Способ выделения чистой культуры микобактерий туберкулеза


 


Владельцы патента RU 2455361:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам выделения чистой культуры микроорганизмов из патологического материала. Способ предусматривает следующее. Измельчают кусочки пораженных органов (биоматериал) и готовят суспензию. Полученную суспензию заливают раствором, содержащим 4-6% лимонной кислоты и 3% перекиси водорода в соотношении 1:1 к суспензии биоматериала и выдерживают в течение 30-60 минут при комнатной температуре с последующей обработкой раствором, содержащим 4-5% янтарной кислоты и 3% перекиси водорода в соотношении с суспензией 1:1. Выдерживают 30-60 минут с последующей нейтрализацией полученной суспензии 5-10% раствором аммиака до рН 7,0. Проводят декантацию надосадочной жидкости и высев осадка на агаровую среду Левенштейна-Йенсена. Изобретение позволяет сократить сроки выделения микобактерий. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам выделения чистой культуры микроорганизмов из патологического материала.

Известны способы выделения чистой культуры микобактерий туберкулеза путем обработки патологического биоматериала, мокроты 2-6% раствором серной кислоты или едкого натра, 10% раствором трехзамещенного фосфата натрия, хлоргексидина, 15-20% раствором соляной кислоты в двойном объеме, антибиотиками с последующим пересевом на плотные питательные среды, но в основном на среду Левенштейна-Йенсена, рекомендованную ВОЗ.

Недостатками указанных способов является депрессивное воздействие указанных средств на жизнеспособность микобактерий туберкулеза и, соответственно, их рост на питательных средах, длительность обработки (до 24 часов при использовании трехзамещенного фосфата натрия) и необходимость проведения центрифугирования, отмывания осадка.

За прототип взят метод Гона: обработка 2-6% растворами серной кислоты патологического материала для подавления посторонней микрофлоры с последующим центрифугированием и отмыванием (Хоменко А.Г. Туберкулез. - М.: Медицина, 1996. - С.117-118).

Недостатком способа является использование серной кислоты, необходимость центрифугирования, отмывания, опасность проводимых обработок и вредное воздействие серной кислоты на рост микобактерий туберкулеза при высеве на питательные среды.

Для устранения указанных недостатков, улучшения выделения и усиления роста культуры микобактерий туберкулеза, повышения безопасности обработки патологического материала разработан и апробирован щадящий способ выделения микобактерий туберкулеза, включающий обработку патологического гомогенизированного биоматериала, мокроты и др. в соотношении 1:1 с массой биоматериала раствором 5-6% лимонной кислоты с 3-4% перекисью водорода в течение 30-60 минут, затем раствором 4-5% янтарной кислоты с 3% перекисью водорода в том же соотношении в течение 30-60 минут с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% раствором аммиака до рН 6,8-7,0, декантацией надосадочной жидкости и высевом содержимого осадка на минеральную агаровую среду Левенштейна-Йенсена.

При проведении исследований для подтверждения эффективности способа перед обработкой проводили дополнительное обсеменение суспензии патологического биоматериала стафилококками, кишечной палочкой и сальмонеллами из расчета 10 тыс. микроорганизмов в 1 мл суспензии и 1 мг микобактерий туберкулеза бычьего и человеческого видов на 1 мл суспензии.

Пример осуществления способа

Суспензию из кусочков пораженных органов (легких, селезенки, лимфоузлов) от больных туберкулезом животных (крупный рогатый скот, морские свинки) после измельчения ножницами заливают раствором, содержащим 4-6% лимонной кислоты и 3% перекиси водорода, в соотношении 1:1 к суспензии биоматериала и выдерживают в течение 30-60 минут при комнатной температуре. После обработки суспензии из пораженных органов и тканей раствором лимонной кислоты и перекиси водорода добавляют раствор, содержащий 4-5% янтарной кислоты и 3% перекиси водорода, в соотношении с суспензией 1:1 для полного подавления, уничтожения посторонней микрофлоры. После выдерживания суспензии в растворе течение 30-60 минут при комнатной температуре проводят ее нейтрализацию 5-10% раствором аммиака до рН 7,0, декантацию надосадочной жидкости и высев осадка на плотную агаровую среду Левенштейна-Йенсена.

Концентрации растворов кислот и перекиси водорода для обработки патологического материала и длительность обработки были определены экспериментальным путем (см. таблицу).

