Конъюгаты с полимером а-бокса hmgb1 и вариантов а-бокса hmgb1

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии и может быть использовано в медицине. Получены и охарактеризованы конъюгаты полипептида высокоаффинного связывающего домена внеклеточного негистонового белка хроматина (А-бокса HMGB1), его вариантов и биологически активных фрагментов с биологически совместимым полимером, предпочтительно ПЭГ. Новые конъюгаты представляют собой устойчивые к воздействию клеточных протеаз соединения, обладающие ингибирующим действием в отношении активности внеклеточного HMGB1. Предлагается использовать конъюгаты по изобретению для диагностики, предупреждения, облегчения симптомов и/или лечения патологий, связанных с внеклеточным HMGB1 и/или с повышенной экспрессией RAGE. 7 н. и 23 з.п. ф-лы, 90 ил., 11 табл., 3 пр.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Конъюгат с полимером А-бокса, высокоаффинного связывающего домена, HMGB1 (А-бокс HMGB1) дикого типа человека, представленного последовательностью SEQ ID N0:1, или биологически активного фрагмента А-бокса HMGB1, где полимер представляет собой остаток линейного или разветвленного полимера, выбираемого из группы, состоящей из полиалкилен гликоля, в частности полиэтиленгликоля, полиалкиленоксида, поливинилпирролидона и декстрана.

2. Конъюгат с полимером полипептидного варианта А-бокса, высокоаффинного связывающего домена, HMGB1 (А-бокс HMGB1) человека или биологически активного фрагмента варианта А-бокса HMGB1, где аминокислотная последовательность указанного полипептидного варианта представлена любой из последовательностей SEQ ID NO:33, 35, 37-39, 42-45, 47-49, 52, 55, 57, 59, 62, 64, 67, 69 и 104, и где полимер представляет собой остаток линейного или разветвленного полимера, выбираемого из группы, состоящей из полиалкилен гликоля, в частности полиэтиленгликоля, полиалкиленоксида, поливинилпирролидона и декстрана.

3. Конъюгат с полимером по п.1 или 2, где полимер представляет собой остаток линейного или разветвленного полимера, выбираемого из полиэтиленгликоля (PEG) и метоксиполиэтиленгликоля (m-PEG).

4. Конъюгат с полимером по п.1 или 2, где полимер имеет молекулярную массу от 100 до 100000, предпочтительно от 5000 до 50000 Да.

5. Конъюгат с полимером по п.1 или 2, где остаток полимера полиэтиленгликоля (PEG) имеет среднюю молекулярную массу 20000 или среднюю молекулярную массу 40000 Да.

6. Конъюгат с полимером по п.1 или 2, где остаток полимера ковалентно связан с полипептидом А-бокса HMGB1, А-боксом HMGB1, его полипептидным вариантом или их биологически активным фрагментом.

7. Конъюгат с полимером по п.6, где остаток полимера конъюгирован с полипептидом А-бокса HMGB1, полипептидным вариантом или его биологически активным фрагментом с помощью ковалентной связи, выбираемой из аминной, амидной, карбаматной, карбонатной, углеродной, сложноэфирной, простой эфирной, простой тиоэфирной и дисульфидной связи.

8. Конъюгат с полимером по п.1 или 2, где участок конъюгирования на полипептиде А-бокса HMGB1, его полипептидном варианте или его биологически активном фрагменте выбирают из остатка лизина, цистеина, гистидина, аргинина, тирозина, серина, треонина, аспартата, глутамата и N-концевой аминогруппы.

9. Конъюгат с полимером по п.1, где биологически активный фрагмент А-бокса человеческого HMGB1 дикого типа представляет собой фрагмент, состоящий, по меньшей мере, из 77 или, по меньшей мере, из 54 аминокислот соответственно, и включает аминокислотные последовательности, определенные в SEQ ID NO:117 или 223 соответственно.

10. Конъюгат с полимером по п.9, где полипептидный вариант биологически активных фрагментов А-бокса человеческого HMGB1 выбирают из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей, определенных в любой из SEQ ID NO: 118-222 или 224-300.

11. Фармацевтическая композиция, для лечения патологий, связанных с HMGB1, и патологий, связанных с белками-гомологами HMGB1, включающая эффективное количество, по меньшей мере, одного конъюгата с полимером по любому из предшествующих пунктов в качестве активного средства совместно, по крайней мере, с одним из компонентов, выбранных из фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных средств, разбавителей и/или добавок.

