Получение рекомбинантного белка pфно-lg



Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg
Получение рекомбинантного белка pфно-lg

 


Владельцы патента RU 2458988:

ВАЙЕТ РИСЁРЧ АЙРЛЭНД ЛИМИТЕД (IE)

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства и его вариантам. Способ включает обеспечение культуры клеток, содержащей клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток. Используют среду, содержащую глютамин и обладающую необходимыми свойствами. Проводят поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени. Осуществляют изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) рН; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций. Проводят поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg. Предложенное изобретение позволяет осуществлять крупномасштабное производство рФНО-lg в культуре клеток. 5 н. и 43 з.п. ф-лы, 76 ил., 27 табл., 17 пр.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Способ получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток; и
среду, содержащую глютамин, и обладающую свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: (i) суммарное количество аминокислот на единицу объема больше приблизительно 70 мМ; (ii) отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству аспарагина меньше, чем приблизительно 2; (iii) отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству всех аминокислот меньше, чем приблизительно 0,2; (iv) отношение суммарного молярного количества неорганических ионов к суммарному количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; (v) совокупное суммарное количество глютамина и аспарагина на единицу объема больше, чем приблизительно 16 мМ; и комбинаций указанных свойств;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20-80% от максимально возможной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при поддержании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) рН; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная исходная концентрация глютамина в указанной среде меньше или равна 10 мМ.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная исходная концентрация глютамина в указанной среде меньше или равна 4 мМ.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное общее суммарное количество глютамина на единицу объема в указанной среде меньше или равно 10 мМ.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное общее суммарное количество глютамина на единицу объема в указанной среде меньше или равно 4 мМ.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что глютамин обеспечивают только в указанной исходной среде в начале культивирования клеток.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная исходная плотность указанных клеток млекопитающего составляет по меньшей мере 2×105 клеток/мл.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная исходная плотность указанных клеток млекопитающего составляет по меньшей мере 2×106 клеток/мл.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный этап обеспечения включает обеспечение по меньшей мере 1000 л культуры.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный этап обеспечения включает обеспечения по меньшей мере 10000 л культуры.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый набор условий включает первый диапазон температур, который составляет приблизительно от 30 до 42°С.

12. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый набор условий включает первое значение температуры, которое составляет приблизительно 37°С.

13. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный второй набор условий включает второй диапазон температур, который составляет приблизительно от 25 до 41°С.

14. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный второй набор условий включает второй диапазон температур, который составляет приблизительно от 29 до 35°С.

15. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный второй набор условий включает второе значение температуры, которое составляет приблизительно 31°С.

16. Способ по п.1, который дополнительно включает следующий за первым указанным этапом изменения по меньшей мере одного из условий культивирования второй этап изменения условий, включающий изменение по меньшей мере одного из условий культивирования, в результате которого получают третий набор условий культивирования, причем указанный второй этап изменения условий включает изменение по меньшей мере одного из условий культивирования, выбранного из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанный третий набор условий включает третий диапазон температур, который составляет приблизительно от 27 до 37°С.

18. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый период времени составляет 1-7 дней.

19. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый период времени составляет приблизительно 4 дня.

20. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный первый период времени и указанный второй период времени вместе составляют по меньшей мере 5 дней.

21. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную культуру поддерживают в течение второго периода времени, который достаточен для того, чтобы уровень лактата снизился после того, как указанный уровень лактата в культуре достиг максимального уровня.

22. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанную культуру поддерживают в течение второго периода времени, который достаточен для того, чтобы уровень аммония снизился после того, как указанный уровень аммония в культуре достиг максимального уровня.

23. Способ по п.1, отличающийся тем, что в указанную культуру клеток дополнительно добавляют дополнительные компоненты, при этом указанные дополнительные компоненты выбраны из группы, состоящей из: гормонов и/или других факторов роста, определенных ионов (таких как ионы натрия, хлора, кальция, магния и фосфат-ионы), буферов, витаминов, нуклеозидов или нуклеотидов, микроэлементов (неорганических соединений, обычно присутствующих в очень низких конечных концентрациях), аминокислот, липидов, глюкозы или других источников энергии.

