспензия отмытых эритроцитов не может быть использована для определения деформируемости мембран, так как для этого необходима 5-10% суспензия отмытых эритроцитов.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является повышение эффективности способа приготовления суспензии эритроцитов с минимально измененными мембранами для определения деформируемости последних.

Поставленный технический результат достигается тем, что в способе приготовления суспензии для определения деформируемости эритроцитарных мембран, включающем забор крови, проведение отмывки эритроцитов и ресуспензирование, производят 3-кратную отмывку эритроцитов. Каждую отмывку осуществляют в рефрижераторной центрифуге при скорости 2700 об/мин в течение 8 минут, при температуре 36,6°C в растворе низкой ионной силы Liss с pH 7,4. При этом в процессе второй отмывки эритроцитов в отличающийся раствор Liss добавляют трипсин в концентрации 2 мг/мл. При третьей отмывке эритроцитов происходит удаление трипсина, причем после каждой проведенной отмывки эритроцитов удаляют надосадочную жидкость и вновь добавляют на каждые 1,0 мл суспензии эритроцитов 5,0 мл раствора Liss, а после третьей отмывки 0,1 мл отмытых эритроцитов ресуспензируют в 1,9 мл раствора Liss.

Способ приготовления суспензии эритроцитов осуществляют следующим образом.

У пациента, в положении сидя, спустя 10-12 часов после приема пищи, при его минимальной физической активности производят взятие крови путем проведения пункции локтевой вены, а жгут накладывают не более чем на одну-две минуты, чем обеспечивается минимальный стаз, при котором не повреждаются клетки крови.

Забранную венозную кровь в количестве 5,0 мл помещают в пробирку с антикоагулянтом этилендиаминтетраацетатом (К2ЭДТА) 7,2 мг, которую помещают в рефрижераторную центрифугу. Затем кровь 3-кратно центрифугируют в течение 8 минут при температуре 36,6°С и при скорости центрифуги 2700 об/мин.

Проводя 3-кратную отмывку эритроцитов в рефрижераторной центрифуге в отмывающем растворе низкой ионной силы Liss (Low Ionic Strength Solution) с pH 7,4, тщательно удаляют плазму с верхним слоем эритроцитарной суспензии с целью исключения попадания других форменных элементов крови.

При этом соотношение эритроцитов и отмывающего раствора Liss составляет 1:5.

В процессе второй отмывки эритроцитов в рефрижераторной центрифуге добавляют в отмывающий раствор Liss трипсин в концентрации 2 мг/мл.

При этом после каждой проведенной отмывки эритроцитов удаляют надосадочную жидкость и вновь добавляют на каждые 1,0 мл суспензии эритроцитов 5,0 мл отмывающего раствора низкой ионной силы Liss.

После третьей отмывки 0,1 мл отмытые эритроциты ресуспензируют в 1,9 мл раствора Liss и используют для определения деформируемости эритроцитарной мембраны с помощью установки «лазерный пинцет».

Способ приготовления суспензии эритроцитов для определения деформируемости эритроцитарных мембран, включающий забор венозной крови, проведение отмывки эритроцитов и ресуспензирование, отличающийся тем, что производят 3-кратную отмывку эритроцитов, каждую отмывку осуществляют в рефрижераторной центрифуге при скорости 2700 об/мин в течение 8 мин, при температуре 36,6°C в растворе низкой ионной силы Liss с pH 7,4, при этом в процессе второй отмывки эритроцитов в отличающийся раствор Liss добавляют трипсин в концентрации 2 мг/мл, при третьей отмывке эритроцитов происходит удаление трипсина, причем после каждой проведенной отмывки эритроцитов удаляют надосадочную жидкость и вновь добавляют на каждые 1,0 мл суспензии эритроцитов 5,0 мл раствора Liss, а после третьей отмывки 0,1 мл отмытых эритроцитов ресуспензируют в 1,9 мл раствора Liss.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования вирусологического ответа у больных хронической сочетанной HBV/HCV-инфекцией при проведении противовирусной терапии хронического гепатита В.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано при диагностике опухолей костной системы. .

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования эффективности иммуносупрессивной терапии хронического гломерулонефрита с нефротическим синдромом.
Изобретение относится к медицине и может и касается способа определения динамики тяжести состояния больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития и скорости прогрессирования фиброза капсулы хрусталика после удаления врожденной катаракты у детей раннего возраста.

Изобретение относится к области медицины. .
Изобретение относится к области судебно-медицинской экспертизы. .
Изобретение относится к медицине, а именно к детской уронефрологии, и может быть использовано для диагностики повреждения почечной паренхимы у детей. .
Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки агрегационной способности эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегационной способности, где в качестве индуктора агрегации используют хлористый цинк, при этом эритроциты помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 3-10 мМ и регистрируют степень агрегации фотометрическим методом.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной гематологии

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, неврологии, терапии, лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки эффективности сосудистой терапии по содержанию аннексин-V позитивных и негативных эндотелиальных клеток в крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и описывает способ диагностики вялотекущего гнойно-воспалительного процесса при эндопротезировании, включающий определение числа фагоцитов до операции, отличающийся тем, что расчет фагоцитарной активности нейтрофилов производят у пациентов через 12-24 месяцев после имплантации и если: ФП (фагоцитарный показатель) составляет 81,0-92,0%, ПЗФ (показатель завершенности фагоцитоза) - 65-77%, КАФ (количество активных фагоцитов) - 2,6-3,1 (109/л), то полученные данные оценивают как нестабильность эндопротеза без признаков гнойно-воспалительного процесса; ФП составляет 92,0-94,5%, ПЗФ - 60-64%, КАФ - 3,3-3,6 (109/л), то полученные данные оценивают как нестабильность эндопротеза с признаками вялотекущего гнойно-воспалительного процесса
Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования развития рецидива стенокардии после реваскуляризации миокарда
Изобретение относится к медицине, точнее к профилактической медицине и лабораторной диагностике, и описывает способ скриннинговой оценки функционального состояния организма человека, включающий сбор конденсата выдыхаемой влаги (экспирата), подготовку биосенсора - люминесцентных лифилизированных бактерий «Эколюм», добавление к 0,5 см3 биосенсора 0,5 см3 экспирата, 15-минутную экспозицию, измерение интенсивности люминесценции смеси суспензии бактерий и конденсата в течение 1000 сек, фиксирование ее максимального уровня (Иоп, имп/сек.), сопоставление этого значения с аналогичным параметром Ик, имп/сек, полученным при внесении в кювету биолюминометра вместо конденсата дистиллированной воды в равном объеме, установление коэффициента К как отношения Иоп/Ик, при значениях которого К=1 констатируют оптимальный окислительный статус, при К>1 - преобладание прооксидантных процессов (высокий уровень образования кислородных радикалов, недостаточный уровень защиты от их повреждающего действия), при К<1 - активные антиоксидантные процессы, достаточные резервы защитных механизмов

Изобретение относится к биологии, а именно к иммунологии, и может быть использовано для хемилюминесцентного анализа в ветеринарии

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и касается способа прогнозирования развития остеопенического синдрома в послеродовом периоде

Изобретение относится к медицине, а именно кардиологии, и может быть использовано для индивидуального прогнозирования фатального сердечно-сосудистого события

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической биохимии и хирургии, и может быть использовано для диагностики течения раневого процесса при синдроме диабетической стопы
Наверх