Способ диагностики атопического дерматита у детей


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2459210:

Файзуллина Резеда Абдулахатовна (RU)
Газиев Айрат Рафович (RU)
Газиева Эллина Гумаровна (RU)
Шамов Булат Альфредович (RU)
Вахитов Хаким Муратович (RU)
Ослопов Владимир Николаевич (RU)
Шахтарин Артем Викторович (RU)
Данилушкина Елена Алексеевна (RU)

Изобретение относится к медицине, конкретно к дерматологии, и касается способа диагностики атопического дерматита у детей. Сущность способа заключается в том, что осуществляют забор венозной крови ребенка, далее эритроциты осаждают и промывают холодной средой промывки, предынкубируют 3 часа при 37°С, суспензию осаждают и промывают эритроциты для удаления наружного лития. Далее эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, инкубируют при температуре 37°С, на 60 минуте инкубации отбирают суспензию эритроцитов, производят центрифугирование в течение двух минут, супернатант осторожно набирают и разбавляют тридистилированной водой, измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре и при величине скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающей 258 mkM Li/л.кл./час, диагностируют атопический дерматит у детей. Использование способа позволяет с высокой точностью диагностировать атопический дерматит у детей. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, конкретно к дерматологии, и касается способа диагностики атопического дерматита у детей.

Структурно-функциональной единицей живого организма является клетка, основу функционирования которой определяет клеточная мембрана. Клеточная мембрана обеспечивает избирательное проникновение в клетку и из нее молекул и ионов, необходимых для выполнения специфических функций клетки, поддерживает трансмембранную разницу электрического потенциала, специфику межклеточных контактов. Перенос ионов через клеточную мембрану с помощью переносчиков белковой структуры, включающий активный транспорт и облегченную диффузию, является неотъемлемой частью жизнедеятельности всех клеток организма человека в норме и при патологии. Изменение ионного транспорта связано с патологией атопического дерматита у детей. Одной из ион-транспортных систем является натрий-литиевый противотранспорт (НЛПТ) через мембрану эритроцита.

Поиск патентной и научной литературы показал, что в настоящее время ближайших аналогов этому способу диагностики атопического дерматита у детей не имеется.

Известен способ определения гиперчувствительности фагоцитов к гистамину у больных атопическим дерматитом по заявке №94036342. Однако данный способ как аналог отдаленный, близких обнаружить не удалось.

Техническим результатом является создание способа, позволяющего диагностировать атопический дерматит у детей по скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцитов.

Проницаемость мембраны эритроцитов для натрия оценивают по максимальной скорости натрий-литиевого противотранспорта в эритроцитах.

Способ диагностики осуществляется следующим образом.

Кровь в количестве трех миллилитров забирают утром из вены ребенка в смоченные гепарином с фосфатным буфером (20 ЕД на 1 мл крови) пластиковые пробирки. Содержимое перемешивают и пробирки немедленно помещают в контейнер с тающим льдом. Эритроциты осаждают на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором при достижении 3000g в течение 5 минут, далее плазму и эритроциты удаляют путем отсасывания. Эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной среды промывки (температура тающего льда), 0,25 мл упакованных эритроцитов помещают в 1,25 мл в следующую среду при 37°С и предынкубируют 3 часа при той же температуре с периодическим встряхиванием автоматически каждые 15 минут по 15 секунд, суспензию осаждают и для удаления наружного лития эритроциты промывают 4 раза 4-кратным объемом среды промывки; в этот период происходит выход лития в натриевую и безнатриевую (магниевую) среды за счет обмена лития на натрий и магний, осуществляемого благодаря работе белка-переносчика в условиях ингибирования натрий-калиевой АТФ-азы уабином. Упакованные эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, фактически это среда промывки, содержащая изоосмотическую смесь MgCl2 и сахарозы, но с добавлением 0,1 мМ уабаина и в среду, богатую натрием, содержащая (мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкоза; 10 - HEPES-трис (рН 7,4); 0,1 уабаин, инкубацию продолжают 60 минут при температуре 37 градусов Цельсия с периодическим встряхиванием. На 60 минуте инкубации отбирают 0,45 мл суспензии эритроцитов из обеих сред, производят центрифугирование в течение двух минут, надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,3 мл осторожно набирают и разбавляют в 3 раза тридистилированной водой. Измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре СА-455. Калибровочные растворы готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы. Используют следующие параметры аппаратуры: длина волны 670,6 нм, состав пламени - ацетилен-воздух, стехиометрия пламени - окисляющая, чувствительность 10-7 моль/литр. Программа измерения концентрации элемента в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состоит в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью потока исследуемого раствора. Информация со спектрофотометра поступает на специализированное вычислительное устройство «Электроника ДЗ-28», которое вычисляет концентрацию исследуемого элемента, а результаты выдает на цифровое табло. Скорость натрий-литиевого противотранспорта (V) в микромолях лития на 1 литр клеток в час определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия, через 60 минут инкубации по формуле V=(ANa-AMg)*К, где К (коэффициент) = 33. И при значении скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающем 258 mkM Li/л кл./час, диагностируют атопический дерматит у детей.