Результаты изыскания щадящего способа подавления посторонней микрофлоры для выделения чистой культуры бактерий туберкулеза
№ п/п Способ и средства подавления посторонней микрофлоры в суспензии патологического материала Рост микроорганизмов при пересеве на минеральный или мясопептонный агар с глицерином
Стафилококки, 100 тыс/мл Сальмонеллы, 100 тыс/мл Кишечная палочка E. coli, 100 тыс/мл Микобактерий, 1 мг в 1 мл
1 2 3 4 5 6
1. 3% р-ром лимонной кислоты с 3% перекисью водорода, а затем 3% р-ром янтарной кислоты с 3% перекисью водорода с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% р-ром аммиака Рост отсутствует Рост на 2-й день Рост на 2-й день Рост отсутствовал из-за сплошного роста посторонней микрофлоры
2. 4% р-ром лимонной кислоты с 3% перекисью водорода, а затем 4% р-ром янтарной кислоты с 3% перекисью водорода с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% р-ром аммиака Рост отсутствует Рост отсутствует Рост отсутствует Рост на 8-9-й день после высева
3. 5% р-ром лимонной кислоты с 3% перекисью водорода, а затем 4% р-ром янтарной кислоты с 3% перекисью водорода с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% р-ром аммиака Рост отсутствует Рост отсутствует Рост отсутствует Стабильный рост на 9-10-й день после высева
4. 6% р-ром лимонной кислоты с 3% перекисью водорода, а затем 5% р-ром янтарной кислоты с 3% перекисью водорода с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% р-ром аммиака Рост отсутствует Рост отсутствует Рост отсутствует Стабильный рост на 9-12-й день после высева

Из данных, представленных в таблице, следует, что обработка гомогенизированной суспензии из кусочков легкого, печени, селезенки, мокроты, обсемененных стафилококками, сальмонеллами, кишечной палочкой и микобактериями туберкулеза, раствором лимонной кислоты 4-6% с 3% перекиси водорода в течение 30-60 минут, а затем раствором 4-5% янтарной кислоты с 3% перекиси водорода в течение 30-60 минут с последующей нейтрализацией суспензии 5-10% раствором аммиака подавляет рост посторонней микрофлоры и обеспечивает стабильный рост микобактерий туберкулеза через 9-12 суток после высева на плотную среду Левенштейна-Йенсена. Внесение янтарной кислоты обеспечивало не только подавление посторонней микрофлоры, но и улучшало начальное развитие микобактерий туберкулеза.

Способ выделения чистой культуры микобактерий туберкулеза, включающий обработку гомогенизированного патологического биоматериала растворами кислот, отличающийся тем, что обработку проводят сначала раствором, содержащим 4-6% лимонной кислоты и 3% перекиси водорода, в соотношении 1:1 с массой биоматериала в течение 30-60 мин, затем раствором, содержащим 4-5% янтарной кислоты и 3% перекиси водорода, в том же соотношении в течение 30-60 мин, после этой обработки нейтрализуют суспензию 5-10%-ным раствором аммиака до рН 6,8-7,0, проводят декантацию надосадочной жидкости и высевают осадок на агаровую среду Левенштейна-Йенсена.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области микробиологии, а именно - к способу выявления и отбора культур микроорганизмов, способных биохимически разрушать (трансформировать) микотоксины.

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения обсемененности мочи, секрета предстательной железы, эякулята факультативно-анаэробными и неклостридиально-анаэробными бактериями, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека.
Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения обсемененности мочи, секрета предстательной железы, эякулята бактериями, и может быть использовано для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа дифференциации бактерий Francisella tularensis subsp.mediasiatica. .

Изобретение относится к области микробиологии. .

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и касается способа стандартизации контрольно-производственного штамма бактерий возбудителя пастереллеза птиц (Pasteurella multocida).
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при исследовании микробной загрязненности воздуха. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано как в научно-исследовательской, так и в практической работе для санитарно-эпидемиологического и ветеринарного контроля зараженности продуктов питания, объектов окружающей среды в центрах Госсанэпиднадзора, пищевой промышленности.

Изобретение относится к области медицины и биологии и касается генотипирования Chlamydia trachomatis. .
Изобретение относится к медицинской микробиологии, биотехнологии и пищевой промышленности. .

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности при производстве альфа-амилазы, применяемой в различных областях промышленности и сельского хозяйства для осахаривания (гидролиза) крахмалосодержащего сырья, а именно в хлебопечении, спиртовой, пивоваренной, кондитерской и крахмалопаточной промышленности (выработка паток, сиропов, глюкозы), в текстильной, бумажной промышленности, при производстве моющих средств.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов в искусственных питательных средах при бактериологической диагностике дифтерии.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению штамма-продуцента н-бутанола, используемого в качестве органического растворителя, биотоплива и основы для синтеза многих промышленноценных органических соединений.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и касается аттенуированных бактерий В.pertussis, содержащих нокаутную мутацию в гене dnt и продуцирующих нетоксическую, иммунологически активную, токсоидную форму коклюшного токсина, их применению в качестве живой и инактивированной вакцин и вектора для поливалентной вакцины.
Изобретение относится к биотехнологии. .
Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для получения бактериальных удобрений, а также в сельском хозяйстве.
Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью. .
Изобретение относится к пищевой, косметической, биотехнологической и медицинской промышленности, в частности, используется для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.
Изобретение относится к пищевой, косметической, биотехнологической и медицинской промышленности, в частности, используется для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики заболеваний, вызываемых Pasteurella trehalosi и Mannheimia haemolytica
Наверх