12. Композиция по п.11, предназначенная для диагностических прикладных задач.

13. Композиция по п.11, предназначенная для терапевтических прикладных задач.

14. Применение конъюгата с полимером по любому из пп.1-10 для изготовления лекарственного средства для профилактики, облегчения симптомов или лечения патологий, ассоциированных с HMGB 1.

15. Применение по п.14, где патологии, ассоциированные с HMGB1, и патологии, ассоциированные с белками, гомологичными HMGB1, представляют собой патологические состояния, опосредованные активацией каскада воспалительных цитокинов.

16. Применение по п.14 или 15, где патологические состояния выбирают из группы, состоящей из воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, синдрома системного воспалительного ответа, реперфузионного повреждения после трансплантации органов, сердечно-сосудистого повреждения, акушерского и гинекологического заболевания, инфекционного (вирусного и бактериального) заболевания, аллергического и атопического заболевания, солидных и жидкостных опухолевых патологий, заболеваний, связанных с отторжением трансплантата, врожденных заболеваний, дерматологических заболеваний, неврологических заболеваний, кахексии, почечных заболеваний, состояний, связанных с ятрогенной интоксикацией, метаболических и идиопатических заболеваний и офтальмологических заболеваний.

17. Применение конъюгата с полимером по любому из пп.1-10 для изготовления лекарственного средства для профилактики, облегчения симптомов или лечения патологий, связанных с RAGE.

18. Применение по п.17, где патология, связанная с RAGE, представляет собой диабет I типа или II типа.

19. Применение по п.14 или 17 в комбинации с дополнительным средством, способным ингибировать ранний медиатор каскада воспалительных цитокинов.

20. Применение по п.19, где дополнительное средство представляет собой антагонист или ингибитор цитокина, выбираемого из группы, состоящей из TNF, IL-1α, IL-1β, IL-R_a, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, IL-18, IFN-γ, MIP-1α, MIF-1β, MIP-2, MIF и PAF.

21. Применение по п.19, где дополнительное средство представляет собой антитело к RAGE, нуклеиновую кислоту или аналог нуклеиновой кислоты, способные подавлять экспрессию RAGE, например, антисмысловую молекулу, рибозим или молекулу интерферирующей РНК, или низкомолекулярную синтетическую молекулу, являющуюся антагонистом взаимодействия HMGB1 с RAGE, или растворимый RAGE (sRAGE).

22. Применение по п.19, где дополнительное средство, которое является ингибитором взаимодействия Toll-подобного рецептора (TLR), в частности TLR2, TLR4, TLR7, TLR8 или TLR9, с HMGB1, предпочтительно моноклональным или поликлональным антителом, нуклеиновой кислотой или аналогом нуклеиновой кислоты, способным подавлять экспрессию TLR, например, антисмысловой молекулой, рибозимом или молекулой интерферирующей РНК, или синтетической молекулой, имеющей размер менее 1000 Да.

23. Применение по п.19, где дополнительное средство представляет собой N-концевой лектиноподобный домен (D1) нативного или мутированного тромбомодулина.

24. Применение по п.19, где дополнительное средство представляет собой молекулу синтетической двухцепочечной нуклеиновой кислоты или аналога нуклеиновой кислоты со структурой изогнутой формы, выбираемую из изогнутой или крестообразной ДНК, ПНК или химеры ДНК/ПНК или гибрида.

25. Применение по п.15, где дополнительное средство представляет собой К-252а, и/или его соль, или производное, или конъюгат с полимером К-252а, или его производное.

26. Композиция по п.11, где, по меньшей мере, один конъюгат с полимером находится в комбинации, по меньшей мере, с одним дополнительным средством, как определено в любом из пп.17-25.

27. Применение, по меньшей мере, одного конъюгата с полимером по любому из пп.1-10 для получения медицинских устройств, где указанные конъюгаты обратимо иммобилизованы на поверхности названных медицинских устройств.

28. Применение по п.27, где указанные медицинские устройства представляют собой хирургические инструменты, имплантаты, катетеры или стенты.

29. Медицинское устройство, обратимо покрытое, по меньшей мере, одним конъюгатом с полимером по любому из пп.1-10.

30. Медицинское устройство по п.29, где медицинское устройство выбрано из хирургических инструментов, имплантатов, катетеров или стентов.