Клинические примеры

Пример 1. Больной Н. 13 лет. Обратился с жалобами на высыпания на коже. Диагноз при поступлении в стационар - псевдоаллергическая (неспецифическая) форма аллергии, стадия обострения. Скорость натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита на второй день госпитализации составила 347 микромоль лития на литр клеток в час. Через 97 дней, т.е. в условиях полной смены популяции эритроцитов, скорость натрий-литиевого противотранспорта составила 344 микромоль лития на литр клеток в час. Клинический диагноз - атопический дерматит.

Пример 2. Больной Т. 12 лет. Диагноз при поступлении в стационар - неинфекционно-аллергическая форма дерматита, стадия обострения. Скорость натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита на второй день госпитализации составила 361 микромоль лития на литр клеток в час. Через 102 дня, т.е. в условиях полной смены популяции эритроцитов, скорость натрий-литиевого противотранспорта составила 363 микромоль лития на литр клеток в час. Диагноз - атопический дерматит.

Таким образом, предлагаемый способ увеличивает эффективность диагностики атонического дерматита путем повышения точности и объективности диагностики по скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцитов.

Способ апробирован в стационарном отделении клиники КГМУ и может найти широкое клиническое применение в медицинской практике и эффективно использоваться в дерматологии.

Источники информации

1. Мачарадзе Д.Ш. Роль пищевой аллергии при атопическом дерматите у детей. Педиатрия. №4, 2004.

2. Заявка №94036342.

3. Патент 2282857.

4. Патент 2239837.

Способ диагностики атопического дерматита у детей, включающий забор крови и исследование эритроцитов, отличающийся тем, что кровь в количестве трех миллилитров забирают утром из вены ребенка в смоченные гепарином с фосфатным буфером (20 ед. на 1 мл крови) пластиковые пробирки, перемешивают и пробирки немедленно помещают в контейнер с тающим льдом, эритроциты осаждают на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором при достижении 3000 g в течение 5 мин, далее плазму и эритроциты удаляют путем отсасывания, эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной среды промывки (температура тающего льда), 0,25 мл упакованных эритроцитов помещают в 1,25 мл в следующую среду при температуре 37°С и прединкубируют 3 ч при той же температуре с периодическим встряхиванием автоматически каждые 15 мин по 15 с, суспензию осаждают и для удаления наружного лития эритроциты промывают 4 раза 4-кратным объемом среды промывки; в этот период происходит выход лития в натриевую и безнатриевую (магниевую) среды за счет обмена лития на натрий и магний, осуществляемого благодаря работе белка-переносчика в условиях ингибирования натрий-калиевой АТФ-азы уабином, упакованные эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, фактически это среда промывки, содержащая изоосмотическую смесь MgCl2 и сахарозы, но с добавлением 0,1 мМ уабаина и в среду, богатую натрием, содержащая (мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкоза; 10 - HEPES-трис (рН 7,4); 0,1 уабаин, инкубацию продолжают 60 мин при температуре 37°С с периодическим встряхиванием, на 60 мин инкубации отбирают 0,45 мл суспензии эритроцитов из обеих сред, производят центрифугирование в течение двух минут, надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,3 мл осторожно набирают и разбавляют в 3 раза тридистилированной водой, измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре СА-455, калибровочные растворы готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы, используют следующие параметры аппаратуры: длина волны 670,6 нм, состав пламени - ацетилен-воздух, стехиометрия пламени - окисляющая, чувствительность 10-7 моль/л; программа измерения концентрации элемента в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состоит в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью потока исследуемого раствора, информация со спектрофотометра поступает на специализированное вычислительное устройство «Электроника ДЗ-28», которое вычисляет концентрацию исследуемого элемента, а результаты выдает на цифровое табло, скорость натрий-литиевого противотранспорта (V) в микромолях лития на 1 л клеток в час определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия через 60 мин инкубации по формуле V=(ANa-AMg)·K, где К(коэффициент)=33, ANa - 468 mkM Li/л.кл./ч; AMg - 210 mkM Li/л.кл./ч, при этом при величине скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающей 258 mkM Li/л.кл./ч диагностируют атопический дерматит у детей.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматовенерологии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и касается способа определения резистентности больных распространенными хроническими дерматозами (псориазом, атопическим дерматитом, вульгарной или акантолитической пузырчаткой) к проводимой терапии.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования нарушения маточно-плодово-плацентарного кровотока. .
Изобретение относится к практической медицине, а именно клинико-лабораторной диагностике, и касается способа прогнозирования развития бронхолегочных осложнений при шейно-спинальной травме.
Изобретение относится к медицине, конкретно к диагностике в кардиологии, и касается способа прогнозирования риска возникновения гипертонической болезни у мужчин. .
Изобретение относится к медицине и описывает способ диагностики переходноклеточного рака мочевого пузыря, который основан на обнаружении FISH-методом генетических изменений в клетках уротелия, характерных для РМП, а именно увеличение количества перицентромерных сигналов 3, 7 и 17-й хромосом и/или отсутствие сигнала по локусу 9р21, выявляемых ДНК-зондами «UroVysion».
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и касается способа прогнозирования рисков рецидива неразвивающейся беременности (НБ) у супружеских пар на основании результатов генотипирования.

