Способ сохранения жизнеспособных клеток крови для хемилюминесцентных исследований
Владельцы патента RU 2456595:
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии) (RU)
Изобретение относится к биологии, а именно к иммунологии, и может быть использовано для хемилюминесцентного анализа в ветеринарии. Способ сохранения жизнеспособных клеток крови для хемилюминесцентных исследований включает взятие пробы крови и ее консервирование, причем забор крови проводят в одноразовые пластиковые пробирки и в качестве гемоконсерванта используют Фаглюцид® в соотношении 1:6, заготовленная кровь хранится при температуре от 2 до 6°С. Способ обеспечивает увеличение срока сохранения жизнеспособных лейкоцитов (90-95%) для проведении хемилюминесцентного анализа, сохранение морфофункциональной полноценности и реологических свойств крови крупного рогатого скота в течение 168 часов и величины рН на физиологическом уровне, что позволяет транспортировать кровь для диагностических исследований из отдаленных регионов в лаборатории. 2 табл.
Изобретение относится к биологии, а именно к иммунологии, и может быть использовано для хемилюминесцентного анализа в ветеринарии.
Для консервирования крови применяется Фаглюцид®, который используется в медицине только для консервации донорской крови, но не применяется в ветеринарии. Фаглюцид® раствор гемоконсерванта выпускается ОАО "Акционерное Курганское общество медицинских препаратов и изделий "Синтез". В 1 литре раствора содержится: аденин 0,34 г; декстроза (в пересчете на безводную) 30,0 г; лимонная кислота моногидрат 1,365 г; натрия ортофосфат додекагидрат 7,5 г; натрия цитрат (двузамещенный) 14,0 г; вода для инъекций до 1 л.
Из описанных в литературе наиболее близким к изобретению является патент RU 2280689 С2, от 05.05.2004 «Способ сохранения жизнеспособных лейкоцитов». Способ осуществляют следующим образом. Предварительно производят забор крови с 2,7% раствором трилоном Б (раствор натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты) в пробирки, обработанные 3% раствором полиметилсилоксановой жидкости в хлороформе. Разрушение эритроцитов осуществляют путем гипотонического лизиса. Центрифугируют при 1200 об/мин в течение 15 мин. Дополнительно лейкоциты отмывают 0,02% трилоном Б. Центрифугируют при вышеуказанном режиме, надосадочную жидкость сливают. Осадок суспензии клеток ресуспендируют в стабилизирующем растворе следующего состава; концентрат Хэнкса без фенолового красного в соотношении с водой 1:9.
Однако этот способ обладает следующими недостатками: соотношение объема 2,7% раствора трилона Б и крови крупного рогатого скота 1:10 обеспечивает необходимую для исследований концентрацию жизнеспособных лейкоцитов (90-95%) в течение четырех часов с момента взятия пробы крови (см. табл.1); трилон Б понижает содержание кальция в пробе крови, что приводит к искажению результатов исследования.
Целью изобретения является необходимость сохранить постоянство параметров клеток крови крупного рогатого скота и увеличить срок сохранения жизнеспособных лейкоцитов (90-95%) для проведении хемилюминесцентного анализа.
Поставленная цель достигается тем, что для консервирования крови используется гемоконсервант Фаглюцид®, который обеспечивает сохранение морфофункциональной полноценности крови крупного рогатого скота в течение 7 дней за счет поддержания физиологического уровня АТФ в эритроцитах, реологических свойств крови и величины рН на физиологическом уровне. Гемоконсервант Фаглюцид® смешивается с кровью в соотношении 1:6.
Способ осуществляют следующим образом. Производят забор крови в одноразовые пластиковые пробирки с гемоконсервантом Фаглюцидом® в соотношении 1:6, которые затем помещаются в изотермический контейнер с хладоэлементами и в таком виде доставляются в лабораторию. Заготовленная кровь хранится при температуре от 2 до 6°С.
Использование данного способа позволяет транспортировать кровь из отдаленных регионов для диагностических исследований в лаборатории. Использование Фаглюцида® в качестве гемоконсерванта в соотношении 1:6 позволяет повысить срок сохранения жизнеспособных лейкоцитов в концентрации 90-95% в течение 168 часов с момента взятия крови (см. табл.2), что в 42 раза превосходит показатели при использовании трилона Б.
Способ сохранения жизнеспособных клеток крови для хемилюминесцентных исследований, включающий взятие пробы крови и ее консервирование, отличающийся тем, что забор крови проводят в одноразовые пластиковые пробирки и в качестве гемоконсерванта используют Фаглюцид® в соотношении 1:6, заготовленная кровь хранится при температуре от 2 до 6°С.