24. Способ по п.23, отличающийся тем, что указанные дополнительные компоненты добавляют во множество моментов времени.

25. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная среда включает среду, содержащую глютамин, которая обладает свойством, выбранным из группы, состоящей из следующего:
(i) начальная концентрация аминокислот больше, чем приблизительно 70 мМ; (ii) начальное отношение молярного количества глютамина к молярному количеству аспарагина меньше, чем приблизительно 2; (iii) начальное отношение молярного количества глютамина к количеству всех аминокислот меньше, чем приблизительно 0,2; (iv) начальное отношение молярного количества неорганических ионов к количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; (v) совокупная начальная концентрация глютамина и аспарагина больше, чем приблизительно 16 мМ; и комбинаций указанных свойств.

26. Способ по п.1, отличающийся тем, что в указанную культуру не добавляют дополнительные компоненты в ходе получения рФНО-lg.

27. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 25 мМ.

28. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество гистидина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, тирозина и пролина на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 35 мМ.

29. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная среда обладает свойством, выбранным из группы, состоящей из следующего:
(i) суммарное общее количество гистидина на единицу объема больше, чем приблизительно 1,7 мМ;
(ii) суммарное общее количество изолейцина на единицу объема больше, чем приблизительно 3,5 мМ;
(iii) суммарное общее количество лейцина на единицу объема больше, чем приблизительно 5,5 мМ;
(iv) суммарное общее количество метионина на единицу объема больше, чем приблизительно 2,0 мМ;
(v) суммарное общее количество фенилаланина на единицу объема больше, чем приблизительно 2,5 мМ;
(vi) суммарное общее количество пролина на единицу объема больше, чем приблизительно 2,5 мМ;
(vii) суммарное общее количество триптофана на единицу объема больше, чем приблизительно 1,0 мМ; и
(viii) суммарное общее количество тирозина на единицу объема больше, чем приблизительно 2,0 мМ;

30. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество серина на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 10 мМ.

31. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество аспарагина на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 8 мМ.

32. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество аспарагина на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 12 мМ.

33. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество фосфора на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 5 мМ.

34. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество глютамата на единицу объема в указанной среде меньше, чем приблизительно 1 мМ.

35. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество пантотената кальция на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 20 мг/л.

36. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество никотинамида на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 25 мг/л.

37. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество пиридоксина и пиридоксаля на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 35 мг/л.

38. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное суммарное общее количество тиамина гидрохлорида на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 35 мг/л.

39. Способ по п.1, отличающийся тем, что суммарное общее количество рибофлавина на единицу объема в указанной среде больше, чем приблизительно 2,0 мг/л.

40. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный рФНО-lg является этанерцептом.

41. Способ получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток; и
среду, содержащую глицилглютамин, и обладающую свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: (i) суммарное количество аминокислот на единицу объема больше приблизительно 70 мМ; (ii) отношение суммарного молярного количества глицилглютамина к суммарному количеству аспарагина меньше, чем приблизительно 2; (iii) отношение суммарного молярного количества глицилглютамина к суммарному количеству всех аминокислот меньше, чем приблизительно 0,2; (iv) отношение суммарного молярного количества неорганических ионов к суммарному количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; (v) совокупное суммарное количество глицилглютамина и аспарагина на единицу объема больше, чем приблизительно 16 мМ; и комбинаций указанных свойств;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20-80% от максимально возможной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при поддержании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg.

42. Способ по п.41, отличающийся тем, что указанный рФНО-lg является этанерцептом.

43. Способ получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток; и
среду определенного состава, содержащую глютамин и обладающую по меньшей мере двумя свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: i) начальная концентрация аминокислот больше, чем 70 мМ; ii) отношение молярного количества глютамина к молярному количеству аспарагина меньше, чем приблизительно 2; iii) отношение молярного количества глютамина к количеству всех аминокислот меньше, чем приблизительно 0,2; iv) отношение молярного количества неорганических ионов к количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; и v) совокупная концентрация глютамина и аспарагина больше, чем приблизительно 16 мМ;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20-80% от максимально возможной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при поддержании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg.