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярно-генетической диагностике в онкологии, и касается способа прогнозирования развития профессиональных злокачественных новообразований кожи у работников производства стекловолокна.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения метаболитов углеводного обмена в биологических тканях.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности терапии ладастеном органических астенических расстройств.
Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и касается способа прогноза количества обострений у больных бронхиальной астмой. .
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и касается способа определения резистентности больных распространенными хроническими дерматозами (псориазом, атопическим дерматитом, вульгарной или акантолитической пузырчаткой) к проводимой терапии.
Изобретение относится к биологии, медицине, в частности к лабораторной диагностике, иммунологии, и описывает способ определения резерва реактивности (оксидантного потенциала) нейтрофилов, в котором проводят измерение светосуммы спонтанной хемилюминесценции цельной разведенной крови в растворе люминола сразу после взятия крови и через 4 часа после ее инкубации, затем проводят расчет разности светосуммы (РСС) как разность измерений через 4 часа и измерения, проведенного сразу после забора крови, при этом за норму значений РСС принимают 1%-99% процентильный интервал общего диапазона значений контрольной группы здоровых доноров; значения РСС ниже 1% процентильного интервала свидетельствуют о снижении резерва реактивности нейтрофилов, значения, превышающие 99% процентильный интервал, свидетельствуют о процессе оксидантного стресса, альтерации клеток и развитии воспалительно-деструктивного процесса.
Изобретение относится к области медицины, а именно хирургии, и описывает способ диагностики послеоперационного перитонита путем биохимического исследования сыворотки крови, где в сыворотке крови и перитонеальном экссудате послеоперационных больных определяют уровень ферритина, 100 нг/мл которого принимают за 1 балл, затем баллы ферритина в экссудате и сыворотке суммируют, определяют суммарный индекс ферритина и при его повышении более 12 баллов диагностируют развитие послеоперационного перитонита.

Изобретение относится к области медицины, а именно к ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики степени активности ревматоидного артрита, а именно средней и высокой степени активности РА.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования почечной выживаемости у больных хроническим гломерулонефритом.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения реабсорбции кальция (CaR) при нарушении его гомеостаза, где осуществляют забор крови, центрифугированием отделяют сыворотку крови и определяют в ней креатинин, добавляют к 1,5-2,0 мл сыворотки крови 5% раствор карбогена в азоте и получают ультрафильтрат сыворотки крови, для чего используют фильтр, задерживающий молекулы с молекулярной массой свыше 50000 MW, определяют концентрацию кальция в ультрафильтрате в ммоль/л (CaUF), одновременно с забором крови осуществляют сбор мочи после приема 300-500 мл дистиллированной воды, затем определяют в моче концентрацию кальция и креатинина, рассчитывают клиренс креатинина (GFR), определяют экскрецию кальция из 1 литра клубочкового фильтрата (CaE/GFR), для чего концентрацию кальция в моче умножают на минутный диурез и полученный результат делят на клиренс креатинина; далее определяют разницу между CaUF и CaE/GFR, получая CaR, строят номограмму зависимости значений CaR от CaUF, определяют границу области допустимых значений, соответствующую здоровым людям, при этом, если определенные у пациента значения, лежат в области допустимых значений, выносят суждение о нормальной реабсорбции кальция, при расположении определенных величин выше области допустимых значений выносят суждение об увеличенной реабсорбции кальция и о сниженной реабсорбции кальция - при их расположении ниже нижней границы области допустимых значений.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения реабсорбции кальция (CaR) при нарушении его гомеостаза, где осуществляют забор крови, центрифугированием отделяют сыворотку крови и определяют в ней креатинин, добавляют к 1,5-2,0 мл сыворотки крови 5% раствор карбогена в азоте и получают ультрафильтрат сыворотки крови, для чего используют фильтр, задерживающий молекулы с молекулярной массой свыше 50000 MW, определяют концентрацию кальция в ультрафильтрате в ммоль/л (CaUF), одновременно с забором крови осуществляют сбор мочи после приема 300-500 мл дистиллированной воды, затем определяют в моче концентрацию кальция и креатинина, рассчитывают клиренс креатинина (GFR), определяют экскрецию кальция из 1 литра клубочкового фильтрата (CaE/GFR), для чего концентрацию кальция в моче умножают на минутный диурез и полученный результат делят на клиренс креатинина; далее определяют разницу между CaUF и CaE/GFR, получая CaR, строят номограмму зависимости значений CaR от CaUF, определяют границу области допустимых значений, соответствующую здоровым людям, при этом, если определенные у пациента значения, лежат в области допустимых значений, выносят суждение о нормальной реабсорбции кальция, при расположении определенных величин выше области допустимых значений выносят суждение об увеличенной реабсорбции кальция и о сниженной реабсорбции кальция - при их расположении ниже нижней границы области допустимых значений.

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики идиопатического нарушения носового дыхания у беременных. .
Изобретение относится к офтальмологии, а именно к офтальмоэндокринологии, и предназначено для прогнозирования клинического течения эндокринной офтальмопатии у пациентов с болезнью Грейвса
Наверх