44. Способ по п.43, отличающийся тем, что указанный рФНО-lg является этанерцептом.

45. Способ получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток; и
среду, в которой отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству аспарагина меньше, чем приблизительно 2; и
указанная среда содержит глютамин; и
указанная среда обладает двумя свойствами, выбранными из группы, состоящей из следующего: (i) суммарное количество аминокислот в среде на единицу объема больше приблизительно 70 мМ; (ii) отношение суммарного молярного количества глютамина к суммарному количеству всех аминокислот меньше, чем приблизительно 0,2; (iii) отношение суммарного молярного количества неорганических ионов к суммарному количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; (iv) совокупное суммарное количество глютамина и аспарагина на единицу объема больше, чем приблизительно 16 мМ; и комбинаций указанных свойств;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20-80% от максимально возможной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при поддержании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с в получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg.

46. Способ по п.45, отличающийся тем, что указанный рФНО-lg является этанерцептом.

47. Способ получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства, включающий следующие этапы:
обеспечение культуры клеток, содержащей:
клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток; и
среду определенного состава, содержащую глютамин и характеризующуюся тем, что: i) начальная концентрация аминокислот больше, чем 70 мМ; ii) отношение молярного количества глютамина к молярному количеству аспарагина меньше, чем приблизительно 2; iii) отношение молярного количества глютамина к количеству всех аминокислот меньше, чем приблизительно 0,2; iv) отношение молярного количества неорганических ионов к количеству всех аминокислот составляет приблизительно от 0,4 до 1; и v) совокупная концентрация глютамина и аспарагина больше, чем приблизительно 16 мМ;
поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени, достаточного для того, чтобы клетки размножились до получения плотности жизнеспособных клеток, лежащей в диапазоне приблизительно 20-80% от максимально возможной плотности жизнеспособных клеток, которую можно было бы получить при поддержании указанной культуры при указанном первом наборе условий культивирования;
изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) pH; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций;
поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени, с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg.

48. Способ по п.47, отличающийся тем, что указанный рФНО-lg является этанерцептом.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения иммортализованной клетки человека, стабильно трансфицированной последовательностью нуклеиновой кислоты, стабильно трансфицированной иммортализованной клетке человека, полученной данным способом, способу рекомбинантной продукции целевого белка человека и применению вектора трансфекции.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной и белковой инженерии, и касается способа получения рекомбинантного с-пептида человека. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно, к способу получения полипептидов в культуре клеток для крупномасштабного производства и его вариантам. .

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа секреторной продукции белка. .

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантных биомаркеров полипептидной природы, и может быть использовано в диагностике рассеянного склероза.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к рекомбинантной продукции интерферона человека, и может быть использовано для получения рекомбинантного интерферона альфа-2 человека.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к области биотехнологии и касается целлюлазных слитых белков. .

Соединение, предназначенное для стимуляции пути передачи сигнала через il-15rбета/гамма, с целью индуцировать и/или стимулировать активацию и/или пролиферацию il-15rбета/гамма-положительных клеток, таких как nk-и/или t-клетки, нуклеиновая кислота, кодирующая соединение, вектор экспрессии, клетка-хозяин, адъювант для иммунотерапевтической композиции, фармацевтическая композиция и лекарственное средство для лечения состояния или заболевания, при котором желательно повышение активности il-15, способ in vitro индукции и/или стимуляции пролиферации и/или активации il-15rбета/гамма-положительных клеток и способ получения in vitro активированных nk-и/или t-клеток // 2454463
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению стимуляторов пути передачи сигнала через IL-15Rбета/гамма, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантных биомаркеров полипептидной природы, и может быть использовано в диагностике рассеянного склероза.

Изобретение относится к области биомолекулярной фармакологии, биотехнологии и генетической инженерии и касается рекомбинантного гибридного полипептида и способа его получения
Наверх